Name: isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis
Uploaded: 2020-06-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Dette arbeidet støttes av NIH tilskudd AI125701 og AI139721, Cancer Research Institute CLIP program og American Cancer Society gi RSG-18-222-01-LIB til N.Z. Vi takker Karla Gorena og Sebastian Montagnino fra Flow Cytometry Facility. Data generert i Flow Cytometry Shared Resource Facility ble støttet av University of Texas Health Science Center i San Antonio (UTHSCSA), NIH/NCI-stipend P30 CA054174-20 (Clinical and Translational Research Center [CTRC] ved UTHSCSA) og UL1 TR001120 (Clinical and Translational Science Award).

Alle dyreforsøk utført etter denne protokollen må godkjennes av den respektive institusjonelle dyreomsorgs- og brukskomiteen (IACUC). Alle prosedyrer som er beskrevet her har blitt godkjent av IACUC UT Health San Antonio.
1. Adoptivoverføring av P14 T-celler til C57BL/6-mottakere og LCMV-infeksjon
<ol><li>Bruk P14-mus ved 6-12 ukers alder. Sørg for at kjønnet til donor P14 TCR transgen mus skal samsvare med kjønnet til C57BL/6 mottakermus. Ellers vil celler som mannlige T-celler som o...

<ol>
	<li>Mueller, S. N., Gebhardt, T., Carbone, F. R., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T+cell+subsets,+migration+patterns,+and+tissue+residence.">Memory T cell subsets, migration patterns, and tissue residence.</a> Annual Review of Immunology. 31, 137-161 (2013).</li><li>Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+memory+T+cells:+local+specialists+in+immune+defence.">Tissue-resident memory T cells: local specialists in immune defence.</a> Nature Reviews: Immunology. 16, 79-89 (2016).</li><li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease.">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nature Medicine. 21, 688-697 (2015).</li><li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+memory.+Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses.">T cell memory. Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346, 98-101 (2014).</li><li>Thome, J. J., Farber, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+concepts+in+tissue-resident+T+cells:+lessons+from+humans.">Emerging concepts in tissue-resident T cells: lessons from humans.</a> Trends in Immunology. 36, 428-435 (2015).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hobit+and+Blimp1+instruct+a+universal+transcriptional+program+of+tissue+residency+in+lymphocytes.">Hobit and Blimp1 instruct a universal transcriptional program of tissue residency in lymphocytes.</a> Science. 352, 459-463 (2016).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-box+Transcription+Factors+Combine+with+the+Cytokines+TGF-beta+and+IL-15+to+Control+Tissue-Resident+Memory+T+Cell+Fate.">T-box Transcription Factors Combine with the Cytokines TGF-beta and IL-15 to Control Tissue-Resident Memory T Cell Fate.</a> Immunity. 43, 1101-1111 (2015).</li><li>Milner, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx3+programs+CD8(+)+T+cell+residency+in+non-lymphoid+tissues+and+tumours.">Runx3 programs CD8(+) T cell residency in non-lymphoid tissues and tumours.</a> Nature. 552, 253-257 (2017).</li><li>Liu, Y., Ma, C., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Specific+Control+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells.">Tissue-Specific Control of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Critical Reviews in Immunology. 38, 79-103 (2018).</li><li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance.">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161, 737-749 (2015).</li><li>Qiu, Z., Sheridan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+Lymphocytes+from+the+Mouse+Small+Intestinal+Immune+System.">Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e57281 (2018).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9, 209-222 (2014).</li><li>Ma, C., Mishra, S., Demel, E. L., Liu, Y., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+Controls+the+Formation+of+Kidney-Resident+T+Cells+via+Promoting+Effector+T+Cell+Extravasation.">TGF-beta Controls the Formation of Kidney-Resident T Cells via Promoting Effector T Cell Extravasation.</a> Journal of Immunology. 198, 749-756 (2017).</li><li>Gebhardt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+patterns+of+peripheral+migration+by+memory+CD4++and+CD8++T+cells.">Different patterns of peripheral migration by memory CD4+ and CD8+ T cells.</a> Nature. 477, 216-219 (2011).</li><li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARTC2.2/P2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8(+)+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets.">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8(+) T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> Journal of Immunology. 202, 2153-2163 (2019).</li><li>Fernandez-Ruiz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver-Resident+Memory+CD8(+)+T+Cells+Form+a+Front-Line+Defense+against+Malaria+Liver-Stage+Infection.">Liver-Resident Memory CD8(+) T Cells Form a Front-Line Defense against Malaria Liver-Stage Infection.</a> Immunity. 45, 889-902 (2016).</li><li>Beura, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalizing+the+environment+recapitulates+adult+human+immune+traits+in+laboratory+mice.">Normalizing the environment recapitulates adult human immune traits in laboratory mice.</a> Nature. 532, 512-516 (2016).</li></ol>

