Name: mitigation of blood borne cell attachment to metal implants through cd47-derived peptide immobilization
Uploaded: 2020-12-03T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mitigation of Blood Borne Cell Attachment to Metal Implants through CD47-Derived Peptide Immobilization at JoVE.com

इस पत्र में प्रस्तुत प्रोटोकॉल विकास और अध्ययनों को एनआईएच (NBIB) R01 फंडिंग (# EB023921) द्वारा आईएफ और एसजेएस को समर्थन दिया गया था, और एनआईएच (NHLBI) R01 फंडिंग (#HL137762) को आईएफ और आरजेएल को ।

इस प्रयोग के लिए सभी मानव नमूने फिलाडेल्फिया के बच्चों के अस्पताल के आईआरबी के अनुसार प्राप्त किए गए थे । फिलाडेल्फिया के बाल अस्पताल के IACUC से अनुमोदन पर सभी पशु प्रयोग किए गए थे।
1. पीई-पीडी...

<ol>
	<li>Buccheri, D., Piraino, D., Andolina, G., Cortese, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+and+managing+in-stent+restenosis:+a+review+of+clinical+data,+from+pathogenesis+to+treatment.">Understanding and managing in-stent restenosis: a review of clinical data, from pathogenesis to treatment.</a> Journal Thoracic Disease. 8 (10), 1150-1162 (2016).</li><li>van Oeveren, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obstacles+in+haemocompatibility+testing.">Obstacles in haemocompatibility testing.</a> Scientifica. 2013, 392584 (2013).</li><li>Mitra, A. K., Agrawal, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+stent+restenosis:+bane+of+the+stent+era.">In stent restenosis: bane of the stent era.</a> Journal of Clinical Pathology. 59 (3), 232-239 (2006).</li><li>Iqbal, J., Gunn, J., Serruys, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+stents:+historical+development,+current+status+and+future+directions.">Coronary stents: historical development, current status and future directions.</a> British Medical Bulletin. 106, 193-211 (2013).</li><li>Hoffmann, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+and+mechanisms+of+in-stent+restenosis.+A+serial+intravascular+ultrasound+study.">Patterns and mechanisms of in-stent restenosis. A serial intravascular ultrasound study.</a> Circulation. 94 (6), 1247-1254 (1996).</li><li>Stefanini, G. G., Windecker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stent+thrombosis:+no+longer+an+issue+with+newer-generation+drug-eluting+stents.">Stent thrombosis: no longer an issue with newer-generation drug-eluting stents.</a> Circulation: Cardiovascular Interventions. 5 (3), 332-335 (2012).</li><li>Palmerini, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+outcomes+with+bioabsorbable+polymer-+versus+durable+polymer-based+drug-eluting+and+bare-metal+stents:+evidence+from+a+comprehensive+network+meta-analysis.">Clinical outcomes with bioabsorbable polymer- versus durable polymer-based drug-eluting and bare-metal stents: evidence from a comprehensive network meta-analysis.</a> Journal of the American College of Cardiology. 63 (4), 299-307 (2014).</li><li>Omar, W. A., Kumbhani, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Current+Literature+on+Bioabsorbable+Stents:+a+Review.">The Current Literature on Bioabsorbable Stents: a Review.</a> Current Atherosclerosis Reports. 21 (12), 54 (2019).</li><li>Slee, J. B., Christian, A. J., Levy, R. J., Stachelek, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addressing+the+Inflammatory+Response+to+Clinically+Relevant+Polymers+by+Manipulating+the+Host+Response+Using+ITIM+Domain-Containing+Receptors.">Addressing the Inflammatory Response to Clinically Relevant Polymers by Manipulating the Host Response Using ITIM Domain-Containing Receptors.</a> Polymers (Basel). 6 (10), 2526-2551 (2014).</li><li>Oldenborg, P. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+CD47-modified+biomaterials+to+mitigate+the+immune+response.">The use of CD47-modified biomaterials to mitigate the immune response.</a> Experimental Biology Medicine (Maywood). 241 (10), 1033-1041 (2016).