Name: leveraging turbidity and thromboelastography for complementary clot characterization
Uploaded: 2020-06-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Leveraging Turbidity and Thromboelastography for Complementary Clot Characterization at JoVE.com

1. Fosfat tamponsal salin (PBS) hazırlanması
NOT: PBS bu çalışma boyunca kalsiyum ilavesi gerektirmediği için tanımlanmış tahliller kullanılmıştır. Sitrik kan ürünlerini yeniden kalsifiye etmek için kullanılan kalsiyum eklerken, kalsiyumun fosfat tamponlarında çökeltisi bilindiği için PBS'den kaçınılması gerektiği unutulmamalıdır.
<ol><li>137 mM sodyum klorür, 1,8 mM potasyum fosfat monobasic, 10 mM sodyum fosfat dibazik ve 2,7 mM POTASYUM klorür DI suda karı...

<ol>
	<li>Beckman, M. G., Hooper, W. C., Critchley, S. E., Ortel, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+Thromboembolism.+A+Public+Health+Concern.">Venous Thromboembolism. A Public Health Concern.</a> American Journal of Preventive Medicine. 38, 495-501 (2010).</li><li>Goldhaber, S. Z., Bounameaux, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+embolism+and+deep+vein+thrombosis.">Pulmonary embolism and deep vein thrombosis.</a> The Lancet. 379 (9828), 1835-1846 (2012).</li><li>Weisel, J. W., Litvinov, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+fibrin+polymerization+and+clinical+implications.">Mechanisms of fibrin polymerization and clinical implications.</a> Blood. 121 (10), 1712-1719 (2013).</li><li>Weisel, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+assembly.+Lateral+aggregation+and+the+role+of+the+two+pairs+of+fibrinopeptides.">Fibrin assembly. Lateral aggregation and the role of the two pairs of fibrinopeptides.</a> Biophysical Journal. 50 (6), 1079-1093 (1986).</li><li>Tripathi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+evaluation+of+whole+blood+prothrombin+time+(PT)+and+international+normalized+ratio+(INR)+using+a+Laser+Speckle+Rheology+sensor.">Clinical evaluation of whole blood prothrombin time (PT) and international normalized ratio (INR) using a Laser Speckle Rheology sensor.</a> Scientific Reports. 7 (1), 1-8 (2017).</li><li>Ryan, E. A., Mockros, L. F., Weisel, J. W., Lorand, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+origins+of+fibrin+clot+rheology.">Structural origins of fibrin clot rheology.</a> Biophysical Journal. 77 (5), 2813-2826 (1999).</li><li>Carr, M. E., Hermans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+and+Density+of+Fibrin+Fibers+from+Turbidity.">Size and Density of Fibrin Fibers from Turbidity.</a> Macromolecules. 11 (1), 46-50 (1978).</li><li>Carr, M. E., Shen, L. L., Hermans, J. A. N., Chapel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mass-Length Ratio of Fibrin Fibers from Gel Permeation and Light Scattering. 16, 1-15 (1977).</li><li>Gabriel, D. A., Muga, K., Boothroyd, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Effect of Fibrin Structure on Fibrinolysis. , 24259-24263 (1992).</li><li>Wolberg, A. S., Gabriel, D. A., Hoffman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+fibrin+clot+structure+using+a+microplate+reader.">Analyzing fibrin clot structure using a microplate reader.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 13 (6), 533-539 (2002).</li><li>da Luz, L. T., Nascimento, B., Rizoli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombelastography+(TEG):+practical+considerations+on+its+clinical+use+in+trauma+resuscitation.">Thrombelastography (TEG): practical considerations on its clinical use in trauma resuscitation.</a> Scandinavian Journal of Trauma, Resuscitation and Emergency Medicine. 21 (1), 29 (2013).</li><li>Whitten, C. W., Greilich, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thromboelastography:+past,+present,+and+future+.">Thromboelastography: past, present, and future .</a> Anesthesiology: The Journal of the American Society of Anesthesiologists. 92 (5), 1223-1225 (2000).</li><li>Ranucci, M., Laddomada, T., Ranucci, M., Baryshnikova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+viscosity+during+coagulation+at+different+shear+rates.">Blood viscosity during coagulation at different shear rates.</a> Physiological Reports. 2 (7), 1-7 (2014).</li><li>Zeng, Z., Fagnon, M., Nallan Chakravarthula, T., Alves, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+clot+formation+under+diverse+clotting+conditions:+Comparing+turbidimetry+and+thromboelastography.">Fibrin clot formation under diverse clotting conditions: Comparing turbidimetry and thromboelastography.</a> Thrombosis Research. 187, 48-55 (2020).</li></ol>