Som vevsspesifikk immunitet er et raskt voksende forskningsområde, akkumulerende bevis tyder på at immunceller, spesielt lymfocytter befolkningen kan identifiseres i nesten alle organer i voksne mennesker eller infiserte eller immuniserte mus. LCMV mus infeksjon modell er en veletablert modell for å studere antigen-spesifikk T celle respons, effektor og minne T celle differensiering inkludert TRM biologi på tvers av flere vev. Her beskrev vi en protokoll for å analysere CD8+ T-celler i nyrene. ...

Tissue-resident minne (TRM) T celler representerer en av de mest tallrike T cellepopulasjoner i voksne mennesker og infiserte mus. TRM-celler gir den første linjen av immunforsvar og er kritisk involvert i ulike fysiologiske og patologiske prosesser1,2,3,4,5. Sammenligner med sirkulerende T-celler, TRM celler bære distinkte overflatemarkører med unike transkripsjonsprogrammer6,7,8. Å utvide vår kunnskap om TRM biologi er nøkkelen til å forstå T celleresponser som er avgjørende for fremtidig utvikling av T-cellebaserte vaksiner og immunterapier.
I tillegg til vanlige delte molekylære markører av TRMs på tvers av alle ikke-lymfoide vev, akkumulerende bevis tyder på at vev-spesifikke funksjoner er en sentral komponent i TRM biologi9. Nyre havner mange immunceller inkludert TRM celler etter infeksjon og gir en flott mulighet til å studere TRM cellebiologi i en ikke-slimhinnevev. Akutt LCMV (lymfatisk choriomeningittvirus) infeksjon via intraperitoneal rute er en veletablert systemisk infeksjonsmodell for å studere antigenspesifikke T-celleresponser hos mus. Infeksjonen er vanligvis løst i 7-10 dager i vill type mus og la et stort antall LCMV-spesifikke minne T-celler i en rekke vev, inkludert nyre10. P14 TCR (T cellereseptor) transgene mus bærer CD8+ T-celler gjenkjenner en av de immundominerende epitopene til LCMV presentert av MHC-I (klasse I store histokompatibilitetskompleks) molekyl H2-Db i C57BL/6 mus. Ved å kombinere congenically merket P14 T celle adoptivoverføring og LCMV infeksjon hos mus, CD8+ effector og minne T celler spores, inkludert TRM differensiering og homeostase.
I noen barrierevev, som intestinal intraepithelial lymfocytter (IEL) rom og spyttkjertler, etablerte lymfocytt isolasjon prosedyre gir høy prosentandel av TRM celler med minimal blodbåren T celleforurensning i mus LCMV modell11. Men i ikke-barriere vev, som nyrene, inneholder tett vaskulært nettverk et stort antall sirkulerende CD8+ T-celler. Det har blitt godt dokumentert at selv vellykket perfusjon ikke effektivt kan fjerne alle sirkulerende CD8+ T-celler. For å overvinne denne tekniske hindringen, intravaskulær antistoff farging har blitt etablert som en av de mest brukte teknikker i TRM laboratorier12. Kort sagt, 3-5 minutter før eutanasi, leveres 3 μg/mus anti-CD8 antistoff (for å merke CD8+ T-celler) intravenøst. Intakt blodkarvegg forhindrer rask diffusjon av antistoffet innen denne korte tidsperioden (det vil at 3-5 minutter) og bare intravaskulære celler er merket. Etter standard lymfocytt isolasjonsprotokoll, intravaskulær versus ekstravaskulære celler kan lett skilles ved hjelp av flytcytometri.
Her vil vi beskrive en standardprotokoll som vanligvis brukes i TRM-laboratorier for å utføre intravaskulær merking, lymfocyttisolering og strømningscytometrianalyse av nyre-CD8+ T-celler ved hjelp av en C57BL/6-mus som har mottatt CD45.1+ P14 T-celler og LCMV-infeksjon 30 dager før13. Samme protokoll kan brukes til å studere både effector og minne T-celler i nyrene.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37C incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin a-CD8a antibody(Clone 53-6.7)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0081-U025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30073.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collegenase B</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11088807001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Graduated Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS 5692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mojosort Mouse CD8 Na&#239;ve T Cells Isolation Kit</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>480043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>overhead heat lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00333PZZG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17089101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30096.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid Brass Mouse Restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc</td>
			<td>SAI-MBR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swing Bucket Centrifuge with refrigerator</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture 6-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis

Tissue-resident memory T celle (TRM) er et raskt voksende felt av immunologi forskning. Isolere T-celler fra ulike ikke-lymfoide vev er en av de viktigste trinnene for å undersøke TRMs. Det er små variasjoner i lymfocyttisolasjonsprotokoller for forskjellige organer. Nyre er et viktig ikke-lymfoid organ med mange immuncelleinfiltrasjon, spesielt etter patogeneksponering eller autoimmun aktivering. I de senere årene har flere laboratorier, inkludert våre egne, begynt å karakterisere nyrebosatte CD8+ T-celler i ulike fysiologiske og patologiske innstillinger i både mus og menneske. På grunn av overflod av T-lymfocytter representerer nyre et attraktivt modellorgan for å studere TRMs i ikke-slimhinne- eller ikke-barrierevev. Her vil vi beskrive en protokoll som vanligvis brukes i TRM-fokusertelaboratorier for å isolere CD8+ T-celler fra musenyre etter systemisk virusinfeksjon. Kort, ved hjelp av en akutt lymfatisk choriomeningitt virus (LCMV) infeksjon modell i C57BL/6 mus, viser vi intravaskulær CD8+ T celle merking, enzymatisk fordøyelse, og tetthet gradient sentrifugasjon for å isolere og berike lymfocytter fra mus nyrer for å gjøre prøver klar for den påfølgende flyt cytometri analyse.

Protokollen som er beskrevet her, oppsummeres i et flytskjema (figur 1A). På dag 30 post LCMV infeksjon, utførte vi intravaskulær merking av CD8+ T-celler. 5 minutter senere ble begge nyrene av dyret dissekert, hakket og utsatt for kollagen fordøyelse. Lymfocytter ble ytterligere renset fra de fordøyde prøvene via Percoll-sentrifugering og analysert ved strømningscytometri. Som vist i figur 1B, selv etter tetthet sentrifugasjon-mediert lymfocyt...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Etter virusinfeksjon, nyre havner et relativt stort antall CD8+ T celler og tilbyr en mulighet til å studere ikke-slimhinne TRM celler. Her beskriver vi en protokoll for å isolere mus nyrelymfocytter for flytcytometrianalyse.