</li><li>Tsai, R. K., Rodriguez, P. L., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self+inhibition+of+phagocytosis:+the+affinity+of+'marker+of+self'+CD47+for+SIRPalpha+dictates+potency+of+inhibition+but+only+at+low+expression+levels.">Self inhibition of phagocytosis: the affinity of 'marker of self' CD47 for SIRPalpha dictates potency of inhibition but only at low expression levels.</a> Blood Cells, Molecules and Diseases. 45 (1), 67-74 (2010).</li><li>Slee, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+biocompatibility+of+CD47-functionalized+vascular+stents.">Enhanced biocompatibility of CD47-functionalized vascular stents.</a> Biomaterials. 87, 82-92 (2016).</li><li>Finley, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diminished+adhesion+and+activation+of+platelets+and+neutrophils+with+CD47+functionalized+blood+contacting+surfaces.">Diminished adhesion and activation of platelets and neutrophils with CD47 functionalized blood contacting surfaces.</a> Biomaterials. 33 (24), 5803-5811 (2012).</li><li>Stachelek, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+CD47+modified+polymer+surfaces+on+inflammatory+cell+attachment+and+activation.">The effect of CD47 modified polymer surfaces on inflammatory cell attachment and activation.</a> Biomaterials. 32 (19), 4317-4326 (2011).</li><li>Inamdar, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+and+bioactivity+of+pepCD47+attachment+on+stainless+steel+surfaces.">Stability and bioactivity of pepCD47 attachment on stainless steel surfaces.</a> Acta Biomaterialia. 104, 231-240 (2020).</li><li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+delivery+of+gene+vectors+from+bare-metal+stents+by+use+of+a+biodegradable+synthetic+complex+inhibits+in-stent+restenosis+in+rat+carotid+arteries.">Local delivery of gene vectors from bare-metal stents by use of a biodegradable synthetic complex inhibits in-stent restenosis in rat carotid arteries.</a> Circulation. 117 (16), 2096-2103 (2008).</li><li>Moser, K. V., Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+rat+monocytes+migrate+through+a+BCEC-monolayer+and+express+microglia-markers+at+the+basolateral+side.">Primary rat monocytes migrate through a BCEC-monolayer and express microglia-markers at the basolateral side.</a> Brain Research Bulletin. 74 (5), 336-343 (2007).</li><li>vander Giessen, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marked+inflammatory+sequelae+to+implantation+of+biodegradable+and+nonbiodegradable+polymers+in+porcine+coronary+arteries.">Marked inflammatory sequelae to implantation of biodegradable and nonbiodegradable polymers in porcine coronary arteries.</a> Circulation. 94 (7), 1690-1697 (1996).</li><li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bisphosphonate-mediated+gene+vector+delivery+from+the+metal+surfaces+of+stents.">Bisphosphonate-mediated gene vector delivery from the metal surfaces of stents.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (1), 159-164 (2006).</li><li>Mouro-Chanteloup, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+the+red+cell+skeleton+protein+4.2+interacts+with+the+Rh+membrane+complex+member+CD47.">Evidence that the red cell skeleton protein 4.2 interacts with the Rh membrane complex member CD47.</a> Blood. 101 (1), 338-344 (2003).</li><li>Finley, M. J., Clark, K. A., Alferiev, I. S., Levy, R. J., Stachelek, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+signaling+mechanisms+associated+with+CD47+modified+surfaces.">Intracellular signaling mechanisms associated with CD47 modified surfaces.</a> Biomaterials. 34 (34), 8640-8649 (2013).</li><li>Slee, J. B., Alferiev, I. S., Levy, R. J., Stachelek, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+the+ex+vivo+Chandler+Loop+Apparatus+to+assess+the+biocompatibility+of+modified+polymeric+blood+conduits.">The use of the ex vivo Chandler Loop Apparatus to assess the biocompatibility of modified polymeric blood conduits.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51871 (2014).</li></ol>

