Name: delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model
Uploaded: 2020-09-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

Experimenten utfördes på kvinnliga C57BL/6 möss, ålder 10-12 veckor och 20-25 g kroppsvikt. Alla djurprocedurer uppfyllde de normer som anges i handledningen för vård och användning av försöksdjur (Institute of Laboratory Animal Resources, National Academy of Sciences, Bethesda, MD, USA) och godkändes av Mayo Clinic College of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
1. Förberedelse och intubation
<ol><li>Autoklavera alla kirurgiska instrument...

<ol>
	<li>Franchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Myocardial+Microenvironment+Modulates+the+Biology+of+Transplanted+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells.</a> Molecular Imaging Biology. , (2020).</li><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans.">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li><li>Writing Group, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), 38 (2016).</li><li>Gersh, B. J., Simari, R. D., Behfar, A., Terzic, C. M., Terzic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+repair+therapy:+a+clinical+perspective.">Cardiac cell repair therapy: a clinical perspective.</a> Mayo Clinic Protocol. 84 (10), 876-892 (2009).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+heart+failure+therapy+headed+for+optimization.">Regenerative heart failure therapy headed for optimization.</a> European Heart Journal. 35 (19), 1231-1234 (2014).</li><li>Beegle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+preconditioning+of+mesenchymal+stromal+cells+induces+metabolic+changes,+enhances+survival,+and+promotes+cell+retention+in+vivo.">Hypoxic preconditioning of mesenchymal stromal cells induces metabolic changes, enhances survival, and promotes cell retention in vivo.</a> Stem Cells. 33 (6), 1818-1828 (2015).</li><li>Kubli, D. A., Gustafsson, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+mitophagy:+the+yin+and+yang+of+cell+death+control.">Mitochondria and mitophagy: the yin and yang of cell death control.</a> Circulation Research. 111 (9), 1208-1221 (2012).</li><li>Psaltis, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+oxidative+stress+in+transplanted+mesenchymal+stromal+cells.">Noninvasive monitoring of oxidative stress in transplanted mesenchymal stromal cells.</a> JACC Cardiovascular Imaging. 6 (7), 795-802 (2013).</li><li>Peet, C., Ivetic, A., Bromage, D. I., Shah, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+monocytes+and+macrophages+after+myocardial+infarction.">Cardiac monocytes and macrophages after myocardial infarction.</a> Cardiovasc Research. 16 (6), 1101-1112 (2020).</li><li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioimmunology:+the+immune+system+in+cardiac+homeostasis+and+disease.">Cardioimmunology: the immune system in cardiac homeostasis and disease.</a> Nature Reviews Immunology. 18 (12), 733-744 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Stem+Cells+Promote+the+Resolution+of+Cardiac+Inflammation+After+Ischemia+Reperfusion+Via+Enhancing+Efferocytosis+of+Neutrophils.">Mesenchymal Stem Cells Promote the Resolution of Cardiac Inflammation After Ischemia Reperfusion Via Enhancing Efferocytosis of Neutrophils.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (5), 014397 (2020).</li><li>Saxena, A., Russo, I., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+as+a+therapeutic+target+in+myocardial+infarction:+learning+from+past+failures+to+meet+future+challenges.">Inflammation as a therapeutic target in myocardial infarction: learning from past failures to meet future challenges.</a> Translational Research. 167 (1), 152-166 (2016).</li><li>Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biological+Basis+for+Cardiac+Repair+After+Myocardial+Infarction:+From+Inflammation+to+Fibrosis.">The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction: From Inflammation to Fibrosis.</a> Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).</li><li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li></ol>

Över 85 miljoner människor världen över drabbas av hjärt- ochkärlsjukdomar 3. Den höga prevalensen av dessa ischemiska händelser motiverar ytterligare utveckling och expansion av alternativa terapier för att främja regenerering av skadad vävnad. Traditionella metoder utnyttja ischemi reperfusion förfarandet i en akut inställning med efterföljande administrering av therapeutics1. Inflammatoriska reaktioner är på sin topp mellan 3-4 dagar postdating en hjärt ...

