Name: delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model
Uploaded: 2020-09-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

הניסויים בוצעו על עכברי C57BL/6 נקבה, גיל 10-12 שבועות ו 20-25 גרם משקל גוף. כל ההליכים בבעלי חיים צייתו לסטנדרטים שנקבעו במדריך לטיפול ושימוש בבעלי חיים מעבדה (המכון למשאבי בעלי חיים במעבדה, האקדמיה הלאומית למדעים, בת'סדה, MD, ארה"ב) ואושרו על ידי המכללה לרפואה של מאיו לרפואה מוסדית לטיפול בבעלי חיים...

<ol>
	<li>Franchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Myocardial+Microenvironment+Modulates+the+Biology+of+Transplanted+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells.</a> Molecular Imaging Biology. , (2020).</li><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans.">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li><li>Writing Group, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), 38 (2016).</li><li>Gersh, B. J., Simari, R. D., Behfar, A., Terzic, C. M., Terzic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+repair+therapy:+a+clinical+perspective.">Cardiac cell repair therapy: a clinical perspective.</a> Mayo Clinic Protocol. 84 (10), 876-892 (2009).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+heart+failure+therapy+headed+for+optimization.">Regenerative heart failure therapy headed for optimization.</a> European Heart Journal. 35 (19), 1231-1234 (2014).</li><li>Beegle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+preconditioning+of+mesenchymal+stromal+cells+induces+metabolic+changes,+enhances+survival,+and+promotes+cell+retention+in+vivo.">Hypoxic preconditioning of mesenchymal stromal cells induces metabolic changes, enhances survival, and promotes cell retention in vivo.</a> Stem Cells. 33 (6), 1818-1828 (2015).</li><li>Kubli, D. A., Gustafsson, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+mitophagy:+the+yin+and+yang+of+cell+death+control.">Mitochondria and mitophagy: the yin and yang of cell death control.</a> Circulation Research. 111 (9), 1208-1221 (2012).</li><li>Psaltis, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+oxidative+stress+in+transplanted+mesenchymal+stromal+cells.">Noninvasive monitoring of oxidative stress in transplanted mesenchymal stromal cells.</a> JACC Cardiovascular Imaging. 6 (7), 795-802 (2013).</li><li>Peet, C., Ivetic, A., Bromage, D. I., Shah, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+monocytes+and+macrophages+after+myocardial+infarction.">Cardiac monocytes and macrophages after myocardial infarction.</a> Cardiovasc Research. 16 (6), 1101-1112 (2020).</li><li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioimmunology:+the+immune+system+in+cardiac+homeostasis+and+disease.">Cardioimmunology: the immune system in cardiac homeostasis and disease.</a> Nature Reviews Immunology. 18 (12), 733-744 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Stem+Cells+Promote+the+Resolution+of+Cardiac+Inflammation+After+Ischemia+Reperfusion+Via+Enhancing+Efferocytosis+of+Neutrophils.">Mesenchymal Stem Cells Promote the Resolution of Cardiac Inflammation After Ischemia Reperfusion Via Enhancing Efferocytosis of Neutrophils.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (5), 014397 (2020).</li><li>Saxena, A., Russo, I., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+as+a+therapeutic+target+in+myocardial+infarction:+learning+from+past+failures+to+meet+future+challenges.">Inflammation as a therapeutic target in myocardial infarction: learning from past failures to meet future challenges.</a> Translational Research. 167 (1), 152-166 (2016).</li><li>Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biological+Basis+for+Cardiac+Repair+After+Myocardial+Infarction:+From+Inflammation+to+Fibrosis.">The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction: From Inflammation to Fibrosis.</a> Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).</li><li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li></ol>

מעל 85 מיליון אנשים ברחבי העולם מושפעים ממחלות לב וכלידם 3. השכיחות הגבוהה של אירועים איסכמיים אלה מצדיקה פיתוח נוסף והרחבה של טיפולים חלופיים לקידום התחדשות של רקמות פגומות. שיטות מסורתיות לנצל את הליך reperfusion איסכמיה בסביבה חריפה עם ניהול עוקב שלטיפולית 1. תגובות ...

