Name: delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model
Uploaded: 2020-09-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

De experimenten werden uitgevoerd op vrouwelijke C57BL/6 muizen, leeftijd 10-12 weken en 20-25 g lichaamsgewicht. Alle dierprocedures voldeden aan de normen die zijn vermeld in de Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (Institute of Laboratory Animal Resources, National Academy of Sciences, Bethesda, MD, USA) en werden goedgekeurd door het Mayo Clinic College of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
1. Voorbereiding en intubatie
<ol><li>Auto...

<ol>
	<li>Franchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Myocardial+Microenvironment+Modulates+the+Biology+of+Transplanted+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells.</a> Molecular Imaging Biology. , (2020).</li><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans.">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li><li>Writing Group, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), 38 (2016).</li><li>Gersh, B. J., Simari, R. D., Behfar, A., Terzic, C. M., Terzic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+repair+therapy:+a+clinical+perspective.">Cardiac cell repair therapy: a clinical perspective.</a> Mayo Clinic Protocol. 84 (10), 876-892 (2009).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+heart+failure+therapy+headed+for+optimization.">Regenerative heart failure therapy headed for optimization.</a> European Heart Journal. 35 (19), 1231-1234 (2014).</li><li>Beegle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+preconditioning+of+mesenchymal+stromal+cells+induces+metabolic+changes,+enhances+survival,+and+promotes+cell+retention+in+vivo.">Hypoxic preconditioning of mesenchymal stromal cells induces metabolic changes, enhances survival, and promotes cell retention in vivo.</a> Stem Cells. 33 (6), 1818-1828 (2015).</li><li>Kubli, D. A., Gustafsson, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+mitophagy:+the+yin+and+yang+of+cell+death+control.">Mitochondria and mitophagy: the yin and yang of cell death control.</a> Circulation Research. 111 (9), 1208-1221 (2012).</li><li>Psaltis, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+oxidative+stress+in+transplanted+mesenchymal+stromal+cells.">Noninvasive monitoring of oxidative stress in transplanted mesenchymal stromal cells.</a> JACC Cardiovascular Imaging. 6 (7), 795-802 (2013).</li><li>Peet, C., Ivetic, A., Bromage, D. I., Shah, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+monocytes+and+macrophages+after+myocardial+infarction.">Cardiac monocytes and macrophages after myocardial infarction.</a> Cardiovasc Research. 16 (6), 1101-1112 (2020).</li><li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioimmunology:+the+immune+system+in+cardiac+homeostasis+and+disease.">Cardioimmunology: the immune system in cardiac homeostasis and disease.</a> Nature Reviews Immunology. 18 (12), 733-744 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Stem+Cells+Promote+the+Resolution+of+Cardiac+Inflammation+After+Ischemia+Reperfusion+Via+Enhancing+Efferocytosis+of+Neutrophils.">Mesenchymal Stem Cells Promote the Resolution of Cardiac Inflammation After Ischemia Reperfusion Via Enhancing Efferocytosis of Neutrophils.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (5), 014397 (2020).</li><li>Saxena, A., Russo, I., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+as+a+therapeutic+target+in+myocardial+infarction:+learning+from+past+failures+to+meet+future+challenges.">Inflammation as a therapeutic target in myocardial infarction: learning from past failures to meet future challenges.</a> Translational Research. 167 (1), 152-166 (2016).</li><li>Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biological+Basis+for+Cardiac+Repair+After+Myocardial+Infarction:+From+Inflammation+to+Fibrosis.">The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction: From Inflammation to Fibrosis.</a> Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).</li><li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li></ol>

Meer dan 85 miljoen mensen wereldwijd worden getroffen door hart- en vaatziekten3. De hoge prevalentie van deze ischemische gebeurtenissen rechtvaardigt verdere ontwikkeling en uitbreiding van alternatieve therapieën voor het bevorderen van de regeneratie van beschadigd weefsel. Traditionele methoden maken gebruik van de ischemie reperfusie procedure in een acute omgeving met latere toediening van therapeutica1. Ontstekingsreacties zijn op zijn hoogtepunt tussen 3-4 dagen ...