Hjärt-kärlsjukdom är fortfarande den vanligaste orsaken till sjuklighet och dödlighet i hela världen. Hjärt ischemiska händelser har konstaterats vara till skada för den övergripande funktionen av myokardiet och omgivande celler1. Endast ̴0,45-1,0% av kardiomyocyter kommer att regenerera varje år efter att myokardskador uppstår2. Trots den ökande efterfrågan och inneboende fokus på att utveckla behandlingar, terapier medhjälp i regenerering av skadad vävnad har varit svårt att fastställa och fortfarande kräver ytterligare optimering3,4,5. Stamcellsterapier har införts som en alternativ väg att föryngra skadad vävnad efter en ischemisk händelse; har dock utvecklingen av dessa behandlingar utmanats av begränsad överlevnad och bibehållande av cellerna till ett skadat område6.
Den mikromiljö av hjärtat efter en ischemisk händelse kan karakteriseras som hypoxisk, pro-oxidant, och pro-inflammatoriska, presentera fientliga villkor för terapeutiska stamceller att anpassa sig till för överlevnad7,8. Som ett immunsvar utlöses efter skada, försöker naiva lymfocyter, makrofager, neutrofiler och mastceller att reparera skadan genom att ta bort döende celler och modulera processen för vävnad remodeling9,10,11. Inom de första 3 dagarna efter ischemi, inflammation är på topp med frisättningen av proinflammatoriska cytokiner med högt antal neutrofiler och monocyter i området10,12. Efter 7 dagar har mycket av inflammationen avtagit och övergången till reparativa celler börjar, fortsätter tills ombyggnadskad är klar, cirka 14 dagar hos möss13. Vår kirurgiska metod är en potentiell alternativ strategi för införandet av biologiska läkemedel i hjärtmuskeln att kringgå topp medfödda immunsvar efter ischemi reperfusion skada. Samtidigt kommer det att möjliggöra studier av eventuella behandlingar i ett tillstånd av subakut/kronisk ischemi där det kan finnas olika variabler att överväga jämfört med akut hjärtinfarkt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:973px;" width="973">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:322px;">0.9% NaCl Irrigation, USP</td>
			<td style="width:191px;">Baxter</td>
			<td style="width:132px;">0338-0048-04</td>
			<td style="width:328px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">11x12&#34; Press n&#39; Seal surgical drape, autoclavable</td>
			<td>SAI Infusion Technologies</td>
			<td>PSS-SD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">24G 3/4&#34; IV catheter tube</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">28G x 1/2&#34; 1mL allergy syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305500</td>
			<td>Injection of analgesic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">30G x 1/2&#34; 3/10cc insulin syringe</td>
			<td>Ulticare</td>
			<td>08222.0933.56</td>
			<td>Injection of stem cells</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">6-0 S-29, 12&#34; Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J556G</td>
			<td>Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">9-0 BV100-4, 5&#34; Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2829G</td>
			<td>Ligation of the LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Absorbent underpad</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>14-206-64</td>
			<td>For underneath the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Alcohol prep pads, 2 ply, medium</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anti-fog face mask</td>
			<td>Halyard</td>
			<td>49235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bonn Strabismus scissors, curved, blunt</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14085-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml</td>
			<td>ZooPharm Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity).</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Castroviejo needle holders, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curity sterile gauze sponges</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>397310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Delicate suture tying forceps, 45 angle bent</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Electric Razor</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane 100 ml</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>PI23238</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Lab coat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Monoject 1 mL hypodermic syringe</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>8881501400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria iris forceps, curved, serrated (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria speculum retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17370-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Mouse endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Nair depilatory cream</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Optixcare eye lube plus</td>
			<td>Aventix</td>
			<td></td>
			<td>Sterile ocular lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Physiosuite ventilator</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PolyE Polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-0191</td>
			<td>Temporary compression of LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-iodine swabs</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scalpel, 10-blade</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 3&#34; cotton tipped applicators</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>C15055-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 6&#34; tapered cotton tip applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-826-5WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile gloves</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>N8830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterilization pouches</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MPP100525GS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgery cap</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture tying forceps, straight (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10825-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Transpore surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Triple antibiotic ointment</td>
			<td>G&#38;W Laboratories</td>
			<td>11-2683ILNC2</td>
			<td>Topical application to prevent infection</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15004-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vetflo vaporizer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model