हम रक्त में पाई जाने वाली भड़काऊ कोशिकाओं के साथ सतह की प्रतिक्रियाशीलता को कम करने के व्यापक लक्ष्य के साथ एक स्टेनलेस-स्टील सतह पर चिकित्सीय पेप्टाइड मोइटीज को संलग्न करने के लिए एक अपेक्षाकृत उपन्?...

परक्यूटेनियस कोरोनरी हस्तक्षेप कोरोनरी धमनी रोगों (सीएडी) के इलाज के लिए चिकित्सा की पहली पंक्ति है और मुख्य रूप से रोगग्रस्त धमनियों को स्टेंटिंग करना शामिल है। हालांकि, इन-स्टेंट रेस्टेनोसिस (आईएसआर) और स्टेंट थ्रोम्बोसिस स्टेंट तैनाती से जुड़ी आम जटिलताएं हैं1। रक्त-स्टेंट इंटरफ़ेस में रक्त संपर्क धातु की सतह पर प्लाज्मा प्रोटीन के लगभग तत्काल सोखने की विशेषता है, जिसके बाद प्लेटलेट और भड़काऊ सेल लगाव और सक्रियण2है। सक्रिय भड़काऊ कोशिकाओं से भड़काऊ साइटोकिन्स और केमोकिन्स की रिहाई ट्यूनिका मीडिया में संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं (वीएसएमसी) के फेनोटाइपिक संशोधन की ओर जाता है और उनके केंद्रीय प्रवास को इंटिमल डिब्बे में चलाता है। इंटिमा में सक्रिय वीएसएमसी के प्रसार के परिणामस्वरूप इंटिमल परत मोटा होता है, ल्यूमेन संकुचन और इन-स्टेंट रेस्टेनोसिस3 होताहै। वीएसएमसी प्रसार को रोकने के लिए ड्रग एल्यूटिंग स्टेंट (डीईएस) विकसित किए गए थे; हालांकि, इन दवाओं एंडोथेलियल सेल्स4,5पर एक ऑफ टारगेट साइटोटॉक्सिक प्रभाव है . इसलिए, लेट स्टेंट थ्रोम्बोसिस डेस6,7से जुड़ी एक आम जटिलता है । पॉली-एल-लैक्डाइड जैसे बायोडिग्रेडेबल पॉलिमर से बने स्टेंट ने पशु प्रयोगों और प्रारंभिक नैदानिक परीक्षणों में बहुत वादा दिखाया है, लेकिन अंततः याद किया गया जब "वास्तविक जीवन" नैदानिक उपयोग ने 3पीढ़ी डेस8के लिए अपनी हीनता का प्रदर्शन किया। इसलिए, बेहतर रोगी परिणामों के लिए नंगे धातु स्टेंट की जैव अनुकूलता में सुधार करने की आवश्यकता है।
CD47 एक सर्वव्यापी रूप से व्यक्त ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन है जो अपने कॉग्नेट रिसेप्टर सिग्नल रेगुलेटरी प्रोटीन अल्फा (SIRPα)9से बंधे होने पर जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को रोकता है। सिरपीपी रिसेप्टर में एक प्रतिरक्षा कोशिका टायरोसिन निरोधात्मक आकृति (आईटीआईएम) डोमेन होता है और सिरपी-सीडी 47 इंटरैक्शन पर सिग्नलिंग घटनाओं के परिणामस्वरूप अंततः भड़काऊ कोशिका सक्रियण10 , 11,,12,,13की कमी होती है ।13 हमारी प्रयोगशाला में अनुसंधान से पता चला है कि सीडी 47 (pepCD47) के बाह्रात्म क्षेत्र के 22 अमीनो एसिड आईजी डोमेन के अनुरूप, पुनः संयोजन सीडी 47 या इसके पेप्टाइड डेरिवेटिव, चिकित्सकीय प्रासंगिक बायोमैटेरियल्स14,15, 16,16की एक श्रृंखला के लिए मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को कम कर सकते हैं।, हाल ही में, हमने दिखा दिया है कि pepCD47 को स्टेनलेस स्टील स्टेंट सतहों पर स्थिर किया जा सकता है और रेस्टेनोसिस से जुड़े रोगविज्ञानी प्रतिक्रिया को काफी कम किया जा सकता है। ध्यान दें, pepCD47 संशोधित सतहों दीर्घकालिक भंडारण और एथिलीन ऑक्साइड नसबंदी17के रूप में प्रासंगिक उपयोग की स्थिति के लिए उत्तरदायी हैं । इस उद्देश्य के लिए, pepCD47 एंडोवैस्कुलर स्टेंट की नैदानिक सीमाओं को संबोधित करने के लिए एक उपयोगी चिकित्सीय लक्ष्य हो सकता है।
एक धातु की सतह के लिए pepCD47 के सहसंयोजक लगाव के लिए रणनीति धातु की सतह के उपंयास रासायनिक संशोधनों की एक श्रृंखला शामिल है । धातु की सतहों को पहले अव्यक्त थिओल समूहों (पीएबीटी) के साथ पॉलीलैमीन बिस्फोस्फोनेट के साथ लेपित किया जाता है और इसके बाद थिओलों की सुरक्षा और स्थापित पाइरिडिलिडिओ समूहों (पीडीटी) के साथ पॉलीथीलीनिमाइन (पीईआई) का लगाव होता है। डीप्रोटेक्टेड PABT थिओल्स के साथ प्रतिक्रिया में समाप्त पीडीटी समूहों को तब पेप्टडी 47 के साथ प्रतिक्रिया व्यक्त की जाती है, जिसमें टर्मिनल सिस्टीन अवशेषों में थिओल शामिल होते हैं, जिसके परिणामस्वरूप पेप्सडी 47 को एक डिफाइड बॉन्ड14,17, 18,के माध्यम से धातु की सतह पर बाध्यकारी कियाजाताहै।, हमने पेप्टाइड की एकाग्रता निर्धारित करने के लिए एक फ्लोरोफोर संयुग्मित pepCD47 (TAMRA-pepCD47) का उपयोग किया जिसके परिणामस्वरूप पेप्टाइड की अधिकतम सतह स्थिरीकरण होता है। अंत में, हमने क्रमशः चांडलर लूप उपकरण, और मोनोसाइट अटैचमेंट/मैक्रोफेज विस्तार परख का उपयोग करके pepCD47 लेपित धातु सतहों, पूर्व वीवो की तीव्र और पुरानी विरोधी भड़काऊ क्षमता का मूल्यांकन किया ।
यह पेपर धातु की सतह पर थिओलेटेड पेप्टाइड्स के लगाव के लिए एक व्यवस्थित प्रोटोकॉल प्रदान करता है; पेप्टाइड के अधिकतम स्थिरीकरण घनत्व का निर्धारण; और pepCD47 लेपित धातु सतहों के विरोधी भड़काऊ गुणों का आकलन पूरे रक्त और अलग मोनोसाइट्स के संपर्क में ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:834px;" width="833">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">1 M Tris-HCL</td>
			<td style="width:184px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:129px;">15567-027</td>
			<td style="width:239px;">pH - 7.5</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">4% Glutaraldehyde</td>
			<td style="width:184px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:129px;">16539-07</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">4% Sodium Citrate</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:129px;">S5770</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">ACK lysing buffer</td>
			<td style="width:184px;">Quality Biologicals</td>
			<td style="width:129px;">118-156-721</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">anti-CD45RA Ab (mouse anti-rat; clone OX-19)</td>
			<td style="width:184px;">Biolegend</td>
			<td style="width:129px;">202301</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">anti-CD5 Ab (mouse anti-rat; clone OX-19)</td>