Hart- en vaatziekten blijven wereldwijd de meest voorkomende oorzaak van morbiditeit en mortaliteit. Cardiale ischemische gebeurtenissen zijn gevonden om schadelijk te zijn voor de algehele functie van het myocardium en de omliggende cellen1. Slechts ̴0,45-1,0% van de cardiomyocyten zal elk jaar regenereren na myocardiale schade optreedt2. Ondanks de groeiende vraag en de inherente focus op het ontwikkelen van behandelingen, therapieën die helpen bij de regeneratie van gewond weefsel zijn moeilijk vast te stellen en nog steeds verdere optimalisatie3,4,5. Stamceltherapieën zijn geïntroduceerd als een alternatief pad om beschadigd weefsel te verjongen na een ischemische gebeurtenis; echter, de vooruitgang van deze therapieën is uitgedaagd door de beperkte overleving en het behoud van de cellen naar een gewond gebied6.
De micro-omgeving van het hart na een ischemische gebeurtenis kan worden gekarakteriseerd als hypoxische, pro-oxidant en pro-inflammatoire, met vijandige omstandigheden voor therapeutische stamcellen om zich aan te passen aan overleving7,8. Als een immuunrespons wordt geactiveerd na letsel, naïeve lymfocyten, macrofagen, neutrofielen en mastcellen proberen om de schade te herstellen door het verwijderen van stervende cellen en moduleren van het proces voor weefsel remodelleren9,10,11. Binnen de eerste 3 dagen na ischemie is ontsteking op zijn hoogtepunt met het vrijkomen van pro-inflammatoire cytokinen met een groot aantal neutrofielen en monocyten in het gebied10,12. Na 7 dagen is een groot deel van de ontsteking verdwenen en begint de overgang naar herstellende cellen, die doorgaan tot de herinrichtingscascade is voltooid, ongeveer 14 dagen bij muizen13. Onze chirurgische methode is een mogelijke alternatieve benadering van de introductie van biologische in het myocardium om de piek aangeboren immuunrespons na ischemie reperfusieletsel te omzeilen. Tegelijkertijd zal het mogelijk maken voor de studie van eventuele behandelingen in een toestand van subacute / chronische ischemie waar er verschillende variabelen te overwegen in vergelijking met acute hartinfarct.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:973px;" width="973">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:322px;">0.9% NaCl Irrigation, USP</td>
			<td style="width:191px;">Baxter</td>
			<td style="width:132px;">0338-0048-04</td>
			<td style="width:328px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">11x12&#34; Press n&#39; Seal surgical drape, autoclavable</td>
			<td>SAI Infusion Technologies</td>
			<td>PSS-SD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">24G 3/4&#34; IV catheter tube</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">28G x 1/2&#34; 1mL allergy syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305500</td>
			<td>Injection of analgesic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">30G x 1/2&#34; 3/10cc insulin syringe</td>
			<td>Ulticare</td>
			<td>08222.0933.56</td>
			<td>Injection of stem cells</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">6-0 S-29, 12&#34; Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J556G</td>
			<td>Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">9-0 BV100-4, 5&#34; Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2829G</td>
			<td>Ligation of the LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Absorbent underpad</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>14-206-64</td>
			<td>For underneath the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Alcohol prep pads, 2 ply, medium</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anti-fog face mask</td>
			<td>Halyard</td>
			<td>49235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bonn Strabismus scissors, curved, blunt</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14085-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml</td>
			<td>ZooPharm Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity).</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Castroviejo needle holders, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curity sterile gauze sponges</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>397310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Delicate suture tying forceps, 45 angle bent</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Electric Razor</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane 100 ml</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>PI23238</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Lab coat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Monoject 1 mL hypodermic syringe</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>8881501400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria iris forceps, curved, serrated (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria speculum retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17370-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Mouse endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Nair depilatory cream</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Optixcare eye lube plus</td>
			<td>Aventix</td>
			<td></td>
			<td>Sterile ocular lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Physiosuite ventilator</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PolyE Polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-0191</td>
			<td>Temporary compression of LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-iodine swabs</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scalpel, 10-blade</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 3&#34; cotton tipped applicators</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>C15055-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 6&#34; tapered cotton tip applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-826-5WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile gloves</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>N8830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterilization pouches</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MPP100525GS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgery cap</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture tying forceps, straight (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10825-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Transpore surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Triple antibiotic ointment</td>
			<td>G&#38;W Laboratories</td>
			<td>11-2683ILNC2</td>
			<td>Topical application to prevent infection</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15004-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vetflo vaporizer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model

