Name: isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis
Uploaded: 2020-06-27T14:00:00
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Ces travaux sont soutenus par des subventions des NIH AI125701 et AI139721, le programme CLIP de l’Institut de recherche sur le cancer et la subvention de l’American Cancer Society RSG-18-222-01-LIB à N.Z. Nous remercions Karla Gorena et Sebastian Montagnino du Flow Cytometry Facility. Les données générées dans le Flow Cytometry Shared Resource Facility ont été appuyées par le Centre des sciences de la santé de l’Université du Texas à San Antonio (UTHSCSA), la subvention des NIH/NCI P30 CA054174-20 (Clinical and Translational Research Center [CTRC] à l’UTHSCSA) et UL1 TR001120 (Clinical and Translational Science Award).

Toutes les expériences sur les animaux réalisées à la suite de ce protocole doivent être approuvées par le Comité institutionnel respectif de soins et d’utilisation des animaux (IACUC). Toutes les procédures décrites ici ont été approuvées par IACUC UT Health San Antonio.
1. Transfert adoptif des cellules T P14 dans les receveurs de C57BL/6 et infection par le LCMV
<ol><li>Utilisez des souris P14 à l’âge de 6 à 12 semaines. Assurez-vous que le sexe de la souris transgéniq...

<ol>
	<li>Mueller, S. N., Gebhardt, T., Carbone, F. R., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T+cell+subsets,+migration+patterns,+and+tissue+residence.">Memory T cell subsets, migration patterns, and tissue residence.</a> Annual Review of Immunology. 31, 137-161 (2013).</li><li>Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+memory+T+cells:+local+specialists+in+immune+defence.">Tissue-resident memory T cells: local specialists in immune defence.</a> Nature Reviews: Immunology. 16, 79-89 (2016).</li><li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease.">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nature Medicine. 21, 688-697 (2015).</li><li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+memory.+Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses.">T cell memory. Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346, 98-101 (2014).</li><li>Thome, J. J., Farber, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+concepts+in+tissue-resident+T+cells:+lessons+from+humans.">Emerging concepts in tissue-resident T cells: lessons from humans.</a> Trends in Immunology. 36, 428-435 (2015).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hobit+and+Blimp1+instruct+a+universal+transcriptional+program+of+tissue+residency+in+lymphocytes.">Hobit and Blimp1 instruct a universal transcriptional program of tissue residency in lymphocytes.</a> Science. 352, 459-463 (2016).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-box+Transcription+Factors+Combine+with+the+Cytokines+TGF-beta+and+IL-15+to+Control+Tissue-Resident+Memory+T+Cell+Fate.">T-box Transcription Factors Combine with the Cytokines TGF-beta and IL-15 to Control Tissue-Resident Memory T Cell Fate.</a> Immunity. 43, 1101-1111 (2015).</li><li>Milner, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx3+programs+CD8(+)+T+cell+residency+in+non-lymphoid+tissues+and+tumours.">Runx3 programs CD8(+) T cell residency in non-lymphoid tissues and tumours.</a> Nature. 552, 253-257 (2017).</li><li>Liu, Y., Ma, C., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Specific+Control+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells.">Tissue-Specific Control of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Critical Reviews in Immunology. 38, 79-103 (2018).</li><li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance.">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161, 737-749 (2015).</li><li>Qiu, Z., Sheridan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+Lymphocytes+from+the+Mouse+Small+Intestinal+Immune+System.">Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e57281 (2018).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9, 209-222 (2014).</li><li>Ma, C., Mishra, S., Demel, E. L., Liu, Y., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+Controls+the+Formation+of+Kidney-Resident+T+Cells+via+Promoting+Effector+T+Cell+Extravasation.">TGF-beta Controls the Formation of Kidney-Resident T Cells via Promoting Effector T Cell Extravasation.</a> Journal of Immunology. 198, 749-756 (2017).</li><li>Gebhardt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+patterns+of+peripheral+migration+by+memory+CD4++and+CD8++T+cells.">Different patterns of peripheral migration by memory CD4+ and CD8+ T cells.</a> Nature. 477, 216-219 (2011).</li><li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARTC2.2/P2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8(+)+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets.">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8(+) T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> Journal of Immunology. 202, 2153-2163 (2019).</li><li>Fernandez-Ruiz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver-Resident+Memory+CD8(+)+T+Cells+Form+a+Front-Line+Defense+against+Malaria+Liver-Stage+Infection.">Liver-Resident Memory CD8(+) T Cells Form a Front-Line Defense against Malaria Liver-Stage Infection.</a> Immunity. 45, 889-902 (2016).</li><li>Beura, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalizing+the+environment+recapitulates+adult+human+immune+traits+in+laboratory+mice.">Normalizing the environment recapitulates adult human immune traits in laboratory mice.</a> Nature. 532, 512-516 (2016).</li></ol>