			<td style="width:184px;">Biolegend</td>
			<td style="width:129px;">203501</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">anti-CD6 Ab (mouse anti-rat; clone OX-52)</td>
			<td style="width:184px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:129px;">550979</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">anti-CD68 Ab (mouse anti-rat; clone ED-1)</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:129px;">MCA341</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">anti-CD8a Ab (mouse anti-rat; clone OX-8)</td>
			<td style="width:184px;">Biolegend</td>
			<td style="width:129px;">201701</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Chloroform Certified ACS</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td style="width:129px;">C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Dimethyl Formammide (DMF)</td>
			<td style="width:184px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:129px;">39117</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Embra stainless steel grid</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:129px;">E200-SS</td>
			<td>stainless steel mesh mesh disks</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Ficoll Hypaque</td>
			<td style="width:184px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:129px;">17-1440-02</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Glacial acetic acid</td>
			<td style="width:184px;">ACROS organic</td>
			<td style="width:129px;">148930025</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">goat anti-mouse IgG Alexa Fluor</td>
			<td style="width:184px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:129px;">A11030</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Heparin sodium</td>
			<td style="width:184px;">Sagent Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:129px;">402-01</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Human pepCD47</td>
			<td>Bachem</td>
			<td>4099101</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Isopropanol</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td style="width:129px;">A426P-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">Metal adapters</td>
			<td style="width:184px;">Leur Fitting</td>
			<td style="width:129px;">6515IND</td>
			<td style="width:239px;">1 way adapter 316 ss 1/4&#34;-5/16&#34; hoes end</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Methanol</td>
			<td style="width:184px;">RICCA chemical company</td>
			<td style="width:129px;">4829-32</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Microscope</td>
			<td style="width:184px;">Nikon Eclipse</td>
			<td style="width:129px;">TE300</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-136</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pottasium Bicarbonate (KHCO3)</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td style="width:129px;">P184-500</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">PVC tubes</td>
			<td style="width:184px;">Terumo-CVS</td>
			<td style="width:129px;">60050</td>
			<td style="width:239px;">1/4&#34; X 1/16 8&#39;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">sodium cacodylate buffer with 0.1M sodium chloride</td>
			<td style="width:184px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:129px;">11653</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)</td>
			<td style="width:184px;">Bio-Rad laboratories</td>
			<td style="width:129px;">161-0302</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Sodum actetate (C2H3NaO2)</td>
			<td style="width:184px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:129px;">A13184</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Src peptide</td>
			<td>Bachem</td>
			<td style="width:129px;">4092599</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">Stainless steel (AISI 304) cylinder-shaped samples with a lumen</td>
			<td>Microgroup, Medway, MA</td>
			<td style="width:129px;">20097328</td>
			<td>1 cm X 6 mm OD</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">Stainless steel foils (AISI 316L)</td>
			<td style="width:184px;">Goodfellow, Coraopolis, PA</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:239px;">100 mm X 100 mm X 0.05 mm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:282px;">Tetramethylrhodamine-conjugated pepCD47 (TAMRA-pepCD47)</td>
			<td>Bachem</td>
			<td style="width:129px;">4100277</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:282px;">TMB (3,3&#8217; ,5,5&#8217; -tetramethylbenzidine) substrate and tris (2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>PG82089</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:282px;">Tween-20</td>
			<td style="width:184px;">Bio-Rad laboratories</td>
			<td style="width:129px;">170-6531</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Vybrant CFDA SE Cell Tracer Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:129px;">V12883</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mitigation of blood borne cell attachment to metal implants through cd47-derived peptide immobilization