מחלות לב וכלי דם נשאר הגורם הנפוץ ביותר של תחלואה ותמותה ברחבי העולם. אירועי לב איסכמי נמצאו מזיקים לתפקוד הכולל של שריר הלב והתאים שמסביב1. רק 0.45-1.0% מקרדיומיוציטים יתחדשו מדי שנה לאחר שנזק שריר הלביתרחש 2. למרות הביקוש הגובר וההתמקדות הטבועה בפיתוח טיפולים, טיפולים המסייעים להתחדשות של רקמות פצועות היו קשים להקים ועדייןדורשים אופטימיזציה נוספת 3,,4,,5. טיפולים בתאי גזע הוצגו כדרך חלופית כדי להצעיר רקמה פגומה לאחר אירוע איסכמי; עם זאת, קידום טיפולים אלה כבר אתגר על ידי הישרדות מוגבלת ושמירה של התאים לאזור6 פצוע.
המיקרו-סביבה של הלב לאחר אירוע איסכמי יכולה להיות מאופיינת כ hypoxic, פרו חמצון, ופרו דלקתיות, הצגת תנאים עוינים עבור תאי גזע טיפוליים להסתגללהישרדות 7,,8. כמו תגובה חיסונית מופעלת בעקבות פציעה, לימפוציטים נאיביים, מקרופאגים, נויטרופילים ותאי תורן מנסים לתקן את הנזק על ידי הסרת תאים גוססים ואיזות התהליך לשיפוץרקמות 9,10,11. בתוך 3 הימים הראשונים לאחר איסכמיה, דלקת היא בשיאה עם שחרורו של ציטוקינות פרו דלקתיות עם מספרים גבוהים של נויטרופילים ומונוציטים באזור10,12. לאחר 7 ימים, חלק גדול מהדלקת דעך והמעבר לתאים שיפוץ מתחיל, ממשיך עד מפל השיפוץ הושלמה, כ 14 ימים בעכברים13. השיטה הכירורגית שלנו היא גישה חלופית פוטנציאלית להחדרת ביולוגיות לתוך שריר הלב כדי לעקוף את התגובה החיסונית המולדת שיא לאחר פגיעה איסכמיה reperfusion. במקביל, זה יאפשר את המחקר של כל טיפולים במצב של איסכמיה subacute / כרוני שבו ייתכנו משתנים שונים לשקול בהשוואה אוטם שריר הלב חריפה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:973px;" width="973">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:322px;">0.9% NaCl Irrigation, USP</td>
			<td style="width:191px;">Baxter</td>
			<td style="width:132px;">0338-0048-04</td>
			<td style="width:328px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">11x12&#34; Press n&#39; Seal surgical drape, autoclavable</td>
			<td>SAI Infusion Technologies</td>
			<td>PSS-SD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">24G 3/4&#34; IV catheter tube</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">28G x 1/2&#34; 1mL allergy syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305500</td>
			<td>Injection of analgesic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">30G x 1/2&#34; 3/10cc insulin syringe</td>
			<td>Ulticare</td>
			<td>08222.0933.56</td>
			<td>Injection of stem cells</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">6-0 S-29, 12&#34; Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J556G</td>
			<td>Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">9-0 BV100-4, 5&#34; Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2829G</td>
			<td>Ligation of the LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Absorbent underpad</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>14-206-64</td>
			<td>For underneath the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Alcohol prep pads, 2 ply, medium</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anti-fog face mask</td>
			<td>Halyard</td>
			<td>49235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bonn Strabismus scissors, curved, blunt</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14085-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml</td>
			<td>ZooPharm Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity).</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Castroviejo needle holders, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curity sterile gauze sponges</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>397310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Delicate suture tying forceps, 45 angle bent</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Electric Razor</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane 100 ml</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>PI23238</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Lab coat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Monoject 1 mL hypodermic syringe</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>8881501400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria iris forceps, curved, serrated (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria speculum retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17370-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Mouse endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Nair depilatory cream</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Optixcare eye lube plus</td>
			<td>Aventix</td>
			<td></td>
			<td>Sterile ocular lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Physiosuite ventilator</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PolyE Polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-0191</td>
			<td>Temporary compression of LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-iodine swabs</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scalpel, 10-blade</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 3&#34; cotton tipped applicators</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>C15055-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 6&#34; tapered cotton tip applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-826-5WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile gloves</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>N8830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterilization pouches</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MPP100525GS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgery cap</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture tying forceps, straight (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10825-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Transpore surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Triple antibiotic ointment</td>
			<td>G&#38;W Laboratories</td>
			<td>11-2683ILNC2</td>
			<td>Topical application to prevent infection</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15004-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vetflo vaporizer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model