Bu protokol, basitleştirilmiş bir fibrinojen/trombin pıhtı modelini ticari olarak kullanılabilen bileşenler kullanılarak test eden iki farklı pıhtı karakterizasyon aracının kullanımını göstermektedir. Hem TEG hem de bulanıklık tahlillerinin yapılması kolaydır. Max pıhtı oluşumu (TurbMax ve TEGMax)ve pıhtı oluşum süreleri (TurbTime ve TEGTime)gibi uç nokta pıhtı muayenelerini sağlamakla kalmıyor, aynı zamanda dinamik pıhtı şekillendirme süre...

Tromboz, vücutta kan dolaşımını engelleyen ve dünya çapında yüksek morbidite ve mortaliteye yol açan bir kan pıhtısının patolojik oluşumudur. Her yıl 1000 kişi başına 1-2 venöz tromboemboli olgusu ve 2-3 tromboza bağlı vasküler hastalıklar olgusu vardır1,2. Burada çeşitli pıhtılaşma koşullarında pıhtı oluşumunu izlemek için tromboelastografi (TEG) ve bulanıklığı kullanma yöntemi sunulmuştur. Fibrin(ojen) vücutta pıhtı oluşumundan sorumlu birincil proteindir. Pıhtılaşma kaskad son adımlarında, fibrinopeptidler pıhtı geliştikçe çözünmez fibrin monomerlerin polimerizasyon unu başlatan trombin tarafından fibrinojen den ayrılır3,4. Patolojik trombozda pıhtı oluşumunu anlamak için çeşitli pıhtılaşma koşullarında fibrin oluşumunu karakterize etmek gerekir. İn vitro fibrin pıhtı oluşumunu incelemek için çoklu pıhtı izleme tsays kullanılmıştır. Protrombin zamanı (PT/INR) ve aktive parsiyel tromboplastin zamanı (aPTT) belirli bir pıhtılaşma yolunun bütünlüğünü ölçen iki ortak klinik tahlildir. Ancak, fiziksel pıhtı özellikleri5hiçbir belirti veren tek değişken olarak zaman kullanın. Elektron mikroskobu tamamen oluşmuş bir fibrin pıhtısının mikro-yapısının görüntülenmesine izin verir ancak pıhtı oluşturma işlemi hakkında bilgi vermez6. Tüm tahliller arasında bulanıklık tahlilleri ve TEG, pıhtı özelliklerini zaman içinde dinamik olarak takip etme olanağı sunar. Bu teknikler kapsamlı pıhtılaşma profillerinin ölçülmesini sağlar ve bu nedenle, diğer fibrin pıhtı karakterizasyon araçları üzerinde bazı yarar sağlar.
Özellikle, bulanıklık tahlilleri (veya pıhtı turbidimetrisi) basit uygulaması ve araştırma laboratuvarlarında spektrometrelerin geniş erişilebilirliği nedeniyle araştırma ve klinik uygulamalar için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu töz, tanımlanmış bir dalga boyunda (en sık 350 – 700 nm aralığında bir dalga boyunda)7tek tek tekrarlayan okumalar alarak bir şekillendirme pıhtısı ile ışık iletimi dinamik bir ölçüm sağlar. Okuma odasındaki sıcaklık da ayarlanabilir. Fibrin jel formları gibi, protein ağı üzerinden seyahat ışık miktarı zaman içinde absorbance bir artışa neden azalır. Benzer şekilde, pıhtı ağı bozulduğunda emme azalır. Bulanıklık tahlilleri, hem 96 hem de 384 plakalı yüksek iş elde numune taraması için çok kuyulu plaka biçimi kullanılarak kolayca çok yönlü olarak katlanabilir. Çeşitli pıhtı özellikleri bir bulanıklık izleme eğrisi (zaman ölçümü içinde absorbe) türetilebilir: maksimum bulanıklık, maksimum bulanıklık için zaman, pıhtı başlangıçlı zaman, ve pıhtı oluşum hızı (Vmax). Bir fibrin lif kütlesi / uzunluk oranı da fibrin lif kalınlığı8,9,,10tahmin ham bulanıklık verileri elde edilebilir.
TEG öncelikle hastaların hemostaz ve pıhtı iliklerini değerlendirmek için klinik ortamda kullanılmaktadır. Ayrıca yaygın anti-fibrinolitik ilaçlar veya hemostatik kan ürünleri,11,12uygulanmalıdır belirlemek için cerrahi uygulamalarda kullanılır. Pıhtı oluşumu, bir TEG bardağının içinde, tözün başlamasından önce tüm pıhtılaşma bileşenlerinin bardağa eklenmesiyle oluşur. Gelişen pıhtıya sahip bardak, fiziksel olarak merkezine yerleştirilen bir iğneye karşı döner ve elektromekanik burulma sensörü pıhtının artan viskoelastik gücünü ölçer. Bu test genellikle 37 °C fizyolojik sıcaklıkta yapılır; ancak, sıcaklık cihaz üzerinde manuel olarak ayarlanabilir. Maksimum genlik (MA), reaksiyon hızı (R), kinetik zaman (K), α-açı (Açı) ve maksimum genlik (TMA) için zaman dinamik TEG izleme DEN TEG yazılımı tarafından ayıklanır. Bu değerler genellikle hastanın pıhtılaşma durumunu değerlendirmek için klinik normal aralıklarla karşılaştırılır. TEG tam olarak bir viskometre birimi olmamakla birlikte, milimetre ünitelerinde pıhtı mukavemetini ölçtürünce, hekimlerin spesifik kan ürünlerini yönetmeye karar vermeleri ve terapötik dozlamayı ayarlamaları için değerli bir klinik karar verme aracı olarak önemli viskoelastik pıhtı verileri ve işlevleri ni sağlar13. Hem TEG hem de bulanıklık tahlilleri birlikte kullanıldıklarında, pıhtı mukavemeti ve kinetikte TEG'den kolayca çıkarılabildiği ve fibrin lif kalınlığına optik bulanıklık ölçümleri ile ulaşılabildiği için tamamlayıcı pıhtı karakterizasyonu bilgileri sağlarlar.
