Name: delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model
Uploaded: 2020-09-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

Deneyler dişi C57BL/6 fareler, yaş 10-12 hafta ve 20-25 g vücut ağırlığı üzerinde yapıldı. Tüm hayvan prosedürleri, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nda (Laboratuvar Hayvan Kaynakları Enstitüsü, Ulusal Bilimler Akademisi, Bethesda, MD, ABD) belirtilen standartlara uygun ve Mayo Clinic College of Medicine Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Hazırlık ve entübasyon
<ol><li>Ameliyat...

<ol>
	<li>Franchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Myocardial+Microenvironment+Modulates+the+Biology+of+Transplanted+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells.</a> Molecular Imaging Biology. , (2020).</li><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans.">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li><li>Writing Group, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), 38 (2016).</li><li>Gersh, B. J., Simari, R. D., Behfar, A., Terzic, C. M., Terzic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+repair+therapy:+a+clinical+perspective.">Cardiac cell repair therapy: a clinical perspective.</a> Mayo Clinic Protocol. 84 (10), 876-892 (2009).</li><li>Terzic, A., Behfar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+heart+failure+therapy+headed+for+optimization.">Regenerative heart failure therapy headed for optimization.</a> European Heart Journal. 35 (19), 1231-1234 (2014).</li><li>Beegle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+preconditioning+of+mesenchymal+stromal+cells+induces+metabolic+changes,+enhances+survival,+and+promotes+cell+retention+in+vivo.">Hypoxic preconditioning of mesenchymal stromal cells induces metabolic changes, enhances survival, and promotes cell retention in vivo.</a> Stem Cells. 33 (6), 1818-1828 (2015).</li><li>Kubli, D. A., Gustafsson, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+mitophagy:+the+yin+and+yang+of+cell+death+control.">Mitochondria and mitophagy: the yin and yang of cell death control.</a> Circulation Research. 111 (9), 1208-1221 (2012).</li><li>Psaltis, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+oxidative+stress+in+transplanted+mesenchymal+stromal+cells.">Noninvasive monitoring of oxidative stress in transplanted mesenchymal stromal cells.</a> JACC Cardiovascular Imaging. 6 (7), 795-802 (2013).</li><li>Peet, C., Ivetic, A., Bromage, D. I., Shah, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+monocytes+and+macrophages+after+myocardial+infarction.">Cardiac monocytes and macrophages after myocardial infarction.</a> Cardiovasc Research. 16 (6), 1101-1112 (2020).</li><li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioimmunology:+the+immune+system+in+cardiac+homeostasis+and+disease.">Cardioimmunology: the immune system in cardiac homeostasis and disease.</a> Nature Reviews Immunology. 18 (12), 733-744 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Stem+Cells+Promote+the+Resolution+of+Cardiac+Inflammation+After+Ischemia+Reperfusion+Via+Enhancing+Efferocytosis+of+Neutrophils.">Mesenchymal Stem Cells Promote the Resolution of Cardiac Inflammation After Ischemia Reperfusion Via Enhancing Efferocytosis of Neutrophils.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (5), 014397 (2020).</li><li>Saxena, A., Russo, I., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+as+a+therapeutic+target+in+myocardial+infarction:+learning+from+past+failures+to+meet+future+challenges.">Inflammation as a therapeutic target in myocardial infarction: learning from past failures to meet future challenges.</a> Translational Research. 167 (1), 152-166 (2016).</li><li>Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biological+Basis+for+Cardiac+Repair+After+Myocardial+Infarction:+From+Inflammation+to+Fibrosis.">The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction: From Inflammation to Fibrosis.</a> Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).</li><li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li></ol>

Dünya çapında 85 milyondan fazla insan kardiyovasküler hastalık3etkilenir. Bu iskemik olayların yüksek yaygınlığı, hasarlı dokunun yenilenmesini teşvik etmek için alternatif tedavilerin daha da geliştirilmesini ve genişletilmesini gerektirmektedir. Geleneksel yöntemler terapötik sonraki uygulama ile akut bir ortamda iskemi reperfüzyon prosedürü kullanmak1. İnflamatuar reaksiyonlar 3-4 gün arasında zirvede olan bir kardiyak iskemik olay postdating, n?...

