Name: delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model
Uploaded: 2020-09-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

وأجريت التجارب على فئران أنثى C57BL/6، وعمرها 10-12 أسبوعاً، و20-25 غرام من وزن الجسم. امتثلت جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوان للمعايير الواردة في دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (معهد الثروة الحيوانية المختبرية، الأكاديمية الوطنية للعلوم، بيثيسدا، MD، الولايات المتحدة الأمريكية) وتمت ...

<ol>
	<li>Franchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Myocardial+Microenvironment+Modulates+the+Biology+of+Transplanted+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells.</a> Molecular Imaging Biology. , (2020).</li><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans.">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li><li>Writing Group, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), 38 (2016).</li><li>Gersh, B. J., Simari, R. D., Behfar, A., Terzic, C. M., Terzic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+repair+therapy:+a+clinical+perspective.">Cardiac cell repair therapy: a clinical perspective.</a> Mayo Clinic Protocol. 84 (10), 876-892 (2009).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+heart+failure+therapy+headed+for+optimization.">Regenerative heart failure therapy headed for optimization.</a> European Heart Journal. 35 (19), 1231-1234 (2014).</li><li>Beegle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+preconditioning+of+mesenchymal+stromal+cells+induces+metabolic+changes,+enhances+survival,+and+promotes+cell+retention+in+vivo.">Hypoxic preconditioning of mesenchymal stromal cells induces metabolic changes, enhances survival, and promotes cell retention in vivo.</a> Stem Cells. 33 (6), 1818-1828 (2015).</li><li>Kubli, D. A., Gustafsson, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+mitophagy:+the+yin+and+yang+of+cell+death+control.">Mitochondria and mitophagy: the yin and yang of cell death control.</a> Circulation Research. 111 (9), 1208-1221 (2012).</li><li>Psaltis, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+oxidative+stress+in+transplanted+mesenchymal+stromal+cells.">Noninvasive monitoring of oxidative stress in transplanted mesenchymal stromal cells.</a> JACC Cardiovascular Imaging. 6 (7), 795-802 (2013).</li><li>Peet, C., Ivetic, A., Bromage, D. I., Shah, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+monocytes+and+macrophages+after+myocardial+infarction.">Cardiac monocytes and macrophages after myocardial infarction.</a> Cardiovasc Research. 16 (6), 1101-1112 (2020).</li><li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioimmunology:+the+immune+system+in+cardiac+homeostasis+and+disease.">Cardioimmunology: the immune system in cardiac homeostasis and disease.</a> Nature Reviews Immunology. 18 (12), 733-744 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Stem+Cells+Promote+the+Resolution+of+Cardiac+Inflammation+After+Ischemia+Reperfusion+Via+Enhancing+Efferocytosis+of+Neutrophils.">Mesenchymal Stem Cells Promote the Resolution of Cardiac Inflammation After Ischemia Reperfusion Via Enhancing Efferocytosis of Neutrophils.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (5), 014397 (2020).</li><li>Saxena, A., Russo, I., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+as+a+therapeutic+target+in+myocardial+infarction:+learning+from+past+failures+to+meet+future+challenges.">Inflammation as a therapeutic target in myocardial infarction: learning from past failures to meet future challenges.</a> Translational Research. 167 (1), 152-166 (2016).</li><li>Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biological+Basis+for+Cardiac+Repair+After+Myocardial+Infarction:+From+Inflammation+to+Fibrosis.">The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction: From Inflammation to Fibrosis.</a> Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).</li><li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li></ol>

أكثر من 85 مليون شخص في جميع أنحاء العالم يعانون من أمراض القلب والأوعية الدموية3. ارتفاع انتشار هذه الأحداث الإقفارية يبرر المزيد من التطوير والتوسع في العلاجات البديلة لتعزيز تجديد الأنسجة التالفة. تستخدم الطرق التقليدية إجراء إعادة ضخ الإقفار الإقفاري في بيئة حادة مع الإد?...

