Name: isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis
Uploaded: 2020-06-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Questo lavoro è supportato dalle sovvenzioni NIH AI125701 e AI139721, dal programma CLIP del Cancer Research Institute e dalla sovvenzione RSG-18-222-01-LIB alla N.Z. Ringraziamo Karla Gorena e Sebastian Montagnino di Flow Cytometry Facility. I dati generati nel Flow Cytometry Shared Resource Facility sono stati supportati dall'University of Texas Health Science Center di San Antonio (UTHSCSA), dalla sovvenzione NIH/NCI P30 CA054174-20 (Clinical and Translational Research Center [CTRC] presso UTHSCSA) e ul1 TR001120 (Clinical and Translational Science Award).

Tutti gli esperimenti sugli animali eseguiti a seguito di questo protocollo devono essere approvati dal rispettivo Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali (IACUC). Tutte le procedure qui descritte sono state approvate da IACUC UT Health San Antonio.
1. Trasferimento adottivo di cellule P14 T in destinatari C57BL/6 e infezione da LCMV
<ol><li>Utilizzare topi P14 a 6-12 settimane di età. Assicurarsi che il sesso del topo transgenico P14 TCR donatore corrisponda al sesso dei t...

<ol>
	<li>Mueller, S. N., Gebhardt, T., Carbone, F. R., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T+cell+subsets,+migration+patterns,+and+tissue+residence.">Memory T cell subsets, migration patterns, and tissue residence.</a> Annual Review of Immunology. 31, 137-161 (2013).</li><li>Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+memory+T+cells:+local+specialists+in+immune+defence.">Tissue-resident memory T cells: local specialists in immune defence.</a> Nature Reviews: Immunology. 16, 79-89 (2016).</li><li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease.">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nature Medicine. 21, 688-697 (2015).</li><li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+memory.+Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses.">T cell memory. Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346, 98-101 (2014).</li><li>Thome, J. J., Farber, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+concepts+in+tissue-resident+T+cells:+lessons+from+humans.">Emerging concepts in tissue-resident T cells: lessons from humans.</a> Trends in Immunology. 36, 428-435 (2015).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hobit+and+Blimp1+instruct+a+universal+transcriptional+program+of+tissue+residency+in+lymphocytes.">Hobit and Blimp1 instruct a universal transcriptional program of tissue residency in lymphocytes.</a> Science. 352, 459-463 (2016).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-box+Transcription+Factors+Combine+with+the+Cytokines+TGF-beta+and+IL-15+to+Control+Tissue-Resident+Memory+T+Cell+Fate.">T-box Transcription Factors Combine with the Cytokines TGF-beta and IL-15 to Control Tissue-Resident Memory T Cell Fate.</a> Immunity. 43, 1101-1111 (2015).</li><li>Milner, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx3+programs+CD8(+)+T+cell+residency+in+non-lymphoid+tissues+and+tumours.">Runx3 programs CD8(+) T cell residency in non-lymphoid tissues and tumours.</a> Nature. 552, 253-257 (2017).</li><li>Liu, Y., Ma, C., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Specific+Control+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells.">Tissue-Specific Control of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Critical Reviews in Immunology. 38, 79-103 (2018).</li><li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance.">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161, 737-749 (2015).</li><li>Qiu, Z., Sheridan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+Lymphocytes+from+the+Mouse+Small+Intestinal+Immune+System.">Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e57281 (2018).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9, 209-222 (2014).</li><li>Ma, C., Mishra, S., Demel, E. L., Liu, Y., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+Controls+the+Formation+of+Kidney-Resident+T+Cells+via+Promoting+Effector+T+Cell+Extravasation.">TGF-beta Controls the Formation of Kidney-Resident T Cells via Promoting Effector T Cell Extravasation.</a> Journal of Immunology. 198, 749-756 (2017).</li><li>Gebhardt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+patterns+of+peripheral+migration+by+memory+CD4++and+CD8++T+cells.">Different patterns of peripheral migration by memory CD4+ and CD8+ T cells.</a> Nature. 477, 216-219 (2011).</li><li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARTC2.2/P2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8(+)+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets.">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8(+) T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> Journal of Immunology. 202, 2153-2163 (2019).</li><li>Fernandez-Ruiz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver-Resident+Memory+CD8(+)+T+Cells+Form+a+Front-Line+Defense+against+Malaria+Liver-Stage+Infection.">Liver-Resident Memory CD8(+) T Cells Form a Front-Line Defense against Malaria Liver-Stage Infection.</a> Immunity. 45, 889-902 (2016).</li><li>Beura, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalizing+the+environment+recapitulates+adult+human+immune+traits+in+laboratory+mice.">Normalizing the environment recapitulates adult human immune traits in laboratory mice.</a> Nature. 532, 512-516 (2016).</li></ol>