Fibrin bir kan pıhtısı kritik bir bileşeni olduğu gibi, farklı pıhtı oluşumu koşulları altında fibrin pıhtı karakterizasyonu belirli bir değişken pıhtı oluşum süreci ve nihai pıhtı özellikleri katkıda nasıl değerli bir fikir sağlayabilir. Bunu anlamak tromboz tanısı ve terapötik gelişimi için rehberlik sağlayabilir. Daha temsili bir fibrin pıhtı karakterizasyonu elde etmek için, plazma basitleştirilmiş fibrinojen/trombin model sisteminden daha yakından in vivo pıhtılaşma koşullarına benzediği için pıhtı oluşumunu izlemek için ikame edilebilir. Ancak, pıhtılaşma kaskad karmaşık doğası nedeniyle, plazma kullanarak pıhtı oluşumu karmaşıklığı ekler, daha zor bireysel faktörlerin etkisini izole etmek için yapım. Basitleştirilmiş bir fibrinojen/trombin modelinin kullanılması, son fibrin oluşum adımının izolasyona izin vererek pıhtılaşma kaskadlarının tamamının başlatılması ihtiyacını önler. İki ana fibrin oluşturan bileşenleri (fibrinojen ve trombin) dahil ederek, bu kurulum son derece kontrollü bir pıhtı oluşumu durumu oluşturur. Basitleştirilmiş pıhtı modeli burada kullanılırken, bu protokolün ek pıhtılaşma faktörleri de dahil edilerek daha karmaşık pıhtıları karakterize etmek için de kullanılabileceğini belirtmek önemlidir. Bu çalışmada, bulanıklık ve TEG kullanılarak fibrin pıhtı karakterizasyonu fibrinojen ve trombin konsantrasyonları, iyonik mukavemet, pH ve pıhtılaşma çözeltisinde toplam protein konsantrasyonu ile farklı in vivo pıhtılaşma durumlarını taklit etmek için14. Protokoldeki bu varyasyonlarla ilgili ayrıntılar Bölüm 5'te yer almaktadır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-Well Clear Flat Bottom UV-Transparent Microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3635</td>
			<td>Non-treated acrylic copolymer, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin from human serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A1653</td>
			<td>&#8805;96%, lyophilized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arium Mini Plus Ultrapure Water System</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>NA</td>
			<td>DI water source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A2153</td>
			<td>&#8805;96%, lyophilized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Cups and Pins for TEG 5000 (Clear)</td>
			<td>Haemonetics</td>
			<td>REF 6211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen, Bovine Plasma</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>341573</td>
			<td>contains more than 95% clottable protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen, Plasmingogen-Depleted, Human Plasma</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>341578</td>
			<td>Contains &#8805; 95% clottable proteins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Powder, pH 7.4, for preparing 1 L solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>60130</td>
			<td>&#8805;99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P9791</td>
			<td>&#8805;98% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SevenEasy pH Meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>S20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71378</td>
			<td>&#8805;99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71636</td>
			<td>&#8805;99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax M5 multi-detection microplate reader system</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEG 5000 Thrombelastograph Hemostasis analyzer system</td>
			<td>Haemonetics</td>
			<td>07-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin, Bovine</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>605157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin, Human Plasma, High Activity</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>605195</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