Det finns ett betydande intresse för användning av stamceller (SCs) för återvinning av hjärtfunktion hos individer med skador på hjärtinfarkt. Vanligast studeras hjärtstamcellsterapi genom att leverera SCs samtidigt med induktion av hjärtinfarkt skada. Detta tillvägagångssätt presenterar dock två betydande begränsningar: den tidiga fientliga pro-inflammatoriska ischemisk miljö kan påverka överlevnaden av transplanterade SCs, och det representerar inte subakut infarkt scenario där SCs kommer sannolikt att användas. Här beskriver vi en tvådelar serie av kirurgiska ingrepp för induktion av ischemi-reperfusion skada och leverans av mesenchymala stamceller (MSC). Denna metod för stamcellsadministration kan möjliggöra den längre viabiliteten och retentionen runt skadad vävnad genom att kringgå det ursprungliga immunsvaret. En modell av ischemi reperfusion skada inducerades i möss åtföljs av leverans av mesenkymala stamceller (3,0 x 105), stably uttrycker reportern genen firefly luciferas under den constitutively uttryckt CMV promotor, intramyocardially 7 dagar senare. Djuren var avbildade via ultraljud och bioluminescerande imaging för bekräftelse av skada och injektion av celler, respektive. Viktigt, det fanns ingen extra komplikation takt när du utför denna två-förfarande tillvägagångssätt för SC leverans. Denna metod för stamcellsadministration, kollektivt med utnyttjande av state-of-the-art reporter gener, kan möjliggöra in vivo studie av livskraft och lagring av transplanterade SCs i en situation av kronisk ischemi vanligen ses kliniskt, samtidigt kringgå den ursprungliga pro-inflammatoriska svar. Sammanfattningsvis etablerade vi ett protokoll för fördröjd leverans av stamceller till myokardiet, som kan användas som en potentiell ny metod för att främja regenerering av den skadade vävnaden.

Ischemi reperfusion skada var inducerad i möss på dag 0, följt av en post-operativ echocardiogram och elektrokardiogram dagen före stamceller implantation. Ultraljud och elektrokardiogram analys bekräftade infarkt och minskade ventrikulärt kontraktil funktion (Figur 1A-D). Ytterligare undersökning av data visade utskjutningsfraktionen och fraktionerad förkortning minskade hos möss som fick ischemisk skada, medan de end-diastoliskt och systoliska volymerna ökade (<s...

Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

Stamceller undersöks kontinuerligt som potentiella behandlingar för individer med hjärtinfarkt skada, dock, deras minskade livskraft och retention inom skadad vävnad kan påverka deras långsiktiga effekt. I detta manuskript beskriver vi en alternativ metod för stamcellsleverans i en murine modell av ischemi reperfusion skada.

