Name: detection of microrna expression in the kidneys of immunoglobulin a nephropathic mice
Uploaded: 2020-07-08T14:00:00
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हम इस पांडुलिपि के मसौदे को संपादित करने के लिए एडांज ग्रुप (www.edanzediting.com) से सारा विलियम्स, पीएचडी को धन्यवाद देते हैं।

पशु प्रयोगों को जिची मेडिकल यूनिवर्सिटी की पशु नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और प्रयोगशाला जानवरों के लिए जिची मेडिकल यूनिवर्सिटी गाइड से प्रायोगिक जानवरों के उपयोग और देखभाल दिशानिर्द...

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	<li>Rodrigues, J. C., Haas, M., Reich, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgA+Nephropathy.">IgA Nephropathy.</a> Clinical Journal of the American Society of Nephrology. 12 (4), 677-686 (2017).</li><li>Szeto, C. C., Li, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+in+IgA+nephropathy.">MicroRNAs in IgA nephropathy.</a> Nature Reviews Nephrology. 10 (5), 249-256 (2014).</li><li>Wyatt, R. J., Julian, B. 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P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+miR-148b+expression+promotes+aberrant+glycosylation+of+IgA1+in+IgA+nephropathy.">Abnormal miR-148b expression promotes aberrant glycosylation of IgA1 in IgA nephropathy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 23 (5), 814-824 (2012).</li><li>Serino, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+a+retrospective+international+study,+circulating+miR-148b+and+let-7b+were+found+to+be+serum+markers+for+detecting+primary+IgA+nephropathy.">In a retrospective international study, circulating miR-148b and let-7b were found to be serum markers for detecting primary IgA nephropathy.</a> Kidney International. 89 (3), 683-692 (2016).</li><li>Muso, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+production+of+glomerular+extracellular+matrix+in+a+new+mouse+strain+of+high+serum+IgA+ddY+mice.">Enhanced production of glomerular extracellular matrix in a new mouse strain of high serum IgA ddY mice.</a> Kidney International. 50 (6), 1946-1957 (1996).</li><li>Kurano, M., Yatomi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+gas+chromatography+mass+spectrometry+to+elucidate+metabolites+predicting+the+phenotypes+of+IgA+nephropathy+in+hyper+IgA+mice.">Use of gas chromatography mass spectrometry to elucidate metabolites predicting the phenotypes of IgA nephropathy in hyper IgA mice.</a> Plos One. 14 (7), 0219403 (2019).</li><li>Hyun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cells+improve+renal+function+in+a+mouse+model+of+IgA+nephropathy.">Adipose-derived stem cells improve renal function in a mouse model of IgA nephropathy.</a> Cell Transplantation. 21 (11), 2425-2439 (2012).</li><li>Katsuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+analysis+of+a+mouse+model+of+immunoglobulin+A+nephropathy+reveals+an+enhanced+PDGF-EDG5+cascade.">Genomic analysis of a mouse model of immunoglobulin A nephropathy reveals an enhanced PDGF-EDG5 cascade.</a> The Pharmacogenomics Journal. 1 (3), 211-217 (2001).</li><li>Morse, S. M., Shaw, G., Larner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+mRNA+and+protein+extraction+from+the+same+experimental+sample+using+a+commercially+available+column-based+RNA+preparation+kit.">Concurrent mRNA and protein extraction from the same experimental sample using a commercially available column-based RNA preparation kit.</a> BioTechniques. 40 (1), 54-58 (2006).</li><li>Mestdagh, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+quantitative+miRNA+expression+platforms+in+the+microRNA+quality+control+(miRQC)+study.">Evaluation of quantitative miRNA expression platforms in the microRNA quality control (miRQC) study.</a> Nature Methods. 11 (8), 809-815 (2014).</li><li>Sauer, E., Babion, I., Madea, B., Courts, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evidence+based+strategy+for+normalization+of+quantitative+PCR+data+from+miRNA+expression+analysis+in+forensic+organ+tissue+identification.">An evidence based strategy for normalization of quantitative PCR data from miRNA expression analysis in forensic organ tissue identification.</a> Forensic Science International: Genetics. 13, 217-223 (2014).</li><li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+levels+of+miR-146a+and+miR-155+in+kidney+biopsy+and+urine+from+patients+with+IgA+nephropathy.">Elevated levels of miR-146a and miR-155 in kidney biopsy and urine from patients with IgA nephropathy.</a> Disease Markers. 30 (4), 171-179 (2011).</li><li>Hennino, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-21-5p+renal+expression+is+associated+with+fibrosis+and+renal+survival+in+patients+with+IgA+nephropathy.">miR-21-5p renal expression is associated with fibrosis and renal survival in patients with IgA nephropathy.</a> Scientific Reports. 6, 27209 (2016).</li><li>Green, M. R., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> How to Win the Battle with RNase. 2019 (2), (2019).</li></ol>

