Name: minimum volume vitrification of immature feline oocytes
Uploaded: 2020-06-24T15:00:00
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इस काम को आंशिक रूप से ईव्ससार (यूरोपियन वेटनरी सोसाइटी फॉर स्मॉल एनिमल रिप्रोडक्शन) ग्रांट 2016 और यूनीवर्सिटा डेगली स्टडी डि मिलानो, पियानो डी सोस्टेग्नो अल्ला राइसर्का 2019 (लिना 2 अजिओन ए) द्वारा समर्थित किया गया था। हम डॉ मारियाजिर्जिया मोर्सेली को इसके द्वारा चित्रित और छवि अधिग्रहण के प्रयोगों में उनके योगदान के लिए भी धन्यवाद देना चाहते हैं ।

इसके द्वारा चित्रित प्रक्रियाओं को नैतिक अनुमोदन से गुजरना नहीं पड़ा क्योंकि बिल्ली अंडाशय पशु चिकित्सा क्लीनिकों में मालिक-अनुरोधित नियमित ओवेरेक्टॉमी या ओवेरिओमायस्टेक्टर से प्रतिउत्पादों के ?...

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	<li>Bankowski, B., Lyerly, A., Faden, R., Wallach, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+social+implications+of+embryo+cryopreservation.">The social implications of embryo cryopreservation.</a> Fertility and Sterility. 84 (4), 823-832 (2005).</li><li>Saragusty, J., Arav, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+progress+in+oocyte+and+embryo+cryopreservation+by+slow+freezing+and+vitrification.">Current progress in oocyte and embryo cryopreservation by slow freezing and vitrification.</a> Reproduction. 141 (1), 1-19 (2011).</li><li>Luvoni, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gamete+cryopreservation+in+the+domestic+cat.">Gamete cryopreservation in the domestic cat.</a> Theriogenology. 66 (1), 101-111 (2006).</li><li>Thongphakdee, A., Tipkantha, W., Punkong, C., Chatdarong, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+and+controlling+ovarian+activity+in+wild+felids.">Monitoring and controlling ovarian activity in wild felids.</a> Theriogenology. 109, 14-21 (2018).</li><li>Parks, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+and+mammalian+gametes.">Hypothermia and mammalian gametes.</a> Reproductive Tissue Banking. , 229-261 (1997).</li><li>Carabatsos, M. J., Sellitto, C., Goodenough, D. A., Albertini, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte-granulosa+cell+heterologous+gap+junctions+are+required+for+the+coordination+of+nuclear+and+cytoplasmic+meiotic+competence.">Oocyte-granulosa cell heterologous gap junctions are required for the coordination of nuclear and cytoplasmic meiotic competence.</a> Developmental Biology. 226 (2), 167-179 (2000).</li><li>Murakami, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blastocysts+derived+from+in+vitro-fertilized+cat+oocytes+after+vitrification+and+dilution+with+sucrose.">Blastocysts derived from in vitro-fertilized cat oocytes after vitrification and dilution with sucrose.</a> Cryobiology. 48 (3), 341-348 (2004).</li><li>Merlo, B., Iacono, E., Regazzini, M., Zambelli, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cat+blastocysts+produced+in+vitro+from+oocytes+vitrified+using+the+cryoloop+technique+and+cryopreserved+electroejaculated+semen.">Cat blastocysts produced in vitro from oocytes vitrified using the cryoloop technique and cryopreserved electroejaculated semen.</a> Theriogenology. 70 (1), 126-130 (2008).</li><li>Luciano, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+cryopreservation+protocols+on+cytoskeleton+and+gap+junction+mediated+communication+integrity+in+feline+germinal+vesicle+stage+oocytes.">Effect of different cryopreservation protocols on cytoskeleton and gap junction mediated communication integrity in feline germinal vesicle stage oocytes.</a> Cryobiology. 59 (1), 90-95 (2009).</li><li>Comizzoli, P., Wildt, D. E., Pukazhenthi, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+compaction+of+germinal+vesicle+chromatin+is+beneficial+to+survival+of+vitrified+cat+oocytes.">In vitro compaction of germinal vesicle chromatin is beneficial to survival of vitrified cat oocytes.</a> Reproduction in Domestic Animals. 44, 269-274 (2009).</li><li>Alves, A. E., Kozel, A. C., Luvoni, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitrification+with+DAP+213+and+Cryotop+of+ex+situ+and+in+situ+feline+cumulus-oocyte+complexes.">Vitrification with DAP 213 and Cryotop of ex situ and in situ feline cumulus-oocyte complexes.</a> Reproduction in Domestic Animals. 47 (6), 1003-1008 (2012).</li><li>Kuwayama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+vitrification+for+cryopreservation+of+human+oocytes+and+embryos:+The+Cryotop+method.">Highly efficient vitrification for cryopreservation of human oocytes and embryos: The Cryotop method.</a> Theriogenology. 67 (1), 73 (2007).</li><li>Pope, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+survival+of+domestic+cat+oocytes+after+vitrification,+intracytoplasmic+sperm+injection+and+embryo+transfer.">In vivo survival of domestic cat oocytes after vitrification, intracytoplasmic sperm injection and embryo transfer.</a> Theriogenology. 77 (3), 531-538 (2012).