Name: isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis
Uploaded: 2020-06-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Эта работа поддерживается грантами NIH AI125701 и AI139721, Программой CLIP Института онкологических исследований и Американским онкологическим обществом гранта RSG-18-222-01-LIB в Н.З. Мы благодарим Карлу Горену и Себастьяна Монтаньино из Фонда Цитометрии Потока. Данные, полученные в потоке цитометрии Общие ресурсы фонда были поддержаны в Университете Техаса научный центр здравоохранения в Сан-Антонио (UTHSCSA), NIH / NCI грант P30 CA054174-20 (Клинические и трансляционные научно-исследовательский центр (CTRC) в UTHSCSA), и UL1 TR001120 (Клиническая и трансляционная научная премия).

Все эксперименты на животных, выполненные в соответствии с этим протоколом, должны быть одобрены соответствующим институциональным комитетом по уходу за животными и использованию (IACUC). Все процедуры, описанные здесь, были одобрены IACUC UT Health San Antonio.
1. Приемная передача Т-кл...

<ol>
	<li>Mueller, S. N., Gebhardt, T., Carbone, F. R., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T+cell+subsets,+migration+patterns,+and+tissue+residence.">Memory T cell subsets, migration patterns, and tissue residence.</a> Annual Review of Immunology. 31, 137-161 (2013).</li><li>Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+memory+T+cells:+local+specialists+in+immune+defence.">Tissue-resident memory T cells: local specialists in immune defence.</a> Nature Reviews: Immunology. 16, 79-89 (2016).</li><li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease.">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nature Medicine. 21, 688-697 (2015).</li><li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+memory.+Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses.">T cell memory. Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346, 98-101 (2014).</li><li>Thome, J. J., Farber, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+concepts+in+tissue-resident+T+cells:+lessons+from+humans.">Emerging concepts in tissue-resident T cells: lessons from humans.</a> Trends in Immunology. 36, 428-435 (2015).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hobit+and+Blimp1+instruct+a+universal+transcriptional+program+of+tissue+residency+in+lymphocytes.">Hobit and Blimp1 instruct a universal transcriptional program of tissue residency in lymphocytes.</a> Science. 352, 459-463 (2016).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-box+Transcription+Factors+Combine+with+the+Cytokines+TGF-beta+and+IL-15+to+Control+Tissue-Resident+Memory+T+Cell+Fate.">T-box Transcription Factors Combine with the Cytokines TGF-beta and IL-15 to Control Tissue-Resident Memory T Cell Fate.</a> Immunity. 43, 1101-1111 (2015).</li><li>Milner, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx3+programs+CD8(+)+T+cell+residency+in+non-lymphoid+tissues+and+tumours.">Runx3 programs CD8(+) T cell residency in non-lymphoid tissues and tumours.</a> Nature. 552, 253-257 (2017).</li><li>Liu, Y., Ma, C., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Specific+Control+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells.">Tissue-Specific Control of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Critical Reviews in Immunology. 38, 79-103 (2018).</li><li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance.">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161, 737-749 (2015).</li><li>Qiu, Z., Sheridan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+Lymphocytes+from+the+Mouse+Small+Intestinal+Immune+System.">Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e57281 (2018).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9, 209-222 (2014).</li><li>Ma, C., Mishra, S., Demel, E. L., Liu, Y., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+Controls+the+Formation+of+Kidney-Resident+T+Cells+via+Promoting+Effector+T+Cell+Extravasation.">TGF-beta Controls the Formation of Kidney-Resident T Cells via Promoting Effector T Cell Extravasation.</a> Journal of Immunology. 198, 749-756 (2017).</li><li>Gebhardt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+patterns+of+peripheral+migration+by+memory+CD4++and+CD8++T+cells.">Different patterns of peripheral migration by memory CD4+ and CD8+ T cells.</a> Nature. 477, 216-219 (2011).</li><li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARTC2.2/P2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8(+)+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets.">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8(+) T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> Journal of Immunology. 202, 2153-2163 (2019).</li><li>Fernandez-Ruiz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver-Resident+Memory+CD8(+)+T+Cells+Form+a+Front-Line+Defense+against+Malaria+Liver-Stage+Infection.">Liver-Resident Memory CD8(+) T Cells Form a Front-Line Defense against Malaria Liver-Stage Infection.</a> Immunity. 45, 889-902 (2016).</li><li>Beura, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalizing+the+environment+recapitulates+adult+human+immune+traits+in+laboratory+mice.">Normalizing the environment recapitulates adult human immune traits in laboratory mice.</a> Nature. 532, 512-516 (2016).</li></ol>

