Name: delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model
Uploaded: 2020-09-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

실험은 여성 C57BL/6 마우스, 나이 10-12 주 및 20-25 g 체중에 수행되었다. 모든 동물 절차는 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 가이드에 명시된 기준을 준수 (실험실 동물 자원 연구소, 국립 과학 아카데미, 베데스다, MD, 미국) 및 의학 기관 동물 관리 및 사용위원회의 메이요 클리닉 대학 (IACUC)에 의해 승인되었다.
1. 준비 및 삽관
<ol><li>수술 전에 모든 수술 기구를 ?...

<ol>
	<li>Franchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Myocardial+Microenvironment+Modulates+the+Biology+of+Transplanted+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells.</a> Molecular Imaging Biology. , (2020).</li><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans.">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li><li>Writing Group, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), 38 (2016).</li><li>Gersh, B. J., Simari, R. D., Behfar, A., Terzic, C. M., Terzic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+repair+therapy:+a+clinical+perspective.">Cardiac cell repair therapy: a clinical perspective.</a> Mayo Clinic Protocol. 84 (10), 876-892 (2009).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+heart+failure+therapy+headed+for+optimization.">Regenerative heart failure therapy headed for optimization.</a> European Heart Journal. 35 (19), 1231-1234 (2014).</li><li>Beegle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+preconditioning+of+mesenchymal+stromal+cells+induces+metabolic+changes,+enhances+survival,+and+promotes+cell+retention+in+vivo.">Hypoxic preconditioning of mesenchymal stromal cells induces metabolic changes, enhances survival, and promotes cell retention in vivo.</a> Stem Cells. 33 (6), 1818-1828 (2015).</li><li>Kubli, D. A., Gustafsson, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+mitophagy:+the+yin+and+yang+of+cell+death+control.">Mitochondria and mitophagy: the yin and yang of cell death control.</a> Circulation Research. 111 (9), 1208-1221 (2012).</li><li>Psaltis, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+oxidative+stress+in+transplanted+mesenchymal+stromal+cells.">Noninvasive monitoring of oxidative stress in transplanted mesenchymal stromal cells.</a> JACC Cardiovascular Imaging. 6 (7), 795-802 (2013).</li><li>Peet, C., Ivetic, A., Bromage, D. I., Shah, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+monocytes+and+macrophages+after+myocardial+infarction.">Cardiac monocytes and macrophages after myocardial infarction.</a> Cardiovasc Research. 16 (6), 1101-1112 (2020).</li><li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioimmunology:+the+immune+system+in+cardiac+homeostasis+and+disease.">Cardioimmunology: the immune system in cardiac homeostasis and disease.</a> Nature Reviews Immunology. 18 (12), 733-744 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Stem+Cells+Promote+the+Resolution+of+Cardiac+Inflammation+After+Ischemia+Reperfusion+Via+Enhancing+Efferocytosis+of+Neutrophils.">Mesenchymal Stem Cells Promote the Resolution of Cardiac Inflammation After Ischemia Reperfusion Via Enhancing Efferocytosis of Neutrophils.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (5), 014397 (2020).</li><li>Saxena, A., Russo, I., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+as+a+therapeutic+target+in+myocardial+infarction:+learning+from+past+failures+to+meet+future+challenges.">Inflammation as a therapeutic target in myocardial infarction: learning from past failures to meet future challenges.</a> Translational Research. 167 (1), 152-166 (2016).</li><li>Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biological+Basis+for+Cardiac+Repair+After+Myocardial+Infarction:+From+Inflammation+to+Fibrosis.">The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction: From Inflammation to Fibrosis.</a> Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).</li><li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li></ol>

전 세계적으로 8,500만 명 이상이 심혈관 질환3의영향을 받습니다. 이러한 허혈성 이벤트의 높은 보급은 손상된 조직의 재생을 촉진하기위한 대체 치료의 추가 개발 및 확장을 보증합니다. 전통적인 방법은 치료 1의 후속 투여와 급성 설정에서 허혈 재관류 절차를활용한다. 염증 반응은 호중구, 대식세포 및 증가 된 사이토카인 신호10,<sup class="x...