Kardiyovasküler hastalık dünya çapında en sık morbidite ve mortalite nedeni olmaya devam etmektedir. Kardiyak iskemik olayların miyokardiyum un ve çevresindeki hücrelerin genel işlevine zararlı olduğu bulunmuştur1. Kardiyomiyositlerin sadece %00.45-1.0'̴ miyokardiyal hasar oluştuktan sonra her yıl yenilenecektir2. Artan talep ve tedaviler geliştirmeye doğal odak rağmen, yaralı doku rejenerasyonyardımcı tedaviler kurmak zor olmuştur ve hala daha fazla optimizasyon gerektirir3,4,5. Kök hücre tedavileri iskemik bir olaydan sonra hasarlı dokuyu gençleştirmek için alternatif bir yol olarak sunulmuştur; ancak, bu tedavilerin ilerlemesi sınırlı sağkalım ve yaralı bir alana hücrelerin tutulması ile meydan olmuştur6.
Bir iskemik olay dan sonra kalbin mikroçevre hipoksik olarak karakterize edilebilir, pro-oksidan, ve pro-inflamatuar, terapötik kök hücrelerin hayatta kalmak için adapte için düşmanca koşullar sunan7,8. Bir bağışıklık yanıtı yaralanma sonrasında tetiklenir gibi, naif lenfositler, makrofajlar, nötrofiller ve mast hücreleri ölen hücreleri kaldırarak hasarı onarmak için girişimi ve doku remodeling için süreci modüle9,10,11. İlk 3 gün post-iskemi içinde, inflamasyon bölgede nötrofil ve monositler yüksek sayıda pro-inflamatuar sitokinlerin salınımı ile zirvede10,12. 7 gün sonra, çok iltihap yatışmış ve reparative hücrelere geçiş başlar, remodeling kaskad tamamlanana kadar devam, farelerde yaklaşık 14 gün13. Cerrahi yöntemimiz, iskemi reperfüzyon uyrması sonrası en yüksek doğuştan gelen immün yanıtı atlamak için miyokardiyuma biyolojik lerin girişine alternatif bir yaklaşımdır. Aynı zamanda, akut miyokard infarktüsile karşılaştırıldığında göz önünde bulundurulması gereken farklı değişkenler olabileceği subakut/kronik iskemi durumunda ki tedavilerin incelenmesine olanak sağlayacaktır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:973px;" width="973">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:322px;">0.9% NaCl Irrigation, USP</td>
			<td style="width:191px;">Baxter</td>
			<td style="width:132px;">0338-0048-04</td>
			<td style="width:328px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">11x12&#34; Press n&#39; Seal surgical drape, autoclavable</td>
			<td>SAI Infusion Technologies</td>
			<td>PSS-SD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">24G 3/4&#34; IV catheter tube</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">28G x 1/2&#34; 1mL allergy syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305500</td>
			<td>Injection of analgesic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">30G x 1/2&#34; 3/10cc insulin syringe</td>
			<td>Ulticare</td>
			<td>08222.0933.56</td>
			<td>Injection of stem cells</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">6-0 S-29, 12&#34; Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J556G</td>
			<td>Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">9-0 BV100-4, 5&#34; Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2829G</td>
			<td>Ligation of the LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Absorbent underpad</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>14-206-64</td>
			<td>For underneath the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Alcohol prep pads, 2 ply, medium</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anti-fog face mask</td>
			<td>Halyard</td>
			<td>49235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bonn Strabismus scissors, curved, blunt</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14085-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml</td>
			<td>ZooPharm Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity).</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Castroviejo needle holders, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curity sterile gauze sponges</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>397310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Delicate suture tying forceps, 45 angle bent</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Electric Razor</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane 100 ml</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>PI23238</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Lab coat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Monoject 1 mL hypodermic syringe</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>8881501400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria iris forceps, curved, serrated (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Moria speculum retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17370-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Mouse endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Nair depilatory cream</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td></td>
			<td>Fur removal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Optixcare eye lube plus</td>
			<td>Aventix</td>
			<td></td>
			<td>Sterile ocular lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Physiosuite ventilator</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PolyE Polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-0191</td>
			<td>Temporary compression of LAD artery</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-iodine swabs</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scalpel, 10-blade</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 3&#34; cotton tipped applicators</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>C15055-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile 6&#34; tapered cotton tip applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-826-5WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterile gloves</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>N8830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sterilization pouches</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MPP100525GS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgery cap</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture tying forceps, straight (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10825-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Transpore surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Triple antibiotic ointment</td>
			<td>G&#38;W Laboratories</td>
			<td>11-2683ILNC2</td>
			<td>Topical application to prevent infection</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15004-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vetflo vaporizer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delayed intramyocardial delivery of stem cells after ischemia reperfusion injury in a murine model