नंगे धातु स्टेंट और दवा eluting स्टेंट के साथ जुड़े प्रमुख जटिलताओं में स्टेंट रेस्टेनोसिस और देर से स्टेंट थ्रोम्बोसिस, क्रमशः कर रहे हैं । इस प्रकार, धातु स्टेंट की जैव अनुकूलता में सुधार एक महत्वपूर्ण चुनौती बनी हुई है। इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य एंडोवैस्कुलर स्टेंट सहित रक्त संपर्क चिकित्सा प्रत्यारोपण की जैव अनुकूलता बढ़ाने के लिए जैविक रूप से सक्रिय पेप्टाइड्स द्वारा धातु सतह संशोधन की एक मजबूत तकनीक का वर्णन करना है। CD47 एक इम्यूनोलॉजिकल प्रजाति-स्वयं का विशिष्ट मार्कर है और इसमें विरोधी भड़काऊ गुण हैं। अध्ययनों से पता चला है कि एक्सट्रासेलुलर क्षेत्र (pepCD47) में सीडी 47 के आईजी डोमेन के अनुरूप 22 अमीनो एसिड पेप्टाइड में पूर्ण लंबाई वाले प्रोटीन जैसे एंटी-भड़काऊ गुण होते हैं। चूहों में वीवो अध्ययन में, और हमारी प्रयोगशाला से खरगोश और मानव रक्त प्रयोगात्मक प्रणालियों में पूर्व वीवो अध्ययनों ने दिखा दिया है कि धातुओं पर pepCD47 स्थिरीकरण भड़काऊ कोशिका लगाव और सक्रियण को रोककर उनकी जैव अनुकूलता में सुधार करता है। यह पेपर धातु की सतहों और पेप्टाइड लगाव के कार्यात्मकीकरण के लिए कदम-दर-कदम प्रोटोकॉल का वर्णन करता है। धातु की सतहों को अव्यक्त थिओल समूहों (पीएबीटी) के साथ पॉलीडालैमिन बिस्फोस्फेट का उपयोग करके संशोधित किया जाता है जिसके बाद थिओलों का संरक्षण होता है और पाइरिडिलिडिओ समूहों (पीई-पीडीटी) के साथ स्थापित पॉलीथीलेनिमाइन के साथ प्रतिक्रिया के माध्यम से थिओल-प्रतिक्रियाशील साइटों का प्रवर्धन होता है। अंत में, pepCD47, एक दोहरी 8-अमीनो-3, 6-डायोक्सा-ऑक्टानोइल स्पेसर के माध्यम से कोर पेप्टाइड अनुक्रम से जुड़े टर्मिनल सिस्टीन अवशेषों को शामिल करते हुए, डिसल्फाइड बांड के माध्यम से धातु की सतह से जुड़े होते हैं। धातु की सतह के लिए पेप्टाइड लगाव की यह पद्धति कुशल और अपेक्षाकृत सस्ती है और इस प्रकार कई धातु बायोमैटेरियल्स की जैव अनुकूलता में सुधार करने के लिए लागू किया जा सकता है।