leveraging turbidity and thromboelastography for complementary clot characterization

Tromboz dünya çapında önde gelen ölüm nedenidir. Fibrin(ojen) öncelikle pıhtı oluşumu veya tromboz sorumlu proteindir. Bu nedenle fibrin pıhtı oluşumunu karakterize etmek tromboz çalışmasında faydalıdır. Bulanıklık ve tromboelastografi (TEG) pıhtı oluşumunu izlemek için in vitro tahlillerde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bulanıklık, ışık iletimini bir spektrometre ile fibrin pıhtı yapısı üzerinden dinamik olarak ölçer ve genellikle araştırma laboratuvarlarında kullanılır. TEG, kan pıhtısı mukavemetini doğrudan ölçen ve öncelikle hastaların hemostazlarını değerlendirmek için klinik ortamlarda kullanılan özel bir viskoelastik tekniktir. Bu iki alet yardımıyla, bu çalışmada basitleştirilmiş fibrinojen/trombin pıhtısı modeli kullanılarak in vitro fibrin pıhtısını karakterize etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Her iki teknik genelinde veri eğilimleri çeşitli pıhtılaşma koşulları altında karşılaştırıldı. Bu çalışmada, büyükbaş hayvan pıhtılaşma faktörleri genellikle klinik ve araştırma ortamlarında insan pıhtılaşma faktörlerinin yerine kullanıldığından, insan ve büyükbaş fibrin pıhtıları yan yana oluşmuştur. Sonuçlar, TEG ve bulanıklığın pıhtı oluşumunu iki farklı yöntemle izlediğini ve birlikte kullanıldıklarında farklı pıhtılaşma koşullarında tamamlayıcı pıhtı mukavemeti ve fiber yapısal bilgi sağladığını göstermektedir.

Şekil 1'de gösterilen deneyler, farklı fibrinojen düzeylerinde insan ve büyükbaş fibrin pıhtılarının temsili bulanıklık izleme eğrileridir. Farklı fibrinojen düzeylerinde fibrin pıhtı oluşumu için temsilci TEG izleme eğrileri Şekil 2'degösterilmiştir . Her iki izleme eğrisi pıhtı inisiyasyonu ndan sonraki bir gecikme döneminden sonra pıhtı bulanıklığının veya pıhtı genliğinin zamanla arttığını ve pıhtı oluşumunun sonu...

Watch this Scientific Journal Video about Leveraging Turbidity and Thromboelastography for Complementary Clot Characterization at JoVE.com

Leveraging Turbidity and Thromboelastography for Complementary Clot Characterization

Fibrin hemostaz ve tromboz sırasında pıhtı oluşumundan sorumludur. Bulanıklık tahlilleri ve tromboelastograhy (TEG) bir pıhtı tamamlayıcı değerlendirme sağlayan sinerjik araçlar olarak kullanılabilir. Bu iki teknik birlikte pıhtılaşma koşulları fibrin pıhtı oluşumunu nasıl etkilediği hakkında daha fazla fikir verebilir.