Poiché l'immunità specifica dei tessuti è un'area di ricerca in rapida espansione, l'accumulo di prove suggerisce che le cellule immunitarie, in particolare la popolazione di linfociti, possono essere identificate in quasi tutti gli organi di topi adulti umani o infetti o immunizzati. Il modello di infezione da topo LCMV è un modello consolidato per studiare la differenziazione cellulare T specifica dell'antigene, dell'effettore e della memoria, compresa la biologia TRM su più tessuti. Qui, abbiamo descri...

Le cellule T di memoria residente nei tessuti (TRM)rappresentano una delle popolazioni di cellule T più abbondanti nei topi adulti umani e infetti. Le cellule TRM forniscono la prima linea di difesa immunitaria e sono coinvolte criticamente in vari processi fisiologici epatologici 1,2,3,4,5. Confrontandosi con le cellule T circolanti, le celle TRM trasportano marcatori di superficie distinti con programmi di trascrizioneunivoci 6,7,8. Ampliare la nostra conoscenza della biologia TRM è la chiave per comprendere le risposte delle cellule T, che è essenziale per il futuro sviluppo di vaccini e immunoterapie a base di cellule T.
Oltre ai marcatori molecolari comunemente condivisi di TRMsu tutti i tessuti non linfoidi, l'accumulo di prove suggerisce che le caratteristiche specifiche dei tessuti sono una componente centrale della biologia TRM 9. Il rene ospita molte cellule immunitarie tra cui le cellule TRM dopo l'infezione e offre una grande opportunità per studiare la biologia cellulare TRM in un tessuto non mucoso. L'infezione acuta da LCMV (virus della coriomeningite linfocitica) attraverso la via intraperitoneale è un modello di infezione sistemica ben consolidato per studiare le risposte delle cellule T specifiche dell'antigene nei topi. L'infezione viene solitamente risolta in 7-10 giorni in topi di tipo selvatico e lascia un gran numero di cellule T di memoria specifiche di LCMV in una varietà di tessuti, incluso ilrene 10. I topi transgenici P14 TCR (T cell receptor) trasportano cellule CD8+ T riconoscono uno degli epitopi immuno-dominanti dell'LCMV presentati dalla molecola H2-D b della molecola H2-Db della classe I (complesso di istocompatibilità maggiore) nei topi C57BL/6. Viene monitorata la combinazione di trasferimento adottivo di cellule P14 T marcate congenicamente e infezione da LCMV nei topi, vengono monitorati l'effettore CD8+ e le cellule T di memoria, tra cui la differenziazione TRM e l'omeostasi.
In alcuni tessuti barriera, come il compartimento dei linfociti intraepiteliali intestinali (IEL) e le ghiandole salivari, la procedura di isolamento dei linfociti stabilita produceun'alta percentuale di cellule T RM con una contaminazione minima delle cellule T trasmessa dal sangue nel topo LCMV modello11. Tuttavia, nei tessuti non barriera, come il rene, la fitta rete vascolare contiene un gran numero di cellule CD8+ T circolanti. È stato ben documentato che anche una perfusione riuscita non può rimuovere in modo efficiente tutte le cellule CD8+ T circolanti. Per superare questo ostacolo tecnico, la colorazione degli anticorpi intravascolari è stata stabilita come una delle tecniche più comunemente utilizzate nei laboratori TRM 12. In breve, 3-5 minuti prima dell'eutanasia, 3 μg/ anticorpo anti-CD8 del mouse (per etichettare le cellule CD8+ T) vengono consegnati per via endovenosa. La parete intatta dei vasi sanguigni impedisce una rapida diffusione dell'anticorpo in questo breve periodo di tempo (cioè 3-5 minuti) e vengono etichettate solo le cellule intravascolari. Seguendo il protocollo standard di isolamento dei linfociti, le cellule intravascolari rispetto a quelle extravascolari possono essere facilmente distinte usando la citometria a flusso.
Qui, descriveremo un protocollo standard comunemente utilizzato nei laboratori TRM per eseguire l'etichettatura intravascolare, l'isolamento dei linfociti e l'analisi citometrica del flusso delle cellule REnali CD8+ T utilizzando un mouse C57BL/6 che ha ricevuto cellule CD45.1+ P14 T e infezione da LCMV 30 giorni primadelle 13. Lo stesso protocollo può essere utilizzato per studiare sia le cellule T dell'effettore che della memoria nel rene.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37C incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin a-CD8a antibody(Clone 53-6.7)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0081-U025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30073.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collegenase B</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11088807001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Graduated Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS 5692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mojosort Mouse CD8 Na&#239;ve T Cells Isolation Kit</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>480043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>overhead heat lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00333PZZG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17089101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30096.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid Brass Mouse Restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc</td>
			<td>SAI-MBR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swing Bucket Centrifuge with refrigerator</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture 6-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis

La cellula T di memoria residente nei tessuti (TRM)è un campo in rapida espansione della ricerca immunologica. Isolare le cellule T da vari tessuti non linfoidi è uno dei passaggi chiave per indagare leT RM. Ci sono lievi variazioni nei protocolli di isolamento dei linfociti per diversi organi. Il rene è un organo non linfoide essenziale con numerose infiltrazioni delle cellule immunitarie soprattutto dopo l'esposizione agli agenti patogeni o l'attivazione autoimmune. Negli ultimi anni, diversi laboratori tra cui il nostro hanno iniziato a caratterizzare cellule CD8+ T residenti nei reni in vari contesti fisiologici e patologici sia nel topo che nell'uomo. A causa dell'abbondanza di linfociti T, il rene rappresenta un organo modello attraente per studiare le TRMnei tessuti non mucosi o non barriera. Qui, descriveremo un protocollo comunemente usato nei laboratori focalizzati su TRMper isolare le cellule CD8+ T dai reni del topo a seguito di infezione virale sistemica. In breve, utilizzando un modello di infezione da virus della coriomeningite linfocitica acuta (LCMV) nei topi C57BL/6, dimostriamo l'etichettatura intravascolare delle cellule CD8+ T, la digestione enzimatica e la centrifugazione del gradiente di densità per isolare e arricchire i linfociti dai reni del topo per preparare i campioni per la successiva analisi citometrica del flusso.

Il protocollo qui descritto è riassunto in un diagramma di flusso (Figura 1A). Al giorno 30 dopo l'infezione da LCMV, abbiamo eseguito l'etichettatura intravascolare delle cellule CD8+ T. 5 minuti dopo, entrambi i reni dell'animale sono stati sezionati, tritati e sottoposti a digestione della collagenasi. I linfociti sono stati ulteriormente purificati dai campioni digeriti tramite centrifugazione Percoll e analizzati per citometria a flusso. Come mostrato nella <strong class="xf...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

A seguito di infezione virale, il rene ospita un numero relativamente elevato di cellule CD8+ T e offre l'opportunità di studiare le cellule T RM nonmucose. Qui descriviamo un protocollo per isolare i linfociti renali del topo per l'analisi della citometria del flusso.

Isolamento delle cellule CD8 + T residenti neireni del topo per l'analisi della citometria a flusso