धातु की सतहों को रासायनिक संशोधनों की एक श्रृंखला के माध्यम से पेप्टाइड लगाव के लिए थिओल-प्रतिक्रियाशील प्रदान किया जाता है,जैसा कि चित्र 1 में दर्शाया गया है। PABT इनक्यूबेशन पीई-पीडीटी उपचा?...

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Mitigation of Blood Borne Cell Attachment to Metal Implants through CD47-Derived Peptide Immobilization

यहां प्रस्तुत पॉलीबिस्फोस्फोनेट रसायन का उपयोग करके धातु स्टेंट के लिए पेप्टाइड सीडी 47 (pepCD47) के लिए एक प्रोटोकॉल है। pepCD47 का उपयोग करके धातु स्टेंट का कार्यात्मककरण भड़काऊ कोशिकाओं के लगाव और सक्रियण को रोकता है जिससे उनकी जैव अनुकूलता में सुधार होता है।

CD47-व्युत्पन्न पेप्टाइड इम्मोबिलाइजेशन के माध्यम से धातु प्रत्यारोपण के लिए रक्त जनित कोशिका लगाव का शमन

The key complications associated with bare metal stents and drug eluting stents are in-stent restenosis and late stent thrombosis, respectively. Thus, ...

इस प्रोटोकॉल में चिकित्सीय पेप्टाइड्स को धातु की सतहों पर संलग्न करने के लिए एक उपन्यास रासायनिक रणनीति शामिल है, और इसमें धातु बायोमैटेरियल्स की एक विस्तृत श्रृंखला की जैव अनुकूलता में सुधार करने की क्षमता है। यह पेप्टाइड्स और चिकित्सीय प्रोटीन को बायोइम्प्लांट की नंगे धातु सतहों पर संलग्न करने के लिए एक सार्वभौमिक और मजबूत तकनीक है। हमने इस तकनीक का उपयोग सीडी 47 पेप्टाइड्स द्वारा धातु के स्टेंट की जैव अनुकूलता में सुधार करने के लिए किया है ताकि स्टेंटिंग द्वारा ट्रिगर की जाने वाली सूजन प्रतिक्रियाओं को रोका जा सके।पांच मिनट के लिए एक शेखर में 2-आइसोप्रोपैनॉल के साथ स्टेनलेस स्टील फॉइल कूपन या जाल डिस्क को धोने से शुरू करें। इस वॉश को दो बार करें, फिर नमूनों को दो बार क्लोरोफॉर्म से 10 मिनट प्रति वॉश के लिए धोएं । 30 मिनट के लिए 220 डिग्री सेल्सियस पर एक ओवन में शुद्ध स्टेनलेस स्टील के नमूनों को रखें।पके हुए पन्नी या जाल डिस्क को पीएबीटी के 0.5% जलीय समाधान में विसर्जित करें और उन्हें एक घंटे के लिए एक शेखर में इनक्यूबेट करें। पाबीटी-संशोधित नमूनों को डिओनाइज्ड डिस्टिल्ड पानी से पांच बार धोएं। नमूनों को एक नई शीशी में स्थानांतरित करें और धोते को दोहराएं।एक शेखर पर कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए TCEP के साथ नमूनों का इलाज करें। एक वैक्यूम जनरेटिंग डिवाइस के साथ एक गोल नीचे फ्लास्क में डेगास डिओनाइज्ड आसुत पानी, जैसे कि एक लियोफिलाइजर, और पांच बार डिजिट पानी के साथ पन्नी या जाल डिस्क धोएं। नमूनों को एक नई शीशी में स्थानांतरित करें और वॉश दोहराएं।डेगासेड पानी में स्टॉक पीई-पीडीटी के 212.5 माइक्रोलीटर और 04 मोलर सोडियम एसीटेट के 125 माइक्रोलीटर को कमजोर करके 1% पीई-पीडीटी समाधान के पांच मिलीलीटर तैयार करें। 1% पीडीटी के साथ धोया स्टेनलेस स्टील के नमूनों को इनक्यूबेट करें। आर्गन गैस के साथ हवा की जगह, शीशियों एयरटाइट सील, और उन्हें एक घंटे के लिए एक शेखर पर मिश्रण।पेप्टाइड कंजुगेशन के साथ तुरंत आगे बढ़ें या नमूनों को एक सप्ताह तक चार डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। 50% एसिटिक एसिड में मानव पेप्टाइड सीडी 47 पाउडर को भंग करके एक मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर मानव पेप्टाइड सीडी 47 स्टॉक समाधान तैयार करें, फिर 4.5 मिलीलीटर डेगासेड पीबीएस में स्टॉक के 500 माइक्रोलीटर को भंग करके काम करने वाले समाधान तैयार करें। एक घंटे के लिए मिलाते हुए कमरे के तापमान पर पेप्टाइड सीडी 47 के काम समाधान के साथ धोया पीई-पीडीटी लेपित नमूनों को इनक्यूबेट करें।समाप्त होने पर, पाठ पांडुलिपि में वर्णित पेप्टाइड सीडी 47-लेपित नमूनों को धोएं। पेप्टाइड सीडी 47 या तले हुए पेप्टाइड के साथ धातु की पन्नी को कोटिंग करने के बाद, तिमाही इंच पीवीसी ट्यूबों को तीन 38 सेंटीमीटर लंबे टुकड़ों में काटें और तीन अलग-अलग ट्यूबों में आठ असंशोधित, तले हुए पेप्टाइड, या पेप्टाइड सीडी 47-संशोधित धातु पन्नी तक डालें। स्वस्थ मानव दाताओं से 30 मिलीलीटर रक्त एकत्र करें किसी भी एंटी प्लेटलेट दवाओं से मुक्त, एकत्र रक्त के जमाव को रोकने के लिए 4% सोडियम साइट्रेट के एक मिलीलीटर के साथ सिरिंज को प्री-लोड करें।