हम इस नई विधि का उपयोग करके एक आईजीए नेफ्रोपैथी माउस मॉडल (एचआईजीए चूहों) के गुर्दे में एमआईआरएनए के अभिव्यक्ति स्तर को मापने में सक्षम थे। आईजीए नेफ्रोपैथी एक अस्पष्टीकृत बीमारी है जिसे इसके एटियलजि ...

इम्युनोग्लोबुलिन ए (आईजीए) नेफ्रोपैथी एक प्रकार का प्राथमिक ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस है जो गुर्दे के ग्लोमेरुलर मेसांगियलक्षेत्र 1,2 में आईजीए के असामान्य जमाव की विशेषता है। यह प्राथमिक ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस में सबसे आम है और 20% -40% रोगियों में अंतिम चरण गुर्दे की विफलता की ओर जाता है। कारण अभी भी अज्ञात है लेकिन लगातार म्यूकोसल संक्रमण को 1,3 में फंसाया गया है। कॉर्टिकोस्टेरॉइड्स, इम्यूनोसप्रेसेन्ट्स, और रेनिन-एंजियोटेंसिन सिस्टम इनहिबिटर को चिकित्सीय विधियों1,3 के रूप में प्रस्तावित किया गया है, लेकिन पूरी तरह से स्थापित नहीं किया गयाहै। इसलिए, आईजीए नेफ्रोपैथी के इलाज के एटियलजि और चिकित्सीय तरीकों को स्पष्ट करने के लिए आगे के शोध की आवश्यकता है।
माइक्रोआरएनए (एमआईआरएनए) छोटे, गैर-कोडिंग आरएनए हैं जो जीन अभिव्यक्ति 4,5 को विनियमित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। एमआईआरएनए को विभिन्न बीमारियों के रोगजनन में शामिल होने की सूचना दी गई है, और कुछ को रोग बायोमार्कर और चिकित्सीय एजेंट 4,5 के रूप में पहचाना गया है। हाल के वर्षों में, एमआईआरएनए और आईजीए नेफ्रोपैथी के रोगजनन के बीच एक संबंध भी 2,6,7 बताया गया है। उदाहरण के लिए, एमआईआर -148 बी को आईजीए नेफ्रोपैथी 2,6,7 के रोगियों में आईजीए की संरचनात्मक असामान्यताओं में शामिल दिखाया गया था, जबकि एमआईआर -148 बी और एलईटी -7 बी को आईजीए नेफ्रोपैथी7 का पता लगाने के लिए नए बायोमार्कर के रूप में प्रलेखित किया गया था। हालांकि आईजीए नेफ्रोपैथी पर एमआईआरएनए के प्रभावों को समझने से एटियलजि और उपचार2 को और स्पष्ट करने में मदद मिल सकती है, छोटे पशु मॉडल का उपयोग करके आईजीए नेफ्रोपैथी में एमआईआरएनए की रूपरेखा के लिए मानक तरीके अभीतक स्थापित नहीं किए गए हैं।
हमने यहां एक आईजीए नेफ्रोपैथी माउस मॉडल (एचआईजीए चूहों) के गुर्दे में एमआरएनए अभिव्यक्ति के स्तर को मापने के लिए एक सरल और विश्वसनीय विधि विकसित की है। एचआईजीए माउस एक विशिष्ट डीडीवाई स्ट्रेन है जो विशेष रूप से सीरम आईजीए के उच्च स्तर और किडनी ग्लोमेरुली 8,9,10,11 में आईजीए के असामान्य जमाव को दर्शाता है। इसलिए, एचआईजीए चूहों को आईजीए नेफ्रोपैथी माउस मॉडल 8,9,10,11 के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। हमारी विधि में चार प्रमुख चरण शामिल हैं: सबसे पहले, एचआईजीए चूहों से गुर्दे के नमूने प्राप्त करना; दूसरा, सिलिका झिल्ली-आधारित स्पिन कॉलम का उपयोग करके नमूनों को समरूप बनाना और कुल आरएनए को शुद्ध करना; तीसरा, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन का उपयोग करके कुल आरएनए से पूरक डीएनए (सीडीएनए) को संश्लेषित करना; और चौथा, मात्रात्मक रिवर्स-ट्रांसक्रिप्शन पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूआरटी-पीसीआर) द्वारा एमआरएनए के अभिव्यक्ति स्तर का पता लगाना। इस विधि के लिए तर्क और परिणामों की विश्वसनीयता पिछली रिपोर्ट12,13 पर आधारित है। हम दिखाते हैं कि यह एक आईजीए नेफ्रोपैथी माउस मॉडल में एमआरएनए अभिव्यक्ति के स्तर को सटीक रूप से मापने के लिए एक उपयोगी तकनीक है, और इसका उपयोग आईजीए नेफ्रोपैथी में एमआईआरएनए में भविष्य के शोध को सुविधाजनक बनाने के लिए किया जा सकता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BALB/cCrSlc (25-week-old, female)</td>
			<td>Japan SLC, Inc.</td>
			<td>none</td>
			<td>Mouse for control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIGA/NscSlc (25-week-old, female)</td>
			<td>Japan SLC, Inc.</td>
			<td>none</td>
			<td>IgA nephropathy mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical 96 well reaction plate for qRT-PCR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4316813</td>
			<td>96-well reaction plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4311971</td>
			<td>adhesive film for 96-well reaction plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miScript II RT kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>218161</td>
			<td>Experimental kit for synthesis of cDNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNeasy Mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>217004</td>
			<td>Experimental kit fot extraction of total RNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miScript Primer Assay (RNU6-2)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00033740</td>
			<td>miRNA-specific primer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miScript Primer Assay (miR-155-5p)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00001701</td>
			<td>miRNA-specific primer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miScript Primer Assay (miR-146a-5p)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00001638</td>
			<td>miRNA-specific primer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miScript Primer Assay (miR-21-5p)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00009079</td>
			<td>miRNA-specific primer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miScript SYBR Green PCR kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>218073</td>
			<td>Experimental kit for real-time PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIA shredder</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79654</td>
			<td>biopolymer-shredding spin column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantStudio 12K Flex Flex Real-Time PCR system</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4472380</td>
			<td>real-time PCR instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantStudio 12K Flex Software version 1.2.1.</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4472380</td>
			<td>real-time PCR instrument software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>takara biomasher standard</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td>9790B</td>
			<td>silicon homogenizer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of microrna expression in the kidneys of immunoglobulin a nephropathic mice

