Name: delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model
Uploaded: 2020-09-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

Forsøgene blev udført på kvindelige C57BL/6 mus, alder 10-12 uger og 20-25 g kropsvægt. Alle dyreforsøg er i overensstemmelse med de standarder, der er anført i vejledningen for pleje og brug af laboratoriedyr (Institute of Laboratory Animal Resources, National Academy of Sciences, Bethesda, MD, USA) og blev godkendt af Mayo Clinic College of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
1. Forberedelse og intubation
<ol><li>Autoklave alle kirurgiske in...

<ol>
	<li>Franchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Myocardial+Microenvironment+Modulates+the+Biology+of+Transplanted+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells.</a> Molecular Imaging Biology. , (2020).</li><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans.">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li><li>Writing Group, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), 38 (2016).</li><li>Gersh, B. J., Simari, R. D., Behfar, A., Terzic, C. M., Terzic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+repair+therapy:+a+clinical+perspective.">Cardiac cell repair therapy: a clinical perspective.</a> Mayo Clinic Protocol. 84 (10), 876-892 (2009).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+heart+failure+therapy+headed+for+optimization.">Regenerative heart failure therapy headed for optimization.</a> European Heart Journal. 35 (19), 1231-1234 (2014).</li><li>Beegle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+preconditioning+of+mesenchymal+stromal+cells+induces+metabolic+changes,+enhances+survival,+and+promotes+cell+retention+in+vivo.">Hypoxic preconditioning of mesenchymal stromal cells induces metabolic changes, enhances survival, and promotes cell retention in vivo.</a> Stem Cells. 33 (6), 1818-1828 (2015).</li><li>Kubli, D. A., Gustafsson, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+mitophagy:+the+yin+and+yang+of+cell+death+control.">Mitochondria and mitophagy: the yin and yang of cell death control.</a> Circulation Research. 111 (9), 1208-1221 (2012).</li><li>Psaltis, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+oxidative+stress+in+transplanted+mesenchymal+stromal+cells.">Noninvasive monitoring of oxidative stress in transplanted mesenchymal stromal cells.</a> JACC Cardiovascular Imaging. 6 (7), 795-802 (2013).</li><li>Peet, C., Ivetic, A., Bromage, D. I., Shah, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+monocytes+and+macrophages+after+myocardial+infarction.">Cardiac monocytes and macrophages after myocardial infarction.</a> Cardiovasc Research. 16 (6), 1101-1112 (2020).</li><li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioimmunology:+the+immune+system+in+cardiac+homeostasis+and+disease.">Cardioimmunology: the immune system in cardiac homeostasis and disease.</a> Nature Reviews Immunology. 18 (12), 733-744 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Stem+Cells+Promote+the+Resolution+of+Cardiac+Inflammation+After+Ischemia+Reperfusion+Via+Enhancing+Efferocytosis+of+Neutrophils.">Mesenchymal Stem Cells Promote the Resolution of Cardiac Inflammation After Ischemia Reperfusion Via Enhancing Efferocytosis of Neutrophils.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (5), 014397 (2020).</li><li>Saxena, A., Russo, I., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+as+a+therapeutic+target+in+myocardial+infarction:+learning+from+past+failures+to+meet+future+challenges.">Inflammation as a therapeutic target in myocardial infarction: learning from past failures to meet future challenges.</a> Translational Research. 167 (1), 152-166 (2016).</li><li>Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biological+Basis+for+Cardiac+Repair+After+Myocardial+Infarction:+From+Inflammation+to+Fibrosis.">The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction: From Inflammation to Fibrosis.</a> Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).</li><li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li></ol>

Over 85 millioner mennesker verden over er ramt af hjerte-kar-sygdom3. Den høje forekomst af disse iskæmiske hændelser berettiger yderligere udvikling og udvidelse af alternative behandlingsformer for at fremme regenerering af beskadiget væv. Traditionelle metoder udnytte iskæmi reperfusion procedure i en akut indstilling med efterfølgende administration af terapeutiske1. Inflammatoriske reaktioner er på sit højeste mellem 3-4 dage efter en hjerteisk iskæmisk begiv...