Поскольку специфический иммунитет тканей является быстро расширяющейся областью исследований, накопление доказательств свидетельствует о том, что иммунные клетки, особенно популяция лимфоцитов, могут быть выявлены почти во всех органах у взрослых людей или инфицированных или иммун?...

Ткань резидентов памяти (TRM) Т-клетки представляют собой один из наиболее распространенных Т-клеток населения у взрослых людей и инфицированных мышей. Т-РМ-клетки обеспечивают первую линию иммунной защиты и критически вовлечены в различные физиологические и патологическиепроцессы1,2,3,4,5. По сравнению с циркулирующими Т-клетками,Т-РМ клетки несут различные поверхностные маркеры суникальными программами транскрипции 6,7,8. Расширение наших знаний обиологии T RM является ключом к пониманию реакции Т-клеток, которая имеет важное значение для будущей разработки Т-клеточных вакцин и иммунотерапии.
В дополнение к широко разделяемым молекулярным маркерам TRMs во всех нелимфоидных тканях, накопление доказательств свидетельствует о том, что специфические особенности тканей являются центральным компонентомбиологии T RM9. Почки гавани многих иммунных клеток,включая Т-РМ клетки после инфекции и предлагает отличную возможность для изучения TRM клеточной биологии в немукосальной ткани. Острый LCMV (лимфоцитатический вирус хориомерингита) инфекции через внутриперитонеальный маршрут является устоявшейся системной модели инфекции для изучения антиген-специфических Т-клеток ответы у мышей. Инфекция обычно решается в 7-10 дней у диких мышей типа и оставить большое количество LCMV-специфических Т-клеток памяти в различных тканях, в том числепочки 10. P14 TCR (Т-клеточный рецептор) трансгенных мышей нести CD8И Т-клетки признают один из иммунных доминирующих эпитопов LCMV представлены MHC-I (класс I основной комплекс гистосовместимости) молекулы H2-Db в C57BL/6 мышей. Сочетание конгенически отмеченных P14 Т-клеток приемной передачи и LCMV инфекции у мышей,CD8 и эффектор памяти Т-клеток отслеживаются, в том числедифференциации T RM и гомеостаза.
В некоторых барьерных тканях, таких как кишечные интрапителеальные лимфоциты (IEL) отсека и слюнных желез, установленные лимфоциты изоляции процедура дает высокий процентТ-РМ клеток с минимальным загрязнением Т-клеток, переносимых кровью в мыши LCMVмодели 11. Тем не менее, в небарьерных тканях, таких как почки, плотная сосудистая сеть содержит большое количество циркулирующих CD8 и Т-клеток. Было хорошо задокументировано, что даже успешная перфузия не может эффективно удалить все циркулирующие CD8и Т-клетки. Чтобы преодолеть это техническое препятствие, внутрисосудистые антитела окрашивания была создана в качестве одного из наиболее часто используемых методов в TRM лаборатории 12. Короче говоря, за 3-5 минут до эвтаназии, 3 мкг / мышь анти-CD8 антитела (для обозначенияCD8 и Т-клеток) доставляется внутривенно. Нетронутая стенка кровеносных сосудов предотвращает быстрое распространение антител в течение этого короткого периода времени (т.е. 3-5 минут) и только внутрисосудистые клетки помечены. Следуя стандартному протоколу изоляции лимфоцитов, внутрисосудистые и экстрасосудистые клетки можно легко отличить с помощью цитометрии потока.
Здесь мы опишем стандартный протокол, обычно используемый влабораториях T RM для выполнения внутрисосудистой маркировки, лимфоцитоцитов изоляции и цитометрического анализа почек CD8и Т-клеток с помощью мыши C57BL/6, которая получила CD45.1 и P14 T-клеток и инфекции LCMV за 30дней до 13. Тот же протокол может быть использован для изучения как эффектор и Т-клетки памяти в почках.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37C incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin a-CD8a antibody(Clone 53-6.7)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0081-U025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30073.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collegenase B</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11088807001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Graduated Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS 5692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mojosort Mouse CD8 Na&#239;ve T Cells Isolation Kit</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>480043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>overhead heat lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00333PZZG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17089101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30096.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid Brass Mouse Restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc</td>
			<td>SAI-MBR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swing Bucket Centrifuge with refrigerator</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture 6-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis

Ткань-резидент памяти Т-клеток (TRM) является быстро расширяющейся области иммунологических исследований. Изоляция Т-клеток от различных нелимфоидных тканей является одним из ключевых шагов для исследования TRMs. Существуют небольшие различия в протоколах изоляции лимфоцитов для различных органов. Почка является важным не лимфоидным органом с многочисленным проникновением иммунных клеток, особенно после воздействия патогена или аутоиммунной активации. В последние годы, несколько лабораторий, включая наши собственные начали характеризовать почек резидентовCD8 Т-клеток в различных физиологических и патологических условиях как у мыши и человека. Из-за обилия Т-лимфоцитов, почка представляет собой привлекательный орган модели для изучения TRMs в немукозыловых или небарьерных тканях. Здесь мы опишем протокол, обычно используемый в лабораториях, ориентированных на TRM,чтобы изолировать CD8и Т-клетки от почек мыши после системной вирусной инфекции. Кратко, используя острую лимфоцитарную модель инфекции вируса хориоменита (LCMV) у мышей C57BL/6, мы демонстрируем внутрисосудистыйCD8 и T-клеточную маркировку, энзиматическое пищеварение и градифугу плотности для изоляции и обогащения лимфоцитов из почек мыши, чтобы сделать образцы готовыми к последующему анализу цитометрии потока.

Протокол, описанный здесь, обобщен на диаграмме потока(рисунок 1A). На 30-й день после LCMV инфекции, мы выполнили внутрисосудистой маркировки CD8 и Т-клеток. Через 5 минут обе почки животного были вскрыты, измельчены и подверглись пищеварению коллагеназы. Лимфоциты были ...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

После вирусной инфекции, почки гавани относительно большое количество CD8И Т-клеток и предлагает возможность для изучения немукозальныхТ-РМ-клеток. Здесь мы описываем протокол изоляции лимфоцитов почек мыши для анализа цитометрии потока.

