Name: measuring naturally acquired phagocytosis-inducing antibodies to plasmodium falciparum parasites by a flow cytometry-based assay
Uploaded: 2020-08-06T16:20:00
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Maiken Visti wird für die hervorragende technische Unterstützung gedankt. Diese Arbeit wurde teilweise durch ein Stipendium (MAVARECA II; 17-02-KU) des dänischen Außenministeriums finanziert und vom Danida Fellowship Centre verwaltet. Der Geldgeber hatte keine Rolle bei der Studiengestaltung, Datenerhebung und -analyse, der Entscheidung zur Veröffentlichung oder der Vorbereitung des Manuskripts.

Die menschlichen Serumproben, die für die hier vorgestellten Ergebnisse verwendet wurden, wurden in einer separaten Studie19gesammelt. Die Sammlung wurde vom Institutional Review Board des Noguchi Memorial Institute for Medical Research, University of Ghana (Studie 038/10-11) und von den Regionalen Forschungsethikkommissionen, Hauptstadtregion Dänemarks (Protokoll H-4-2013-083), genehmigt.
1. Parasitenkultur
HINWEIS: Befolgen Sie die lokalen ...

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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+in+children+with+malaria+to+PfEMP1,+RIFIN+and+SURFIN+expressed+at+the+Plasmodium+falciparum+parasitized+red+blood+cell+surface.">Antibodies in children with malaria to PfEMP1, RIFIN and SURFIN expressed at the Plasmodium falciparum parasitized red blood cell surface.</a> Scientific Reports. 8 (1), 3262 (2018).</li><li>Hommel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+antibody+functional+activity+and+strain-specificity+of+vaccine+candidates+for+malaria+in+pregnancy+using+in+vitro+phagocytosis+assays.">Evaluating antibody functional activity and strain-specificity of vaccine candidates for malaria in pregnancy using in vitro phagocytosis assays.</a> Parasites &amp; Vectors. 11 (69), 1-7 (2018).</li><li>Ampomah, P., Stevenson, L., Ofori, M. 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Das hier vorgestellte Protokoll wurde zuvor beschrieben und12,15,17,31 verwendet, um die Kapazität von Antikörpern zu messen, die auf die Oberfläche von P. falciparum IEs abzielen, um Opsonisierung und Phagozytose durch THP-1-Zellen zu induzieren. Die hier vorgestellten Ergebnisse konzentrieren sich auf natürlich erworbene VAR2CSA-spezifische Antikörper im Plasma/Serum von Frauen,...