</li><li>Galiguis, J., G&#243;mez, M. C., Leibo, S. P., Pope, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+domestic+cat+kitten+produced+by+vitrification+of+lipid+polarized+in+vitro+matured+oocytes.">Birth of a domestic cat kitten produced by vitrification of lipid polarized in vitro matured oocytes.</a> Cryobiology. 68 (3), 459-466 (2014).</li><li>Fernandez-Gonzalez, L., Jewgenow, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+feline+oocytes+by+vitrification+using+commercial+kits+and+slush+nitrogen+technique.">Cryopreservation of feline oocytes by vitrification using commercial kits and slush nitrogen technique.</a> Reproduction in Domestic Animals. 52, 230-234 (2017).</li><li>Colombo, M., Morselli, M. G., Tavares, M. R., Apparicio, M., Luvoni, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+competence+of+domestic+cat+vitrified+oocytes+in+3D+enriched+culture+conditions.">Developmental competence of domestic cat vitrified oocytes in 3D enriched culture conditions.</a> Animals. 9 (6), 329 (2019).</li><li>Colombo, M., Morselli, M. G., Apparicio, M., Luvoni, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granulosa+cells+in+three-dimensional+culture:+A+follicle-like+structure+for+domestic+cat+vitrified+oocytes.">Granulosa cells in three-dimensional culture: A follicle-like structure for domestic cat vitrified oocytes.</a> Reproduction in Domestic Animals. , (2020).</li><li>Wood, T. C., Wildt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+quality+of+the+cumulus-oocyte+complex+in+the+domestic+cat+on+the+ability+of+oocytes+to+mature,+fertilize+and+develop+into+blastocysts+in+vitro.">Effect of the quality of the cumulus-oocyte complex in the domestic cat on the ability of oocytes to mature, fertilize and develop into blastocysts in vitro.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 110 (2), 355-360 (1997).</li><li>Cobo, A., Kuwayama, M., P&#233;rez, S., Ruiz, A., Pellicer, A., Remoh&#237;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+concomitant+outcome+achieved+with+fresh+and+cryopreserved+donor+oocytes+vitrified+by+the+Cryotop+method.">Comparison of concomitant outcome achieved with fresh and cryopreserved donor oocytes vitrified by the Cryotop method.</a> Fertility and Sterility. 89 (6), 1657-1664 (2008).</li><li>Mullen, S. F., Critser, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+science+of+cryobiology.">The science of cryobiology.</a> Oncofertility - Fertility preservation for Cancer Survivors. , 83-109 (2007).</li><li>Fahy, G. M., Wowk, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+cryopreservation+by+vitrification.">Principles of cryopreservation by vitrification.</a> Methods in Molecular Biology. 1257, 21-82 (2015).</li><li>Apparicio, M., Ruggeri, E., Luvoni, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitrification+of+immature+feline+oocytes+with+a+commercial+kit+for+bovine+embryo+vitrification.">Vitrification of immature feline oocytes with a commercial kit for bovine embryo vitrification.</a> Reproduction in Domestic Animals. 48 (2), 240-244 (2013).</li><li>Brambillasca, F., Guglielmo, M. C., Coticchio, G., Mignini Renzini, M., Dal Canto, M., Fadini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+challenges+to+efficient+immature+oocyte+cryopreservation.">The current challenges to efficient immature oocyte cryopreservation.</a> Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 30 (12), 1531-1539 (2013).</li><li>Moussa, M., Shu, J., Zhang, X., Zeng, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+mammalian+oocytes+and+embryos:+current+problems+and+future+perspectives.">Cryopreservation of mammalian oocytes and embryos: current problems and future perspectives.</a> Science China Life Sciences. 57 (9), 903-914 (2014).</li><li>Luvoni, G., Pellizzari, P., Battocchio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+slow+and+ultrarapid+freezing+on+morphology+and+resumption+of+meiosis+in+immature+cat+oocytes.">Effects of slow and ultrarapid freezing on morphology and resumption of meiosis in immature cat oocytes.</a> Journal of Reproduction and Fertility. Supplement. 51, 93-98 (1997).</li><li>Calvo, J. J., Robert, D., Viqueira, M., Lombide, P., Calvo, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitrified+and+in+vitro+matured+oocytes+viability+from+adult+housecat+(Felis+catus)+in+reproductive+season.">Vitrified and in vitro matured oocytes viability from adult housecat (Felis catus) in reproductive season.</a> International Journal of Morphology. 33 (4), (2015).</li><li>Nowak, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+viability+of+Serval+(Leptailurus+serval)+and+Pallas+Cat+(Felis+manul)+oocytes+after+cryopreservation+using+the+Rapid-I+Method.">The viability of Serval (Leptailurus serval) and Pallas Cat (Felis manul) oocytes after cryopreservation using the Rapid-I Method.</a> Cryo Letters. 40 (4), 226-230 (2019).</li></ol>