심혈관 질환은 전 세계적으로 사망률과 사망률의 가장 흔한 원인으로 남아 있습니다. 심장 허혈성 사건은 심근 및 주변 세포1의전반적인 기능에 해로운 것으로 밝혀졌다. 심근세포의 ̴0.45-1.0%만이 심근 손상이 발생한 후 매년 재생됩니다2. 증가하는 수요와 치료 개발에 내재된 초점에도 불구하고, 부상당한 조직의 재생을 돕는 치료는 확립하기 어려웠으며 여전히추가최적화3,44,5를필요로합니다. 줄기 세포 치료는 허혈성 사건 후 손상된 조직을 젊어지게하는 대체 경로로 도입되었습니다. 그러나, 이들 치료법의 발전은 세포의 제한된 생존 및 유지에 의해66.
허혈성 사건 후 심장의 미세 환경은 저산소, 프로 산화제 및 프로 염증으로 특징 지어질 수 있으며, 생존에 적응하기 위해 치료 줄기 세포에 대한 적대적인 조건을제시7,,8. 면역 반응이 부상 후, 순진한 림프구, 대식세포, 호중구 및 유방 세포가 죽어가는 세포를 제거하고 조직 리모델링 을 위한 과정을 조절하여9손상을 복구하려고 시도함에 따라9,10,,11. 처음 3 일 이내에 허혈 후, 염증은 지역에서 호중구와 단핵구의 높은 숫자와 프로 염증 사이토 카인의 방출과 함께 절정에10,,12. 7일 후, 염증의 상당 부분은 가라앉고 회복세포로의 전환이 시작되어 리모델링 캐스케이드가 완료될 때까지 계속,마우스(13)에서는약 14일이 된다. 우리의 외과 방법은 허혈 재관류 손상 후 피크 타고난 면역 반응을 우회하기 위해 심근에 생물학적 제제를 도입하는 잠재적 인 대체 접근법입니다. 동시에 급성 심근 경색에 비해 고려해야 할 다른 변수가있을 수 있는 아급성 /만성 허혈 의 조건에서 모든 치료법의 연구를 허용할 것입니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:973px;" width="973">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:322px;">0.9% NaCl Irrigation, USP</td>
			<td style="width:191px;">Baxter</td>
			<td style="width:132px;">0338-0048-04</td>
			<td style="width:328px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">11x12&#34; Press n&#39; Seal surgical drape, autoclavable</td>
			<td>SAI Infusion Technologies</td>
			<td>PSS-SD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">24G 3/4&#34; IV catheter tube</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">28G x 1/2&#34; 1mL allergy syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305500</td>
			<td>Injection of analgesic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">30G x 1/2&#34; 3/10cc insulin syringe</td>
			<td>Ulticare</td>
			<td>08222.0933.56</td>
			<td>Injection of stem cells</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">6-0 S-29, 12&#34; Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J556G</td>
			<td>Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">9-0 BV100-4, 5&#34; Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2829G</td>
			<td>Ligation of the LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Absorbent underpad</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>14-206-64</td>
			<td>For underneath the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Alcohol prep pads, 2 ply, medium</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anti-fog face mask</td>
			<td>Halyard</td>
			<td>49235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bonn Strabismus scissors, curved, blunt</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14085-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml</td>
			<td>ZooPharm Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity).</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Castroviejo needle holders, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curity sterile gauze sponges</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>397310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Delicate suture tying forceps, 45 angle bent</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Electric Razor</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane 100 ml</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>PI23238</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Lab coat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Monoject 1 mL hypodermic syringe</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>8881501400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria iris forceps, curved, serrated (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria speculum retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17370-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Mouse endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Nair depilatory cream</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Optixcare eye lube plus</td>
			<td>Aventix</td>
			<td></td>
			<td>Sterile ocular lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Physiosuite ventilator</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PolyE Polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-0191</td>
			<td>Temporary compression of LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-iodine swabs</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scalpel, 10-blade</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 3&#34; cotton tipped applicators</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>C15055-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 6&#34; tapered cotton tip applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-826-5WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile gloves</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>N8830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterilization pouches</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MPP100525GS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgery cap</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture tying forceps, straight (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10825-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Transpore surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Triple antibiotic ointment</td>
			<td>G&#38;W Laboratories</td>
			<td>11-2683ILNC2</td>
			<td>Topical application to prevent infection</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15004-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vetflo vaporizer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model