10 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करके प्रत्येक ट्यूब में 10 मिलीलीटर रक्त डालें और सिरों को धातु एडाप्टर से जोड़ें। चांडलर लूप उपकरण के पहियों पर रक्त से भरी ट्यूब रखें और चार घंटे के लिए ३७ डिग्री सेल्सियस पर पहिया रोटेशन द्वारा धातु की पन्नी के साथ रक्त पारित करें । ट्यूबों से रक्त को छानलें और आईआरबी आवश्यकताओं के अनुसार इसका निपटान करें, फिर पन्नी को पुनः प्राप्त करने के लिए ट्यूबों को स्केलपेल से काटें।0.1 मोलर सोडियम क्लोराइड के साथ सोडियम कोकोडाइलेट बफर में 70% समाधान को पतला करके 2% ग्लूटारल्डिहाइड समाधान तैयार करें। 15 मिनट के लिए 2% ग्लूटाराल्डिहाइड समाधान में पन्नी को इनक्यूबेट करें और उन्हें रात भर चार डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। धातु की पन्नी का विश्लेषण करने से पहले, उन्हें पीबीएस के साथ तीन बार धोएं।३७ डिग्री सेल्सियस पानी स्नान में पीबीएस के आठ मिलीलीटर गर्म । एक सीएफडीए शीशी में डीएमएसओ के 90 माइक्रोलीटर जोड़कर 10 मिलिमोलर सीएफडीए डाई स्टॉक सॉल्यूशन तैयार करें, फिर स्टॉक सीएफडीए के 75 माइक्रोलीटर को गर्म पीबीएस में जोड़कर वर्किंग सॉल्यूशन तैयार करें। ट्यूब को कई बार मिश्रण करने और एल्यूमीनियम पन्नी के साथ कवर करने के लिए उलटा करें।प्रत्येक पन्नी को सीएफडीए डाई के एक मिलीलीटर में 24-अच्छी प्लेट में रखें। एल्यूमीनियम पन्नी के साथ थाली को कवर करें और 15 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर प्लेट को इनक्यूबेट करें, फिर पीबीएस में तीन बार पन्नी धोएं और उन्हें फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप से छवि दें। धातु की सतह पर पेप्टाइड के अधिकतम स्थिरीकरण घनत्व का निर्धारण करने के लिए सहसंयोजक-बाध्य तमरा संयुग्मित पेप्टाइड सीडी 47 की एकाग्रता की मात्रा निर्धारित की गई थी।अधिकतम पेप्टाइड प्रतिधारण लगभग 180 नैनोग्राम प्रति सेंटीमीटर चुकता था, जिसे 100 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर की इनपुट एकाग्रता के साथ प्राप्त किया गया था। संशोधित धातु सतहों पर तमोरा संयुग्मित पेप्टाइड सीडी 47 का स्थिरीकरण फ्लोरेसेस माइक्रोस्कोपी द्वारा आगे पुष्ट किया गया था, जिसमें तामरा संयुग्मित पेप्टाइड सीडी 47-उपचारित जाल डिस्क की सतह से उत्सर्जित एक समान फ्लोरेसेंस दिखाया गया था। नियंत्रण meshes की सतह पर केवल न्यूनतम फ्लोरेसेंस का पता चला था जिसमें संशोधन का अभाव था, जिससे फ्लोरेसेंस के मुख्य स्रोत के रूप में एक गैर-विशेष रूप से बाध्य टैमरा संयुग्मित पेप्टाइड सीडी 47 को छोड़कर।यह भी पुष्टि की गई कि पेप्टाइड सीडी 47-लेपित सतहों तले हुए संशोधित और असंशोधित पेप्टाइड नियंत्रणों की तुलना में रक्त जनित कोशिका लगाव में भारी कमी दिखाते हैं । चूहे बफी कोट कोशिकाओं से अलग मोनोसाइट्स नंगे धातु और पेप्टाइड सीडी 47-संशोधित स्टेनलेस स्टील पन्नी पर सुसंस्कृत थे। कार्यात्मक सतहों पर तीव्र मोनोसाइट अटैचमेंट, मैक्रोफेज में उनके रूपांतरण और मैक्रोफेज प्रसार का 58% क्षीण होना देखा गया था।इस प्रोटोकॉल का प्रयास करते समय, जितनी जल्दी हो सके और ऑक्सीजन के संपर्क को कम करने के लिए डेगासेड पानी या अभिकर् ती से जुड़े कदमों को अंजाम देना बहुत महत्वपूर्ण है। हमारी तकनीक धातु की सतहों के साथ सेलुलर इंटरैक्शन को चुनिंदा रूप से संशोधित करती है और आरटी-पीसीआर, फ्लो साइटोमेट्री और इम्यूनोफ्लोरेसेंस जैसे एक विशिष्ट सेल प्रकार की पहचान परख इस तकनीक के अनुकूल हैं। बायोएक्टिव पेप्टाइड की एक श्रृंखला के लिए विकसित होने पर, यह तकनीक ऊतक सामग्री इंटरफेस पर जैव अनुकूलता बढ़ाने में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकती है।