ऊसाइट क्रायोप्रिजर्वेशन एक महत्वपूर्ण जर्मप्लाज्म संरक्षण तकनीक है, विशेष रूप से टैक्सा में जहां कई प्रजातियां खतरे में हैं, जैसे फेलिडी परिवार। इस पांडुलिपि में अपरिपक्व बिल्ली ओसाइट्स के विट्रीफ...

क्रायोप्रिजर्वेशन असिस्टेड प्रजनन तकनीकों (एआरटी) का एक महत्वपूर्ण कदम बन गया है। मनुष्यों में, यह चिकित्सा या व्यक्तिगत कारणों के लिए प्रजनन क्षमता या पितृत्व के स्थगन के संरक्षण की अनुमति देता है । जानवरों में, विशेष रूप से खेत जानवरों और पालतू जानवरों में, या विशेष रूप से जंगली लुप्तप्राय प्रजातियों में, नियोजित संभोग में दूरी और समय को दूर करना आवश्यक है। जब पैदा होने वाले व्यक्तियों को अभी तक नहीं चुना गया है या भ्रूण ठंड से जुड़े नैतिक मुद्दों से बचने के लिए, विशेष रूप से मानव चिकित्सा1में, गेमटे क्रायोप्रिजर्वेशन सबसे अच्छा विकल्प है। शुक्राणुओं को संरक्षित करना और विगलन के बाद संतोषजनक परिणाम देना अपेक्षाकृत आसान है, लेकिन उनकी संरचनात्मक विशेषताओं के कारण ओसाइट्स, स्टोर करने के लिए अधिक जटिल हो सकते हैं। दरअसल, कम सतह/मात्रा अनुपात, साथ ही ऊप्लाज्मा के आसपास जोना पेलुसिडा की उपस्थिति, कोशिका2में क्रायोप्रोटेक्टेंट और पानी के आंदोलन को सीमित करती है । इसके अलावा, फेलिड सहित घरेलू जानवरों में, उन्हें लिपिड-समृद्ध साइटोप्लाज्म की विशेषता है, जिसे उन्हें क्रायोप्रिजर्वेशन 3 के प्रति अधिक संवेदनशील बनाने के लिए सोचाजाताहै।
अधिकांश फेलिड्स को धमकी दी जाती है, और घरेलू बिल्ली का उपयोग नियमित ओवेरेक्टॉमी से गोनाड की उपलब्धता के लिए जर्मप्लाज्म संरक्षण के लिए प्रोटोकॉल विकसित करने के लिए एक मॉडल के रूप में किया जाता है। जंगली जानवरों में, गोनाड को वैकल्पिक सर्जरी या (अधिक बार) पोस्टमार्टमके बाद प्राप्त किया जा सकता है, और अपरिपक्व (अंकुरित वेसिकल) गेमेस को वापस लाया जा सकता है। हार्मोनल उत्तेजना परिपक्व (मेटाफेज द्वितीय) oocytes प्राप्त करने के उद्देश्य से मानव ARTs में के रूप में के रूप में आम नहीं है क्योंकि नैतिक मुद्दों और प्रजातियों के-और उपचार के लिए व्यक्तिगत विशिष्ट प्रतिक्रिया4।
इसलिए, क्रायोप्रिजर्वेशन रणनीतियों के विकास ने अपरिपक्व गेम्स पर ध्यान केंद्रित किया है, जिसे आमतौर पर दुर्लभ व्यक्तियों की अप्रत्याशित या अचानक मृत्यु के बाद वापस लाया जा सकता है। जैविक दृष्टिकोण से, अपरिपक्व या परिपक्व गेम के क्रायोप्रिजर्वेशन में कुछ अंतर हैं, प्रत्येक के फायदे हैं। सबसे पहले, डीएनए अपरिपक्व ओसाइट्स में अधिक संरक्षित है, जिसके अंकुरित वेसिकल में परमाणु झिल्ली से घिरे गुणसूत्र होते हैं, जबकि मेटाफेज II ओसाइट्स का मेयोटिक धुरी क्रायोनिंज5के लिए अधिक असुरक्षित हो सकता है। दूसरे, ठंड से प्रेरित साइटोस्केलेटन नुकसान धुरी रोटेशन, ध्रुवीय शरीर के निष्कासन, प्रोन्यूक्लियर माइग्रेशन और साइटोकिन्सिस को प्रभावित कर सकता है, जिसका ओसाइट विकास चरण के अनुसार अलग-अलग प्रभाव हो सकते हैं, जो मेयोसिस प्रगति या निषेचन के बाद की घटनाओं को प्रभावित करते हैं। अंत में, और शायद सबसे महत्वपूर्ण बात, जबकि परिपक्व ओसाइट्स निषेचित होने के लिए तैयार हैं, अपरिपक्व गेम परमाणु और साइटोप्लाज्मिक परिपक्वता6के माध्यम से जाने के लिए आसपास के क्यूमुलस कोशिकाओं के समर्थन पर भरोसा करते हैं, और यही कारण है कि पूरे क्यूमुलस-ओसाइट कॉम्प्लेक्स (सीओसी) क्रायोप्रीयरेयव हैं। हालांकि, क्यूमुलस कोशिकाओं का नुकसान और/या गेम्टे और आसपास के दैहिक कोशिकाओं के बीच कार्यात्मक संबंध का नुकसान शायद अपरिपक्व COCs के क्रायोप्रिजर्वेशन का सबसे हानिकारक प्रभाव है ।
क्रायोप्रिजर्वेशन तकनीकों में, विट्रीफिकेशन एक है जिसे क्षेत्र की स्थितियों में अधिक आसानी से लागू किया जा सकता है। धीमी गति से (या नियंत्रित दर) ठंड की तुलना में, विट्रीफिकेशन तेज है और इसके लिए विशिष्ट उपकरणों की आवश्यकता नहीं होती है, जैसे कि प्रोग्रामेबल फ्रीजर। विट्रीफिकेशन के तीन मौलिक सिद्धांतों (यानी उच्च चिपचिपाहट, उच्च क्रायोप्रोटेक्टिव एकाग्रता, छोटी मात्रा और अल्ट्रा-रैपिड तापमान में कमी से जुड़े) को संतुष्ट करने के लिए, कई मीडिया और समर्थन विशेष रूप से विकसित किए गए हैं और बिल्लियों में अपरिपक्व और परिपक्व ओसाइट्स दोनों के लिए उपयोग किए जाते हैं। सरल तिनके7के साथ शुरुआत, उपकरणों तो "न्यूनतम मात्रा" लक्ष्य तक पहुंचने के लिए विकसित किया गया । क्रायोलोप8,ओपन खींचा तिनके (ऑप्स)9,प्लास्टिक गटर (संशोधित स्ट्रॉ)10 और क्रायोट्यूब11 का उपयोग किया गया है, जब तक कि एक अधिक कुशल डिवाइस (यानी, क्रायोटॉप)11 नियोजितनहीं किया गया था, अस्तित्व और मेयोसिस बहाली में सुधार। क्रायोटॉप(पूरक चित्रा 1)एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध समर्थन है जो विट्रीफिकेशन के लिए वैकल्पिक खुली प्रणाली बन गया है। मानव ओसाइट्स और भ्रूण के विट्रीफिकेशन के लिए विकसित, इसमें एक छोटी सी फिल्म पट्टी होती है जो एक कठोर प्लास्टिक धारक से जुड़ी होती है, जो भंडारण12के दौरान प्लास्टिक ट्यूब कैप द्वारा संरक्षित होती है। इसकी उपयोगिता और विट्रीफिकेशन वॉल्यूम (0.1 माइक्रोन) में अत्यधिक कमी के लिए धन्यवाद, जो बेहद तेजी से ठंडा और वार्मिंग दरों की ओर भी जाता है, यह विट्रीफिकेशन समर्थन घरेलू बिल्ली सहित कई प्रजातियों में तेजी से लागू किया गया है, जिसमें इसका उपयोग विभिन्न प्रकार,के मीडिया13,14, 15,,15,16,17के साथ किया गया है।,
