Name: isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis
Uploaded: 2020-06-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Dette arbejde er støttet af NIH tilskud AI125701 og AI139721, Cancer Research Institute CLIP program og American Cancer Society tilskud RSG-18-222-01-LIB til N.Z. Vi takker Karla Gorena og Sebastian Montagnino fra Flow Cytometri Facility. Data genereret i Flow Cytometri Shared Resource Facility blev støttet af University of Texas Health Science Center i San Antonio (UTHSCSA), NIH/ NCI tilskud P30 CA054174-20 (Klinisk og Translationel Research Center [CTRC] på UTHSCSA), og UL1 TR001120 (Klinisk og Translationel Science Award).

Alle dyreforsøg, der udføres efter denne protokol, skal godkendes af den respektive institutionelle komité for dyrepleje og -anvendelse (IACUC). Alle procedurer, der er beskrevet her, er blevet godkendt af IACUC UT Health San Antonio.
1. Adoptivoverførsel af P14 T-celler til C57BL/6-modtagere og LCMV-infektion
<ol><li>Brug P14 mus i alderen 6-12 uger. Sørg for, at kønnet på donor P14 TCR transgene mus skal matche køn C57BL/6 modtager mus. Ellers vil celler som mandlige T-celler, der ...

<ol>
	<li>Mueller, S. N., Gebhardt, T., Carbone, F. R., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T+cell+subsets,+migration+patterns,+and+tissue+residence.">Memory T cell subsets, migration patterns, and tissue residence.</a> Annual Review of Immunology. 31, 137-161 (2013).</li><li>Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+memory+T+cells:+local+specialists+in+immune+defence.">Tissue-resident memory T cells: local specialists in immune defence.</a> Nature Reviews: Immunology. 16, 79-89 (2016).</li><li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease.">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nature Medicine. 21, 688-697 (2015).</li><li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+memory.+Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses.">T cell memory. Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346, 98-101 (2014).</li><li>Thome, J. J., Farber, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+concepts+in+tissue-resident+T+cells:+lessons+from+humans.">Emerging concepts in tissue-resident T cells: lessons from humans.</a> Trends in Immunology. 36, 428-435 (2015).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hobit+and+Blimp1+instruct+a+universal+transcriptional+program+of+tissue+residency+in+lymphocytes.">Hobit and Blimp1 instruct a universal transcriptional program of tissue residency in lymphocytes.</a> Science. 352, 459-463 (2016).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-box+Transcription+Factors+Combine+with+the+Cytokines+TGF-beta+and+IL-15+to+Control+Tissue-Resident+Memory+T+Cell+Fate.">T-box Transcription Factors Combine with the Cytokines TGF-beta and IL-15 to Control Tissue-Resident Memory T Cell Fate.</a> Immunity. 43, 1101-1111 (2015).</li><li>Milner, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx3+programs+CD8(+)+T+cell+residency+in+non-lymphoid+tissues+and+tumours.">Runx3 programs CD8(+) T cell residency in non-lymphoid tissues and tumours.</a> Nature. 552, 253-257 (2017).</li><li>Liu, Y., Ma, C., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Specific+Control+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells.">Tissue-Specific Control of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Critical Reviews in Immunology. 38, 79-103 (2018).</li><li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance.">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161, 737-749 (2015).</li><li>Qiu, Z., Sheridan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+Lymphocytes+from+the+Mouse+Small+Intestinal+Immune+System.">Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e57281 (2018).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9, 209-222 (2014).</li><li>Ma, C., Mishra, S., Demel, E. L., Liu, Y., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+Controls+the+Formation+of+Kidney-Resident+T+Cells+via+Promoting+Effector+T+Cell+Extravasation.">TGF-beta Controls the Formation of Kidney-Resident T Cells via Promoting Effector T Cell Extravasation.</a> Journal of Immunology. 198, 749-756 (2017).</li><li>Gebhardt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+patterns+of+peripheral+migration+by+memory+CD4++and+CD8++T+cells.">Different patterns of peripheral migration by memory CD4+ and CD8+ T cells.</a> Nature. 477, 216-219 (2011).</li><li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARTC2.2/P2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8(+)+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets.">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8(+) T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> Journal of Immunology. 202, 2153-2163 (2019).</li><li>Fernandez-Ruiz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver-Resident+Memory+CD8(+)+T+Cells+Form+a+Front-Line+Defense+against+Malaria+Liver-Stage+Infection.">Liver-Resident Memory CD8(+) T Cells Form a Front-Line Defense against Malaria Liver-Stage Infection.</a> Immunity. 45, 889-902 (2016).</li><li>Beura, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalizing+the+environment+recapitulates+adult+human+immune+traits+in+laboratory+mice.">Normalizing the environment recapitulates adult human immune traits in laboratory mice.</a> Nature. 532, 512-516 (2016).</li></ol>