Comme l’immunité spécifique aux tissus est un domaine de recherche en expansion rapide, l’accumulation de preuves suggère que les cellules immunitaires, en particulier la population de lymphocytes peuvent être identifiés dans presque tous les organes chez les souris adultes humaines ou infectées ou immunisées. Le modèle d’infection de souris de LCMV est un modèle bien établi pour étudier la réponse de cellule T antigène-spécifique, l’effecteur et la différenciation de cellule T de mémoire comprena...

Les cellules T de mémoire tissulaire(RMT)représentent l’une des populations de cellules T les plus abondantes chez les souris humaines adultes et infectées. Lescellules T RM fournissent la première ligne de défense immunitaire et sont impliquées de façon critique dans divers processus physiologiques et pathologiques1,2,3,4,5. En comparaison avec les cellules T circulant, les cellules TRM portent des marqueurs de surface distincts avec des programmes de transcription uniques6,7,8. L’élargissement de nos connaissancesen biologie de la RMT est la clé pour comprendre les réponses des cellules T, ce qui est essentiel au développement futur de vaccins et d’immunothérapies à base de cellules T.
En plus des marqueurs moléculaires couramment partagés de TRMdans tous les tissus non lymphoïdes, l’accumulation de preuves suggère que les dispositifs tissulaires spécifiques sont un composant central de labiologie de RM9de T. Rein abrite de nombreuses cellules immunitaires, y comprisles cellules RM T après l’infection et offre une excellente occasion d’étudier la biologiedes cellules RM T dans un tissu non muqueux. L’infection aiguë de LCMV (virus lymphocytique de choriomeningitis) par voie intraperitoneal est un modèle systémique bien établi d’infection pour étudier des réponses antigène-spécifiques de cellule T chez les souris. L’infection est généralement résolue en 7-10 jours chez les souris de type sauvage et laisser un grand nombre de cellules T mémoire spécifiques au LCMV dans une variété de tissus, y compris le rein10. Les souris transgéniques P14 TCR (récepteur des lymphocytes T) portent des lymphocytes CD8+ T reconnaissent l’un des épitopes immuno-dominants du LCMV présentés par la molécule H2-D B de la molécule H2-Dde classe I (complexe d’histocompatibilité majeure de classe I) chez les souris C57BL/6. Combinant le transfert adoptif de cellule T de P14 agréablement marqué et l’infection de LCMV chez les souris, CD8 + effecteuret cellules de T de mémoire sont suivis, y compris la différenciation et l’homéostasie de RM de T.
Dans certains tissus de barrière, tels que le compartiment intraepithelial intestinal de lymphocytes (IEL) et les glandes salivaires, la procédure établie d’isolement de lymphocyte donne le pourcentage élevé descellules de RM de T avec la contamination minimale de cellule T par sang dans le modèle11de souris de LCMV. Cependant, dans les tissus non barrière, tels que le rein, le réseau vasculaire dense contient un grand nombre de cellules CD8+ T circulant. Il a été bien documenté que même la perfusion réussie ne peut pas supprimer efficacement toutes les cellules CD8+ T en circulation. Pour surmonter cet obstacle technique, la coloration intravasculaire d’anticorps a été établie comme l’une des techniques les plus couramment employées dans leslaboratoires de RM de T12. En bref, 3-5 minutes avant l’euthanasie, 3 anticorps anti-CD8 μg/souris (pour étiqueter les lymphocytes CD8+ T) sont livrés par voie intraveineuse. La paroi intacte des vaisseaux sanguins empêche la diffusion rapide de l’anticorps dans ce court laps de temps (c.-à-d. 3-5 minutes) et seules les cellules intravasculaires sont étiquetées. Suivant le protocole standard d’isolement de lymphocyte, les cellules intravasculaires contre extravascular peuvent être facilement distinguées utilisant la cytométrie de flux.
Ici, nous allons décrire un protocole standard couramment utilisé dans les laboratoires TRM pour effectuer l’étiquetage intravasculaire, l’isolement des lymphocytes et l’analyse de cytométrie du flux des cellules rénales CD8+ T à l’aide d’une souris C57BL/6 qui a reçu des lymphocytes T CD45.1+ P14 et l’infection par le LCMV 30 joursavant 13. Le même protocole peut être utilisé pour étudier à la fois les cellules T effectrices et de mémoire dans le rein.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37C incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin a-CD8a antibody(Clone 53-6.7)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0081-U025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30073.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collegenase B</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11088807001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Graduated Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS 5692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mojosort Mouse CD8 Na&#239;ve T Cells Isolation Kit</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>480043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>overhead heat lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00333PZZG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17089101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30096.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid Brass Mouse Restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc</td>
			<td>SAI-MBR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swing Bucket Centrifuge with refrigerator</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture 6-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis

La cellule T de mémoire de tissu-résident(RMT)est un domaine rapidement croissant de recherche d’immunologie. Isoler les lymphocytes T de divers tissus non lymphoïdes est l’une des étapes clés pour étudier lesRMT. Il existe de légères variations dans les protocoles d’isolement des lymphocytes pour différents organes. Le rein est un organe non lymphoïde essentiel avec de nombreuses infiltrations de cellules immunitaires, surtout après l’exposition aux pathogènes ou l’activation auto-immune. Ces dernières années, plusieurs laboratoires, y compris le nôtre ont commencé à caractériser les cellules CD8 + Trésidentes rénales dans divers milieux physiologiques et pathologiques chez la souris et chez l’homme. En raison de l’abondance des lymphocytes T, le rein représente un organe modèle attrayant pour étudierles RMTdans les tissus non muqueux ou non-barrière. Ici, nous allons décrire un protocole couramment utilisé dans les laboratoires axéssurla RM T pour isoler les cellules CD8+ T des reins de souris à la suite d’une infection virale systémique. En bref, à l’aide d’un modèle aigu d’infection par le virus de la chorioméningite lymphocytique (LCMV) chez les souris C57BL/6, nous démontrons l’étiquetage intravasculaire des lymphocytes CD8+ T, la digestion enzymatique et la centrifugation du gradient de densité pour isoler et enrichir les lymphocytes des reins de souris afin de préparer les échantillons à l’analyse subséquente de la cytométrie du débit.

Le protocole décrit ici est résumé dans un diagramme de flux (Figure 1A). Au jour 30 infection de poteau de LCMV, nous avons exécuté l’étiquetage intravasculaire des cellules CD8+ T. 5 minutes plus tard, les deux reins de l’animal ont été disséqués, hachés finement et soumis à la digestion des collagènes. Les lymphocytes ont été purifiés à partir des échantillons digérés par centrifugation percoll et analysés par cytométrie d’écoulement. Comme le montr...

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Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Suite à une infection virale, le rein abrite un nombre relativement important de cellules CD8+ T et offre la possibilité d’étudier les lymphocytes TRM non muqueux. Ici, nous décrivons un protocole pour isoler les lymphocytes rénaux de souris pour l’analyse de cytométrie de flux.

Isolement des cellules CD8+ T résidentes du rein de souris pour l’analyse de cytométrie de flux