ولا تزال أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الأكثر شيوعاً في معدلات الاعتلال والوفيات في جميع أنحاء العالم. وقد وجد أن الأحداث الإقفاري القلبية الضارة إلى الوظيفة العامة للقلب والخلايا المحيطة1. فقط ̴0.45-1.0% من عضلة القلب سوف تتجدد كل عام بعد حدوث تلف عضلة القلب2. على الرغم من الطلب المتزايد والتركيز المتأصل على تطوير العلاجات، العلاجات المساعدة في تجديد الأنسجة المصابة كان من الصعب إنشاء ولا تزال تتطلب المزيد من التحسين3,4,5. وقد أدخلت علاجات الخلايا الجذعية كمسار بديل لتجديد الأنسجة التالفة بعد حدوث حدث نقص التروية; ومع ذلك، تم الطعن في تقدم هذه العلاجات من خلال البقاء على قيد الحياة والاحتفاظ بالخلايا إلى منطقة المصابة6.
يمكن وصف البيئة الدقيقة للقلب بعد حدوث نقص في التروية بأنه نقص في الأكسجة، ومناصر للأكسدة، ومناصر للالتهابات، وتقديم ظروف عدائية للخلايا الجذعية العلاجية للتكيف مع البقاء على قيد الحياة7،8. كما يتم تشغيل استجابة مناعية بعد الإصابة، اللمفاويات الساذجة، الضامة، العدلات والخلايا الصاري محاولة لإصلاح الضرر عن طريق إزالة الخلايا المحتضرة والتضمين عملية لإعادة عرض الأنسجة9،10،11. في غضون الأيام 3 الأولى بعد نقص التروية، والتهاب في ذروته مع الافراج عن السيتوكينات الموالية للالتهابات مع أعداد كبيرة من العدلات ومحاديات في المنطقة10،12. بعد 7 أيام، وقد هدأت الكثير من الالتهاب والانتقال إلى الخلايا التعويضية يبدأ، والاستمرار حتى اكتمال سلسلة إعادة عرض، ما يقرب من 14 يوما في الفئران13. طريقتنا الجراحية هي نهج بديل محتمل لإدخال البيولوجيات في عضلة القلب لتجاوز ذروة الاستجابة المناعية الفطرية بعد إصابة إعادة حقن الإقفاري. وفي الوقت نفسه، فإنه سيسمح لدراسة أي علاجات في حالة نقص التروية/نقص التروية المزمن حيث قد يكون هناك متغيرات مختلفة للنظر بالمقارنة مع احتشاء عضلة القلب الحاد.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:973px;" width="973">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:322px;">0.9% NaCl Irrigation, USP</td>
			<td style="width:191px;">Baxter</td>
			<td style="width:132px;">0338-0048-04</td>
			<td style="width:328px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">11x12&#34; Press n&#39; Seal surgical drape, autoclavable</td>
			<td>SAI Infusion Technologies</td>
			<td>PSS-SD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">24G 3/4&#34; IV catheter tube</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">28G x 1/2&#34; 1mL allergy syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305500</td>
			<td>Injection of analgesic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">30G x 1/2&#34; 3/10cc insulin syringe</td>
			<td>Ulticare</td>
			<td>08222.0933.56</td>
			<td>Injection of stem cells</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">6-0 S-29, 12&#34; Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J556G</td>
			<td>Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">9-0 BV100-4, 5&#34; Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2829G</td>
			<td>Ligation of the LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Absorbent underpad</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>14-206-64</td>
			<td>For underneath the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Alcohol prep pads, 2 ply, medium</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anti-fog face mask</td>
			<td>Halyard</td>
			<td>49235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bonn Strabismus scissors, curved, blunt</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14085-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml</td>
			<td>ZooPharm Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity).</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Castroviejo needle holders, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curity sterile gauze sponges</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>397310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Delicate suture tying forceps, 45 angle bent</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Electric Razor</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane 100 ml</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>PI23238</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Lab coat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Monoject 1 mL hypodermic syringe</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>8881501400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria iris forceps, curved, serrated (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria speculum retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17370-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Mouse endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Nair depilatory cream</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Optixcare eye lube plus</td>
			<td>Aventix</td>
			<td></td>
			<td>Sterile ocular lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Physiosuite ventilator</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PolyE Polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-0191</td>
			<td>Temporary compression of LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-iodine swabs</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scalpel, 10-blade</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 3&#34; cotton tipped applicators</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>C15055-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 6&#34; tapered cotton tip applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-826-5WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile gloves</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>N8830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterilization pouches</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MPP100525GS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgery cap</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture tying forceps, straight (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10825-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Transpore surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Triple antibiotic ointment</td>
			<td>G&#38;W Laboratories</td>
			<td>11-2683ILNC2</td>
			<td>Topical application to prevent infection</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15004-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vetflo vaporizer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model