Isolering av mus nyre-resident CD8+ T celler for Flow Cytometry Analyse

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

CD8 +T-celler har forskjellige egenskaper i forskjellig vev, som et kritisk eksempel på ikke-slimhinne- og ikke-lymfoidvev. Det er viktig å direkte karakterisere nyre-resident celler for å fullt ut forstå T-cellebiologi. Her vil vi demonstrere vår praktiske metode for å isolere nyre-resident CD8 + T celler imøtekommende påfølgende flyt cytometri analyse.Denne metoden kan gi innsikt i studier av effector og minne CD8 + T celler generert etter infeksjoner samt autoimmune svar. Prosedyren vil bli utført av Dr.Chaoyu Ma, en forsker for laboratoriet mitt. Begynn med å fortynne biotin anti CD8 alfa antistoff til 15 mikrogram per milliliter i PBS, og sørg for at det er nok til å administrere 200 mikroliter til hver mus.Før injeksjon, varme halen vene av musen med en overhead varmelampe i fem til 10 minutter for å utvide den. Trekk 200 mikroliter av den forfortynnede antistoffblandingen i en 28-gauge insulinsprøyte og fjern eventuelle luftbobler ved å flytte stempelet opp og ned. Bøy nålen for å skape en 150-graders vinkel mellom nålen og sprøyten, skråkant opp, slik at nålen er parallell med halevenen.Hold musen med et gnagerehold og spray halen med 70% etanol for å gjøre venen tydelig synlig. Hold halen på den distale enden med tommelen og midtfingrene på den ikke-dominerende hånden, og plasser deretter pekefingeren under injeksjonsstedet. Med den dominerende hånden sette nålen inn i venen parallelt mot hjertets retning og sakte injisere 200 mikroliter av antistoffet.Fjern nålen og komprimer injeksjonsstedet forsiktig til blødningen stopper. Etter euthanizing musen, dissekere nyrene med saks og overføre den til en 1,5-milliliter mikro sentrifuge rør. La prøvene stå på is til videre behandling.Forbered seksbrønnsplater med tre milliliter fordøyelsesløsning i hver brønn, bruk en brønn per mus, og lagre dem på is. Tilsett 300 mikroliter fordøyelsesløsning i hvert prøverør og hakke nyreprøvene med en rett vårsaks. Overfør hakket nyreprøver til seksbrønnplatene med fordøyelsesløsningen.Inkuber prøvene ved 37 grader Celsius med mild gynge i 45 minutter, homogeniser deretter vevet med stempelflensen på en tre milliliter sprøyte og overfør det til 15-milliliter koniske rør. Spinn prøvene ned på 500 ganger g og fire grader Celsius i fem minutter. Fjern den supernaturlige og resuspend pellet i tre milliliter RPMI med 10% FCS.Spinn ned prøven på 500 ganger g og fire grader Celsius i fem minutter, og fjern deretter den supernaturlige og gjenoppuss cellepelleten med fem milliliter på 44% tetthetsgradientmedium og RPMI-blanding. Sett spissen av en tre milliliter pipette som inneholder tre milliliter med 67% tetthet gradient medium og PBS direkte til bunnen av hvert rør og sakte slippe løsningen slik at den tunge løsningen danner et distinkt lag nederst. Spinn prøvene på 900 ganger g i 20 minutter med redusert akselerator og bremseinnstillinger, og fjern deretter rørene forsiktig fra sentrifugen uten å forstyrre lagene.Fjern det øverste laget med en overføringpipette uten å berøre lymfocyttlaget og overfør lymfocyttlaget til et nytt 15-milliliter rør. Fyll røret med PBS og 5% FCS, bland deretter ved å sakte invertere røret fire til seks ganger. Etter å ha sentrifugert prøvene ved 500 ganger G og fire grader Celsius i fem minutter, fjern det overnaturlige og gjenoppuspend cellepellet med 500 mikroliter komplett RPMI-medium.Cellene er nå klare for flytcytometrifarging. Selv etter tetthet sentrifugering-mediert lymfocytt berikelse, var det svært vanlig å se en stor del av ikke lymfocytter i sluttproduktet. Men etter å ha fått på levende lymfocytter, CD8 + T lymfocytter var lett å identifisere.Som forventet, bare ekstra vaskulære CD8 + T celler effektivt ervervet vev bosatt minne T-celle fenotyper, som oppregulering av CD69 og nedregulering av Ly6C. I motsetning til de infiserte musene ble de aller fleste CD8+T-celler isolert fra unge naive mus plassert i SPF-anlegget merket med CD8 alfaantistoff og tilhørte derfor det intravaskulære rommet. Denne teknikken har sterkt akselerert undersøkelsen av vev-resident immunceller i tettvaskulæriserte organer.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Hel-dyr Imaging og strømningscytometriske Teknikker for analyse av Antigen-spesifikke CD8 + T celle responser etter Nanopartikkel Vaksinasjon

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

Bruk av flowcytometrisystemer å vurdere tilstanden til Chromatin i T-celler

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolasjon og flowcytometrisk analyse av immunceller fra iskemisk Mouse Brain

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescens-aktivert cellesortering for Rensing av Plasmacytoid dendrittiske celler fra mus Bone Marrow

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

Isolasjon og Flowcytometriske analyse av endocervikale Gamma Delta T-celler

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Måling av T-celle alloreaktiviteten hjelp Imaging Flow Cytometry

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolasjon og In Vitro kultur Murine og menneskelig Alveolar makrofager

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

Flerfarget flyt cytometri-baserte kvantifisering av mitokondrier og lysosomer i T-celler

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Utarbeidelse av hele benmarg for Mass flowcytometri analyse av nøytrofile-Lineage celler

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...