Fördröjd Intramyokardiell leverans av stamceller efter Ischemia Reperfusion Skada i en Murine Modell

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

Ischemisk skada inducerar en fientlig pro-inflammatorisk miljö som påverkar överlevnaden av transplanterade celler. Vårt protokoll presenterar en alternativ metod för att tillhandahålla biologiska läkemedel genom att kringgå det ursprungliga immunsvaret på skada. Den största fördelen med detta protokoll är att det gör det möjligt att administrera therapeutics en vecka efter skada, härma behandling i den kliniska miljön.Vårt primära fokus ligger på ischemireperfusionsskademodellen och transplantation av STEM-celler. Detta tillvägagångssätt kan dock också utnyttjas för modeller av inflammatorisk sjukdom som innebär införandet av biologiska terapier. Börja med att autoklavera alla kirurgiska instrument.Om flera operationer ska utföras i en session, rengör instrumenten efter varje djur och åter sterilisera dem med hjälp av en varm pärla sterilisator. Subkutant administrera smärtstillande, väg djuret, och mata in vikten i ventilatorn. Raka vänster sida av bröstet från bröstbenet till nivån på axeln och tillämpa avhårningskräm för att avlägsna överflödig päls.För att förhindra lungkollaps, upprätthålla det positiva slutet expiratory trycket vid två centimeter vatten för ischemi reperfusion förfarandet och ändra den till tre centimeter vatten för fördröjd injektion av celler förfarande. Efter att ha sövt musen, intubate det med en 20 gauge endotrakeal tube och överföra den till en kontrollerad värmedyna för att upprätthålla en kroppstemperatur på 35 till 37 grader Celsius. Placera musen i lateral recumbency med kranial ände till vänster och caudal slutet till höger.Skrubba det kirurgiska området omväxlande mellan povidone jod och sprit svabbarna tre gånger och tillämpa oftalmisk salva på båda ögonen. Använd ett nummer 10 blad skalpell för att göra en vertikal snitt 2,5 millimeter till höger om den vänstra bröstvårtan i synfältet, använd sedan sax för att skära igenom de ytliga muskellagren tills interkostalmuskeln och revbenen är synliga. Medan du lyfter revbenen och omgivande vävnad, skär genom det intercostal utrymmet mellan den fjärde och femte revben, sedan in ögonlocket upprullningsdon i det öppna utrymmet.Dra tillbaka hjärtsäcken med hjälp av böjda tåtal, flytta lungan uppåt och ut ur vyn. Passera en 9-0 nylon sutur genom myokardiet under LAD artären 2,5 millimeter distala till vänster auricle upprätthålla jämn och konsekvent rörelse för att förhindra att riva av vävnaden eller punktera ett större blodkärl. Knyt en lös fyrkantig knut, sedan placera en centimeter av polyeten slangar inom den lösa knuten.Säkra suturen runt slangen och bekräfta ischemi genom pallor och ventrikulär arytmi, släpp sedan efter 35 minuter. Efter att du har tagit bort slangen, vänta i fem minuter för att bekräfta re-perfusion av myokardiet. Placera en 24 gauge IV kateterrör i brösthålan ett intercostal utrymme till höger om öppningen.Använd 6-0 resorberbara suturer för att stänga det intercostala snittet i ett enkelt avbrutet mönster och muskellagret i ett kontinuerligt suturmönster. Efter stängning av det ytliga muskellagret, avlägsna bröströret samtidigt som luften dras tillbaka från brösthålan med en milliliter tuberkulinspruta. Stäng huden snitt med en 6-0 resorberbar sutur i en kontinuerlig horisontell madrass mönster.När du är klar, administrera 1,5 milliliter varm saltlösning subkutant och tillämpa trippel antibiotika salva till snittet platsen för att förhindra infektion. Överför musen till en sängkläder gratis bur eller en bur med täckt sängkläder på en varm pad och en temperatur på 35 till 37 grader Celsius tills den är helt återställd. Efter att ha förberett och intubera musen som tidigare beskrivits, ta bort suturen från hudlagret med sax och tlyck, använd sedan ett nummer 10 skalpell för att göra ett snitt på samma plats som den tidigare operationen.Fortsätt att skära igenom ärrvävnaden tills muskelskiktet sutur är synlig, använd sedan saxen och tröt för att ta bort suturen och skär muskelskiktet öppna. Ta bort suturerna som håller ihop revbenen och fortsätt skära genom interkräsmuskeln från det tidigare snittet. Placera ögonlocksretraktorn i det interkonstala utrymmet och lokalisera området för den tidigare ligeringen.Ladda 300, 000 mesenkymala STAMCELLER upphängda i 20 mikroliter pbs i en 30 gauge insulinspruta och böj nålen något för att uppnå rätt vinkel för injektion. Rör sig i riktning från apex mot hjärtats bas, sätt sprutan i regionen peri-infarkt tills nålöppningen är helt inne i hjärtmuskeln, sedan långsamt injicera cellerna i hjärtmuskeln, vänta tre sekunder och ta bort nålen. Observera hjärtat noga i tre minuter för att försäkra dig om att det inte finns någon onormal reaktion på cellerna såsom ventrikelflimmer.Efter tre minuter, placera en 24 gauge IV kateterrör i brösthålan en intercostal utrymme till höger om öppningen. Stäng intercostalmuskeln och hudlagren och ta bort bröströret som tidigare beskrivits. Administrera 1,5 milliliter varm saltlösning subkutant och tillämpa trippel antibiotika salva till snittet för att förhindra infektion.Överför musen till en sängkläder gratis bur eller bur med täckta sängkläder på en varm pad tills den är helt återställd. Post-operativ echocardiogram och elektrokardiogram utfördes på dagen fortsätter STEM cell implantation, bekräftar infarkt och minskade Ventrikulärt contractile funktion. Ytterligare undersökning av data visade utskjutningen fraktion och fraktionerad förkortning minskade i möss som fick ischemisk skada, medan slutet diastoliskt och systoliskt volymer ökade.Masson trichrome färgning av hjärtinfarkt vävnad sju dagar post-skada visade ökad kollagen nedfall och gallring av vänster Ventrikulärt väggen i hjärtan av möss som fått skandinaviska skada. In vivo bioluminescent imaging eller BLI utfördes på dagen efter mesenchymal STEM cell implantation. Framgångsrik leverans av MSC exemplifieras av BLI-signalen jämfört med möss som hade inducerat ischemi reperfusion skada men fick inte MSC.När du försöker detta protokoll, tänk på att små avsiktliga rörelser när du skär genom interkostalerna, ligting fartyget, och injicera celler är avgörande för att förhindra onödiga skador på hjärtat eller lungan i synfältet. Dessa förfaranden erbjuder förmågan att övervaka hjärtfunktionen efter transplantation genom ultraljud, cellens livskraft via bioluminescens avbildning, eller ytterligare molekylära eller biokemiska tekniker beroende på vilken terapi som används.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normothermic hjärtstopp och hjärt-lungräddning: en musmodell av ischemi-reperfusion skada