هناك اهتمام كبير في استخدام الخلايا الجذعية (SCs) لاستعادة وظيفة القلب في الأفراد الذين يعانون من إصابات عضلة القلب. الأكثر شيوعا، تتم دراسة العلاج بالخلايا الجذعية القلبية عن طريق تقديم SCs بالتزامن مع تحريض إصابة عضلة القلب. ومع ذلك، فإن هذا النهج يمثل قيدين هامين: قد تؤثر البيئة الإقفارية المعادية المبكرة للالتهابات على بقاء الـ SCs المزروعة، ولا تمثل سيناريو احتشاء تحت الحاد حيث من المرجح أن يتم استخدام SCs. هنا نحن وصف سلسلة من جزأين من العمليات الجراحية لاستقراء إصابة الإقفاريات reperfusion والولادة من الخلايا الجذعية mesenchymal (MSCs). قد تسمح هذه الطريقة من إدارة الخلايا الجذعية لقابلية البقاء الأطول والاستبقاء حول الأنسجة التالفة من خلال التحايل على الاستجابة المناعية الأولية. تم حث نموذج من إصابة إعادة ضخ الإقفاري في الفئران يرافقها تسليم الخلايا الجذعية mesenchymal (3.0 × 105) ، والتعبير بشكل ثابت عن المراسل الجيني firefly luciferase تحت المروج CMV أعرب عن المكونة ، داخل الرحمية 7 أيام في وقت لاحق. تم تصوير الحيوانات عن طريق الموجات فوق الصوتية والتصوير بالإنارة الحيوية لتأكيد الإصابة وحقن الخلايا ، على التوالي. الأهم من ذلك، لم يكن هناك أي معدل مضاعفات إضافية عند تنفيذ هذا النهج الإجراءين للتسليم SC. هذه الطريقة من إدارة الخلايا الجذعية، مجتمعة مع استخدام الدولة من بين أحدث الجينات مراسل، قد تسمح لدراسة في الجسم الحي من صلاحية والاحتفاظ SCs زرع في حالة من نقص التروية المزمنة ينظر عادة سريريا، في حين يتحايل أيضا على الاستجابة الأولية الموالية للالتهابات. باختصار، وضعنا بروتوكولاً لتأخر وصول الخلايا الجذعية إلى عضلة القلب، والذي يمكن استخدامه كنهج جديد محتمل في تعزيز تجديد الأنسجة التالفة.

تم تحريض إصابة إعادة ضخ الإسترشيا في الفئران في اليوم 0 ، تليها مخطط صدى القلب بعد الجراحة وتخطيط كهربية القلب في اليوم السابق لزرع الخلايا الجذعية. وأكد الموجات فوق الصوتية وتحليل تخطيط القلب احتشاء وانخفاض وظيفة الانقباض البطين(الشكل 1A-D). وتبين من مواصلة فحص الب...

Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

يتم التحقيق في الخلايا الجذعية باستمرار كعلاجات محتملة للأفراد الذين يعانون من تلف عضلة القلب ، ومع ذلك ، يمكن أن يؤثر انخفاض قدرتها على البقاء والاحتفاظ داخل الأنسجة المصابة على فعاليتها على المدى الطويل. في هذه المخطوطة، نُصف طريقة بديلة لتوصيل الخلايا الجذعية في نموذج من اِصابة إعادة ضخ الإقفار.

تأخر التسليم داخل القلب للخلايا الجذعية بعد إصابة إعادة ضخ الإقفاري في نموذج مورين

