Name: isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis
Uploaded: 2020-06-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Dit werk wordt ondersteund door NIH subsidies AI125701 en AI139721, Cancer Research Institute CLIP programma en American Cancer Society subsidie RSG-18-222-01-LIB aan N.Z. Wij danken Karla Gorena en Sebastian Montagnino van Flow Cytometry Facility. Gegevens gegenereerd in de Flow Cytometry Shared Resource Facility werden ondersteund door de University of Texas Health Science Center in San Antonio (UTHSCSA), NIH / NCI subsidie P30 CA054174-20 (Clinical and Translational Research Center [CTRC] op UTHSCSA), en UL1 TR001120 (Clinical and Translational Science Award).

Alle dierproeven die volgens dit protocol worden uitgevoerd, moeten worden goedgekeurd door het desbetreffende Comité voor institutionele dierverzorging en -gebruik (IACUC). Alle hier beschreven procedures zijn goedgekeurd door IACUC UT Health San Antonio.
1. Adoptieoverdracht van P14 T-cellen naar C57BL/6-ontvangers en LCMV-infectie
<ol><li>Gebruik P14 muizen op 6-12 weken oud. Zorg ervoor dat het geslacht van donor P14 TCR transgene muis moet overeenkomen met het geslacht van C57BL/6 ontv...

<ol>
	<li>Mueller, S. N., Gebhardt, T., Carbone, F. R., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T+cell+subsets,+migration+patterns,+and+tissue+residence.">Memory T cell subsets, migration patterns, and tissue residence.</a> Annual Review of Immunology. 31, 137-161 (2013).</li><li>Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+memory+T+cells:+local+specialists+in+immune+defence.">Tissue-resident memory T cells: local specialists in immune defence.</a> Nature Reviews: Immunology. 16, 79-89 (2016).</li><li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease.">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nature Medicine. 21, 688-697 (2015).</li><li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+memory.+Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses.">T cell memory. Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346, 98-101 (2014).</li><li>Thome, J. J., Farber, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+concepts+in+tissue-resident+T+cells:+lessons+from+humans.">Emerging concepts in tissue-resident T cells: lessons from humans.</a> Trends in Immunology. 36, 428-435 (2015).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hobit+and+Blimp1+instruct+a+universal+transcriptional+program+of+tissue+residency+in+lymphocytes.">Hobit and Blimp1 instruct a universal transcriptional program of tissue residency in lymphocytes.</a> Science. 352, 459-463 (2016).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-box+Transcription+Factors+Combine+with+the+Cytokines+TGF-beta+and+IL-15+to+Control+Tissue-Resident+Memory+T+Cell+Fate.">T-box Transcription Factors Combine with the Cytokines TGF-beta and IL-15 to Control Tissue-Resident Memory T Cell Fate.</a> Immunity. 43, 1101-1111 (2015).</li><li>Milner, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx3+programs+CD8(+)+T+cell+residency+in+non-lymphoid+tissues+and+tumours.">Runx3 programs CD8(+) T cell residency in non-lymphoid tissues and tumours.</a> Nature. 552, 253-257 (2017).</li><li>Liu, Y., Ma, C., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Specific+Control+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells.">Tissue-Specific Control of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Critical Reviews in Immunology. 38, 79-103 (2018).</li><li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance.">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161, 737-749 (2015).</li><li>Qiu, Z., Sheridan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+Lymphocytes+from+the+Mouse+Small+Intestinal+Immune+System.">Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e57281 (2018).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9, 209-222 (2014).</li><li>Ma, C., Mishra, S., Demel, E. L., Liu, Y., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+Controls+the+Formation+of+Kidney-Resident+T+Cells+via+Promoting+Effector+T+Cell+Extravasation.">TGF-beta Controls the Formation of Kidney-Resident T Cells via Promoting Effector T Cell Extravasation.</a> Journal of Immunology. 198, 749-756 (2017).</li><li>Gebhardt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+patterns+of+peripheral+migration+by+memory+CD4++and+CD8++T+cells.">Different patterns of peripheral migration by memory CD4+ and CD8+ T cells.</a> Nature. 477, 216-219 (2011).</li><li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARTC2.2/P2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8(+)+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets.">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8(+) T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> Journal of Immunology. 202, 2153-2163 (2019).</li><li>Fernandez-Ruiz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver-Resident+Memory+CD8(+)+T+Cells+Form+a+Front-Line+Defense+against+Malaria+Liver-Stage+Infection.">Liver-Resident Memory CD8(+) T Cells Form a Front-Line Defense against Malaria Liver-Stage Infection.</a> Immunity. 45, 889-902 (2016).</li><li>Beura, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalizing+the+environment+recapitulates+adult+human+immune+traits+in+laboratory+mice.">Normalizing the environment recapitulates adult human immune traits in laboratory mice.</a> Nature. 532, 512-516 (2016).</li></ol>

