Name: isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis
Uploaded: 2020-06-27T14:00:00
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यह काम NIH अनुदान AI125701 और AI139721, कैंसर अनुसंधान संस्थान क्लिप कार्यक्रम और अमेरिकन कैंसर सोसायटी अनुदान RSG-18-222-01-LIB द्वारा समर्थित है N.Z. हम कार्ला गोरेना और सेबेस्टियन मोंटाग्निनो को फ्लो साइटोमेट्री फैसिलिटी से धन्यवाद देते हैं । फ्लो साइटोमेट्री साझा संसाधन सुविधा में उत्पन्न डेटा को सैन एंटोनियो (UTHSCSA), NIH/NCI अनुदान P30 CA054174-20 (यूटीएचएससीएसए में नैदानिक और अनुवाद अनुसंधान केंद्र [सीटीआरसी] में टेक्सास स्वास्थ्य विज्ञान केंद्र के विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित किया गया था, और UL1 TR001120 (नैदानिक और अनुवाद विज्ञान पुरस्कार) ।

इस प्रोटोकॉल के बाद किए गए सभी पशु प्रयोगों को संबंधित संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया जाना चाहिए । यहां वर्णित सभी प्रक्रियाओं को आईएसीयूसी यूटी हेल्थ सैन एंटोनियो ने मंज?...

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	<li>Mueller, S. N., Gebhardt, T., Carbone, F. R., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T+cell+subsets,+migration+patterns,+and+tissue+residence.">Memory T cell subsets, migration patterns, and tissue residence.</a> Annual Review of Immunology. 31, 137-161 (2013).</li><li>Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+memory+T+cells:+local+specialists+in+immune+defence.">Tissue-resident memory T cells: local specialists in immune defence.</a> Nature Reviews: Immunology. 16, 79-89 (2016).</li><li>Park, C. O., Kupper, T. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-box+Transcription+Factors+Combine+with+the+Cytokines+TGF-beta+and+IL-15+to+Control+Tissue-Resident+Memory+T+Cell+Fate.">T-box Transcription Factors Combine with the Cytokines TGF-beta and IL-15 to Control Tissue-Resident Memory T Cell Fate.</a> Immunity. 43, 1101-1111 (2015).</li><li>Milner, J. 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L., Liu, Y., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+Controls+the+Formation+of+Kidney-Resident+T+Cells+via+Promoting+Effector+T+Cell+Extravasation.">TGF-beta Controls the Formation of Kidney-Resident T Cells via Promoting Effector T Cell Extravasation.</a> Journal of Immunology. 198, 749-756 (2017).</li><li>Gebhardt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+patterns+of+peripheral+migration+by+memory+CD4++and+CD8++T+cells.">Different patterns of peripheral migration by memory CD4+ and CD8+ T cells.</a> Nature. 477, 216-219 (2011).</li><li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARTC2.2/P2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8(+)+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets.">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8(+) T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> Journal of Immunology. 202, 2153-2163 (2019).</li><li>Fernandez-Ruiz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver-Resident+Memory+CD8(+)+T+Cells+Form+a+Front-Line+Defense+against+Malaria+Liver-Stage+Infection.">Liver-Resident Memory CD8(+) T Cells Form a Front-Line Defense against Malaria Liver-Stage Infection.</a> Immunity. 45, 889-902 (2016).</li><li>Beura, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalizing+the+environment+recapitulates+adult+human+immune+traits+in+laboratory+mice.">Normalizing the environment recapitulates adult human immune traits in laboratory mice.</a> Nature. 532, 512-516 (2016).</li></ol>

चूंकि ऊतक विशिष्ट प्रतिरक्षा अनुसंधान का एक तेजी से विस्तार क्षेत्र है, सबूत जमा करने से पता चलता है कि प्रतिरक्षा कोशिकाओं, विशेष रूप से लिम्फोसाइट्स आबादी वयस्क मानव या संक्रमित या प्रतिरक्षित चूह?...