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

يؤدي تلف الإقفاري إلى بيئة معادية معادية للالتهابات تؤثر على بقاء الخلايا المزروعة. بروتوكولنا يقدم طريقة بديلة لتوفير البيولوجيا من خلال التحايل على الاستجابة المناعية الأولية للإصابة. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو أنه يجعل من الممكن لإدارة العلاجية أسبوع واحد بعد الإصابة، وتقليد العلاج في البيئة السريرية.ينصب تركيزنا الأساسي على نموذج إصابة إعادة ضخ الإقفار وزرع الخلايا الجذعية. ومع ذلك، يمكن أيضا استخدام هذا النهج لنماذج من الأمراض الالتهابية التي تنطوي على إدخال العلاجات البيولوجية. تبدأ autoclaving جميع الأدوات الجراحية.إذا كانت العمليات الجراحية المتعددة التي يتعين إجراؤها في جلسة واحدة، تنظيف الأدوات بعد كل وإعادة تعقيمها باستخدام خرز الساخنة التعقيم. تحت الجلد إدارة مسكن، تزن الحيوان، وإدخال الوزن في جهاز التنفس الصناعي. يحلق الجانب الأيسر من الصدر من القص إلى مستوى الكتف وتطبيق كريم إزالة الشعر لإزالة الفراء الزائد.لمنع انهيار الرئة، والحفاظ على الضغط النهائي النهائي الموجب عند سنتيمترين من الماء لإجراء إعادة التروية وتغييره إلى ثلاثة سنتيمترات من الماء للحقن المتأخر من إجراء الخلايا. بعد تخدير الماوس، intubate ذلك مع أنبوب 20 قياس endotracheal ونقلها إلى وسادة التدفئة التي تسيطر عليها للحفاظ على درجة حرارة الجسم من 35 إلى 37 درجة مئوية. ضع الفأر في اِرْقَة شغل جانبية مع نهاية الجمجمة على اليسار ونهاية الكودال على اليمين.فرك منطقة جراحية بالتناوب بين بوديندون اليود والكحول مسحات ثلاث مرات وتطبيق مرهم العيون على كلتا العينين. استخدم مشرط نصلي رقم 10 لعمل شق عمودي 2.5 ملليمتر إلى يمين الحلمة في أقصى اليسار في مجال الرؤية، ثم استخدم المقص لقطع طبقات العضلات السطحية حتى تظهر العضلات الوربية والأضلاع. أثناء رفع الأضلاع والأنسجة المحيطة بها ، تقطع من خلال الفضاء الوربي بين الأضلاع الرابعة والخامسة ، ثم أدخل مُسَاَدِع الجفن في الفضاء المفتوح.سحب pericardium باستخدام ملقط منحني، تحريك الرئة صعودا والخروج من وجهة النظر. تمرير خياطة النايلون 9-0 من خلال عضلة القلب تحت الشريان LAD 2.5 ملليمتر إلى اليسار auricle الحفاظ على حركة سلسة ومتسقة لمنع تمزق الأنسجة أو ثقب الأوعية الدموية الرئيسية. ربط عقدة مربعة فضفاضة، ثم ضع سنتيمتر واحد من أنابيب البولي إيثيلين داخل عقدة فضفاضة.تأمين خياطة حول الأنابيب وتأكيد نقص التروية عن طريق شحوب وعدم انتظام ضربات القلب البطين، ثم الافراج بعد 35 دقيقة. بعد إزالة الأنابيب، انتظر لمدة خمس دقائق لتأكيد إعادة ضخ عضلة القلب. ضع أنبوب قسطرة الرابع 24 في تجويف الصدر مسافة نترية واحدة إلى يمين الفتحة.استخدام 6-0 خياطة قابلة للامتصاص لإغلاق شق الوربي في نمط انقطاع بسيط وطبقة العضلات في نمط خياطة مستمرة. بعد إغلاق طبقة العضلات السطحية ، قم بإزالة أنبوب الصدر أثناء سحب الهواء من تجويف الصدر باستخدام حقنة درنة درنة ميليلتر واحد. أغلق شق الجلد مع خياطة قابلة للامتصاص 6-0 في نمط فراش أفقي مستمر.عند الانتهاء، قم بإدارة 1.5 ملليلتر من تحت الجلد الملحي الدافئ وتطبيق مرهم المضادات الحيوية الثلاثي على موقع الشق لمنع العدوى. نقل الماوس إلى قفص الفراش مجانا أو قفص مع الفراش مغطاة على وسادة دافئة ودرجة حرارة من 35 إلى 37 درجة مئوية حتى يتم استردادها تماما. بعد إعداد الماوس وتنبيبه كما سبق وصفه، قم بإزالة الغرز من طبقة الجلد بمقص وملقط، ثم استخدم مشرطًا رقم 10 لإجراء شق في نفس موقع الجراحة السابقة.الاستمرار في قطع من خلال ندبا حتى خياطة طبقة العضلات مرئية، ثم استخدام مقص والملقط لإزالة خياطة وقطع طبقة العضلات مفتوحة. إزالة الغرز عقد الأضلاع معا ومواصلة قطع من خلال العضلات الوربية من الشق السابق. ضع مُناسِّر الجفن في الفضاء الوربي وحدد مكان منطقة الربط السابق.تحميل 300،000 mesenchymal الخلايا الجذعية علقت في 20 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني في حقنة الأنسولين قياس 30 وثني الإبرة قليلا لتحقيق زاوية مناسبة للحقن. تتحرك في الاتجاه من القمة نحو قاعدة القلب، أدخل الحقنة في المنطقة شبه الحمراء حتى فتحة الإبرة تماما داخل عضلة القلب، ثم حقن الخلايا ببطء في عضلة القلب، والانتظار ثلاث ثوان وإزالة الإبرة. مراقبة القلب عن كثب لمدة ثلاث دقائق للتأكد من عدم وجود رد فعل غير طبيعي للخلايا مثل الرجفان البطيني.بعد ثلاث دقائق، ضع أنبوب قسطرة 24 قياس الرابع في تجويف الصدر مسافة واحدة الوربي إلى يمين الفتحة. أغلق العضلات الوربية وطبقات الجلد وأزل أنبوب الصدر كما سبق وصفه. إدارة 1.5 ملليلتر من الحارة المالحة تحت الجلد وتطبيق مرهم المضادات الحيوية الثلاثي إلى موقع شق لمنع العدوى.نقل الماوس إلى قفص الفراش الحرة أو قفص مع الفراش مغطاة على وسادة دافئة حتى يتم استردادها بالكامل. تم إجراء مخطط صدى القلب بعد الجراحة وتخطيط القلب في اليوم الذي يتم فيه زرع الخلايا الجذعية الجذعية ، مما يؤكد احتشاء وانخفاض وظيفة الانقباض البطيني. وأظهر مزيد من الفحص للبيانات أن كسر القذف وتقصير الكسور قد انخفضا في الفئران التي تلقت إصابة إقفارية، في حين زادت أحجام الانبساطي والانقباضي في نهاية المطاف.ماسون ثلاثية الألوان تلطيخ من الأنسجة عضلة القلب سبعة أيام بعد الإصابة أظهرت زيادة ترسب الكولاجين وترقق من جدار البطين الأيسر في قلوب الفئران التي تلقت إصابة الإقفاري. في التصوير الإنارة الحيوية في الجسم الحي أو BLI تم تنفيذها في اليوم التالي لزرع الخلايا الجذعية الوسيمني. ويتمثل نجاح التسليم في حالات العسران في الانبعاثات في إشارة BLI مقارنة بالفئران التي تسببت في إصابة إعادة ضخ الإقفار ولكنها لم تتلقَّ هذه الإصابات.عند محاولة هذا البروتوكول، نضع في اعتبارنا أن الحركات الصغيرة المتعمدة عند قطع من خلال النترات، وربط الأوعية، وحقن الخلايا أمر حيوي لمنع الضرر غير المبرر للقلب أو الرئة في مجال الرؤية. هذه الإجراءات توفر القدرة على رصد وظيفة القلب بعد زرع من خلال الموجات فوق الصوتية، والخلايا الحيوية من خلال التصوير الاحتقاني، أو مزيد من التقنيات الجزيئية أو البيوكيميائية اعتمادا على العلاج المستخدم.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