Som vævsspecifik immunitet er et hurtigt voksende forskningsområde, tyder akkumulerende beviser på, at immunceller, især lymfocytter befolkning kan identificeres i næsten alle organer i voksne mennesker eller inficerede eller immuniserede mus. LCMV mus infektion model er en veletableret model til at studere antigen-specifikke T-celle respons, effektor og hukommelse T celle differentiering herunder TRM biologi på tværs af flere væv. Her beskrev vi en protokol til at analysere CD8+ T-celler i ...

Væv-hjemmehørende hukommelse (TRM)T-celler repræsenterer en af de mest rigelige T-celle populationer i voksne mennesker og inficerede mus. TRM-celler giver den første linje i immunforsvaret og er kritisk involveret i forskellige fysiologiske og patologiskeprocesser 1,2,3,4,5. Sammenligne med cirkulerende T-celler, TRM celler bære forskellige overflade markører med unikke transskriptionprogrammer 6,7,8. Udvidelse af vores viden om TRM biologi er nøglen til at forstå T celle svar, som er afgørende for den fremtidige udvikling af T-celle-baserede vacciner og immunterapier.
Ud over almindeligt delte molekylære markører for TRMs på tværs af alle ikke-lymfoide væv, akkumulere beviser tyder på, at væv-specifikke funktioner er en central del af TRM biologi9. Nyre havne mange immunceller, herunder TRM celler efter infektion og giver en stor mulighed for at studere TRM cellebiologi i en ikke-slimhindevæv. Akut LCMV (lymfocytisk choriomeningitis virus) infektion via intraperitoneal rute er en veletableret systemisk infektion model til at studere antigen-specifikke T-celle reaktioner i mus. Infektionen er normalt forsvandt i 7-10 dage i vilde type mus og efterlade et stort antal LCMV-specifikke hukommelse T-celler i en række væv, herundernyrerne 10. P14 TCR (T-celle receptor) transgene mus bære CD8+ T-celler genkende en af de immun-dominerende epitoper af LCMV præsenteret af MHC-I (klasse I større histokompatibilitet kompleks) molekyle H2-Db i C57BL/6 mus. Ved at kombinere medfødt markeret P14 T celle adoptivoverførsel og LCMV infektion i mus, CD8+ effektor og hukommelse T-celler spores, herunder TRM differentiering og homøostase.
I nogle barriere væv, såsom intestinal intraepithelial lymfocytter (IEL) rum og spytkirtler, etablerede lymfocyt isolation procedure giver høj procentdel af TRM celler med minimal blodbårne T-celle forurening i mus LCMV model11. Men i ikke-barriere væv, såsom nyrerne, tæt vaskulære netværk indeholder et stort antal cirkulerende CD8+ T-celler. Det er blevet veldokumenteret, at selv vellykket perfusion ikke effektivt kan fjerne alle cirkulerende CD8+ T-celler. For at overvinde denne tekniske hurdle, intravaskulær antistof farvning er blevet etableret som en af de mest almindeligt anvendte teknikker i TRM labs12. Kort sagt, 3-5 minutter før aktiv dødshjælp, 3 μg/mus anti-CD8 antistof (for at mærke CD8+ T-celler) leveres intravenøst. Intakt blodkar væg forhindrer hurtig diffusion af antistoffet inden for denne korte periode (dvs. 3-5 minutter) og kun intravaskulære celler er mærket. Efter standard lymfocyt isolation protokol, intravaskulær versus ekstravaskulære celler kan let skelnes ved hjælp af flow cytometri.
Her vil vi beskrive en standardprotokol, der almindeligvis anvendes i TRM labs til at udføre intravaskulær mærkning, lymfocytisolering og flow cytometri analyse af nyre CD8+ T-celler ved hjælp af en C57BL/6 mus, der har modtaget CD45.1+ P14 T-celler og LCMV infektion 30 dage før13. Samme protokol kan bruges til at studere både effektor og hukommelse T-celler i nyrerne.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37C incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin a-CD8a antibody(Clone 53-6.7)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0081-U025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30073.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collegenase B</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11088807001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Graduated Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS 5692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mojosort Mouse CD8 Na&#239;ve T Cells Isolation Kit</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>480043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>overhead heat lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00333PZZG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17089101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30096.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid Brass Mouse Restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc</td>
			<td>SAI-MBR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swing Bucket Centrifuge with refrigerator</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture 6-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis

Væv-hjemmehørende hukommelse T-celle (TRM)er et hastigt voksende område af immunologi forskning. Isolering T-celler fra forskellige ikke-lymfoide væv er et af de vigtigste skridt til at undersøge TRMs. Der er små variationer i lymfocyt isolation protokoller for forskellige organer. Nyre er et vigtigt ikke-lymfoide organ med talrige immuncelleinfiltration især efter patogen eksponering eller autoimmun aktivering. I de seneste år, flere laboratorier, herunder vores egen er begyndt at karakterisere nyre hjemmehørende CD8+ T-celler i forskellige fysiologiske og patologiske indstillinger i både mus og menneske. På grund af den overflod af T lymfocytter, nyre repræsenterer en attraktiv model organ til at studere TRMs i ikke-slimhinde eller ikke-barriere væv. Her vil vi beskrive en protokol, der almindeligvis anvendes i TRM-fokuseredelaboratorier til at isolere CD8+ T-celler fra musenyrerne efter systemisk virusinfektion. Kort, ved hjælp af en akut lymfocytisk choriomeningitis virus (LCMV) infektion model i C57BL/6 mus, vi demonstrere intravaskulære CD8+ T celle mærkning, enzymatisk fordøjelse, og densitet gradient centrifugering at isolere og berige lymfocytter fra musenyrer at gøre prøverne klar til den efterfølgende flow cytometri analyse.

Den protokol, der er beskrevet her, er opsummeret i et rutediagram (Figur 1A). På dag 30 post LCMV infektion, vi udførte intravaskulær mærkning af CD8+ T-celler. 5 minutter senere, begge nyrer af dyret blev dissekeret, hakket og udsat for kollagenase fordøjelsen. Lymfocytter blev yderligere renset fra de fordøjede prøver via Percoll centrifugering og analyseret af flow cytometri. Som vist i figur 1Bvar det også efter centrifugeringsmedieret ly...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Efter virusinfektion, nyre havne et relativt stort antal CD8+ T-celler og giver mulighed for at studere ikke-slimhinde TRM celler. Her beskriver vi en protokol til at isolere mus nyre lymfocytter for flow cytometri analyse.