Miyokardiyal yaralanmaları olan bireylerde kardiyak fonksiyonun iyileşmesi için kök hücre (SC) kullanımına büyük ilgi vardır. En sık, kardiyak kök hücre tedavisi miyokardiyal yaralanma indüksiyonu ile eşzamanlı Olarak SCs teslim ederek çalışılır. Ancak, bu yaklaşım iki önemli sınırlamalar sunar: erken düşmanca pro-inflamatuar iskemik ortam nakledilen SCs sağkalım etkileyebilir, ve SCs büyük olasılıkla kullanılacak subakut enfarktüs senaryo temsil etmez. Burada iskemi-reperfüzyon yaralanması indüksiyonu ve mezenkimal kök hücre (MsC) teslimi için iki bölümlü bir dizi cerrahi işlem denilmektedir. Kök hücre yönetimi bu yöntem ilk bağışıklık yanıtı atlatarak hasarlı doku etrafında daha uzun canlılık ve tutma için izin verebilir. İskemi reperfüzyon yaralanması bir model farelerde mezenkimal kök hücrelerin teslimi ile birlikte indüklenen oldu (3.0 x 105),ststitutively ifade CMV organizatörü altında muhabir gen firefly luciferase ifade, intramiyokardial 7 gün sonra. Hayvanlar sırasıyla yaralanma ve hücre enjeksiyonu onayı için ultrason ve biyolüminesans görüntüleme ile görüntülendi. Daha da önemlisi, SC doğumu için bu iki işlem yaklaşımını gerçekleştirirken ek komplikasyon oranı yoktu. Kök hücre yönetimi bu yöntem, topluca state-of-the-art muhabir genlerin kullanımı ile, canlılık ve kronik iskemi bir durumda nakledilen SCs tutulması in vivo çalışma için izin verebilir klinik olarak görülen, aynı zamanda ilk pro-inflamatuar yanıtı atlatmak. Özetle, kök hücrelerin miyokardyuma gecikmeli olarak ulaştırılması için bir protokol oluşturduk, bu da hasarlı dokunun yenilenmesini teşvik etmede potansiyel yeni bir yaklaşım olarak kullanılabilir.

İskemi reperfüzyon yaralanması farelerde 0. Ultrason ve elektrokardiyogram analizi enfarktüs ve azalmış ventriküler kontraktil fonksiyonu doğruladı (Şekil 1A-D). Verilerin ileri incelenmesinde iskemik yaralanma alan farelerde ejeksiyon fraksiyonu ve fraksiyonel kısalma azalırken, son diyastolik ve sistolik hacimler artmıştır(Tablo 1). Normal bir fare kalbi ile karşılaştırıldığında(Şekil 2A),Masson Trikrom...

Watch this Scientific Journal Video about Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model at JoVE.com

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

Kök hücreler sürekli miyokardiyal hasarı olan bireyler için potansiyel tedaviler olarak araştırılır, ancak, onların azaltılmış canlılık ve yaralı doku içinde tutma onların uzun vadeli etkinliğini etkileyebilir. Bu yazıda iskemi reperfüzyon yaralanması nın bir murine modelinde kök hücre dağıtımı için alternatif bir yöntem açıklanmaktadır.

Bir Murine Modelinde İskemi Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Kök Hücrelerin Gecikmiş İntramiyokardiyal Teslimi