Malaria ist eine vektorübertragene Krankheit, die beim Menschen bei einer Infektion mit fünf verschiedenen Arten der Gattung Plasmodiumverursacht wird. Die am weitesten verbreitete Art ist P. falciparum, die auch für die meisten Morbidität und Sterblichkeit verantwortlich ist1. Die klinische Darstellung von Malaria variiert von asymptomatischen oder gutartigen Infektionen bis hin zu komplizierten/schweren Erkrankungen, wobei letztere meist bei Kindern unter fünf Jahren auftritt. Die Exposition gegenüber P. falciparum induziert keine sterile Immunität, aber Personen, die in endemischen Gebieten leben, entwickeln langsam Immunität gegen die klinische Krankheit. Der Schutz ist alters-/expositionsabhängig und die Immunität wird normalerweise während der ersten 5-10 Lebensjahre erworben2. Erwachsene Frauen sind eine wichtige Ausnahme, da schwere Malaria während der Schwangerschaft in einer klinischen Präsentation auftreten kann, die als Plazenta-Malaria (PM) bekannt ist. PM ist eine wichtige Ursache für Abtreibung, Totgeburt, vorzeitige Geburt, niedriges Geburtsgewicht, fetalen Tod und mütterliche Anämie. Widerstand gegen PM entwickelt sich über aufeinander folgende Schwangerschaften3. Der Schutz vor PM ist mit dem Erwerb von Antikörpern gegen DEN VAR2CSA-Typ PfEMP14,5, ein infiziertes Erythrozyten(IE) Oberflächenantigen verbunden, das an Chondroitinsulfat A (CSA) bindet, das die IE-Sequestrierung in der Plazenta ermöglicht. Antikörper vermitteln Schutz durch verschiedene funktionelle Aktivitäten (überprüft in6,7), einschließlich der Opsonisierung von IEs, um Phagozytose zu induzieren. Frühe In-vitro-Studien zeigten, dass Antikörper das Wachstum von P. falciparum in Gegenwart von Monozyten über Phagozytose8,9begrenzen können. Neuere Studien haben gezeigt, dass höhere Konzentrationen von phagozytoseinduzierenden Antikörpern mit besseren Schwangerschaftsergebnissen (im Zusammenhang mit einer HIV-Koinfektion) verbunden sind10,11, was auf die Relevanz dieser Effektorfunktion in der natürlich erworbenen Immunantwort hinweist.
Hier stellen wir ein Protokoll zur Messung dieser Funktion von Antikörpern im menschlichen Plasma/Serum vor, wobei in vitro kultivierte IEs VAR2CSA zusammen mit der Monozytenlinie THP-1 exezieren. Der Assay wurde zuvor11,12,13,,14,15,16,17,18 und gilt als ein verbesserter und einfacher Ansatz im Vergleich zu früheren mikroskopischen Protokollen8, da er das Testen einer größeren Anzahl von Antikörperproben in einem einzigen Durchlauf mit kleineren Mengen an Antikörpern ermöglicht und mühsame und voreingenommene Mikroskopiezählung vermeidet. Obwohl der Test von mehreren Laboratorien verwendet wurde und seine Ausführung einfach genug ist, erfordert er eine sorgfältige Planung und Vorbereitung, daher würde ein detailliertes Protokoll seine Anwendung durch Laboratorien und Forscher ohne vorherige Erfahrung ermöglichen. Wir verwenden als Beispiel spätstufensynchronisierte IEs, die VAR2CSA mit Antikörpern ausdrücken, die in Serum enthalten sind und von Frauen mit natürlich erworbener PM-spezifischer Immunität gesammelt wurden. Das Protokoll kann jedoch leicht geändert werden, um die Funktionalität von Antikörpern gegen jedes auf der IE-Oberfläche vorhandene Parasiten-Antigen zu überprüfen, unabhängig davon, ob es durch natürliche Exposition oder durch Impfung induziert wird.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>96 well cell culture plates, round bottom with lid</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3799</td>
			<td>Any similar plate can be used, make sure it is compatible with the flow cytometer instrument you intend to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlbuMAX-II</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11021-037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlbuMAX-II (5%)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>5% AlbuMAX-II (Gibco, 11021-037), 0.2g/L hypoxanthine (Sigma, H9377) in RPMI1640 (Sigma, R5886)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Red Blood Cells antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab34858</td>
			<td>Prepare 2&#65533;&#65533;l aliquots and freeze a -20&#176;C. Use one aliquot per experiment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads Protein G</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10003D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium bromide solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E1510</td>
			<td>Prepare a stock solution at 0.1mg/mL in RPMI1640 (R5886). Store protected from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FC500 flow cytometer</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td>Any flow cytometer supporting 96 well plate format and having the appropriate lasers/filters to measure EtBr fluorescence can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141</td>
			<td>Heat inactivate before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC mouse anti-human CD16</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555406 or 556618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC mouse anti-human CD32</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552883</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC mouse anti-human CD64</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowLogic software</td>
			<td>Inivai technologies</td>
			<td></td>
			<td>Any flow cytometry analysis can be used, for example FlowJo or Winlist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin (10mg/mL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G1272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoxanthine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H9377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine (200mM)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysing solution</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>15mM NH4Cl, 10mM NaHCO3, 1mM EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS CS-column and accesories</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-041-305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parasite culture medium</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>2mM L-glutamine (Sigma, G7513), 50&#181;g/mL Gentamicin (Sigma, G1272), 0.5% AlbuMAX-II (AlbuMAX-II 5%) in RPMI1640 (Sigma, R5886)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (10000U and 10mg/mL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>THP-1 culture medium</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>10%FBS (Gibco, 10099-141), 2mM L-glutamine (Sigma, G7513), 100U/mL Penicillin, 0.1mg/mL Streptomycin (Sigma, P0781) in RPMI1640 (Sigma, R5886)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vario MACS magnet</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring naturally acquired phagocytosis-inducing antibodies to plasmodium falciparum parasites by a flow cytometry-based assay