इस पांडुलिपि का उद्देश्य एक संग्रह-विट्रीफिकेशन-वार्मिंग प्रोटोकॉल का वर्णन करना है, जिसमें मूल रूप से मानव ओसाइट्स के लिए विकसित एक से मामूली संशोधन किए गए हैं, जो न्यूनतम मात्रा विट्रीफिकेशन के लिए प्रयोगशाला-निर्मित मीडिया और वाणिज्यिक समर्थन को नियोजित करते हैं और इमामाचर फेलिन्स के क्रायोप्रिजर्वेशन के लिए क्षेत्र की स्थितियों में आसानी से लागू किया जा सकता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2942</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic pipettes &#38; tips</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>Needed to pipette 20, 100, 240 and 300 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scalpels</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>Size 10 is usually ok</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bunsen beak</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamps</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>Some small (Mosquito clamp) for ovary isolation, some bigger (Klemmer clamp) to work in liquid nitrogen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotop</td>
			<td>Kitazato (distributor: MBT - Medical Biological Technologies)</td>
			<td>01.CR</td>
			<td>Distributors and catalog number may change in different countries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol (EG)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9129</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F9665</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipettes</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>Advised lenght 230 mm (100+130)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gobelets</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>According to the canisters of the storage tank</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating stage</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>All heating stages are ok, as long as they can keep 38&#186;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M4530</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8662</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin G sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3032</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinyl alcohol (PVA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8136</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Repro plate</td>
			<td>Kitazato (distributor: MBT - Medical Biological Technologies)</td>
			<td>01.K-2</td>
			<td>Distributors and catalog number may change in different countries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>As long as the operator can select the oocytes, other stereomicroscopes are ok</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Storage tank</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>Any regularly filled tank is ok</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9137</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam/nitrogen resistant box</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>All boxes which can contain liquid nitrogen are ok, as long as the operator is comfortable. Kitazato box is called &#34;Cooling Rack&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S1888</td>
			<td>/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timers</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>All timers which can be set on times until 9 minutes are ok</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimum volume vitrification of immature feline oocytes