इम्युनोग्लोबुलिन ए (आईजीए) नेफ्रोपैथी एक प्रकार का प्राथमिक ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस है जो आईजीए के असामान्य जमाव की विशेषता है, जिससे अंत-चरण गुर्दे की विफलता होती है। हाल के वर्षों में, आईजीए नेफ्रोपैथी के रोगजनन में माइक्रोआरएनए (एमआईआरएनए) की भागीदारी की सूचना मिली है। हालांकि, छोटे पशु मॉडल का उपयोग करके आईजीए नेफ्रोपैथी में एमआईआरएनए की प्रोफाइलिंग के लिए कोई स्थापित विधि नहीं है। इसलिए, हमने एक आईजीए माउस मॉडल (एचआईजीए माउस) के गुर्दे में एमआरएनए का विश्लेषण करने के लिए एक विश्वसनीय विधि विकसित की है। इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य नियंत्रित चूहों के गुर्दे में स्तरों की तुलना में एचआईजीए चूहों के गुर्दे में एमआईआरएनए के परिवर्तित अभिव्यक्ति स्तर का पता लगाना है। संक्षेप में, इस विधि में चार चरण होते हैं: 1) एचआईजीए चूहों से गुर्दे के नमूने प्राप्त करना; 2) गुर्दे के नमूनों से कुल आरएनए को शुद्ध करना; 3) कुल आरएनए से पूरक डीएनए को संश्लेषित करना; और 4) एमआईआरएनए के मात्रात्मक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूआरटी-पीसीआर)। इस विधि का उपयोग करते हुए, हमने एचआईजीए चूहों के गुर्दे में कई एमआईआरएनए (एमआईआर -155-5 पी, एमआईआर -146 ए -5 पी और एमआईआर -21-5 पी) के अभिव्यक्ति स्तर का सफलतापूर्वक पता लगाया। इस नई विधि को आईजीए नेफ्रोपैथी में एमआईआरएनए की रूपरेखा बनाने वाले अन्य अध्ययनों पर लागू किया जा सकता है।