Das Protokoll beschreibt, wie ein Flusszytometrie-basierte Phagozytose-Assay von Plasmodium falciparum-infizierte Erythrozyten (IEs) von natürlich erworbenen IgG-Antikörpern speziell für VAR2CSA opsonisiert. VAR2CSA ist das Parasiten-Antigen, das die selektive Sequestrierung von IEs in der Plazenta vermittelt, die bei Schwangeren eine schwere Form von Malaria verursachen kann, die Plazenta-Malaria (PM). Der Schutz vor PM wird durch VAR2CSA-spezifische Antikörper vermittelt, von denen angenommen wird, dass sie funktionieren, indem sie die Plazentasese hemmen und/oder IEs für Phagozytose opsonisieren. Der Test verwendet spätstufensynchronisierte IEs, die in vitro ausgewählt wurden, um VAR2CSA, Plasma-/Serum-Antikörper von Frauen mit natürlich erworbener PM-spezifischer Immunität und die phagozytische Zelllinie THP-1 auszudrücken. Das Protokoll kann jedoch leicht geändert werden, um die Funktionalität von Antikörpern gegen jedes auf der IE-Oberfläche vorhandene Parasiten-Antigen zu überprüfen, unabhängig davon, ob es durch natürliche Exposition oder durch Impfung induziert wird. Der Assay bietet eine einfache und hochdurchsatzige Auswertung eines wichtigen funktionellen Aspekts der antikörpervermittelten Immunität bei Malaria mit guter Reproduzierbarkeit. Es ist daher nützlich bei der Bewertung der klinischen Immunität gegen P. falciparum Malaria, eine DerHauptursache von Morbidität und Mortalität in den Tropen, insbesondere in Afrika südlich der Sahara.

Hier stellen wir im Detail ein Protokoll vor, das zuvor31 beschrieben wurde und11,12,13,14,15,16,17,18 verwendet hat, um die Kapazität von Antikörpern zu messen, die auf die Oberfläche von P. falciparum IEs abzielen, um O...

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Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls besteht darin, Anweisungen zu geben, wie die Kapazität von Antikörpern gemessen werden kann, die in Seren oder Plasma von Individuen vorhanden sind, die natürlich einer Plasmodium falciparum-Infektion ausgesetzt sind, um die Phagozytose der parasiteninfizierten Erythrozyten (IEs) zu opsonisieren und zu induzieren.

Messung natürlich erworbener Phagozytose-induzierender Antikörper gegen Plasmodium falciparum Parasiten durch einen Flow Cytometry-based Assay

The protocol describes how to set up and run a flow cytometry-based phagocytosis assay of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (IEs) opsonized by ...