심근 손상을 입은 개인의 심장 기능 회복을 위한 줄기 세포(SC)의 사용에 상당한 관심이 있습니다. 가장 일반적으로, 심장 줄기 세포 치료는 심근 상해의 유도와 동시에 SC를 전달하여 공부됩니다. 그러나, 이 접근은 2개의 중요한 한계를 제시합니다: 초기 적대적인 선동적인 허혈성 환경은 이식한 SC의 생존에 영향을 미칠 수 있고, SC가 사용될 가능성이 있는 아급성 경색 시나리오를 나타내지 않습니다. 여기에서 우리는 허혈 재관성 상해의 유도 및 중간엽 줄기 세포 (MSC)의 납품을 위한 외과 절차의 2 부분으로 시리즈를 기술합니다. 줄기 세포 투여의 이 방법은 초기 면역 반응을 우회하여 손상된 조직 주위의 더 긴 생존력과 보존을 허용할 수 있다. 허혈성 재관류 손상의 모델은 중간엽 줄기 세포 (3.0 x 105)의전달을 동반한 마우스에서 유도되었으며, 균등하게 발현 된 CMV 프로모터, intramyocardily 7 일 후 기자 유전자 반딧불 루시포라제를 표현하였다. 동물은 각각 세포의 상해 그리고 주입의 확인을 위한 초음파 및 생물 발광 화상 진찰을 통해 심상화되었습니다. 중요한 것은 SC 납품을 위한 이 2절차 접근방식을 수행할 때 추가합병증 비율이 없었습니다. 이러한 줄기세포 투여 방법은, 일체적으로 최첨단 리포터 유전자의 활용과 함께, 임상적으로 일반적으로 본 만성 허혈의 상황에서 이식된 SC의 생존력 및 유지에 대한 생체 내 연구를 허용하면서도 초기 프로 염증 반응을 우회할 수 있다. 요약하자면, 우리는 손상된 조직의 재생을 촉진하는 잠재적인 새로운 접근법으로 사용될 수 있는 심근으로 줄기 세포의 지연된 전달을 위한 프로토콜을 설치했습니다.

허혈 재관전 부상은 0일째에 마우스에서 유도되었고, 그 다음에는 줄기세포 이식 전날 수술 후 심전도 및 심전도가 뒤따랐다. 초음파 및 심전도 분석은 경색및 감소된 심실 수축 기능을 확인하였다(도1A-D). 데이터의 추가 검사는 허혈성 손상을 받은 마우스에서 배출 분획 및 분수 단축이 감소된 반면, 최종 확장기 및 수축부 부피가 증가하였다(표1). ?...

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Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

줄기 세포는 심근 손상을 가진 개별을 위한 잠재적인 처리로 지속적으로 조사됩니다, 그러나, 부상당한 조직 내의 그들의 감소된 생존및 보존은 그들의 장기 효험에 영향을 미칠 수 있습니다. 이 원고에서 우리는 허혈 재관전 손상의 뮤린 모델에서 줄기 세포 전달을위한 대체 방법을 설명합니다.