जंगली जानवरों के संरक्षण कार्यक्रमों में, गेमे बैंकिंग मूल्यवान व्यक्तियों और दुर्लभ प्रजातियों के आनुवंशिक संसाधनों की रक्षा और जैव विविधता संरक्षण को बढ़ावा देने के लिए महत्वपूर्ण है । फेलिड्स में, अधिकांश प्रजातियों को विलुप्त होने की धमकी दी जाती है, और घरेलू नस्लों का उपयोग जर्मप्लाज्म बैंकिंग के लिए प्रोटोकॉल की दक्षता बढ़ाने के लिए एक मॉडल के रूप में किया जाता है। ओसाइट क्रायोप्रिजर्वेशन तकनीकों में, विट्रीफिकेशन मानव और पशु चिकित्सा सहायता प्राप्त प्रजनन में अधिक से अधिक लोकप्रिय है। क्रायोटॉप विट्रीफिकेशन, जो पहले मानव ओसाइट्स और भ्रूण के लिए विकसित किया गया था, ने बिल्ली ओसाइट्स के लिए अच्छी तरह से अनुकूल होने का प्रदर्शन किया है। यह विधि कई फायदे प्रदान करती है, जैसे कि क्षेत्र की स्थिति में व्यवहार्यता और प्रक्रिया की गति, जो कई नमूनों को संसाधित करने की आवश्यकता होने पर सहायक हो सकती है। हालांकि, दक्षता दृढ़ता से ऑपरेटर के कौशल पर निर्भर है, और अंतर और अंतर प्रयोगशाला मानकीकरण की जरूरत है, साथ ही कार्मिक प्रशिक्षण । यह प्रोटोकॉल ओसाइट संग्रह से वार्मिंग तक, कदम क्षेत्र के अनुकूल प्रोटोकॉल द्वारा एक कदम में एक वाणिज्यिक समर्थन पर अपरिपक्व बिल्ली के समान ओसाइट्स के न्यूनतम मात्रा विट्रीफिकेशन का वर्णन करता है। प्रोटोकॉल के बाद, वार्मिंग में ओसाइट अखंडता और व्यवहार्यता का संरक्षण (90% जितना अधिक) उम्मीद की जा सकती है, हालांकि अभी भी वार्मिंग के बाद परिपक्वता और भ्रूणीय विकास परिणामों में सुधार की गुंजाइश है।