יש עניין משמעותי בשימוש בתאי גזע (SCs) להתאוששות של תפקוד הלב באנשים עם פציעות שריר הלב. הנפוץ ביותר, טיפול בתאי גזע לב נחקר על ידי אספקת SCs במקביל עם האינדוקציה של פגיעה בשריר הלב. עם זאת, גישה זו מציגה שתי מגבלות משמעותיות: הסביבה האיסכמית הפרו דלקתית העוינת המוקדמת עשויה להשפיע על הישרדותם של SCs מושתלים, והיא אינה מייצגת את תרחיש האוטם subacute שבו SCs סביר להניח ישמשו. כאן אנו מתארים סדרה של שני חלקים של הליכים כירורגיים עבור אינדוקציה של פגיעה איסכמיה-reperfusion ומסירה של תאי גזע mesenchymal (MSCs). שיטה זו של ניהול תאי גזע עשויה לאפשר את הכדאיות והשמירה הארוכה יותר סביב רקמה פגומה על ידי עקיפת התגובה החיסונית הראשונית. מודל של פגיעה reperfusion איסכמיה היה מושרה בעכברים מלווה במשלוח של תאי גזע mesenchymal (3.0 x 105), מבטא בstabing את הגן הכתב גחלילית לוציפראז תחת היזם CMV מבוטא באופן קונסטרטיבי, intramyocardially 7 ימים מאוחר יותר. בעלי החיים תדמינו באמצעות אולטרסאונד והדמיה ביו-לומסצנטית לאישור פציעה והזרקת תאים, בהתאמה. חשוב לציין, לא היה שיעור סיבוך נוסף בעת ביצוע גישה זו של שני נהלים עבור מסירה SC. שיטה זו של ניהול תאי גזע, יחד עם ניצול של גנים עיתונאי המדינה-of-the-art, עשוי לאפשר מחקר vivo של קיום ושמירה של SCs מושתלים במצב של איסכמיה כרונית נפוץ לראות קלינית, תוך עקיפת התגובה הפרו דלקתית הראשונית. לסיכום, הקמנו פרוטוקול לעיכוב במשלוח של תאי גזע לתוך שריר הלב, אשר יכול לשמש כגישה חדשה פוטנציאלית לקידום התחדשות של הרקמה הפגועה.

פציעת תפרוק איסכמיה נגרמה בעכברים ביום 0, ואחריו אקו-קרדיוגרמה ואלקטרוקרדיוגרם לאחר הניתוח ביום שלפני השתלת תאי גזע. ניתוח אולטרסאונד ואלקטרוקרדיוגרם אישר אוטם וירידה בתפקוד ההתכווצות בחדר הלב(איור 1לערך). בדיקה נוספת של הנתונים הראתה כי השבר והקיצור החלקי ירדו ?...

Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

תאי גזע נחקרים ללא הרף כטיפולים פוטנציאליים עבור אנשים עם נזק שריר הלב, עם זאת, הכדאיות והשמירה שלהם ירד בתוך רקמה פצועה יכול להשפיע על היעילות שלהם לטווח ארוך. בכתב יד זה אנו מתארים שיטה חלופית למשלוח תאי גזע במודל מורין של פגיעה בהתרככיה.