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

İskemik hasar, nakledilen hücrelerin hayatta kalmasını etkileyen düşmanca pro-inflamatuar bir ortama neden olur. Protokolümüz yaralanmaya karşı ilk bağışıklık yanıtını atlatarak biyolojik lik sağlamak için alternatif bir yöntem sunmaktadır. Bu protokolün en büyük avantajı, yaralanmadan bir hafta sonra terapötik tedavinin mümkün kAlınması ve klinik ortamda tedaviyi taklit etmesidir.Öncelikli odak noktamız iskemi reperfüzyon yaralanma modeli ve KÖK hücrelerin naklidir. Ancak, bu yaklaşım aynı zamanda biyolojik tedavilerin giriş içeren inflamatuar hastalık modelleri için kullanılabilir. Tüm cerrahi aletleri otoklavlayarak başlayın.Birden fazla ameliyat tek seansta yapılacaksa, her hayvandan sonra aletleri temizleyin ve sıcak boncuk sterilizatörü kullanarak yeniden sterilize edin. Subkutan analjezik yönetmek, hayvan tartmak, ve ventilatör içine ağırlık girin. Göğüs kafesinin sol tarafını omuz seviyesine kadar tıraş edin ve fazla kürkü çıkarmak için tüy dökücü krem uygulayın.Akciğer çökmesini önlemek için, iskemi reperfüzyon prosedürü için suyun iki santimetre de pozitif son ekspiratuar basıncı korumak ve hücrelerin prosedürü gecikmiş enjeksiyon için su üç santimetre değiştirin. Fareyi anestezi ettikten sonra, 20 gauge endotrakeal tüp ile entübe ve 35 ila 37 santigrat derece bir vücut sıcaklığı korumak için kontrollü bir ısıtma yastığı aktarın. Fareyi solda kranial ucu ve sağdaki kaudal uç ile lateral recumbency yerleştirin.Povidon iyot ve alkol bezleri arasında değişen cerrahi bölgeyi üç kez temizleyin ve her iki göze de oftalmik merhem uygulayın. Görüş alanında sol en sol meme 2,5 milimetre dikey bir kesi yapmak için bir numara 10 bıçak neşter kullanın, sonra interkostal kas ve kaburga görünür olana kadar yüzeysel kas katmanları kesmek için makas kullanın. Kaburga ve çevre doku kaldırarak, dördüncü ve beşinci kaburga arasındaki interkostal boşluk üzerinden kesilmiş, sonra açık alana göz kapağı retraktör eklemek.Kavisli forceps kullanarak perikard geri çekin, yukarı ve görüş dışında akciğer hareket. LAD arter altında miyokardium üzerinden 9-0 naylon dikiş geçirin 2.5 milimetre distal sol auricle doku yırtılması veya büyük bir kan damarı delinmesi önlemek için düzgün ve tutarlı bir hareket koruyarak. Gevşek bir kare düğüm kravat, sonra gevşek düğüm içinde polietilen boru bir santimetre yerleştirin.Tüpün etrafındaki sütün etrafını sabitleyin ve pallor ve ventriküler aritmi ile iskemiyi doğrulayın, 35 dakika sonra serbest bırakın. Tüpü çıkardıktan sonra miyokardin yeniden perfüzyonu onaylamak için beş dakika bekleyin. 24 gauge IV kateter tüpünü açılışın sağındaki torasik kaviteye bir interkostal alana yerleştirin.Basit bir kesik desen ve sürekli dikiş desen kas tabakası interkostal kesi kapatmak için 6-0 emilebilir dikişkullanın. Yüzeysel kas tabakasını kapattıktan sonra, bir mililitre tüberkülin şırınga ile göğüs boşluğundan hava çekerken göğüs tüpünü çıkarın. Sürekli yatay yatak desen 6-0 emilebilir dikiş ile cilt kesisi kapatın.Bittiğinde, 1.5 mililitre sıcak tuzlu su altı uygulayın ve enfeksiyonu önlemek için kesi bölgesine üçlü antibiyotik merhem uygulayın. Fareyi, sıcak bir ped üzerinde kapalı yatak takımları ve 35 ila 37 derece lik bir sıcaklıkla tamamen iyileşene kadar yatak ücretsiz bir kafese veya kafese aktarın. Daha önce açıklandığı gibi fareyi hazırlayıp entübe ettikten sonra, makas ve forceps ile deri tabakasından dikiş çıkarın, sonra bir önceki ameliyat ile aynı yerde bir kesi yapmak için bir sayı 10 neşter kullanın.Kas tabakası dikiş görünür olana kadar skar dokusu ile kesmeye devam edin, sonra dikiş kaldırmak ve açık kas tabakası kesmek için makas ve forceps kullanın. Birlikte kaburga tutan dikişleri çıkarın ve