ऊतक-निवासी स्मृति (टीआरएम)टी कोशिकाएं वयस्क मानव और संक्रमित चूहों में सबसे प्रचुर मात्रा में टी सेल आबादी में से एक का प्रतिनिधित्व करती हैं। टीआरएम कोशिकाएं प्रतिरक्षा रक्षा की पहली पंक्ति प्रदान करती हैं और विभिन्न शारीरिक और रोग प्रक्रियाओं में गंभीर रूप से शामिल होती हैं1,2,3,4,5. परिसंचारी टी कोशिकाओं के साथ तुलना करते हुए, टीआरएम कोशिकाओं अद्वितीय प्रतिलेखनकार्यक्रम6,7,8के साथ अलग सतह मार्कर ले । टीआरएम जीव विज्ञान के हमारे ज्ञान का विस्तार टी सेल प्रतिक्रियाओं को समझने की कुंजी है जो टी सेल आधारित टीकों और इम्यूनोथेरपी के भविष्य के विकास के लिए आवश्यक है ।
सभी गैर-लिम्फोइड ऊतकों में टीआरएमएस के आमतौर पर साझा आणविक मार्कर के अलावा, जमा करने वाले सबूत बताते हैं कि ऊतक-विशिष्ट विशेषताएं टीआरएम जीव विज्ञान9का एक केंद्रीय घटक हैं। गुर्दे संक्रमण के बाद टीआरएम कोशिकाओं सहित कई प्रतिरक्षा कोशिकाओं बंदरगाहों और एक महान एक गैर म्यूकोसल ऊतक में टीआरएम सेल जीव विज्ञान का अध्ययन करने का अवसर प्रदान करता है । इंट्रापेरिटोनियल मार्ग के माध्यम से तीव्र एलसीएमवी (लिम्फोसाइटिक कोरियोमेनिनाइटिस वायरस) संक्रमण चूहों में एंटीजन-विशिष्ट टी सेल प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित प्रणालीगत संक्रमण मॉडल है। संक्रमण आमतौर पर जंगली प्रकार के चूहों में 7-10 दिनों में हल हो जाता है और गुर्दे10सहित विभिन्न ऊतकों में बड़ी संख्या में एलसीएमवी-विशिष्ट मेमोरी टी कोशिकाओं को छोड़ देता है। P14 TCR (टी सेल रिसेप्टर) ट्रांसजेनिक चूहों सीडी 8+ टी कोशिकाओं को ले जाने के लिए MHC-I (वर्ग मैं प्रमुख histocompatibility परिसर) C57BL/6 चूहों में अणु H2-Dबी द्वारा प्रस्तुत LCMV के प्रतिरक्षा प्रमुख epitopes में से एक को पहचान । चूहों में congenically चिह्नित P14 टी सेल दत्तक हस्तांतरण और एलसीएमवी संक्रमण के संयोजन, सीडी 8+ प्रभावक और स्मृति टी कोशिकाओं को ट्रैक किया जाता है, जिसमें टीआरएम भेदभाव और होमोस्टेसिस शामिल हैं।
कुछ बाधा ऊतकों में, जैसे आंतों के इंट्रापिहेलियल लिम्फोसाइट्स (आईईएल) डिब्बे और लार ग्रंथियों, स्थापित लिम्फोसाइट आइसोलेशन प्रक्रिया माउस एलसीएमवी मॉडल11में न्यूनतम रक्त जनित टी सेल संदूषण के साथ टीआरएम कोशिकाओं का उच्च प्रतिशत पैदावार करती है। हालांकि, गैर-बाधा ऊतकों में, जैसे गुर्दे, घने संवहनी नेटवर्क में बड़ी संख्या में परिसंचारी सीडी 8+ टी कोशिकाएं होती हैं। यह अच्छी तरह से प्रलेखित किया गया है कि यहां तक कि सफल परफ्यूजन कुशलता से सभी परिसंचारी सीडी 8+ टी कोशिकाओं को दूर नहीं कर सकते हैं। इस तकनीकी बाधा को दूर करने के लिए, इंट्रावैस्कुलर एंटीबॉडी धुंधला टी आरएम लैब्स12में सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली तकनीकों में से एक के रूप मेंस्थापित किया गया है। संक्षेप में, इच्छामृत्यु से 3-5 मिनट पहले, 3 μg/माउस एंटी-सीडी8 एंटीबॉडी (सीडी 8+ टी कोशिकाओं को लेबल करने के लिए) नसों के द्वारा वितरित किया जाता है। अक्षुण्ण रक्त वाहिका दीवार इस कम समय (यानी, 3-5 मिनट) के भीतर एंटीबॉडी के तेजी से प्रसार को रोकती है और केवल इंट्रावैस्कुलर कोशिकाओं को लेबल किया जाता है। मानक लिम्फोसाइट आइसोलेशन प्रोटोकॉल के बाद, इंट्रावैस्कुलर बनाम एक्स्ट्रास्कुलर कोशिकाओं को प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग करके आसानी से प्रतिष्ठित किया जा सकता है।
यहां, हम आमतौर पर टीआरएम लैब्स में इंट्रावैस्कुलर लेबलिंग, लिम्फोसाइट आइसोलेशन और फ्लो साइटोमेट्री एनालिसिस का इस्तेमाल करने के लिए एक मानक प्रोटोकॉल का वर्णन करेंगे, जिसमें C57BL/6 माउस का उपयोग करके किडनी सीडी 8+ टी कोशिकाओं का प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण किया गया है जिसे CD45.1+ P14 टी कोशिकाएं और एलसीएमवी संक्रमण13 से 30दिन पहले प्राप्त हुआ है । एक ही प्रोटोकॉल का उपयोग गुर्दे में प्रभावक और मेमोरी टी कोशिकाओं दोनों का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37C incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin a-CD8a antibody(Clone 53-6.7)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0081-U025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30073.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collegenase B</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11088807001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Graduated Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS 5692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mojosort Mouse CD8 Na&#239;ve T Cells Isolation Kit</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>480043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>overhead heat lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00333PZZG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17089101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30096.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid Brass Mouse Restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc</td>
			<td>SAI-MBR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swing Bucket Centrifuge with refrigerator</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture 6-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis

ऊतक-निवासी स्मृति टी सेल (टीआरएम)इम्यूनोलॉजी अनुसंधान का एक तेजी से विस्तार क्षेत्र है। विभिन्न गैर-लिम्फोइड ऊतकों से टी कोशिकाओं को अलग करना टीआरएमएस की जांच करने के लिए महत्वपूर्ण चरणों में से एक है। विभिन्न अंगों के लिए लिम्फोसाइट आइसोलेशन प्रोटोकॉल में मामूली भिन्नताएं हैं। गुर्दे विशेष रूप से रोगजनक जोखिम या ऑटोइम्यून सक्रियण के बाद कई प्रतिरक्षा कोशिका घुसपैठ के साथ एक आवश्यक गैर-लिम्फोइड अंग है। हाल के वर्षों में, हमारे अपने सहित कई प्रयोगशालाओं दोनों माउस और मानव में विभिन्न शारीरिक और रोग सेटिंग्स में गुर्दे निवासी सीडी 8+ टी कोशिकाओं की विशेषता शुरू कर दिया है । टी लिम्फोसाइट्स की बहुतायत के कारण, गुर्दे गैर-म्यूकोसल या गैर-बाधा ऊतकों में टीआरएमएस का अध्ययन करने के लिए एक आकर्षक मॉडल अंग का प्रतिनिधित्व करता है। यहां, हम प्रणालीगत वायरल संक्रमण के बाद माउस गुर्दे से सीडी 8+ टी कोशिकाओं को अलग करने के लिए आमतौर पर टीआरएम-केंद्रितप्रयोगशालाओं में उपयोग किए जाने वाले प्रोटोकॉल का वर्णन करेंगे। संक्षेप में, C57BL/6 चूहों में एक तीव्र लिम्फोसिटिक कोरियोमेनिनाइटिस वायरस (एलसीएमवी) संक्रमण मॉडल का उपयोग करके, हम बाद के प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण के लिए नमूने तैयार करने के लिए माउस गुर्दे से लिम्फोसाइट्स को अलग और समृद्ध करने के लिए इंट्रावैस्कुलर सीडी 8+ टी सेल लेबलिंग, एंजाइमैटिक पाचन, और घनत्व ढाल अपकेंद्रित्र का प्रदर्शन करते हैं।

यहां वर्णित प्रोटोकॉल एक प्रवाह चार्ट(चित्रा 1A)में संक्षेप में है । 30 पोस्ट एलसीएमवी संक्रमण के दिन, हमने सीडी 8+ टी कोशिकाओं की इंट्रावैस्कुलर लेबलिंग का प्रदर्शन किया। 5 मिनट बाद, जानवर ?...