Hjerte-kar-sygdom er fortsat den mest almindelige årsag til sygelighed og dødelighed på verdensplan. Hjerte iskæmisk hændelser har vist sig at være skadelige for den overordnede funktion af myokardiet og de omkringliggende celler1. Kun ̴0,45-1,0% af kardiomyocytter vil regenerere hvert år efter myokardieskaderopstår 2. På trods af den stigende efterspørgsel og iboende fokus på udvikling af behandlinger har det været vanskeligt at etablere behandlinger, der hjalp med regenerering af skadetvæv, ogkræver stadig yderligereoptimering 3,4,5. Stamcellebehandlinger er blevet indført som en alternativ vej til at forynge beskadiget væv efter en iskæmisk begivenhed; Men udviklingen af disse behandlinger er blevet udfordret af den begrænsede overlevelse og fastholdelse af cellerne til et skadet område6.
Mikromiljø af hjertet efter en iskæmisk begivenhed kan karakteriseres som hypoxisk, pro-oxidant, og pro-inflammatoriske, præsenterer fjendtlige betingelser for terapeutiske stamceller til at tilpasse sig for overlevelse7,8. Som en immunrespons udløses efter skade, naive lymfocytter, makrofager, neutrofiler og mastceller forsøge at reparere skaden ved at fjerne døende celler og modulere processen for væv remodeling9,10,11. Inden for de første 3 dage efter iskæmi, betændelse er på sit højeste med frigivelsen af pro-inflammatoriske cytokiner med et stort antal neutrofiler og monocytter i området10,12. Efter 7 dage, meget af betændelse er aftaget og overgangen til reparative celler begynder, fortsætter indtil remodeling kaskade er færdig, cirka 14 dage i mus13. Vores kirurgiske metode er en potentiel alternativ tilgang til indførelsen af biologi i myokardiet at omgå toppen medfødte immunrespons efter iskæmi reperfusion skade. Samtidig vil det give mulighed for undersøgelse af alle behandlinger i en tilstand af subakut / kronisk iskæmi, hvor der kan være forskellige variabler til at overveje i forhold til akut myokardie infarkt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:973px;" width="973">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:322px;">0.9% NaCl Irrigation, USP</td>
			<td style="width:191px;">Baxter</td>
			<td style="width:132px;">0338-0048-04</td>
			<td style="width:328px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">11x12&#34; Press n&#39; Seal surgical drape, autoclavable</td>
			<td>SAI Infusion Technologies</td>
			<td>PSS-SD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">24G 3/4&#34; IV catheter tube</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">28G x 1/2&#34; 1mL allergy syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305500</td>
			<td>Injection of analgesic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">30G x 1/2&#34; 3/10cc insulin syringe</td>
			<td>Ulticare</td>
			<td>08222.0933.56</td>
			<td>Injection of stem cells</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">6-0 S-29, 12&#34; Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J556G</td>
			<td>Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">9-0 BV100-4, 5&#34; Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2829G</td>
			<td>Ligation of the LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Absorbent underpad</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>14-206-64</td>
			<td>For underneath the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Alcohol prep pads, 2 ply, medium</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anti-fog face mask</td>
			<td>Halyard</td>
			<td>49235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bonn Strabismus scissors, curved, blunt</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14085-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml</td>
			<td>ZooPharm Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity).</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Castroviejo needle holders, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curity sterile gauze sponges</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>397310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Delicate suture tying forceps, 45 angle bent</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Electric Razor</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane 100 ml</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>PI23238</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Lab coat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Monoject 1 mL hypodermic syringe</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>8881501400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria iris forceps, curved, serrated (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria speculum retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17370-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Mouse endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Nair depilatory cream</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Optixcare eye lube plus</td>
			<td>Aventix</td>
			<td></td>
			<td>Sterile ocular lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Physiosuite ventilator</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PolyE Polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-0191</td>
			<td>Temporary compression of LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-iodine swabs</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scalpel, 10-blade</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 3&#34; cotton tipped applicators</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>C15055-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 6&#34; tapered cotton tip applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-826-5WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile gloves</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>N8830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterilization pouches</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MPP100525GS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgery cap</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture tying forceps, straight (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10825-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Transpore surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Triple antibiotic ointment</td>
			<td>G&#38;W Laboratories</td>
			<td>11-2683ILNC2</td>
			<td>Topical application to prevent infection</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15004-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vetflo vaporizer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model