वर्तमान प्रोटोकॉल (चित्रा 1 और पूरकचित्रा 1) के अनुसार बिल्ली ओसाइट विट्रीफिकेशन और वार्मिंग के बाद, अधिकांश गेम्स जीवित रहतेहैं। विट्रीफिकेशन के बाद, अन्य तकनीकों के बीच, व्यवहार्यत?...

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Minimum Volume Vitrification of Immature Feline Oocytes

यह पांडुलिपि वाणिज्यिक समर्थन पर प्रयोगशाला निर्मित मीडिया के साथ अपरिपक्व बिल्ली ओसाइट्स के न्यूनतम मात्रा विट्रीफिकेशन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करती है। यह पूर्व वीवो गोनाड से vitrification और वार्मिंग के लिए oocyte अलगाव से हर कदम को शामिल किया गया ।

अपरिपक्व फेलिन ओसाइट्स का न्यूनतम वॉल्यूम विट्रीफिकेशन

In wild animals&#8217; conservation programs, gamete banking is crucial to safeguard genetic resources of valuable individuals and rare species and to ...

यह प्रोटोकॉल एक क्रायोप्रिजर्वेशन तकनीक के माध्यम से बिल्ली के समान ओसाइट्स के दीर्घकालिक संरक्षण के लिए उपयोगी है जिसे विट्रीफिकेशन के साथ जाना जाता है, जो पशु प्रजातियों में प्रजनन और जैव विविधता संरक्षण के लिए महत्वपूर्ण है। विट्रीफिकेशन के मुख्य फायदे इसकी गति है क्योंकि इसे 17 मिनट से भी कम समय में पूरा किया जा सकता है और यदि तरल नाइट्रोजन उपलब्ध है तो क्षेत्र की स्थितियों में इसकी व्यवहार्यता। घरेलू बिल्ली जंगली लुप्तप्राय फेलिन के लिए एक व्यवहार्य मॉडल है।क्रायोप्रिजर्वेशन प्रोटोकॉल के विकास और अनुकूलन से फेलिन संरक्षण कार्यक्रमों के लिए गेमेट बायोबैंक स्थापित करने की अनुमति मिलेगी। एक पंक्ति में तीन शंकु कुओं के साथ एक Repro vitrification प्लेट तैयार करके शुरू करते हैं। दूसरे और तीसरे कुओं में पहले कुएं में संतुलन समाधान के 20 माइक्रोलीटर और विट्रीफिकेशन समाधान के 300 माइक्रोलीटर जोड़ें।क्यूमुलस ओसाइट परिसरों या सीओसी को बराबर करने के लिए, पहले कुएं के नीचे एक या अधिक परिसरों को स्थानांतरित करने के लिए एक छोटे बोर पिपेट का उपयोग करें। धीरे-धीरे ड्रॉप की सीमा में संतुलन समाधान के 20 माइक्रोलीटर जोड़ें और तीन मिनट तक प्रतीक्षा करें, फिर संतुलन समाधान के एक और 240 माइक्रोलीटर जोड़ें और नौ मिनट तक प्रतीक्षा करें। प्रतीक्षा करते समय, तरल नाइट्रोजन के साथ एक बॉक्स तैयार करें और प्रयोग या बिल्ली पहचान कोड के साथ एक विट्रीफिकेशन समर्थन लेबल करें।बॉक्स और स्टीरियो माइक्रोस्कोप के पास समर्थन रखो। सीओसी को बराबर करने के बाद, 90 सेकंड से भी कम समय में विट्रीफिकेशन करें। सीओसी को विट्रीफ करने के लिए, दूसरे कुएं से विट्रीफिकेशन समाधान के साथ छोटे बोर के पिपेट को भरें।सीओसी को पहले कुएं के नीचे से लें और उन्हें दूसरे कुएं की सतह पर ले जाएं। पिपेट को विट्रीफिकेशन समाधान से धोएं, फिर सीओसी को कुएं के दूसरे क्षेत्र में ले जाएं और आसपास के समाधान को मिलाएं। कुएं के दूसरे क्षेत्र से समाधान के साथ पिपेट भरें।सीओसी को ले जाएं और उनके आसपास के माध्यम को पिपेट के साथ मिलाएं। इस प्रक्रिया को एक बार और दोहराएं। इसके बाद, पिपेट को तीसरे कुएं से विट्रीफिकेशन समाधान से धोएं और इसका उपयोग सीओसी को तीसरे कुएं के नीचे ले जाने के लिए करें।फिर, आसपास के समाधान को मिलाएं। कुएं के दूसरे क्षेत्र से समाधान के साथ पिपेट भरने के बाद, सीओसी को स्थानांतरित करें और समाधान को मिलाएं। इस प्रक्रिया को दोहराएं।