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

Les cellules CD8+T comportent des caractéristiques distinctes dans différents tissus, comme un exemple critique de tissu non muqueux et non lymphoïde. Il est essentiel de caractériser directement les cellules réniennes pour bien comprendre la biologie des cellules T. Ici nous démontrerons notre méthode commode pour isoler les cellules CD8+T réniennes-résidentes accommodant l’analyse suivante de cytométrie de flux.Cette méthode pourrait fournir un aperçu des études des cellules CD8+T d’effecteur et de mémoire générées après des infections aussi bien que des réponses autoimmunes. La procédure sera effectuée par le Dr Chaoyu Ma, chercheur scientifique pour mon laboratoire. Commencez par diluer l’anticorps alpha biotine anti CD8 à 15 microgrammes par millilitre dans PBS, en vous assurant qu’il y a suffisamment pour administrer 200 microlitres à chaque souris.Avant l’injection, chauffer la veine arrière de la souris avec une lampe thermique aérienne pendant cinq à dix minutes pour la dilater. Dessinez 200 microlitres du mélange d’anticorps pré dilué dans une seringue à insuline de calibre 28 et éliminez les bulles d’air en déplaçant le piston de haut en bas. Pliez l’aiguille pour créer un angle de 150 degrés entre l’aiguille et la seringue, biseauter, de sorte que l’aiguille est parallèle à la veine de la queue.Retenez la souris avec un restrainer de rongeur et pulvérisez la queue avec 70% d’éthanol pour rendre la veine clairement visible. Tenez la queue à l’extrémité distale avec le pouce et les doigts du milieu de la main non dominante, puis placez l’index sous le site d’injection. Avec la main dominante insérer l’aiguille dans la veine en parallèle vers la direction du cœur et injecter lentement 200 microlitres de l’anticorps.Retirer l’aiguille et compresser doucement le site d’injection jusqu’à ce que le saignement s’arrête. Après avoir euthanasié la souris, disséquez le rein avec des ciseaux et transférez-le dans un tube de micro centrifugeuse de 1,5 millilitre. Laissez les échantillons sur la glace jusqu’à ce qu’ils soient traités plus avant.Préparer des assiettes de six puits avec trois millilitres de solution de digestion dans chaque puits, en utilisant un puits par souris, et les stocker sur la glace. Ajouter 300 microlitres de solution de digestion dans chaque tube d’échantillon et hacher les échantillons de rein avec un ciseaux à ressort droit. Transférer les échantillons de rein hachés dans les plaques de six puits avec la solution de digestion.Incuber les échantillons à 37 degrés Celsius avec un basculement doux pendant 45 minutes, puis homogénéiser le tissu avec la bride de piston d’une seringue de trois millilitres et le transférer dans des tubes coniques de 15 millilitres. Faites tourner les échantillons à 500 fois g et quatre degrés Celsius pendant cinq minutes. Retirez le supernatant et resuspendez la pastille en trois millilitres de RPMI avec 10%FCS.Faites tourner l’échantillon à 500 fois g et quatre degrés Celsius pendant cinq minutes, puis retirez le supernatant et resuspendez la pastille cellulaire avec cinq millilitres de gradient de densité moyen et de mélange RPMI. Placez la pointe d’une pipette de trois millilitres contenant trois millilitres de gradient de densité de 67% moyenne et PBS directement au fond de chaque tube et relâchez lentement la solution de sorte que la solution lourde forme une couche distincte au fond. Faites tourner les échantillons à 900 fois g pendant 20 minutes avec des réglages réduits de l’accélérateur et des freins, puis retirez soigneusement les tubes de la centrifugeuse sans déranger les couches.Retirez la couche supérieure avec une pipette de transfert sans toucher la couche de lymphocyte et transférez la couche de lymphocyte à un nouveau tube de 15 millilitres. Remplissez le tube avec PBS et 5%FCS, puis mélangez en inversant lentement le tube quatre à six fois. Après avoir centrifugé les échantillons à 500 fois G et quatre degrés Celsius pendant cinq minutes, retirez le supernatant et réutilisez la pastille cellulaire avec 500 microlitres de milieu RPMI complet.Les cellules sont maintenant prêtes pour la coloration de cytométrie d’écoulement. Même après l’enrichissement des lymphocytes à médiation centrifugeuse de densité, il était très courant de voir une grande partie des non-lymphocytes dans le produit final. Cependant, après avoir gagné sur les lymphocytes vivants, les lymphocytes CD8+T étaient faciles à identifier.Comme prévu, seules les cellules CD8+T extra-vasculaires ont efficacement acquis des phénotypes de cellules T de mémoire résident tissulaire, tels que la déréglementation du CD69 et la downregulation du Ly6C. Contrairement aux souris infectées, la grande majorité des cellules CD8+T isolées de jeunes souris naïves logées dans l’installation de FPS ont été étiquetées avec un anticorps alpha CD8 et appartenaient donc au compartiment intravasculaire. Cette technique a considérablement accéléré l’étude des cellules immunitaires résidentes des tissus dans les organes densément vascularisés.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Débit analyse par cytométrie de cellules immunitaires dans aortes murin

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Recherche

Immunologie et infection

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Imagerie animal entier et cytométrie de flux techniques pour T CD8 + Analyse des réponses spécifiques de l&#39;antigène de cellule après nanoparticules vaccination

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

L&#39;utilisation de la cytométrie de flux pour évaluer l&#39;état de la chromatine dans les cellules T

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolement et analyse par cytométrie en flux des cellules immunitaires du cerveau ischémique souris

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescence-tri cellulaire activé pour la purification de cellules dendritiques plasmacytoïdes de la moelle osseuse de souris

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

Isolement et cytométrie de flux Analyse de Human Endocervical Gamma Delta cellules T

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Mesure de cellules T alloréactivité basés sur l&#39;imagerie cytométrie en flux

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

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Isolement et la Culture In Vitro de Macrophages alvéolaires murines et humaines

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

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Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

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In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...