Tamamlayıcı Pıhtı Karakterizasyonu için Bulanıklık ve Tromboelastografiden Yararlanma

Thrombosis is a leading cause of death worldwide. Fibrin(ogen) is the protein primarily responsible for clot formation or&#160;thrombosis. Therefore, ...

Tromboelastografi ve bulanıklık tahlilleri pıhtı karakterizasyonu için iki basit ve ayırt edici yöntemdir. Bu teknikler birlikte pıhtılaşma değişkenlerinin pıhtı özelliklerini nasıl etkilediğikonusunda daha kapsamlı bir anlayış sunar. Bu tahlillerin her ikisi de, sadece uç nokta pıhtı analizi sunmak değil, aynı zamanda zaman içinde fibrin pıhtı oluşumu çekmek, diğer birçok pıhtı karakterizasyon araçları aksine Bu teknikler tromboz hastalarının fibrinolitik devlet güvenilir tanı sağlayabilir fizyolojik olarak ilgili sentetik pıhtı platformu geliştirmeye yardımcı olabilir zaman içinde pıhtı bulanıklığı izlemek için, 350-700 nanometre bir absorbans aralığı olan herhangi bir ticari olarak kullanılabilir spektrometre kullanın.Spektrometreyi açın ve ilgili analiz yazılımını açın. Ardından birinci plakayı seçin ve plaka ayarları sekmesini açın. Zaman içinde dinamik bir emiciliği izlemek için ABS ve kinetik'i tıklatın.Dalga boyu sekmesinde 550 nanometre seçin, ardından zamanlama sekmesine geçin ve toplam çalışma süresini 30 saniye lik bir aralıkla 60 dakikaya ayarlayın, bunları vurgulayarak ilgi kuyularını seçin. Pipet 140 mikrolitre PBS uv şeffaf 96 kuyu plakabir kuyuiçine. Sonra trombin 10 mikrolitre ekleyin ve karıştırın, hemen iyi ve pipet beş kez yukarı ve aşağı kabarcıklar oluşturmayı önlemek için özen pipet sadece ilk durağı kullanarak fibrinojen 50 mikrolitre ekleyerek pıhtılaşma başlatmak.Plakayı plaka tutucuya yerleştirin ve bulanıklık okumasını başlatmak için yazılımda okumayı tıklatın. Okuma, bulanıklık verilerini aldığında ve zaman içinde emicilerin değişimini çizerek bulanıklık izleme eğrisi elde ettiğinde, zaman içinde eğrinin maksimum emici değerini alarak maksimum bulanıklık elde edin, ardından maksimum bulanıklığı 0,9 ile çarparak maksimum bulanıklığı %90 hesaplayın. Pıhtı başlatmadan %90 maksimum bulanıklığa kadar olan zamanı hesaplayarak maksimum bulanıklığa kadar geçen süreyi elde edin.Tromboelastografiyi veya TEG analizörü açın ve sıcaklığın 37 santigrat derecede sabitolmasını bekleyin, sonra TEG yazılımını açın ve KIMLIK bölümünün altında bir deneme adı oluşturun. TÜM KANALLAR İçİn eTest testi yapmak için TEG sekmesini tıklayın ve ekrandaki istemleri takip edin. Ardından tüm kontroller tamamlandıktan sonra kolu yük konumuna geri yerleştirin.Kullanılacak kanallar için bilgi sayfasında yapılanları tıklatın ve örnek bilgileri girdi. İlgili kanala açık bir kaplamasız TEG kabı yerleştirin. Taşıyıcıyı yukarı doğru kaydırın ve pini burulma çubuğuna sabitlemek için bardağın alt altına beş kez bastırın ve ardından taşıyıcıyı düşürün ve tıklanına kadar bardağı tabanına doğru bastırın.Pipet 20 mikrolitre trombin çözeltisi TEG kabına, daha sonra 360 mikrolitre pıhtılaşma çözeltisi elde etmek için bardağa 340 mikrolitre fibrinojen ekleyerek pıhtılaşmayı başlatın. Beş kez yukarı ve aşağı boru lama tarafından fincan içeriğini karıştırın. Fincan yüklü taşıyıcıyı yukarı kaydırın kolu okuma konumuna getirin ve TEG okumasını başlatmak için yazılımda başlat'a tıklayın.Okuma tamamlandıktan sonra parametreleri alın ve zaman içinde genlik çizerek bir TEG izleme eğrisi elde edin. MA'yı maksimum genlik olarak seçin, bu da pıhtı zorlanmasının ve TMA'nın yazılımdan maksimum genliğe kadar zaman olarak göstergesidir. Temsili bulanıklık ve farklı fibrinojen düzeylerinde insan ve büyükbaş fibrin pıhtılarının TEG izleme eğrileri burada gösterilmiştir.Takip eğrileri pıhtı inisiyasyonu ndan sonraki bir gecikme döneminden sonra pıhtı oluşumunun sonunda zamanla pıhtı bulanıklığının veya pıhtı genliğinin arttığını ve seviyelerde arttığını göstermektedir. Maksimum bulanıklık ve maksimum bulanıklık için zaman bulanıklık türetilen iki parametre, maksimum genlik ve maksimum genlik için zaman TEG türetilmiştir. Pıhtılaşma çözeltisinde daha yüksek bir fibrinojen seviyesinde dört değer de artar.Maksimum bulanıklık, fibrin lif kalınlığı ve fibrin ağ yoğunluğunun göstergesi olan pıhtı yapısının optik bir ölçüsüdür. Maksimum genlik mutlak pıhtı gerilimini yansıtan mekanik bir ölçü iken, iki değer birlikte alındığında pıhtı mikro yapıları hakkında ücretsiz bir fikir sağlar. Bu yordam, esas olarak fibrin polimerizasyonunu etkileyen değişkenleri incelemek için basitleştirilmiş bir pıhtılaşma modeli göstermektedir.Bu model, diğer parametreleri incelemek için ek pıhtılaşma faktörleri nin eklenmesi yle özelleştirilebilir. Pıhtılaşma modeli, pıhtı oluşumunu ve antitrombotik ilaçların varlığında hayal kırıklığını izlemek için klinik plazma örnekleri kullanılarak kolayca değiştirilebilir. Sonuçlar hastalarda terapötik tedaviye rehberlik edebilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Moleküler Mekanizmalarının Karakterizasyonu<em&gt; In vivo</em&gt; UVR İsteyerek Katarakt