Als weefsel specifieke immuniteit is een snelle groeiende gebied van onderzoek, accumuleren bewijs suggereren dat immuuncellen, vooral lymfocyten populatie kan worden geïdentificeerd in bijna alle organen in volwassen menselijke of geïnfecteerde of geïmmuniseerde muizen. LCMV muis infectie model is een gevestigde model om antigeen-specifieke T-cel respons, effector en geheugen T cel differentiatie met inbegrip van TRM biologie over meerdere weefsels te bestuderen. Hier beschreven we een protocol om CD8...

Weefsel-resident geheugen (TRM)T-cellen vertegenwoordigen een van de meest voorkomende T-cel populaties in volwassen menselijke en geïnfecteerde muizen. TRM cellen bieden de eerste lijn van immuunafweer en zijn kritisch betrokken bij verschillende fysiologische en pathologische processen1,2,3,4,5. Vergeleken met circulerende T-cellen, TRM cellen dragen verschillende oppervlakte markers met unieke transcriptie programma's6,7,8. Het uitbreiden van onze kennis van TRM biologie is de sleutel tot het begrijpen van T-celreacties die essentieel is voor de toekomstige ontwikkeling van T-celgebaseerde vaccins en immunotherapieën.
Naast de algemeen gedeelde moleculaire markers van TRMs in alle niet-lymfeweefsels, accumuleren bewijs suggereren dat weefsel-specifieke kenmerken zijn een centrale component van TRM biologie9. Nier herbergt veel immuuncellen, waaronder TRM cellen na infectie en biedt een geweldige kans om TRM celbiologie te bestuderen in een niet-mucosale weefsel. Acute LCMV (lymfatische choriomeningitis virus) infectie via intraperitoneale route is een gevestigde systemische infectie model om antigeen-specifieke T-cel reacties bij muizen te bestuderen. De infectie wordt meestal opgelost in 7-10 dagen in wilde type muizen en laat een groot aantal LCMV-specifieke geheugen T cellen in een verscheidenheid van weefsels, waaronder de nier10. P14 TCR (T cel receptor) transgene muizen dragen CD8+ T cellen herkennen een van de immuun-dominante epitopen van LCMV gepresenteerd door MHC-I (klasse I grote histocompatibiliteit complex) molecuul H2-Db in C57BL/6 muizen. Het combineren van congenisch gemarkeerde P14 T-cel adoptieve overdracht en LCMV-infectie bij muizen, CD8+ effector en geheugen T-cellen worden bijgehouden, inclusief TRM-differentiatie en homeostase.
In sommige barrièreweefsels, zoals darm intraepitheliale lymfocyten (IEL) compartiment en speekselklieren, gevestigde lymfocyte isolatie procedure levert een hoog percentage van TRM cellen met minimale door bloed overgedragen T-cel besmetting in de muis LCMV model11. Echter, in niet-barrièreweefsels, zoals de nier, dicht vasculaire netwerk bevat een groot aantal circulerende CD8+ T cellen. Het is goed gedocumenteerd dat zelfs succesvolle perfusie niet efficiënt alle circulerende CD8+ T cellen kan verwijderen. Om deze technische hindernis te overwinnen, intravasculaire antilichaam kleuring is vastgesteld als een van de meest gebruikte technieken in TRM labs12. Kortom, 3-5 minuten voor euthanasie wordt 3 μg/muis anti-CD8 antilichaam (label CD8+ T cellen) intraveneus geleverd. Intacte bloedvatwand voorkomt snelle verspreiding van het antilichaam binnen deze korte periode (d.w.z. 3-5 minuten) en alleen intravasculaire cellen worden gelabeld. Volgens het standaard protocol voor lymfocytenisolatie kunnen intravasculaire versus extravasculaire cellen gemakkelijk te onderscheiden worden met behulp van stroomcytometrie.
Hier zullen we een standaardprotocol beschrijven dat vaak wordt gebruikt in TRM-laboratoria om intravasculaire etikettering, lymfocytenisolatie en stroomcytometrieanalyse van nier-CD8+ T-cellen uit te voeren met behulp van een C57BL/6-muis die 30 dagen voor13cd45.1+ P14 T-cellen en LCMV-infectie heeft ontvangen. Hetzelfde protocol kan worden gebruikt om zowel effector als geheugen T-cellen in de nier te bestuderen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37C incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin a-CD8a antibody(Clone 53-6.7)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0081-U025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30073.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collegenase B</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11088807001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Graduated Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS 5692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mojosort Mouse CD8 Na&#239;ve T Cells Isolation Kit</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>480043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>overhead heat lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00333PZZG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17089101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30096.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid Brass Mouse Restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc</td>
			<td>SAI-MBR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swing Bucket Centrifuge with refrigerator</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture 6-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis

Tissue-resident memory T cell (TRM)is een snel groeiend gebied van immunologie onderzoek. Het isoleren van T-cellen uit verschillende niet-lymfeweefsels is een van de belangrijkste stappen om TRMs te onderzoeken. Er zijn lichte variaties in lymfocyten isolatie protocollen voor verschillende organen. Nier is een essentieel niet-lymfoïde orgaan met tal van immuuncelinfiltratie vooral na blootstelling aan ziekteverwekkers of auto-immuunactivatie. In de afgelopen jaren zijn meerdere laboratoria, waaronder onze eigen, begonnen met het karakteriseren van nierbewoner CD8+ T-cellen in verschillende fysiologische en pathologische omgevingen in zowel muis als mens. Door de overvloed aan T-lymfocyten, nier vertegenwoordigt een aantrekkelijk model orgaan om TRMs studie in niet-mucosale of niet-barrièreweefsels. Hier zullen we een protocol beschrijven dat vaak wordt gebruikt in TRM-gerichtelaboratoria om CD8+ T-cellen te isoleren van muizennieren na systemische virale infectie. Kortom, met behulp van een acuut lymfatisch choriomeningitisvirus (LCMV) infectiemodel in C57BL/6 muizen, tonen we intravasculaire CD8+ T-cellabeling, enzymatische spijsvertering en dichtheidgradiëntcentrifugatie aan om lymfocyten te isoleren en te verrijken van muizennieren om monsters klaar te maken voor de daaropvolgende stromingscytometry-analyse.

Het hier beschreven protocol wordt samengevat in een stroomdiagram(figuur 1A). Op dag 30 na LCMV infectie, voerden we intravasculaire etikettering van CD8+ T cellen. 5 minuten later werden beide nieren van het dier ontleed, gehakt en onderworpen aan collagenase spijsvertering. Lymfocyten werden verder gezuiverd uit de verteerde monsters via Percoll centrifugatie en geanalyseerd door stroomcytometrie. Zoals blijkt uit figuur 1B, zelfs na dichtheid cent...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Na virale infectie, nier herbergt een relatief groot aantal CD8+ T cellen en biedt een kans om niet-mucosale TRM cellen te bestuderen. Hier beschrijven we een protocol om muisnierlymfocyten te isoleren voor stromingscytometrieanalyse.