Dieses Protokoll ermöglicht es, die Fähigkeit von Antikörpern zu messen, die Phagozytose von Plasmodium falciparum infizierten Erythrozyten zu opsonisieren und zu induzieren. Antikörper, die im Serum von Personen vorhanden sind, die natürlich einer Parasiteninfektion ausgesetzt sind, sowie solche, die durch Immunisierung mit Parasitenantigenen induziert werden, können getestet werden. Mit mir wird Maiken Visti, eine Technikerin aus meinem Labor, das Verfahren demonstrieren.Um eine THP-1-Zellkultur für einen Phagozytose-Assay einzurichten, säten die Zellen am Tag vor dem Experiment die Zellen in einem 25-Zentimeter-Quadrat-Kulturkolben und einer Konzentration von 2,5 mal 10 bis zu den fünften Zellen pro Milliliter in THP ein Zellkulturmedium. Am Tag des Experiments, mindestens eine Stunde vor dem Experimentblock, um 96-Well-Platten mit 150 Mikroliter sterilen 2%FBS pro Brunnen zu runden. Für die Ernte und Reinigung von Trophozoit-infizierten Erythrozyten im mittleren bis späten Stadium, bereiten Sie etwa 1,2 Milliliter verpackte P-Falciparum-Parasitenkultur in 10 Milliliter Parasitenkulturmedium zu, mit mindestens 5% Parasitenmie und fügen Sie eine magnetische Säule hinzu.Waschen Sie die Säule mit 50 Milliliter Parasitenkulturmedium. Um die infizierten Erythrozyten zu elute, entfernen Sie die Säule vom Magneten und spülen Sie sie mit 50 Millilitern Parasitenkulturmedium. Dann sammeln Sie die infizierten Erythrozyten durch Zentrifugation und setzen Sie das Pellet in einem Milliliter frischen Parasitenkulturmedium zum Zählen wieder auf.Stellen Sie die gereinigte infizierte Erythrozytensuspension um 3,3 mal 10 auf die siebten Zellen pro Milliliter in Parasitkulturmedium, das Ethidiumbromid enthält, auf eine Endkonzentration von 2,5 Mikrogramm pro Milliliter an. Entfernen Sie als Nächstes die Blockierlösung von einer 96-Well-Platte, indem Sie die Platte in einen Abfallbehälter schieben. Dann entfernen Sie einen Überschuss über einem Papiertuch und fügen Sie 30 Mikroliter des Ethidiumbromid-Etiketts infiziert Erythrozyten Suspension zu allen bis auf einen Brunnen in der oberen Hälfte der Platte.Fügen Sie 30 Mikroliter Parasitenkulturmedium in den leeren Brunnen, und inkubieren Sie die Platte für 10 Minuten bei Raumtemperatur, vor Licht geschützt. Am Ende der Inkubation 170 Mikroliter Parasitenkulturmedium zu jedem Brunnen hinzufügen und die infizierten Erythrozyten an der Unterseite der Platte durch Zentrifugation sedimentieren. Entfernen Sie den Überstand, indem Sie die Platte in einen Abfallbehälter streichen, und waschen Sie die mit Ethidiumbromid beschrifteten infizierten Erythrozyten zwei weitere Male, mit 200 Mikrolitern Parasitenkulturmedium pro Brunnen, wie gerade gezeigt wurde.Nach dem zweiten Waschen verwenden Sie eine Mehrkanalpipette, um das gesamte Volumen des Überstandes aus jedem Brunnen sorgfältig zu entfernen, ohne die Pellets zu stören. Und setzen Sie die mit Ethidiumbromid gekennzeichneten infizierten Erythrozyten in 30 Mikroliter Antikörperlösung wieder auf, einschließlich der entsprechenden Kontrollen und Testproben, die zuvor in parasitenkulturmedium hergestellt wurden. Dann legen Sie die Platte bei 37 Grad Celsius für 45 Minuten, vor Licht geschützt.Während die infizierten Erythrozyten opsonisiert werden, sammeln Sie die THP-1-Zellen durch Zentrifugation, und setzen Sie das Pellet in 12 Milliliter frische, vorgewärmte THP-1-Zellkulturmedium. Nach einer zweiten Zentrifugation das Pellet in einem Milliliter THP-1-Zellkulturmedium zum Zählen wieder aufsetzen und die Zellkonzentration auf fünf mal 10 bis zu den fünften Zellen pro Milliliter im THP-1-Zellkulturmedium einstellen. Entfernen Sie die Blockierlösung von der zweiten 96-Well-Platte und fügen Sie jedem Brunnen 100 Mikroliter THP-1-Zellen hinzu.Legen Sie dann die Platte in den Zellkultur-Inkubator. Am Ende der Opsonisierungsinkubation 170 Mikroliter Parasitenkulturmedium zu jedem Brunnen der Opsonisationsplatte hinzufügen und die infizierten Erythrozyten durch Zentrifugation an den Boden der Platte sedimentieren. Waschen Sie die opsonisierten infizierten Erythrozyten zweimal mit 200 MikroliterParasitenkulturmedium