뮤린 모델에서 허혈혈 재관류 부상 후 줄기 세포의 지연 된 자궁 내 납품

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

허혈성 손상은 이식 된 세포의 생존에 영향을 미치는 적대적인 염증 환경을 유도합니다. 우리의 프로토콜은 부상에 대한 초기 면역 반응을 우회하여 생물학적 제제를 제공하기위한 대체 방법을 제시합니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 임상 환경에서 치료를 모방, 부상 후 1 주일 치료를 투여 할 수 있다는 것입니다.우리의 주요 초점은 허혈 재관전 손상 모델과 STEM 세포의 이식에 있습니다. 그러나, 이 접근은 또한 생물학 치료의 소개를 관련시키는 선동적인 질병의 모형을 위해 이용될 수 있습니다. 모든 수술 기구를 자동화하여 시작합니다.한 세션에서 여러 번의 수술을 수행하려면 각 동물 후 악기를 청소하고 뜨거운 비드 멸균기를 사용하여 다시 멸균하십시오. 피하 진통제를 투여하고, 동물의 무게를 측정하고, 인공호흡기에 무게를 입력합니다. 흉골에서 어깨 의 수준으로 가슴의 왼쪽을 면도하고 여분의 모피를 제거하기 위해 탈모 크림을 적용합니다.폐 붕괴를 방지하기 위해, 허혈 재관전 시술을 위해 2센티미터의 물에서 양극성 기만 압력을 유지하고 세포 시술의 지연된 주입을 위해 3센티미터의 물로 변경한다. 마우스를 마취한 후 20게이지 내막 튜브로 삽관하여 제어된 가열 패드로 이송하여 섭씨 35~37도의 체온을 유지합니다. 마우스를 왼쪽에 두개골 끝이 있고 오른쪽에 는 caudal 끝이 있는 측면 회비에 놓습니다.포비도요오드와 알코올 면봉을 세 번 번 교대로 수술 영역을 문질러 두 눈에 안과 연고를 적용합니다. 10번 블레이드 메스를 사용하여 시야에서 왼쪽 젖꼭지의 오른쪽에 수직 절개 2.5밀리미터를 한 다음 가위를 사용하여 늑간 근육과 갈비뼈가 보일 때까지 피상 근육 층을 절단합니다. 갈비뼈와 주변 조직을 들어 올리는 동안 네 번째갈비뼈와 다섯 번째 갈비뼈 사이의 늑간 공간을 잘라낸 다음 눈꺼풀 리트랙터를 열린 공간에 삽입합니다.구부러진 집게를 사용하여 회심을 철회하고 폐를 시야에서 위쪽으로 움직입니다. 9-0 나일론 봉합사를 LAD 동맥 아래 심근을 통해 전달 2.5 왼쪽 auricle에 조직의 찢어지거나 주요 혈관을 뚫는 것을 방지하기 위해 부드럽고 일관된 움직임을 유지합니다. 느슨한 사각형 매듭을 묶은 다음 느슨한 매듭 안에 폴리에틸렌 튜브 1 센티미터를 놓습니다.튜브 주변의 봉합사를 확보하고 창구와 심실 부정맥에 의해 허혈을 확인한 다음 35 분 후에 놓습니다. 튜브를 제거 한 후 심근의 재 관류를 확인하기 위해 5 분 동안 기다립니다. 24 게이지 IV 카테터 튜브를 흉부 구멍 에 넣고 개구부 오른쪽에 하나의 늑간 공간을 배치합니다.6-0 흡수성 봉합사를 사용하여 간단한 중단 패턴및 근육 층에서 연속 봉합사 패턴으로 늑간 절개를 닫습니다. 피상적 인 근육 층을 닫은 후 흉부 구멍에서 공기를 1 밀리리터 결핵 주사기로 제거합니다. 연속 수평 매트리스 패턴에 6-0 흡수 봉합사로 피부 절개를 닫습니다.완료되면, 1.5 밀리리터의 따뜻한 식염수를 피하고 감염을 방지하기 위해 절개 부위에 삼중 항생제 연고를 적용한다. 마우스를 침구 없는 케이지 또는 따뜻한 패드에 덮인 침구가 있는 케이지또는 완전히 복구될 때까지 섭씨 35~37도의 온도로 마우스를 옮기습니다. 이전에 설명한 대로 마우스를 준비하고 삽관한 후, 가위 및 집게로 피부 층에서 봉합사를 제거한 다음, 숫자 10 메스를 사용하여 이전 수술과 동일한 위치에 절개를 합니다.근육 층 봉합사가 보일 때까지 흉터 조직을 통해 절단 계속, 다음 봉합사를 제거하고 열린 근육 층을 잘라 가위와 집게를 사용합니다. 함께 갈비뼈를 들고 봉합사를 제거하고 이전 절개에서 늑간 근육을 통해 절단을 계속. 눈꺼풀 리트랙터를 늑간 공간에 넣고 이전 리그레이션 영역을 찾습니다.로드 300, 000 중간엽 STEM 세포는 PBS의 20 마이크로 리터에서 30 게이지 인슐린 주사기로 중단하고 주입에 대한 적절한 각도를 달성하기 위해 바늘을 약간 구부린다. 정점에서 심장 의 밑쪽으로 이동, 바늘 개구부가 완전히 심근 안쪽에 때까지 페리 -infarct 영역에 주사기를 삽입 한 다음 천천히 심근에 세포를 주입, 3 초 기다렸다 바늘을 제거. 심실 세동과 같은 세포에 비정상적인 반응이 없는지 확인하기 위해 3 분 동안 심장을 면밀히 관찰하십시오.3분 후, 24 게이지 IV 카테터 튜브를 흉부 구멍 에 1개의 늑간 공간을 개구부 오른쪽에 놓습니다. 늑간 근육과 피부 층을 닫고 이전에 설명한 바와 같이 가슴 튜브를 제거하십시오. 1.5 밀리리터의 따뜻한 식염수를 피하고 감염을 예방하기 위해 절개 부위에 삼중 항생제 연고를 적용한다.마우스를 침구 없는 케이지 또는 케이지에 옮기고 따뜻한 패드에 덮인 침구가 완전히 복구될 때까지 옮기습니다. 수술 후 심전도 및 심전도는 STEM 세포 이식을 진행하여 경색을 확인하고 심실 수축 기능을 감소시키는 날에 수행되었다. 데이터의 추가 검사는 허혈성 손상을 받은 마우스에서 배출 분획 및 분수 단축이 감소한 반면, 최종 확장기 및 수축기 부피가 증가하였다.상해 후 7일 심근 조직의 마손 삼크롬 염색은 허혈성 상해를 받은 마우스의 심혼에 있는 좌심실 벽의 증가 콜라겐 증착 및 숱이를 보여주었습니다. 생체 내 생물 발광 화상 진찰 또는 BLI는 중간엽 STEM 세포 이식 후 날에 수행되었다. MSC의 성공적인 전달은 허혈 재관전 손상을 유도했지만 MSC를 받지 못한 마우스에 비해 BLI 신호에 의해 예시된다.이 프로토콜을 시도할 때, 늑간 을 통해 절단할 때 작은 의도적인 움직임, 혈관을 리칭하고, 세포를 주입하는 것은 시야에서 심장 또는 폐에 과도한 손상을 방지하는 데 필수적이라는 것을 명심하십시오. 이러한 절차는 초음파를 통해 이식 후 심장 기능을 모니터링 할 수있는 기능을 제공합니다, 생물 발광 이미징을 통해 세포 생존 가능성, 또는 사용되는 치료에 따라 추가 분자 또는 생화학 적 기술.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normothermic 심장 마비와 심폐 소생술의 : 국소 빈혈 - Reperfusion 상해의 마우스 모델