Er is aanzienlijke belangstelling voor het gebruik van stamcellen (SC's) voor het herstel van de hartfunctie bij personen met myocardiale verwondingen. Meestal wordt cardiale stamceltherapie bestudeerd door scs gelijktijdig te leveren met de inductie van myocardiaal letsel. Deze aanpak bevat echter twee belangrijke beperkingen: de vroege vijandige pro-inflammatoire ischemische omgeving kan de overleving van getransplanteerde SC's beïnvloeden, en het vertegenwoordigt niet het subacute infarct scenario waar SC's waarschijnlijk zullen worden gebruikt. Hier beschrijven we een tweedelige reeks chirurgische ingrepen voor de inductie van ischemie-reperfusieletsel en de levering van mesenchymale stamcellen (MSCs). Deze methode van stamcel toediening kan zorgen voor de langere levensvatbaarheid en retentie rond beschadigd weefsel door het omzeilen van de eerste immuunrespons. Een model van ischemie reperfusie letsel werd geïnduceerd bij muizen vergezeld van de levering van mesenchymale stamcellen (3.0 x 105), stabiel uitdrukken van de verslaggever gen firefly luciferase onder de constitutief uitgedrukte CMV promotor, intramyocardially 7 dagen later. De dieren werden afgebeeld via echografie en bioluminescente beeldvorming voor de bevestiging van letsel en injectie van cellen, respectievelijk. Belangrijk is dat er geen extra complicatiepercentage was bij het uitvoeren van deze twee-procedure benadering voor SC-levering. Deze methode van stamcel toediening, gezamenlijk met het gebruik van state-of-the-art reporter genen, kan zorgen voor de in vivo studie van levensvatbaarheid en retentie van getransplanteerde SCs in een situatie van chronische ischemie vaak klinisch gezien, terwijl ook het omzeilen van de eerste pro-inflammatoire reactie. Samengevat hebben we een protocol opgesteld voor de vertraagde levering van stamcellen in het myocardium, dat kan worden gebruikt als een potentiële nieuwe aanpak bij het bevorderen van regeneratie van het beschadigde weefsel.

Ischemie reperfusie letsel werd geïnduceerd in muizen op dag 0, gevolgd door een postoperatieve echocardiogram en elektrocardiogram op de dag voorafgaand aan de implantatie van stamcellen. Echografie en elektrocardiogram analyse bevestigd infarct en verminderde ventriculaire contractielfunctie (Figuur 1A-D). Verder onderzoek van de gegevens toonde aan dat de uitwerpfractie en fractionele verkorting werden verminderd bij muizen die ischemische schade opliepen, terwijl de ein...

Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

Stamcellen worden voortdurend onderzocht als mogelijke behandelingen voor personen met myocardiale schade, maar hun verminderde levensvatbaarheid en retentie in gewond weefsel kan hun werkzaamheid op lange termijn beïnvloeden. In dit manuscript beschrijven we een alternatieve methode voor stamcellevering in een murinemodel van ischemie reperfusieletsel.