pro Brunnen, mit einer Mehrkanalpipette, um den Überstand nach der zweiten Wäsche vorsichtig zu entfernen.Setzen Sie die opsonisierten infizierten Erythrozyten in 100 Mikrolitern vorgewärmter THP-1-Zellkulturmedium pro Brunnen aus, und übertragen Sie 50 Mikroliter jeder opsonisierten infizierten Erythrozytensuspension auf einen entsprechenden Brunnen in der Phagozytoseplatte. Wenn alle Zellen hinzugefügt wurden, legen Sie die Platte nicht mehr als 40 Minuten im Zellkultur-Inkubator, geschützt vor Licht. Am Ende der Inkubation, stoppen Sie die Phagozytose durch Zentrifugation bei vier Grad Celsius.Entfernen Sie den Überstand und setzen Sie die Pellets mit 150 Mikrolitern Ammoniumchlorid-Lysing-Lösung pro Brunnen wieder auf. Nach genau drei Minuten 100 Mikroliter Eiskälte bei 2%FBS in PBS hinzufügen, um die Lyse zu stoppen, und die intakten Zellen durch Zentrifugation sedimentieren. Als nächstes waschen Sie die Zellen dreimal mit 200 Mikroliter frische eiskalte 2%FBS in PBS pro Brunnen, pro Waschgang.Nach der letzten Wäsche das Zellpellet in 200 Mikroliter frischer Eiskälte 2%FBS in PBS pro Brunnen wieder aufsetzen. Für die Erfassung und Analyse der Durchflusszytometrie laden Sie die Zellen sofort auf ein Durchflusszytometer und verwenden Sie das lineare Vorwärts-gegen-Linear-Streudiagramm für die Brunnen ohne infizierte Erythrozyten, um die THP-1-Zellen zu gaten. Erwerben Sie 10.000 Ereignisse in diesem Tor, und verwenden Sie die THP-1-Zellen mit den infizierten Erythrozyten opsonisiert mit einer positiven Kontrolle, um ein Histogramm-Diagramm einzurichten, um die Ethidiumbromid-Fluoreszenzintensität zu messen.Öffnen Sie zur Analyse das lineare Vorwärts- versus lineare Seitenstreudiagramm für die Brunnen ohne infizierte Erythrozyten und schließen Sie die THP-1-Zellen an. Richten Sie dann ein positives Tor in einem FL-3-Histogramm ein und kopieren Sie diese Tore auf alle anderen Probenbrunnen, um den Prozentsatz der Ethidiumbromid-positiven THP-1-Zellen zu bestimmen. Für jede getestete Probe kann phagozytose als absoluter Wert oder als relative Phagozytose als Prozentsatz berechnet werden, wobei die Positivkontrolle als Maximum verwendet wird.Die THP-1-Zellen sollten regelmäßig auf die EXPRESSION des FC-Gammarezeptors durch Durchflusszytometrie überprüft werden. Die Zellen sollten negativ für CD16 und positiv für CD32 und CD64 sein. In diesem Opsonisierungsexperiment wurden die THP-1-Zellen zuerst nach ihren vorderen und seitlichen Streuprofilen abgezäutt, um eine Quantifizierung des Prozentsatzes der mit Ethidiumbromid gekennzeichneten Zellen zu ermöglichen, was auf Zellen hindeutet, die mindestens einen Antikörper transplantiert haben, der infiziertes Erythrozyten opsonisiert hat.Die Negativkontrollproben sollten alle einen einzelnen negativen Peak im FL3-Kanal erzeugen, wobei nur wenige Ereignisse im Ethidiumbromid-Marker beobachtet werden. Dementsprechend sollten die mittleren Phagozytosewerte, sowohl als absolute Ethidiumbromid-positive THP-1-Zellen als auch als relative Phagozytose-Prozentsätze, sehr niedrig sein. Im Gegensatz dazu sollte die Positivkontrolle Spuren mit zwei Spitzen, einem negativen Peak und einem deutlich positiven und gut abgetrennten Peak innerhalb des Ethidiumbromidmarkers erzeugen.Die durchschnittlichen Phagozytosewerte sind normalerweise am höchsten für die positive Kontrolle, gefolgt vom Malaria-exponierten Frauenpool und den einzelnen Malaria-exponierten Frauenkontrollen. Obwohl diese Methode konsistente Ergebnisse liefert, wurden Abweichungen im Neigungskoeffizienten der angepassten Linien beobachtet. Daher wird die Verwendung relativer Werte empfohlen, insbesondere wenn es nicht möglich ist, alle Stichproben in einem einzigen Experiment auszuführen.Achten Sie darauf, das Experiment sorgfältig im Voraus zu planen, bereiten sowohl die THP-1-Zellen und die Parasiten entsprechend, mit nur Trophozyten mit einer Reinheit größer als 80%Darüber hinaus sollten Sie immer die entsprechenden Kontrollen enthalten, um die Qualität des Experiments zu bewerten und die Datenanalyse zu erleichtern.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