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Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

वायरल संक्रमण के बाद, गुर्दे सीडी 8+ टी कोशिकाओं की एक अपेक्षाकृत बड़ी संख्या बंदरगाहों और गैर mucosal टीआरएम कोशिकाओं का अध्ययन करने का अवसर प्रदान करता है । यहां, हम प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण के लिए माउस किडनी लिम्फोसाइट्स को अलग करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं।

प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण के लिए माउस किडनी-रेजिडेंट सीडी 8+ टी कोशिकाओं का अलगाव

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

सीडी 8 + टी कोशिकाओं में गैर-म्यूकोसल और गैर-लिम्फोइड ऊतक का एक महत्वपूर्ण उदाहरण के रूप में विभिन्न ऊतकों में अलग-अलग विशेषताएं होती हैं। टी-सेल जीव विज्ञान को पूरी तरह से समझने के लिए सीधे किडनी-निवासी कोशिकाओं की विशेषता होना आवश्यक है। यहां हम गुर्दे के निवासी सीडी 8 + टी कोशिकाओं को अलग करने के लिए हमारी सुविधाजनक विधि का प्रदर्शन करेंगे जो बाद के प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण को समायोजित करते हैं।यह विधि संक्रमण के साथ-साथ ऑटोइम्यून प्रतिक्रियाओं के बाद उत्पन्न प्रभावक और मेमोरी सीडी 8 + टी कोशिकाओं के अध्ययनों में अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकती है। प्रक्रिया मेरी प्रयोगशाला के लिए एक अनुसंधान वैज्ञानिक डॉ Chaoyu Ma द्वारा किया जाएगा । पीबीएस में 15 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर के लिए बायोटिन एंटी सीडी 8 अल्फा एंटीबॉडी को कमजोर करके शुरू करें, जिससे यह सुनिश्चित हो सके कि प्रत्येक माउस को 200 माइक्रोलीटर प्रशासन करने के लिए पर्याप्त है।इंजेक्शन से पहले, माउस की पूंछ की नस को पांच से 10 मिनट के लिए ओवरहेड हीट लैंप के साथ गर्म करें ताकि इसे फैलाया जा सके। एक 28 गेज इंसुलिन सिरिंज में पूर्व पतला एंटीबॉडी मिश्रण के 200 माइक्रोलीटर ड्रा और पिस्टन ऊपर और नीचे ले जाकर किसी भी हवा बुलबुले को दूर। सुई और सिरिंज के बीच 150 डिग्री का कोण बनाने के लिए सुई को मोड़ें, ऊपर रहें, ताकि सुई पूंछ की नस के समानांतर हो।एक कृंतक निरोधक के साथ माउस को नियंत्रित करें और नस को स्पष्ट रूप से दिखाई देने के लिए 70% इथेनॉल के साथ पूंछ स्प्रे करें। गैर-प्रमुख हाथ के अंगूठे और मध्य उंगलियों के साथ डिस्टल एंड पर पूंछ को पकड़ें, फिर इंजेक्शन साइट के नीचे इंडेक्स फिंगर रखें। प्रमुख हाथ के साथ दिल की दिशा की ओर समानांतर में नस में सुई डालें और धीरे-धीरे एंटीबॉडी के 200 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करें।सुई निकालें और धीरे से इंजेक्शन साइट सेक जब तक खून बह रहा बंद हो जाता है। माउस को इच्छामृत्यु के बाद, गुर्दे को कैंची से काटना और इसे 1.5 मिलीलीटर माइक्रो सेंट्रलाइज ट्यूब में स्थानांतरित करें। आगे की प्रक्रिया तक बर्फ पर नमूनों को छोड़ दें।प्रत्येक अच्छी तरह से पाचन समाधान के तीन मिलीलीटर के साथ छह अच्छी तरह से प्लेटें तैयार करें, एक अच्छी तरह से प्रति माउस का उपयोग करें, और उन्हें बर्फ पर स्टोर करें। प्रत्येक नमूना ट्यूब में पाचन समाधान के 300 माइक्रोलीटर जोड़ें और एक सीधे वसंत कैंची के साथ गुर्दे के नमूनों कीमा। कीमा बनाया हुआ गुर्दे के नमूनों को पाचन समाधान के साथ छह अच्छी प्लेटों में स्थानांतरित करें।४५ मिनट के लिए कोमल कमाल के साथ ३७ डिग्री सेल्सियस पर नमूनों को इनक्यूबेट, तो एक तीन मिलीलीटर सिरिंज के प्लंजर flange के साथ ऊतक समरूप और यह 15 मिलीलीटर शंकु ट्यूबों को स्थानांतरित । नमूनों को ५०० बार जी और चार डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए नीचे स्पिन । सुपरनैंट निकालें और 10% एफसीएस के साथ आरपीएमआई के तीन मिलीलीटर में गोली को फिर से खर्च करें।पांच मिनट के लिए 500 बार जी और चार डिग्री सेल्सियस पर नमूना नीचे स्पिन, तो supernatant हटाने और 44% घनत्व ढाल माध्यम और RPMI मिश्रण के पांच मिलीलीटर के साथ सेल गोली resuspend। एक तीन मिलीलीटर पिपेट की नोक डालें जिसमें 67% घनत्व ढाल माध्यम और पीबीएस के तीन मिलीलीटर सीधे प्रत्येक ट्यूब के नीचे होते हैं और धीरे-धीरे समाधान जारी करते हैं ताकि भारी समाधान नीचे एक अलग परत बनाता है। कम त्वरक और ब्रेक सेटिंग्स के साथ 20 मिनट के लिए 900 बार जी पर नमूनों को स्पिन करें, फिर परतों को परेशान किए बिना अपकेंद्रित्र से ट्यूबों को ध्यान से हटा दें।लिम्फोसाइट परत को छूने के बिना एक हस्तांतरण पिपेट के साथ शीर्ष परत को हटा दें और लिम्फोसाइट परत को एक नई 15-मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें। पीबीएस और 5% FCS के साथ ट्यूब भरें, तो धीरे से ट्यूब चार से छह बार उलटा द्वारा मिश्रण । नमूनों को पांच मिनट के लिए ५०० बार जी और चार डिग्री सेल्सियस पर अपकेंद्री करने के बाद, सुपरनैंट को हटा दें और पूर्ण आरपीएमआई माध्यम के ५०० माइक्रोलीटर के साथ सेल पेलेट को फिर से खर्च करें ।कोशिकाएं अब फ्लो साइटोमेट्री स्टेनिंग के लिए तैयार हैं। घनत्व अपकेंद्रित्र-मध्यस्थता लिम्फोसाइट संवर्धन के बाद भी, अंतिम उत्पाद में गैर लिम्फोसाइट्स का एक बड़ा हिस्सा देखना बहुत आम था। हालांकि, लाइव लिम्फोसाइट्स पर प्राप्त करने के बाद, सीडी 8 + टी लिम्फोसाइट्स की पहचान करना आसान था।जैसा कि अपेक्षित था, केवल अतिरिक्त संवहनी सीडी 8 + टी कोशिकाओं ने कुशलतापूर्वक ऊतक निवासी स्मृति टी-सेल फेनोटाइप का अधिग्रहण किया, जैसे सीडी 69 का अपरेगुलेशन और Ly6C का डाउनरेगुलेशन। संक्रमित चूहों के विपरीत, एसपीएफ सुविधा में रखे युवा भोले चूहों से अलग सीडी 8 + टी कोशिकाओं के विशाल बहुमत सीडी 8 अल्फा एंटीबॉडी के साथ लेबल किया गया था और इसलिए इंट्रावैस्कुलर डिब्बे के थे । इस तकनीक ने घनी संवहनी अंगों में ऊतक-निवासी प्रतिरक्षा कोशिकाओं की जांच में काफी तेजी लाई है।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