Der er betydelig interesse i brugen af stamceller (SCs) til inddrivelse af hjertefunktion hos personer med myokardieskader. Mest almindeligt, hjertestamcelleterapi er undersøgt ved at levere SCs samtidig med induktion af myokardieskader. Denne fremgangsmåde indeholder imidlertid to væsentlige begrænsninger: Det tidlige fjendtlige proinflammatoriske iskæmiske miljø kan påvirke overlevelsen af transplanterede SC'er, og det repræsenterer ikke det subakut infarktscenarie, hvor SCs sandsynligvis vil blive anvendt. Her beskriver vi en todelt serie af kirurgiske procedurer for induktion af iskæmi-reperfusion skade og levering af mesenkymale stamceller (MSC). Denne metode til administration af stamceller kan give mulighed for længere levedygtighed og retention omkring beskadiget væv ved at omgå den oprindelige immunrespons. En model af iskæmi reperfusion skade blev induceret i mus ledsaget af levering af mesenkymale stamceller (3,0 x 105),stably udtrykker reporter genet firefly luciferase under konstituerende udtrykt CMV promotor, intramyocardially 7 dage senere. Dyrene blev afbildet via ultralyd og bioluminescerende billeddannelse for bekræftelse af skade og injektion af celler, henholdsvis. Det er vigtigt, at der ikke var nogen ekstra komplikationsrate, når du udførte denne tilgang med to procedurer for sc-levering. Denne metode til administration af stamceller, kollektivt med udnyttelse af state-of-the-art reporter gener, kan give mulighed for in vivo undersøgelse af levedygtighed og fastholdelse af transplanterede SCs i en situation med kronisk iskæmi almindeligt set klinisk, samtidig med at omgå den oprindelige pro-inflammatoriske respons. Sammenfattende har vi etableret en protokol for forsinket levering af stamceller i myokardiet, som kan bruges som en potentiel ny tilgang til at fremme regenerering af det beskadigede væv.

Iskæmi reperfusion skade blev induceret i mus på dag 0, efterfulgt af en post-operative ekkokardiogram og elektrokardiogram på dagen før stamcelleimplantatation. Ultralyds- og elektrokardiogramanalyse bekræftede infarkt og nedsat ventrikelkontraktisk funktion (Figur 1A-D). Yderligere undersøgelse af dataene viste, at udslyngningsfraktionen og fraktioneret afkortning blev nedsat hos mus, der fik iskæmisk skade, mens de end diastoliske og systoliske volumener steg (<str...

Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

Stamceller celler undersøges løbende som potentielle behandlinger for personer med myokardieskader, men deres nedsat levedygtighed og fastholdelse i skadet væv kan påvirke deres langsigtede effektivitet. I dette manuskript beskriver vi en alternativ metode til stamcellelevering i en murine model af iskæmi reperfusion skade.