Isolering af musenyrnyre resident CD8+ T-celler til flowcytometrianalyse

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

CD8+T-celler har forskellige træk i forskelligt væv, som et kritisk eksempel på ikke-slimhindevæv og ikke-lymfoide væv. Det er vigtigt at direkte karakterisere nyre-hjemmehørende celler til fuldt ud at forstå T-celle biologi. Her vil vi demonstrere vores bekvemme metode til at isolere nyre-hjemmehørende CD8 + T celler imødekommende efterfølgende flow cytometri analyse.Denne metode kan give indsigt i undersøgelser af effektor og hukommelse CD8 + T-celler genereret efter infektioner samt autoimmune reaktioner. Proceduren vil blive udført af Dr.Chaoyu Ma, en forsker for mit laboratorium. Begynd med at fortynde biotin anti CD8 alfa antistof til 15 mikrogram pr. milliliter i PBS, og sørg for, at der er nok til at administrere 200 mikroliter til hver mus.Før injektion, varme hale vene af musen med en overhead varmelampe i fem til 10 minutter til at spile den. Tegn 200 mikroliter af den fortyndede antistofblanding i en 28-gauge insulinsprøjt, og fjern eventuelle luftbobler ved at flytte stemplet op og ned. Bøj nålen for at skabe en 150-graders vinkel mellem nålen og sprøjten,, så nålen er parallel med halevene.Tilbageholde musen med en gnaver fastholde og spray halen med 70% ethanol for at gøre venen klart synlig. Hold halen i den distale ende med tommelfingeren og midterste fingre af den ikke-dominerende hånd, og placer derefter pegefingeren under injektionsstedet. Med den dominerende hånd stikke nålen ind i venen parallelt mod retningen af hjertet og langsomt injicere 200 mikroliter af antistoffet.Fjern nålen, og kom dem forsigtigt til at komprimere injektionsstedet, indtil blødningen stopper. Efter aflive musen, dissekere nyrerne med en saks og overføre den til en 1,5-milliliter mikro centrifuge rør. Lad prøverne blive på is, indtil de forarbejdes.Forbered seks-brøndplader med tre milliliter fordøjelsesopløsning i hver brønd, ved hjælp af en brønd pr mus, og opbevar dem på is. Tilsæt 300 mikroliter fordøjelsesopløsning i hvert prøverør og hakker nyreprøverne med en lige fjedersaks. Overfør de hakkede nyreprøver til de seks-brøndplader med fordøjelsesopløsningen.Inkuber prøverne ved 37 grader Celsius med blid rokkende i 45 minutter, derefter homogenisere vævet med stemplet flange af en tre-milliliter sprøjte og overføre det til 15-milliliter koniske rør. Drej prøverne ned ved 500 gange g og fire grader Celsius i fem minutter. Fjern supernatanten og opsplit pellet i tre milliliter RPMI med 10% FCS.Drej prøven ned ved 500 gange g og fire grader Celsius i fem minutter, fjern derefter supernatanten og resuspend cell pellet med fem milliliter 44% tæthed gradient medium og RPMI mix. Sæt spidsen af en tre milliliter pipette indeholdende tre milliliter 67% tæthed gradient medium og PBS direkte til bunden af hvert rør og langsomt frigive opløsningen, således at den tunge opløsning danner et særskilt lag i bunden. Drej prøverne ved 900 gange g i 20 minutter med reducerede accelerator- og bremseindstillinger, fjern derefter forsigtigt rørene fra centrifugen uden at forstyrre lagene.Fjern det øverste lag med en overførselpipette uden at røre ved lymfocytlaget og overfør lymfocytlaget til et nyt 15-milliliterrør. Fyld røret med PBS og 5% FCS, derefter blandes ved langsomt at vende røret fire til seks gange. Efter centrifugering af prøverne ved 500 gange G og fire grader Celsius i fem minutter fjernes supernatanten og resuspendrer cellepellet med 500 mikroliter komplet RPMI-medium.Cellerne er nu klar til flow cytometri farvning. Selv efter densitet centrifugering-medieret lymfocyt berigelse, var det meget almindeligt at se en stor del af ikke-lymfocytter i det endelige produkt. Men efter at få på levende lymfocytter, CD8 + T lymfocytter var let at identificere.Som forventet, kun ekstra-vaskulære CD8 + T-celler effektivt erhvervet væv hjemmehørende hukommelse T-celle fænotyper, såsom opregulering af CD69 og nedregulering af Ly6C. I modsætning til de inficerede mus blev langt størstedelen af CD8+T-celler, der var isoleret fra unge naive mus i SPF-anlægget, mærket med CD8-alfaantistof og tilhørte derfor det intravaskulære rum. Denne teknik har i høj grad fremskyndet undersøgelsen af væv-hjemmehørende immunceller i tæt vaskulariserede organer.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Whole-dyr Imaging og Flowcytometrisk Teknikker til analyse af antigen-specifikke CD8 + T-celle responser efter Nanopartikel Vaccination

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

Brug af flowcytometri at vurdere tilstanden af ​​kromatin i T-celler

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolering og flowcytometrisk analyse af immunceller fra iskæmisk Mouse Brain

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescens-aktiveret cellesortering til oprensning af Plasmacytoide dendritiske celler fra knoglemarven i mus

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

Isolering og flowcytometrisk analyse for Human endocervikale Gamma Delta T-celler

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Måling af T-celle alloreaktivitet Brug Imaging flowcytometri

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation og In Vitro kultur af Murine og menneskelige alveolær makrofager

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

Flerfarvet Flow flowcytometri-baserede kvantificering af mitokondrier og lysosomer i T celler

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Fremstilling af hele knoglemarv til masse cytometri analyse af neutrofile-Lineage celler

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...