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

연구

의학

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

심근 국소 빈혈 및 Reperfusion의 Murine 폐쇄 가슴 모델

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

마우스의 급성 신장 손상 및 사후 상해 섬유증의 허혈 - 재관류 모델

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Intramyocardial Cell Delivery: Observations in Murine Hearts

심근 내 휴대 납품 : 쥐과 마음의 관찰

Previous studies showed that cell delivery promotes cardiac function amelioration by release of cytokines and factors that increase cardiac tissue ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

창자 허혈 - 재관류 손상의 쥐 모델

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

안압 상승을 통해 망막 허혈 - 재관류 손상의 마우스 모델

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

쥐의 심근 허혈 재관류 후 관상 동맥 흐름 예비의 평가

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

재건 미세 수술에서 허혈 재관류 손상의 연구를위한 전 임상 쥐 모델

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Tracking Superparamagnetic Iron Oxide-labeled Mesenchymal Stem Cells using MRI after Intranasal Delivery in a Traumatic Brain Injury Murine Model

외상성 뇌 손상 뮤린 모델에서 비강 내 전달 후 MRI를 사용하여 수퍼 파라마그네틱 철 산화물 표지 메젠키말 줄기 세포 추적

Stem cell-based therapies for brain injuries, such as traumatic brain injury (TBI), are a promising approach for clinical trials. However, technical ...