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Experimental and Imaging Techniques for Examining Fibrin Clot Structures in Normal and Diseased States

Normal ve Hastalıklı Devletleri&#39;nde Fibrin pıhtısı Yapıları incelenmesi için deneysel ve Görüntüleme Teknikleri

Fibrin is an extracellular matrix protein that is responsible for maintaining the structural integrity of blood clots. Much research has been done on ...

High Throughput Characterization of Adult Stem Cells Engineered for Delivery of Therapeutic Factors for Neuroprotective Strategies

Nöroprotektif Stratejileri Tedavi Faktörleri teslimi için tasarlandı Erişkin Kök Hücre Yüksek Verimli Karakterizasyonu

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to ...

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

Fare Kolorektal Afferent Endings in vitro Fonksiyonel Karakterizasyonu içinde

This video demonstrates in detail an in vitro single-fiber electrophysiological recording protocol using a mouse colorectum-nerve preparation. The ...

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

Fare Modelinde Kuruluş ve İYE ve CAUTI Karakterizasyonu

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

Cilt Mikro-Greftler Üretimi için Yeni Bir Ayrıştırma Yöntemi sonra doku karakterizasyonu

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Echocardiographic Approaches and Protocols for Comprehensive Phenotypic Characterization of Valvular Heart Disease in Mice

Farelerde Kalp Kapak Hastalıkları Kapsamlı Fenotipik Karakterizasyonu için ekokardiyografik Yaklaşımlar ve Protokoller

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Hazırlık ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Mıknatıslanmış karakterizasyonu Endotel Hücreleri miR-modifiye

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Development and Functional Characterization of Murine Tolerogenic Dendritic Cells

Geliştirme ve işlevsel fare Tolerogenic dendritik hücrelerin karakterizasyonu

The immune system operates by maintaining a tight balance between coordinating responses against foreign antigens and maintaining an unresponsive state ...