Forsinket Intramyokardie levering af stamceller efter Iskæmi Reperfusion Skade i en Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

Iskæmisk skade inducerer en fjendtlig pro-inflammatorisk miljø påvirker overlevelsen af transplanterede celler. Vores protokol præsenterer en alternativ metode til at levere biologi ved at omgå den oprindelige immunrespons på skade. Den største fordel ved denne protokol er, at det gør det muligt at administrere terapeutiske en uge efter skade, efterligne behandling i det kliniske miljø.Vores primære fokus er på iskæmi reperfusion skade model og transplantation af STAMCELLER. Men, denne fremgangsmåde kan også udnyttes til modeller af inflammatorisk sygdom, der indebærer indførelse af biologiske behandlinger. Begynd med autoklavering alle kirurgiske instrumenter.Hvis flere operationer skal udføres i en session, rense instrumenterne efter hvert dyr og re-sterilisere dem ved hjælp af en varm perle sterilisator. Subkutanet administrere smertestillende, veje dyret, og input vægten i ventilatoren. Barber venstre side af brystet fra brystbenet til niveauet af skulderen og anvende depilatory creme til at fjerne overskydende pels.For at forhindre lunge sammenbrud, opretholde den positive ende eksentatoriske tryk på to centimeter vand for iskæmi reperfusion procedure og ændre det til tre centimeter vand til forsinket injektion af celler procedure. Efter bedøvelse musen, intubere det med en 20 gauge endotrakeal rør og overføre det til en kontrolleret varmepude for at opretholde en kropstemperatur på 35 til 37 grader Celsius. Placer musen i lateral recumbency med kranieende på venstre og caudal ende til højre.Skrub det kirurgiske område skiftevis mellem povidone jod og alkohol svaberprøver tre gange og anvende oftalmologiske salve til begge øjne. Brug en nummer 10 klinge skalpel til at foretage en lodret snit 2,5 millimeter til højre for venstre brystvorte i synsfeltet, derefter bruge en saks til at skære gennem de overfladiske muskel lag, indtil interkostale muskler og ribben er synlige. Mens løfte ribbenene og omgivende væv, skæres gennem interkostale rummet mellem den fjerde og femte ribben, derefter indsætte øjenlåget retractor i det åbne rum.Træk hjertesækken tilbage ved hjælp af buede kraftafgænsninger, og flytte lungen opad og ud af visningen. Pass en 9-0 nylon sutur gennem myokardiet under LAD arterie 2,5 millimeter distale til venstre auricle opretholde glat og konsekvent bevægelse for at forhindre rivning af vævet eller punktering en større blodkar. Bind en løs firkantet knude, og placer derefter en centimeter polyethylenrør i den løse knude.Fastgør suturen omkring slangen og bekræft iskæmi ved pallor og ventrikelarytmi, derefter frigives efter 35 minutter. Efter fjernelse af slangen, vente i fem minutter for at bekræfte re-perfusion af myokardiet. Placer et 24 gauge IV kateterrør ind i brysthulen et interkostale rum til højre for åbningen.Brug 6-0 absorberbare suturer til at lukke interkostale snit i et simpelt afbrudt mønster og muskellaget i et kontinuerligt suturmønster. Efter lukning af det overfladiske muskellag fjernes brystrøret, mens luften trækkes ud af brysthulen med en en milliliter tuberkulinsprøjte. Luk hudsnitt med en 6-0 absorberbar sutur i et kontinuerligt vandret madrasmønster.Når du er færdig, administrere 1,5 milliliter varm saltvand subkutant og anvende tredobbelt antibiotika salve til indsnit stedet for at forhindre infektion. Overfør musen til et sengetøj gratis bur eller et bur med overdækket strøelse på en varm pude og en temperatur på 35 til 37 grader Celsius, indtil det er fuldt tilbagebetalt. Efter forberedelse og intubering af musen som tidligere beskrevet, skal du fjerne suturen fra hudlaget med saks og hæcener, og brug derefter en nummer 10 skalpel til at foretage et snit på samme sted som den foregående operation.Fortsæt med at skære gennem arvæv, indtil muskellaget sutur er synlig, derefter bruge saks og hændebånd til at fjerne sutur og skære muskellaget åbent. Fjern suturerne, der holder ribbenene sammen, og fortsæt med at skære gennem interkostale musklen fra det foregående