אספקה תוך-תוך-קרדיאלית מושהית של תאי גזע לאחר פציעת איסכמיה רפרציה במודל מורין

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

נזק איסכמי גורם לסביבה פרו דלקתית עוינת המשפיעה על הישרדותם של תאים מושתלים. הפרוטוקול שלנו מציג שיטה חלופית לאספקת תרופות ביולוגיות על ידי עקיפת התגובה החיסונית הראשונית לפציעה. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שהוא מאפשר לנהל טיפולים שבוע לאחר פציעה, מחקה את הטיפול בסביבה הקלינית.ההתמקדות העיקרית שלנו היא במודל הפציעה של עשן וההשתלה של תאי STEM. עם זאת, גישה זו יכולה גם להיות מנוצלת עבור מודלים של מחלות דלקתיות המערבת כניסתה של טיפולים ביולוגיים. התחל על ידי autoclaving כל המכשירים הכירורגיים.אם יש לבצע מספר ניתוחים בפגישה אחת, יש לנקות את המכשירים לאחר כל חיה ולנקות אותם מחדש באמצעות מעקר חרוזים חם. באופן תת עורי לנהל משכך כאבים, לשקול את החיה, ולה להזין את המשקל לתוך מכונת ההנשמה. לגלח את הצד השמאלי של החזה מעצם החזה לרמה של הכתף ולהחיל קרם depilatory כדי להסיר פרווה עודפת.כדי למנוע קריסת ריאות, לשמור על לחץ תפוגת הקצה החיובי בשני סנטימטרים של מים עבור הליך reperfusion קשה ולשנות אותו לשלושה סנטימטרים של מים עבור הזרקה מאוחרת של הליך התאים. לאחר הרדמה של העכבר, צנרר אותו עם צינור אנדוטראצ'ל 20 מד ולהעביר אותו כרית חימום מבוקרת כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של 35 עד 37 מעלות צלזיוס. מניחים את העכבר ב recumbency בצד השני עם קצה הגולגולת בצד שמאל ו caudal בצד ימין.לשפשף את האזור הכירורגי לסירוגין בין יוד povidone ספוגיות אלכוהול שלוש פעמים ולהחיל משחה עיניים על שתי העיניים. השתמש באזמל להב מספר 10 כדי לבצע חתך אנכי 2.5 מילימטרים מימין לפטמה השמאלית ביותר בשדה המבט, ולאחר מכן השתמש במספריים כדי לחתוך דרך שכבות השריר השטחיות עד שהשריר והצלעות הבין-קומתיים נראים לעין. תוך כדי הרמת הצלעות והרקמה שמסביב, חותכים דרך החלל הבין-צלעי בין הצלעות הרביעית והחמישית, ואז מכניסים את מפולג העפעפיים לחלל הפתוח.לסגת pericardium באמצעות מדפים מעוגלים, הזזת הריאה כלפי מעלה ומחוץ לתצוגה. להעביר תפר ניילון 9-0 דרך שריר הלב מתחת לעורק LAD 2.5 מילימטרים דיסטלי אל האוריאל השמאלי שמירה על תנועה חלקה ועקבית כדי למנוע קריעת הרקמה או לנקב כלי דם גדול. לקשור קשר מרובע רופף, ואז למקם סנטימטר אחד של צינורות פוליאתילן בתוך הקשר הרופף.לאבטח את התפר סביב צינורות ולאשר איסקימיה על ידי חיוורון הפרעות קצב חדרית, ולאחר מכן לשחרר לאחר 35 דקות. לאחר הסרת הצינורות, לחכות חמש דקות כדי לאשר חליטה מחדש של שריר הלב. מניחים צינור קטטר IV 24 מד לתוך חלל בית החזה חלל בין-קוסטלי אחד מימין לפתיחה.השתמש 6-0 תפרים נספגים כדי לסגור את החתך הבין-קומתי בתבנית מופרעת פשוטה ואת שכבת השריר בתבנית תפר רציפה. לאחר סגירת שכבת השריר השטחית, להסיר את צינור החזה תוך משיכת האוויר מן חלל בית החזה עם מזרק שחפת מיליליטר אחד. סגור את חתך העור עם תפר נספג 6-0 בתבנית מזרן אופקית רציפה.בסיום, לנהל 1.5 מיליליטר של מלוחים חמים תת עורית ולהחיל משחה אנטיביוטית משולשת לאתר החתך כדי למנוע זיהום. מעבירים את העכבר לכלוב ללא מצעים או לכלוב עם מצעים מכוסים על כרית חמה וטמפרטורה של 35 עד 37 מעלות צלזיוס עד שהוא התאושש לחלוטין. לאחר הכנת וצנרור העכבר כפי שתואר קודם לכן, להסיר את התפר משכבת העור עם מספריים ומדפים, ולאחר מכן להשתמש מספר 10 אזמל לעשות חתך באותו מיקום כמו הניתוח הקודם.המשך לחתוך דרך רקמת הצלקת עד תפר שכבת השריר גלוי, ולאחר מכן להשתמש במספריים ומלקחיים כדי להסיר את התפר לחתוך את שכבת השריר פתוח. הסר את התפרים המחזיקים את הצלעות יחד והמשך לחתוך דרך השריר הבין-קומתי מהחתך הקודם. מניחים את מפשק העפעפיים בחלל הבין-חלק ומאתרים את האזור של הרצועה הקודמת.