प्रतिरक्षा कोशिकाओं के भीतर murine aortas Cytometry विश्लेषण फ्लो

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Nanoparticle के टीकाकरण के बाद के विश्लेषण से प्रतिजन विशेष CD8 + टी सेल प्रतिक्रिया के लिए पूरे पशु इमेजिंग और प्रवाह cytometric तकनीकों

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

फ्लो का उपयोग टी कोशिकाओं में chromatin की स्थिति का आकलन करने के लिए

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

अलगाव और इस्केमिक माउस मस्तिष्क से प्रतिरक्षा कोशिकाओं के प्रवाह cytometric विश्लेषण

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

माउस अस्थि मज्जा से Plasmacytoid वृक्ष के समान कोशिकाओं की शुद्धि के लिए प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल छंटनी

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

मानव endocervical गामा डेल्टा टी कोशिकाओं के अलगाव और प्रवाह cytometric विश्लेषण

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

टी सेल Alloreactivity का मापन इमेजिंग फ्लो का उपयोग करना

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

अलगाव और इन विट्रो संस्कृति Murine और मानव वायुकोशीय मैक्रोफेज

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

बहुरंगा प्रवाह Cytometry-टी कोशिकाओं में Mitochondria और Lysosomes के ठहराव आधारित

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

न्यूट्रोफिल-लाइनेज सेल के मास साइटोमेट्री विश्लेषण के लिए पूरे अस्थि मज्जा की तैयारी

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...