Auswahl der Plasmodium falciparum Parasiten für Cytoadhesion zu Human Brain Endothelial Cells

Most human malaria deaths are caused by blood-stage Plasmodium falciparum parasites. Cerebral malaria, the most life-threatening complication of the ...

Forschung

Immunologie und Infektion

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

Ein<em&gt; In-vitro-</em&gt; Co-Infektion Modell zum Studium<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; HIV-1-Wechselwirkungen in primären menschlichen Monozyten abgeleitete Immunzellen

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

Ein einfaches Protokoll für Thrombozyten-vermittelte Verklumpung<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt;-Infizierten Erythrozyten in einer Ressource Schlechte Einstellung

P. falciparum causes the majority of severe malarial infections. The pathophysiological mechanisms underlying cerebral malaria (CM) are not fully ...

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Trennung<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Late Stage-infizierten Erythrozyten durch magnetische Mittel

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

High Yield Reinigung von<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Merozoiten Zur Verwendung in opsonierende Antikörper-Assays

Plasmodium falciparum merozoite antigens are under development as potential malaria vaccines. One aspect of immunity against malaria is the removal of ...

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

In-vivo-Bewertung der Nager Plasmodium Parasitämie und Merozoite Invasion durch Durchflusszytometrie

During blood stage infection, malaria parasites invade, mature, and replicate within red blood cells (RBCs). This results in a regular growth cycle and an ...

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

Methoden, um die regulatorische Rolle kleiner RNAs und Ribosomal Belegung von Untersuchen<em&gt; Plasmodium falciparum</em

The genetic variation responsible for the sickle cell allele (HbS) enables erythrocytes to resist infection by the malaria parasite, P. falciparum. The ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

Durchflusszytometrie-basierte Assay zur Überwachung von NK-Zell-Funktionen

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Die Beurteilung Retinal Microglial Phagozytische Funktion<em&gt; In Vivo</em&gt; Mit einem Durchfluss-Zytometrie basierten Assay

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

A Flow Cytometry-Based Cytotoxicity Assay for the Assessment of Human NK Cell Activity

Ein Flow Cytometry-basierte Zytotoxizität Assay für die Beurteilung der menschlichen NK-Zell-Aktivität

Within the innate immune system, effector lymphocytes known as natural killer (NK) cells play an essential role in host defense against aberrant cells, ...