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

En murin Sluten kista modell av ischemi och reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemi-reperfusion modell av akut Kidneyskadan och efter skada Fibros i möss

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Intramyocardial Cell Delivery: Observations in Murine Hearts

Intramyocardial Cell Leverans: Observationer i Murina Hearts

Previous studies showed that cell delivery promotes cardiac function amelioration by release of cytokines and factors that increase cardiac tissue ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

En mus modell av ischemi-reperfusion skada genom Ligation i vänstra främre nedåt Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murina Modell av Intestinal ischemi-reperfusionsskada

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

En musmodell av retinal ischemi-reperfusion skada genom Elevation av det intraokulära trycket

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Utvärdering av Koronarflödesreserv efter myokardischemi Refusion hos råttor

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

En preklinisk råtta modell för studiet av ischemia-reperfusion skada i rekonstruktiv microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Tracking Superparamagnetic Iron Oxide-labeled Mesenchymal Stem Cells using MRI after Intranasal Delivery in a Traumatic Brain Injury Murine Model

Spårning superparamagnetiska järnoxid-märkta mesenkymala stamceller med MRT efter intranasal leverans i en traumatisk hjärnskada murin modell

Stem cell-based therapies for brain injuries, such as traumatic brain injury (TBI), are a promising approach for clinical trials. However, technical ...