Isolatie van Mouse Kidney-Resident CD8+ T cellen voor Flow Cytometry Analysis

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

CD8+T-cellen dragen verschillende kenmerken in verschillende weefsels, als een kritisch voorbeeld van niet-mucosale en niet-lymfeweefsel. Het is essentieel om nier-ingezeten cellen direct te karakteriseren om T-celbiologie volledig te begrijpen. Hier zullen we onze handige methode demonstreren om nier-resident CD8 + T cellen te isoleren die de volgende stromingscytometrieanalyse opvangen.Deze methode kan inzicht geven in de studies van effector en geheugen CD8 + T cellen gegenereerd na infecties en auto-immuunreacties. De procedure zal worden uitgevoerd door Dr.Chaoyu Ma, een onderzoeker voor mijn laboratorium. Begin met het verdunnen van biotine anti CD8 alfa-antilichaam tot 15 microgram per milliliter in PBS, ervoor te zorgen dat er genoeg is om 200 microliters toe te dienen aan elke muis.Verwarm vóór de injectie de staartader van de muis gedurende vijf tot tien minuten met een bovenleidingslamp om deze te verwijden. Teken 200 microliters van het voorverdunde antilichaam mix in een 28-gauge insulinespuit en verwijder eventuele luchtbellen door het bewegen van de zuiger op en neer. Buig de naald om een hoek van 150 graden te creëren tussen de naald en de spuit, schuine kant omhoog, zodat de naald parallel loopt aan de staartader.Beperk de muis met een knaagdier restrainer en spray de staart met 70% ethanol om de ader duidelijk zichtbaar te maken. Houd de staart aan het distale uiteinde met de duim en middelvingers van de niet-dominante hand en plaats vervolgens de wijsvinger onder de injectieplaats. Steek met de dominante hand de naald parallel in de ader naar de richting van het hart en injecteer langzaam 200 microliter van het antilichaam.Verwijder de naald en comprimeer de injectieplaats zachtjes tot het bloeden stopt. Na het euthanaseren van de muis ontleed je de nier met een schaar en breng je deze over naar een 1,5 milliliter microcentrifugebuis. Laat de monsters op ijs tot verdere verwerking.Bereid zes-put platen met drie milliliter van de spijsvertering oplossing in elke put, met behulp van een put per muis, en bewaar ze op ijs. Voeg 300 microliters van de spijsvertering oplossing in elk monster buis en gehakt van de nier monsters met een rechte veer schaar. Breng de gehakte niermonsters met de spijsverteringsoplossing over op de zes-goed platen.Incubeer de monsters op 37 graden Celsius met zachte schommelen gedurende 45 minuten, dan homogeniseren het weefsel met de zuiger flens van een drie-milliliter spuit en breng het naar 15-milliliter conische buizen. Draai de monsters vijf minuten naar beneden op 500 g en vier graden Celsius. Verwijder de supernatant en resuspend de pellet in drie milliliter RPMI met 10% FCS.Draai het monster vijf minuten lang naar beneden bij 500 g en vier graden Celsius en verwijder vervolgens de supernatant en zet de celpellet opnieuw op met vijf milliliter van 44% dichtheidsgradiënt medium en RPMI-mix. Zet de punt van een drie-milliliter pipet met drie milliliter van 67%dichtheidgradiënt medium en PBS direct aan de onderkant van elke buis en laat de oplossing langzaam los, zodat de zware oplossing een aparte laag aan de onderkant vormt. Draai de monsters 20 minuten lang op 900 g met minder gas- en reminstellingen en verwijder de buizen voorzichtig uit de centrifuge zonder de lagen te storen.Verwijder de toplaag met een transferpipet zonder de lymfocytenlaag aan te raken en breng de lymfocytenlaag over naar een nieuwe buis van 15 milliliter. Vul de buis met PBS en 5% FCS, meng door de buis vier tot zes keer langzaam om te keren. Na het centrifugeren van de monsters op 500 keer G en vier graden Celsius gedurende vijf minuten, verwijder de supernatant en resuspend de cel pellet met 500 microliters van volledige RPMI medium.De cellen zijn nu klaar voor flow cytometrie vlekken. Zelfs na dichtheid centrifugatie-gemedieerde lymfocyten verrijking, was het heel gebruikelijk om een groot deel van de niet-lymfocyten in het eindproduct te zien. Echter, na het verkrijgen van levende lymfocyten, CD8 + T lymfocyten waren gemakkelijk te identificeren.Zoals verwacht, alleen extra-vasculaire CD8 + T cellen efficiënt verworven weefsel ingezeten geheugen T-cel fenotypes, zoals upregulatie van CD69 en downregulatie van Ly6C. In tegenstelling tot de geïnfecteerde muizen, de overgrote meerderheid van cd8 + T cellen geïsoleerd van jonge naïeve muizen gehuisvest in de SPF faciliteit werden gelabeld met CD8 alpha antilichaam en dus behoorde tot de intravasculaire compartiment. Deze techniek heeft het onderzoek naar weefsel-ingezeten immuuncellen in dicht gevasculariseerde organen sterk versneld.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Flowcytometrie-analyse van de immuuncellen Binnen Murine aorta

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Whole-dierlijke Imaging en Flowcytometrische technieken voor analyse van antigeen-specifieke CD8 + T cel reacties na Nanoparticle Vaccinatie

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

Het gebruik van flowcytometrie om de staat van chromatine in T-cellen Assess

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolatie en Flow cytometrische analyse van de immuuncellen van de ischemische hersenen van muizen

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescentie-geactiveerde Cell Sorting voor Zuivering van plasmacytoïde dendritische cellen van de muis Bone Marrow

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

Isolatie en Flow cytometrische analyse van Human Endocervicale Gamma Delta T-cellen

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Meting van de T-cel alloreactiviteit Met behulp van Imaging flowcytometrie

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolatie en In Vitro cultuur van lymfkliertest en menselijke alveolaire macrofagen

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

Multicolor Stroom Cytometry gebaseerde kwantificering van Mitochondria en lysosomen in T cellen

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Voorbereiding van het hele beenmerg voor massa Cytometry analyse van neutrofiele-Lineage cellen

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...