önceki kesi den interkostal kas kesme ye devam edin. Göz kapağı retraktörü interkostal alana yerleştirin ve önceki ligasyon alanını bulun.20 mikrolitre PBS'de asılı olan 300, 000 mezenkimal KÖK hücreyi 30 gauge insülin şırıngasına yükleyin ve enjeksiyon için uygun açıyı elde etmek için iğneyi hafifçe bükün. Apex'ten kalbin tabanına doğru ilerleyerek, iğne açıklığı miyokardyumun içine tamamen girene kadar şırıngayı peri-enfarktüs bölgesine yerleştirin, sonra hücreleri yavaşça miyokardyuma enjekte edin, üç saniye bekleyin ve iğneyi çıkarın. Ventriküler fibrilasyon gibi hücrelere anormal bir reaksiyon olmadığından emin olmak için kalbi üç dakika boyunca yakından gözlemleyin.Üç dakika sonra, 24 gauge IV kateter tüpünü açılışın sağındaki torasik kaviteye bir interkostal alana yerleştirin. Interkostal kas ve deri tabakalarını kapatın ve daha önce açıklandığı gibi göğüs tüpünü çıkarın. 1.5 mililitre ılık tuzlu su altı uygulayın ve enfeksiyonu önlemek için kesi bölgesine üçlü antibiyotik merhem uygulayın.Fareyi, tamamen iyileşene kadar sıcak bir ped üzerinde kapalı yatak takımları olan yatak serbest kafesine veya kafese aktarın. Postoperatif ekokardiyogram ve elektrokardiyogram, enfarktüs ve azalmış ventriküler kontraktil fonksiyonunun doğrulanmasıyla, STEM hücre implantasyonunun devam edildiği gün gerçekleştirildi. Verilerin daha ileri incelenmesi, iskemik yaralanma alan farelerde ejeksiyon fraksiyonunun ve fraksiyonel kısalansın azaldığını, son diyastolik ve sistolik hacimlerin arttığını gösterdi.Yaralanma dan yedi gün sonra miyokard dokusunun Masson trikrom boyama sında iskemik yaralanma alan farelerin kalplerinde kollajen birikiminin arttığı ve sol ventrikül duvarının inceltilmesi saptanmıştır. İn vivo biyolüminesans görüntüleme veya BLI mezenkimal KÖK hücre implantasyonundan sonraki gün yapıldı. MSC'lerin başarılı bir şekilde teslimi, iskemi reperfüzyon yaralanmasına neden olan ancak MSC almayan farelere kıyasla BLI sinyali ile örneklenir.Bu protokolü denerken, interkostalları keserken, damarı bağlarken ve enjekte eden hücreler görüş alanında kalp veya akciğerde aşırı hasar oluşmasını önlemek için hayati önem taşır. Bu işlemler, ultrason yoluyla transplantasyon sonrası kardiyak fonksiyonu izleme, biyolüminesans görüntüleme yoluyla hücre canlılığı veya kullanılan tedaviye bağlı olarak daha fazla moleküler veya biyokimyasal teknikler ile kardiyak fonksiyonu izleme olanağı sunar.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normotermik Kardiyak Arrest ve Kardiyopulmoner Resusitasyon: İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Intramyocardial Cell Delivery: Observations in Murine Hearts

Intramiyokardiyal Hücre Teslimat: Mürin Hearts Gözlemler

Previous studies showed that cell delivery promotes cardiac function amelioration by release of cytokines and factors that increase cardiac tissue ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Göz İçi Basıncı Yükselmesi ile Retina İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Farelerde miyokardiyal Iskemi reperfüzyon sonrası koroner akış rezervi değerlendirilmesi

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Rekonstrüktif Mikrocerrahide İskemi-Reperfüzyon Hasarı Nın İnceleştirilmesinde Klinik Öncesi Sıçan Modeli

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Tracking Superparamagnetic Iron Oxide-labeled Mesenchymal Stem Cells using MRI after Intranasal Delivery in a Traumatic Brain Injury Murine Model

Travmatik Beyin Hasarı Murine Modelinde İntranazal Doğum sonrası MRG kullanarak Süperparamanyetik Demir Oksit etiketli Mezenkimal Kök Hücrelerin Takibi

Stem cell-based therapies for brain injuries, such as traumatic brain injury (TBI), are a promising approach for clinical trials. However, technical ...