לטעון 300, 000 תאי STEM mesenchymal מושעה ב 20 microliters של PBS לתוך מזרק אינסולין 30 מד לכופף את המחט מעט כדי להשיג את הזווית הנכונה להזרקה. נע בכיוון מן איפקס לכיוון בסיס הלב, להכניס את המזרק לתוך האזור peri-infarct עד פתיחת המחט הוא לגמרי בתוך שריר הלב, ואז לאט להזריק את התאים לתוך שריר הלב, לחכות שלוש שניות ולהסיר את המחט. שימו לב ללב מקרוב במשך שלוש דקות כדי לוודא שאין תגובה חריגה לתאים כגון פרפור חדרי.לאחר שלוש דקות, מניחים צינור קטטר IV 24 מד לתוך חלל בית החזה חלל בין-חלק אחד מימין לפתיחה. סגור את שכבות השרירים והעור הבין-קוסטליות והסר את צינור החזה כפי שתואר קודם לכן. לנהל 1.5 מיליליטר של מלוחים חמים תת עורית ולהחיל משחה אנטיביוטית משולשת לאתר החתך כדי למנוע זיהום.מעבירים את העכבר לכלוב או כלוב ללא מצעים עם מצעים מכוסים על כרית חמה עד שהוא משוחזר במלואו. אקו-קרדיוגרמה ואלקטרוקרדיוגרמה לאחר הניתוח בוצעו ביום ההליך השתלת תאי STEM, המאשר אוטם וירידה בתפקוד התכווצות חדרית. בדיקה נוספת של הנתונים הראתה כי שבר הפליטה וקיצור השברים ירדו בעכברים שקיבלו פגיעה איסכמית, בעוד שהנפחים הדיאסטאליים והסיסטוליים בסוף גדלו.מכתים Trichrome מאסון של רקמת שריר הלב שבעה ימים לאחר פציעה הראו תצהיר קולגן מוגברת דילול של הקיר החדר השמאלי בלבבות של עכברים שקיבלו פגיעה איסכמית. הדמיה ביולומינסנטית של Vivo או BLI בוצעה ביום שלאחר השתלת תאי STEM קסנצ'ימליים. מסירה מוצלחת של MSCs מתדגמת על ידי אות BLI בהשוואה לעכברים שגרמו לפגיעה בהתרשכות אצ'מיה אך לא קיבלו MSCs.בעת ניסיון פרוטוקול זה, יש לזכור כי תנועות מכוונות קטנות בעת חיתוך דרך intercostals, קשירה כלי השיט, והזרקת תאים חיוניים למניעת נזק מיותר ללב או הריאה בשדה המבט. הליכים אלה מציעים את היכולת לפקח על תפקוד הלב לאחר ההשתלה באמצעות אולטרסאונד, כדאיות התא באמצעות הדמיה bioluminescence, או טכניקות מולקולריות או ביוכימיות נוספות בהתאם לטיפול המשמש.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

דום לב Normothermic ו החייאה: במודל עכבר של פגיעה איסכמיה reperfusion

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

דגם Murine סגור החזה של איסכמיה של שריר הלב reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Intramyocardial Cell Delivery: Observations in Murine Hearts

משלוח הנייד intramyocardial: תוכן בלבבות Murine

Previous studies showed that cell delivery promotes cardiac function amelioration by release of cytokines and factors that increase cardiac tissue ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע&quot;י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

הערכה של שמורת זרם כלילית לאחר איסכמיה אוטם שריר הלב Reperfusion בחולדות

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

מודל מפרה קליני לחקר איסכמיה-reperfusion פציעה במיקרו-כירורגיה משחזרת

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Tracking Superparamagnetic Iron Oxide-labeled Mesenchymal Stem Cells using MRI after Intranasal Delivery in a Traumatic Brain Injury Murine Model

מעקב על תחמוצת ברזל פאראמגנטית-מתויג תאי גזע Mesenchymal באמצעות ה-MRI לאחר Intranasal משלוח ב מודל טראומטי פציעה במוח

Stem cell-based therapies for brain injuries, such as traumatic brain injury (TBI), are a promising approach for clinical trials. However, technical ...