توقف القلب والإنعاش القلبي Normothermic : نموذج الفأر من نقص التروية ، إعادة إشباع الخلايا الإصابات

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

والفئران مغلقة الصدر نموذج نقص التروية القلبية وإعادة إشباع الخلايا

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

نقص التروية-ضخه نموذج من إصابة الكلى الحاد والتليف آخر الاصابات في الفئران

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Intramyocardial Cell Delivery: Observations in Murine Hearts

داخل عضلة القلب توصيل الخليوي: ملاحظات في قلوب الفئران

Previous studies showed that cell delivery promotes cardiac function amelioration by release of cytokines and factors that increase cardiac tissue ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

A الفئران نموذج من عضلة القلب إصابة نقص التروية، ضخه من خلال ربط الشريان الأمامي اليسار تنازليا

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

نموذج الفئران من المعوية الإسكيمية-ضخه إصابة

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

نموذج الفأر من الشبكية الإسكيمية-ضخه إصابة خلال ارتفاع ضغط العين

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

تقييم احتياطي التدفق التاجي بعد إعادة ضخ الإقفارية عضلة القلب في الفئران

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

نموذج الفئران قبل السريرية لدراسة نقص التروية-ضخ الاصابه في جراحه المجهرية الترميمية

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Tracking Superparamagnetic Iron Oxide-labeled Mesenchymal Stem Cells using MRI after Intranasal Delivery in a Traumatic Brain Injury Murine Model

تتبع أكسيد الحديد المغناطيسي المسمي الخلايا الجذعية المسسبيه باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي بعد الولادة في الأنف في أصابه الدماغ الرضية نموذج Murine

Stem cell-based therapies for brain injuries, such as traumatic brain injury (TBI), are a promising approach for clinical trials. However, technical ...