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Methods Development for Blood Borne Macrophage Carriage of Nanoformulated Antiretroviral Drugs

रक्त जनित बृहतभक्षककोशिका कैरिज Nanoformulated एंटीरेट्रोवाइरल दवाओं के लिए तरीके विकास

Nanoformulated drugs can improve pharmacodynamics and bioavailability while serving also to reduce drug toxicities for antiretroviral (ART) medicines. To ...

Bacterial Immobilization for Imaging by Atomic Force Microscopy

परमाणु शक्ति माइक्रोस्कोपी इमेजिंग के लिए बैक्टीरियल स्थिरीकरण

AFM is a high-resolution (nm scale) imaging tool that mechanically probes a surface.  It has the ability to image cells and biomolecules, in a liquid ...

Generation and Recovery of &beta;-cell Spheroids From Step-growth PEG-peptide Hydrogels

Generation and Recovery of ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Spheroids From Step-growth PEG-peptide Hydrogels

और स्टेप - विकास खूंटी पेप्टाइड Hydrogels से β सेल spheroids का सृजन वसूली

Hydrogels are hydrophilic crosslinked polymers that provide a three-dimensional  microenvironment with tissue-like elasticity and high permeability for  ...

Graphene Coatings for Biomedical Implants

बायोमेडिकल प्रत्यारोपण के लिए ग्राफीन कोटिंग्स

Atomically smooth graphene as a surface coating has potential to improve implant properties. This demonstrates a method for coating nitinol alloys with ...

Generation of Aligned Functional Myocardial Tissue Through Microcontact Printing

Microcontact मुद्रण के माध्यम से निरपेक्ष कार्यात्मक दौरे के ऊतकों का सृजन

Advanced heart failure represents a major unmet clinical challenge,  arising from the loss of viable and/or fully functional cardiac muscle  cells. ...

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

विधि रक्त मस्तिष्क बाधा के एक मानव कोशिका आधारित, संपर्क माडल की तैयारी के लिए बेहतर

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Ferromagnetic Bare Metal Stent for Endothelial Cell Capture and Retention

Endothelial सेल पर कब्जा है और बनाए रखने के लिए Ferromagnetic नंगे धातु स्टेंट

Rapid endothelialization of cardiovascular stents is needed to reduce stent thrombosis and to avoid anti-platelet therapy which can reduce bleeding risk. ...

Wet Chemistry and Peptide Immobilization on Polytetrafluoroethylene for Improved Cell-adhesion

बेहतर सेल-आसंजन के लिए गीले रसायन विज्ञान और पेप्टाइड स्थिरीकरण Polytetrafluoroethylene पर

Endowing materials surface with cell-adhesive properties is a common strategy in biomaterial research and tissue engineering. This is particularly ...

Site-Directed Immobilization of Bone Morphogenetic Protein 2 to Solid Surfaces by Click Chemistry

साइट-अस्थि Morphogenetic प्रोटीन 2 के निर्देश के स्थिरीकरण के लिए क्लिक करें रसायन विज्ञान से ठोस सतहों

Different therapeutic strategies for the treatment of non-healing long bone defects have been intensively investigated. Currently used treatments present ...

Functional Surface-immobilization of Genes Using Multistep Strand Displacement Lithography

कार्यात्मक सतह-Multistep कतरा विस्थापन लिथोग्राफी का उपयोग कर जीन के स्थिरीकरण

Immobilization of genes on lithographically structured surfaces allows the study of compartmentalized gene expression processes in an open microfluidic ...