Vertraagde intramyocardial levering van stamcellen na Ischemie Reperfusie Letsel in een Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

Ischemische schade veroorzaakt een vijandige ontstekingsomgeving die de overleving van getransplanteerde cellen beïnvloedt. Ons protocol presenteert een alternatieve methode voor het verstrekken van biologische door het omzeilen van de eerste immuunrespons op letsel. Het belangrijkste voordeel van dit protocol is dat het mogelijk is om een week na letsel therapieën toe te dienen, waarbij de behandeling in de klinische omgeving wordt nagebootst.Onze primaire focus ligt op het ischemie reperfusieletselmodel en transplantatie van STAMcellen. Deze aanpak kan echter ook worden gebruikt voor modellen van ontstekingsziekten die de introductie van biologische therapieën inhoudt. Begin met het autoclaven van alle chirurgische instrumenten.Als meerdere operaties in één sessie moeten worden uitgevoerd, reinigt u de instrumenten na elk dier en steriliseert u ze opnieuw met een hete kraalsteriliator. Onderhuids pijnstillen, het dier wegen en het gewicht in de beademing invoeren. Scheer de linkerkant van de borst van het borstbeen tot het niveau van de schouder en breng ontharingscrème aan om overtollige vacht te verwijderen.Om het instorten van de longen te voorkomen, moet u de positieve eindeindedruk op twee centimeter water voor de reperfusieprocedure van ischemie handhaven en deze wijzigen in drie centimeter water voor de vertraagde injectie van cellen. Na het verdoven van de muis, intuberen met een 20 meter endotracheale buis en breng het naar een gecontroleerde verwarming pad om een lichaamstemperatuur van 35 tot 37 graden Celsius te handhaven. Plaats de muis in laterale recumbency met craniale einde aan de linkerkant en caudal einde aan de rechterkant.Scrub het chirurgische gebied afwisselend povidone jodium en alcohol wattenstaafjes drie keer en van toepassing oogheelkundige zalf op beide ogen. Gebruik een nummer 10 blad scalpel om een verticale incisie 2,5 millimeter te maken naar rechts van de meest linkse tepel in het gezichtsveld, gebruik dan een schaar om door de oppervlakkige spierlagen te snijden totdat de intercostale spier en ribben zichtbaar zijn. Tijdens het tillen van de ribben en het omliggende weefsel, snijd door de intercostale ruimte tussen de vierde en vijfde ribben, dan steek het ooglid oprolmechanisme in de open ruimte.Trek het pericardium in met gebogen tangen, en beweeg de long omhoog en uit het zicht. Passeer een 9-0 nylon hechting door het myocardium onder de LAD-slagader van 2,5 millimeter distaal naar de linker oorschelp met een soepele en consistente beweging om scheuren van het weefsel te voorkomen of een groot bloedvat te doorboren. Bind een losse vierkante knoop, plaats dan een centimeter polyethyleen buizen in de losse knoop.Zet de hechting rond de slang vast en bevestig ischemie door bleekheid en ventriculaire aritmie en laat na 35 minuten los. Na het verwijderen van de slang, wacht vijf minuten om re-perfusie van het myocardium te bevestigen. Plaats een 24-meter 4-meter 4-6-kathecatiebuis in de borstholte, een intercostale ruimte rechts van de opening.Gebruik 6-0 opneembare hechtingen om de intercostale incisie te sluiten in een eenvoudig onderbroken patroon en de spierlaag in een continu hechtingspatroon. Na het sluiten van de oppervlakkige spierlaag, verwijder de borstbuis terwijl het terugtrekken van de lucht uit de thoracale holte met een een milliliter tuberculine spuit. Sluit de huidincisie met een 6-0 opneembare hechting in een continu horizontaal matraspatroon.Wanneer u klaar bent, dient u 1,5 milliliter warme zoutoplossing onderhuids toe en breng drievoudige antibioticazalf toe op de incisieplaats om infectie te voorkomen. Breng de muis naar een beddengoed vrije kooi of een kooi met bedekt beddengoed op een warm pad en een temperatuur van 35 tot 37 graden Celsius totdat het volledig is hersteld. Na het voorbereiden en intuberen van de muis zoals eerder beschreven, verwijder de hechting van de huidlaag met een schaar en tangen en gebruik vervolgens een nummer 10 scalpel om een incisie te maken op dezelfde locatie als de vorige operatie.Blijf door het littekenweefsel snijden totdat de hechting van de spierlaag zichtbaar is, gebruik dan de schaar en tangen om de hechting te verwijderen en de spierlaag open te snijden. Verwijder de hechtingen die de ribben bij elkaar houden en blijf de intercostale spier van de vorige incisie doorsnijden. Plaats het ooglid retractor in de intercostale ruimte en zoek het gebied van de vorige ligatie.Laad 300.000 mesenchymale STEMcellen opgehangen in 20 microliter PBS in een 30-meter insulinespuit en buig de naald iets om de juiste hoek voor injectie te bereiken. Bewegen in de richting van de top naar de basis van het hart, steek de spuit in het peri-infarct gebied totdat de naald opening is volledig in het myocardium, dan langzaam injecteren van de cellen in het myocard, wacht drie seconden en verwijder de naald. Observeer het hart gedurende drie minuten goed om ervoor te zorgen dat er geen abnormale reactie op de cellen zoals ventriculaire fibrillatie.Na drie minuten plaatst u een 24-meter 4-meter 4-meter 600-katheterbuis in de borstholte, één intercostale ruimte rechts van de opening. Sluit de intercostale spier- en huidlagen en verwijder de borstbuis zoals eerder beschreven. Toedien 1,5 milliliter warme zoutoplossing onderhuids en breng drievoudige antibioticazalf toe op de incisieplaats om infectie te voorkomen.Breng de muis naar een beddengoed vrije kooi of kooi met bedekt beddengoed op een warm pad totdat het volledig is hersteld. Postoperatieve echocardiogram en elektrocardiogram werden uitgevoerd op de dag procedure STAM cel implantatie, bevestiging van infarct en verminderde ventriculaire contractiel functie. Verder onderzoek van de gegevens toonde aan dat de uitwerpfractie en fractionele verkorting werden verminderd bij muizen die ischemische schade ontvingen, terwijl de einddiastolische en systolische volumes toenamen.Masson trichrome kleuring van myocardiaal weefsel zeven dagen na de schade toonde verhoogde collageen afzetting en dunner van de linker ventriculaire muur in harten van muizen die ischemische schade ontvangen. In vivo bioluminescente beeldvorming of BLI werd uitgevoerd op de dag na mesenchymale STAMcelimplantatie. Succesvolle levering van MSCs wordt geïllustreerd door het BLI-signaal in vergelijking met muizen die ischemie reperfusieletsel hadden veroorzaakt, maar geen MSC's kregen.Houd er bij een poging dit protocol rekening mee dat kleine opzettelijke bewegingen bij het doorsnijden van de intercostals, het kruisen van het vat en het injecteren van cellen van vitaal belang zijn voor het voorkomen van onnodige schade aan het hart of de long in het gezichtsveld. Deze procedures bieden de mogelijkheid om de hartfunctie te controleren na transplantatie door middel van echografie, cel levensvatbaarheid via bioluminescentie beeldvorming, of verdere moleculaire of biochemische technieken, afhankelijk van de gebruikte therapie.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normotherme hartstilstand en cardiopulmonale reanimatie: een muismodel van ischemie-reperfusie schade