snit. Anlåget retractor i det interkostale rum og lokalisere området af den tidligere ligation.Belastning 300, 000 mesenkymale STAMCELLER suspenderet i 20 mikroliter af PBS i en 30 gauge insulin sprøjte og bøje nålen lidt for at opnå den rette vinkel for injektion. Bevæger sig i retning fra spidsen mod bunden af hjertet, indsætte sprøjten i peri-infarkt regionen, indtil nålen åbningen er helt inde i myokardiet, derefter langsomt injicere cellerne i myokardiet, vent tre sekunder og fjern nålen. Overhold hjertet nøje i tre minutter for at sikre, at der ikke er nogen unormal reaktion på cellerne, såsom ventrikelflimmer.Efter tre minutter anbringes et 24 gauge IV kateterrør i brysthulen et interkostale rum til højre for åbningen. Luk interkostale muskel og hud lag og fjerne brystet rør som tidligere beskrevet. Administrere 1,5 milliliter varm saltvand subkutant og anvende tredobbelt antibiotika salve til indsnit stedet for at forhindre infektion.Overfør musen til et sengetøj gratis bur eller bur med overdækket strøelse på en varm pude, indtil den er fuldt tilbagebetalt. Postoperativt ekkokardiogram og elektrokardiogram blev udført den dag, hvor DER fortsætter STEM-celleimplantatation, hvilket bekræftede infarkt og nedsat ventrikelkontraktilefunktion. Yderligere undersøgelse af dataene viste, at udslyngningsfraktionen og fraktioneret afkortning blev nedsat hos mus, der fik iskæmisk skade, mens slutdiastol- og systoliske mængder steg.Masson trichrome farvning af myokardievæv syv dage efter skaden viste øget kollagen aflejring og udtynding af venstre ventrikelvæg i hjerter af mus, der modtog iskæmisk skade. In vivo bioluminescerende billeddannelse eller BLI blev udført dagen efter mesenkymal STEM celle implantation. Vellykket levering af MSC'er eksemplificeres ved BLI-signalet sammenlignet med mus, der havde forårsaget iskæmigenserfusionsskade, men ikke fik MSC.Når du forsøger denne protokol, huske på, at små forsætlige bevægelser, når skære gennem interkostale, ligating fartøjet, og indsprøjtning celler er afgørende for at forhindre unødig skade på hjertet eller lungerne i synsfeltet. Disse procedurer giver mulighed for at overvåge hjertefunktion efter transplantation gennem ultralyd, celle levedygtighed via bioluminescens billeddannelse, eller yderligere molekylære eller biokemiske teknikker afhængigt af den anvendte behandling.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Et murint lukket bryst Model for myocardial iskæmi og reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Iskæmireperfusion Model akut nyreskade og Post Injury Fibrose i mus

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Intramyocardial Cell Delivery: Observations in Murine Hearts

Intramyocardial Cell Levering: Observationer i murine Hjerter

Previous studies showed that cell delivery promotes cardiac function amelioration by release of cytokines and factors that increase cardiac tissue ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

En murin model af myokardieiskæmi-reperfusionsskade gennem æggelederne for Venstre Anterior Faldende Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murin model af intestinal iskæmi-reperfusionsskade

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

En mus Model of retinaiskæmi-reperfusionsskade Gennem Elevation af intraokulært tryk

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluering af koronar flow reserve efter myokardieiskæmi reperfusion hos rotter

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

En præklinisk rotte model for studiet af iskæmi-reperfusion skade i rekonstruktiv mikrokirurgi

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Tracking Superparamagnetic Iron Oxide-labeled Mesenchymal Stem Cells using MRI after Intranasal Delivery in a Traumatic Brain Injury Murine Model

Tracking superparamagnetisk jernoxid-mærket Mesenchymal stamceller ved hjælp af MRI efter intranasal levering i en traumatisk hjerneskade murine model

Stem cell-based therapies for brain injuries, such as traumatic brain injury (TBI), are a promising approach for clinical trials. However, technical ...