कुएं के दूसरे क्षेत्र से विट्रीफिकेशन समाधान के साथ पिपेट टिप भरें और इसका उपयोग टिप के करीब विट्रीफिकेशन समर्थन की पट्टी पर COCs लोड करने के लिए करें, फिर अतिरिक्त माध्यम को एस्पिरेट करें। तरल नाइट्रोजन में विट्रीफिकेशन समर्थन को तुरंत डुबकी लगाएं और इसे बंद करने के लिए क्लैंप का उपयोग करें, जिससे यह सुनिश्चित हो सके कि यह डूबे हुए रहें। लोडेड विट्रीफिकेशन को गोबलेट में स्टोर करें और वार्मिंग तक उन्हें स्टोरेज लिक्विड नाइट्रोजन टैंक में रखें।हीटिंग स्टेज को स्टीरियो माइक्रोस्कोप के करीब रखें और इसे 38 डिग्री सेल्सियस पर चालू करें। मंच के शीर्ष पर पेट्री डिश के ढक्कन को गर्म करें, फिर विट्रिफिकेशन स्टोरेज टैंक से तरल नाइट्रोजन के साथ एक बॉक्स में स्थानांतरित करें। गर्म होने के लिए प्रत्येक विट्रीफिकेशन समर्थन के लिए एक रिप्रो प्लेट की एक पंक्ति तैयार करें।पहले कुएं में कमजोर पड़ने के 300 माइक्रोलीटर और दूसरे और तीसरे कुओं में वाशिंग सॉल्यूशन के 300 माइक्रोलीटर जोड़ें। गलन का घोल इनक्यूबेटर से बाहर निकालें और पेट्री डिश के ढक्कन पर 100 माइक्रोलीटर गिरा दें। तरल नाइट्रोजन के अंदर विट्रीफिकेशन सपोर्ट खोलने के लिए क्लैंप का उपयोग करें।पेट्री डिश ढक्कन को स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे रखें, फिर जल्दी से विट्रीफिकेशन समर्थन उठाएं और अपनी पट्टी को बूंद में विसर्जित करें, इसे तब तक स्थानांतरित करें जब तक कि सभी सीओसी अलग न हो जाएं। खाली होते ही ड्रॉप से समर्थन निकालें, लेकिन सीओसी को एक मिनट के लिए विगलन समाधान में छोड़ दें। कमजोर पड़ने के समाधान के साथ एक पिपेट भरें और इसका उपयोग कोक्स को विगलन समाधान ड्रॉप से कमजोर पड़ने के समाधान के साथ पहले कुएं के नीचे ले जाने के लिए करें।सीओसी को तीन मिनट के लिए वहां छोड़ दें । पिपेट को दूसरे कुएं से वॉश सॉल्यूशन से धोएं, फिर सीओसी लें और उन्हें दूसरे कुएं के नीचे ले जाएं। पांच मिनट तक इंतजार करें।पिपेट को तीसरे कुएं से एक समाधान के साथ धोएं और इसका उपयोग सीओसी को दूसरे कुएं से तीसरे कुएं की सतह पर ले जाने के लिए करें। तीसरे कुएं के नीचे को छूने के लिए COCs के लिए प्रतीक्षा करें। फिर प्रक्रिया को एक और अच्छी तरह से क्षेत्र के साथ दोहराएं।समाप्त होने पर, पिपेट को संस्कृति माध्यम से धोएं और ओसाइट्स को संस्कृति पकवान में ले जाएं। इस प्रोटोकॉल के अनुसार ओसाइट विट्रीफिकेशन और वार्मिंग के बाद अधिकांश गेमेट जीवित रहते हैं। फ्लोरोसीन डायसेटेट और प्रोपिडियम आयोडाइड के साथ दाग एक व्यवहार्य विट्रीफाइड गर्म बिल्ली क्यूमुलस ओसाइट परिसर की एक प्रतिनिधि तस्वीर यहां दिखाई गई है।यह तालिका विट्रीफिकेशन के बाद अस्तित्व के प्रतिशत को दर्शाती है, जिसमें इन विट्रो परिपक्वता के लिए ओसाइट्स के पोस्ट-वार्मिंग डेटा को दर्शाया गया है। ४३५ oocytes में से, ३९५ बच गया, एक समग्र ९०.८% के बाद वार्मिंग व्यवहार्यता स्कोरिंग । हालांकि वार्मिंग के बाद कुछ रूपात्मक बदलाव नजर आ सकते हैं।सबसे अधिक बार रूपात्मक असामान्यताएं ओप्लाज्म आकार और ग्रैन्युलेशन में परिवर्तन, क्यूमुलस कोशिकाओं की आंशिक या कभी-कभी कुल हानि, और जोना पेलुसिडा फ्रैक्चर हैं। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, मीडिया को पहले से तैयार करना याद रखें ताकि वे उपयोग से पहले सही तापमान हों और सेल विषाक्तता से बचने के लिए प्रोटोकॉल तापमान और समय का पालन करें। प्रोटोकॉल अन्य प्रजातियों के oocytes पर भी लागू किया जा सकता है।यदि सफल, यह भी लुप्तप्राय felines में जैव विविधता संरक्षण के लिए रोगाणु प्लाज्म बैंकिंग में योगदान कर सकता है ।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Expression of Fluorescent Proteins in Branchiostoma lanceolatum by mRNA Injection into Unfertilized Oocytes