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Een murine Closed-borst Model van myocardiale ischemie en reperfusie

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemie-reperfusie model van Acute Kidney Injury en Post Letsel Fibrosis in Muizen

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Intramyocardial Cell Delivery: Observations in Murine Hearts

Intramyocardiale Cell Levering: Waarnemingen in Muizen Harten

Previous studies showed that cell delivery promotes cardiac function amelioration by release of cytokines and factors that increase cardiac tissue ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Muizenmodel van Intestinale ischemie-reperfusie schade

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Een muismodel van retinale ischemie-reperfusie letsel door misbruik van intra-oculaire druk

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluatie van coronaire stroom reserve na myocardiale ischemie reperfusie bij ratten

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Een pre-klinische rat model voor de studie van ischemie-reperfusie letsel in reconstructieve microchirurgie

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Tracking Superparamagnetic Iron Oxide-labeled Mesenchymal Stem Cells using MRI after Intranasal Delivery in a Traumatic Brain Injury Murine Model

Het volgen van superparamagnetische ijzer oxide-gelabelde mesenchymale stamcellen met behulp van MRI na intranasale levering in een traumatisch hersenletsel Murine model

Stem cell-based therapies for brain injuries, such as traumatic brain injury (TBI), are a promising approach for clinical trials. However, technical ...