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

Le cellule CD8+T portano caratteristiche distinte in diversi tessuti, come esempio critico di tessuto non mucoso e non linfoide. È essenziale caratterizzare direttamente le cellule renali residenti per comprendere appieno la biologia delle cellule T. Qui dimostreremo il nostro comodo metodo per isolare le cellule CD8 + T residenti nei reni che ospitano la successiva analisi della citometria del flusso.Questo metodo potrebbe fornire informazioni sugli studi delle cellule CD8+T dell'effettore e della memoria generate dopo le infezioni e sulle risposte autoimmuni. La procedura sarà eseguita dal Dr.Chaoyu Ma, un ricercatore del mio laboratorio. Iniziare diluendo l'anticorpo alfa anti CD8 biotina a 15 microgrammi per millilitro in PBS, assicurandosi che ci sia abbastanza per somministrare 200 microlitri a ciascun topo.Prima dell'iniezione, riscaldare la vena di coda del mouse con una lampada termica aerea per cinque-10 minuti per dilatarla. Disegnare 200 microlitri della miscela di anticorpi pre-diluiti in una siringa per insulina calibro 28 e rimuovere eventuali bolle d'aria spostando il pistone su e giù. Piegare l'ago per creare un angolo di 150 gradi tra l'ago e la siringa, smussare, in modo che l'ago sia parallelo alla vena della coda.Trattenere il topo con un limitatore di roditori e spruzzare la coda con il 70% di etanolo per rendere la vena chiaramente visibile. Tenere la coda all'estremità distale con il pollice e le dita medie della mano non dominante, quindi posizionare il dito indice sotto il sito di iniezione. Con la mano dominante inserire l'ago nella vena in parallelo verso la direzione del cuore e iniettare lentamente 200 microlitri dell'anticorpo.Rimuovere l'ago e comprimere delicatamente il sito di iniezione fino a quando il sanguinamento non si ferma. Dopo aver eutanasiato il topo, sezionare il rene con le forbici e trasferirlo in un tubo di micro centrifuga da 1,5 millilitri. Lasciare i campioni sul ghiaccio fino a un'ulteriore lavorazione.Preparare piatti a sei pozzi con tre millilitri di soluzione di digestione in ogni pozzo, usando un pozzo per topo, e conservarli sul ghiaccio. Aggiungere 300 microlitri di soluzione di digestione in ogni tubo campione e tritare i campioni di rene con una forbice a molla dritta. Trasferire i campioni di rene tritati nelle piastre a sei pozzi con la soluzione di digestione.Incubare i campioni a 37 gradi Celsius con un dondolo delicato per 45 minuti, quindi omogeneizzare il tessuto con la flangia stantuffo di una siringa da tre millilitri e trasferirlo in tubi conici da 15 millilitri. Far girare i campioni a 500 volte g e quattro gradi Celsius per cinque minuti. Rimuovere il supernatante e rimescolare il pellet in tre millilitri di RPMI con 10%FCS.Far girare il campione a 500 volte g e quattro gradi Celsius per cinque minuti, quindi rimuovere il supernatante e rimescolare il pellet cellulare con cinque millilitri di mezzo gradiente di densità del 44% e mix RPMI. Mettere la punta di una pipetta da tre millilitri contenente tre millilitri di mezzo gradiente di densità del 67% e PBS direttamente sul fondo di ogni tubo e rilasciare lentamente la soluzione in modo che la soluzione pesante formi uno strato distinto nella parte inferiore. Ruotare i campioni a 900 volte g per 20 minuti con impostazioni ridotte dell'acceleratore e del freno, quindi rimuovere con cura i tubi dalla centrifuga senza disturbare gli strati.Rimuovere lo strato superiore con una pipetta di trasferimento senza toccare lo strato di linfocita e trasferire lo strato di linfociti in un nuovo tubo da 15 millilitri. Riempire il tubo con PBS e 5%FCS, quindi mescolare invertendo lentamente il tubo da quattro a sei volte. Dopo aver centrifugato i campioni a 500 volte G e quattro gradi Celsius per cinque minuti, rimuovere il supernatante e rimescolare il pellet cellulare con 500 microlitri di mezzo RPMI completo.Le cellule sono ora pronte per la colorazione della citometria a flusso. Anche dopo l'arricchimento dei linfociti mediati dalla centrifugazione della densità, era molto comune vedere gran parte dei non linfociti nel prodotto finale. Tuttavia, dopo aver guadagnato sui linfociti vivi, i linfociti CD8+T erano facili da identificare.Come previsto, solo le cellule CD8+T extravascolari hanno acquisito in modo efficiente fenotipi di cellule T di memoria residente nei tessuti, come l'upregolazione del CD69 e la downregulation del Ly6C. A differenza dei topi infetti, la stragrande maggioranza delle cellule CD8+T isolate da giovani topi ingenui ospitati nello stabilimento SPF erano etichettate con anticorpi alfa CD8 e quindi appartenevano al compartimento intravascolare. Questa tecnica ha notevolmente accelerato lo studio delle cellule immunitarie residenti nei tessuti negli organi densamente vascolarizzati.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Analisi Citometria a flusso di cellule immunitarie all&#39;interno aorte Murine

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Imaging Whole-animale e di citometria a flusso tecniche di analisi di Antigen-specific CD8 + cellule T Risposte dopo nanoparticelle vaccinazione

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

L&#39;uso di citometria a flusso per valutare lo stato della cromatina in cellule T

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolamento e analisi citofluorimetrica delle cellule immunitarie dal cervello ischemica mouse

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Separazione delle cellule fluorescenza-attivato per la purificazione delle cellule dendritiche plasmacitoidi dal midollo osseo di topo

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

L&#39;isolamento e la citometria a flusso Analisi di Human endocervicale Gamma Delta T Cells

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Misura della T cellulare alloreattività Utilizzando Imaging Citometria a Flusso

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolamento e coltura In Vitro dei macrofagi alveolari murini ed umani

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

Quantificazione di basata su citometria a flusso multicolor dei mitocondri e lisosomi in cellule di T

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Preparazione del midollo osseo intero per l'analisi della citometria di massa delle cellule di lignaggio neutrofilo

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...