Expression of Fluorescent Proteins in Branchiostoma lanceolatum by mRNA Injection into Unfertilized Oocytes

फ्लोरोसेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति में<em&gt; Branchiostoma lanceolatum</em&gt; Unfertilized Oocytes में mRNA इंजेक्शन द्वारा

We report here a robust and efficient protocol for the expression of fluorescent proteins after mRNA injection into unfertilized oocytes of the ...

Isolation and Characterization of Mouse Antral Oocytes Based on Nucleolar Chromatin Organization

Nucleolar Chromatin संगठन के आधार पर माउस कोटरीय oocytes के अलगाव और विशेषता

This protocol describes a simple and quick method to isolate and characterize mouse antral GV (Germinal Vesicle) oocytes as able (SN, Surrounded ...

Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

संशोधित MicroSecure कांच में रूपांतर: एक सुरक्षित, सरल और अत्यधिक मानव ब्लास्टोसिस्ट के लिए प्रभावी Cryopreservation प्रक्रिया

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

Analysis of Chromosome Segregation, Histone Acetylation, and Spindle Morphology in Horse Oocytes

क्रोमोजोम अलगाव का विश्लेषण, हिस्टोन एसिटिलेशन, और स्पिंडल मोर्फ़ोलॉजी इन हॉर्स ओक्साइट्स

The field of assisted reproduction has been developed to treat infertility in women, companion animals, and endangered species. In the horse, assisted ...

Generation of Genetically Modified Mice through the Microinjection of Oocytes

Oocytes के सूक्ष्मदर्शन के माध्यम से आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहे का उत्पादन

The use of genetically modified mice has significantly contributed to studies on both physiological and pathological in vivo processes. The pronuclear ...

A Neural Network-Based Identification of Developmentally Competent or Incompetent Mouse Fully-Grown Oocytes

तंत्रिका नेटवर्क-आधारित विकास के सक्षम या अक्षम माउस की पहचान पूरी तरह से बड़े हो अंडाणुओं

Infertility clinics would benefit from the ability to select developmentally competent vs. incompetent oocytes using non-invasive procedures, thus ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

न्यूनतम इनवेसिव भ्रूण हस्तांतरण और खरगोश मॉडल में इष्टतम भ्रूण के चरण में भ्रूण काचन

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Human Blastocyst Biopsy and Vitrification

मानव ब्लास्टोसिस्ट बायोप्सी और Vitrification

Blastocyst biopsy is performed to obtain a reliable genetic diagnosis during IVF cycles with preimplantation genetic testing. Then, the ideal workflow ...

In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

पशुओं में अर्ली एंट्रल कूप से Oocytes के लिए विट्रो संस्कृति रणनीति

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish

जेब्राफिश के ओवेरियन रोम में कूप कोशिकाओं और ओसाइट्स का पृथक्करण

Zebrafish has become an ideal model to study the ovarian development of vertebrates. The follicle is the basic unit of the ovary, which consists of ...