हमने एचआईजीए चूहों (एन = 10) के गुर्दे में एमआईआरएनए के अभिव्यक्ति स्तर की जांच की। यह परिणाम पूरी तरह से वर्णित प्रोटोकॉल के आधार पर प्राप्त किया गया था। सी चूहों के गुर्दे को नियंत्रण (एन = 10) के रूप में चुन...

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Detection of MicroRNA Expression in the Kidneys of Immunoglobulin A Nephropathic Mice

माइक्रोआरएनए आईजीए नेफ्रोपैथी के रोगजनन में शामिल हैं। हमने एक आईजीए नेफ्रोपैथी माउस मॉडल (एचआईजीए चूहों) के गुर्दे में माइक्रोआरएनए अभिव्यक्ति के स्तर का पता लगाने के लिए एक विश्वसनीय विधि विकसित की है। यह नई विधि आईजीए नेफ्रोपैथी में एमआईआरएनए की भागीदारी की जांच करने की सुविधा प्रदान करेगी।

इम्युनोग्लोबुलिन ए नेफ्रोपैथिक चूहों के गुर्दे में माइक्रोआरएनए अभिव्यक्ति का पता लगाना

Immunoglobulin A (IgA) nephropathy is a type of primary glomerulonephritis characterized by the abnormal deposition of IgA, leading to the end-stage renal ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

प्रायोगिक Autoimmune Hypophysitis के SJL चूहे में प्रेरण

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

के 4D multimodality इमेजिंग<em&gt; Citrobacter rodentium</emचूहे में&gt; संक्रमण

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

चूहे में स्थानीय तीव्रग्राहिता मापने

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

जांच के लिए गुणात्मक और मात्रात्मक assays और प्रोटीन antimicrobials की विशेषता

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

MicroRNA-based Regulation of Picornavirus Tropism

Picornavirus 【tropism की MicroRNA आधारित विनियमन

Cell-specific restriction of viral replication without concomitant attenuation can benefit vaccine development, gene therapy, oncolytic virotherapy, and ...

Detection and Removal of Nuclease Contamination During Purification of Recombinant Prototype Foamy Virus Integrase

पता लगाने और संयोजक प्रोटोटाइप फोम वायरस Integrase के शोधन के दौरान Nuclease संदूषण को हटाने

The integrase (IN) protein of the retrovirus prototype foamy virus (PFV) is a model enzyme for studying the mechanism of retroviral integration. Compared ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

थाइमस-निर्भर और थाइमस-स्वतंत्र Immunoglobulin Isotype प्रतिक्रियाओं का प्रयोग चूहों में एंजाइम से जुड़े Immunosorbent परख का लक्षण वर्णन

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

साल्मोनेला एसपीपी की स्क्रीनिंग के लिए एक उच्च प्रवाह मंच./शिगेला एसपीपी.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Lung microRNA Profiling Across the Estrous Cycle in Ozone-exposed Mice

फेफड़े microRNA ओजोन-उजागर चूहों में मद चक्र भर में profiling

MicroRNA (miRNA) profiling has become of interest to researchers working in various research areas of biology and medicine. Current studies show a ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

चूहों में मेजबान-रोगज़नक़ प्रतिक्रियाओं और वैक्सीन प्रभावकारिता का मूल्यांकन

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...