Изоляция мыши Почки-Резидент CD8 -Т-клетки для анализа цитометрии потока

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

Клетки CD8-T имеют различные особенности в различных тканях, как критический пример немукозальной и немфоидной ткани. Важно непосредственно охарактеризовать клетки-резиденты почек, чтобы полностью понять биологию Т-клеток. Здесь мы продемонстрируем наш удобный метод изоляции клеток CD8-T, проживающих в почках, с последующим цитометрией потока.Этот метод может дать представление об исследованиях эффектора и памяти CD8'T клеток, генерируемых после инфекций, а также аутоиммунных реакций. Процедура будет выполнена доктором Чаою Ма, научным сотрудником моей лаборатории. Начните с разбавления биотина анти CD8 альфа-антитела до 15 микрограмм на миллилитр в PBS, убедившись, что есть достаточно, чтобы управлять 200 микролитров для каждой мыши.Перед инъекцией нагрейте хвостовую вену мыши накладным тепловым лампой в течение пяти-десяти минут, чтобы расширить ее. Нарисуйте 200 микролитров предварительно разбавленного антитела смесь в 28-го калибра инсулина шприц и удалить любые пузырьки воздуха, перемещая поршень вверх и вниз. Согните иглу, чтобы создать 150-градусный угол между иглой и шприцем, скошенный вверх, так что игла параллельна хвостовой вене.Сдерживайте мышь с помощью меры сдерживания грызунов и распылите хвост 70%этанолом, чтобы сделать вену хорошо видимой. Держите хвост на дистального конца большим и средним пальцами не доминирующей руки, а затем поместите указательный палец под место инъекции. С доминирующей рукой вставьте иглу в вену параллельно в направлении сердца и медленно впрыснуть 200 микролитров антитела.Снимите иглу и аккуратно сжать место инъекции, пока кровотечение останавливается. После усыпив мышь, рассекаете почки ножницами и перенесите ее в 1,5-миллилитровую микро центрифугу. Оставьте образцы на льду до дальнейшей обработки.Приготовьте шесть пластин с тремя миллилитров раствора пищеварения в каждой хорошо, используя один колодец на мышь, и хранить их на льду. Добавьте 300 микролитров раствора пищеварения в каждую пробную трубку и измельчите образцы почек прямыми весенними ножницами. Перенесите рубленые образцы почек на шестиясные пластины с раствором пищеварения.Инкубировать образцы при 37 градусах по Цельсию с нежным качания в течение 45 минут, а затем гомогенизировать ткани с поршень фланг три миллилитров шприца и передать его в 15-миллилитровых конических труб. Спин образцов вниз на 500 раз г и четыре градуса по Цельсию в течение пяти минут. Удалите супернатант и повторно посовелите гранулы в три миллилитров RPMI с 10%FCS.Спин вниз образца в 500 раз г и четыре градуса по Цельсию в течение пяти минут, а затем удалить супернатант и повторно помыть гранулы клетки с пятью миллилитров 44%плотность градиента среднего и RPMI смеси. Положите кончик трехми миллилитров пипетки, содержащей три миллилитров 67%плотность градиента среды и PBS непосредственно в нижней части каждой трубки и медленно отпустите раствор так, что тяжелый раствор образует отдельный слой в нижней части. Спин образцов на 900 раз г в течение 20 минут с уменьшенным ускорителем и настройками тормоза, а затем тщательно удалить трубки из центрифуги, не нарушая слоев.Удалите верхний слой с помощью переносной пипетки, не касаясь слоя лимфоцитов, и перенесите слой лимфоцитов в новую 15-миллилитровую трубку. Заполните трубку с PBS и 5%FCS, а затем смешать медленно инвертирования трубки четыре-шесть раз. После центрифугирования образцов при 500 раз G и четырех градусов по Цельсию в течение пяти минут, удалить супернатант и повторно помыть гранулы клетки с 500 микролитров полной среды RPMI.Клетки теперь готовы к окрашивания цитометрии потока. Даже после плотности центрифугации опосредованного обогащения лимфоцитов, это было очень часто, чтобы увидеть большую часть не лимфоцитов в конечный продукт. Однако, после получения на живых лимфоцитов, CD8-T лимфоцитов было легко определить.Как и ожидалось, только внесудистой CD8'T клетки эффективно приобрели ткани резидентов памяти Т-клеток фенотипов, таких как upregulation CD69 и downregulation Ly6C. В отличие от инфицированных мышей, подавляющее большинство клеток CD8-T, изолированных от молодых наивных мышей, размещенных в учреждении SPF, были помечены альфа-антителами CD8 и поэтому принадлежали к внутрисосудистому отсеку. Этот метод значительно ускорил исследование тканевых иммунных клеток в плотно васкуляризированных органах.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Проточной цитометрии анализа иммунных клеток мышей В аорты

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Всего животного визуализации и проточной цитометрии методы анализа антиген-специфических CD8 + Т-клеточные ответы после вакцинации наночастиц

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

Использование проточной цитометрии для оценки состояния хроматина в Т-клетках

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Выделение и проточной цитометрии анализ иммунных клеток из мозга ишемического Mouse

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Флуоресценция активированных сортировки клеток для очистки плазмоцитов дендритных клеток из костного мозга мыши

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

Выделение и Flow Cytometric Анализ человеческого Endocervical Гамма-Дельта Т-клеток

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Измерение Т-клетки с помощью визуализации аллореактивности проточной цитометрии

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Изоляции и в пробирке культуры мышиных и человека альвеолярные макрофаги

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

Многоцветная потока на основе цитометрии количественная оценка митохондрии и лизосом в Т-клеток

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Подготовка цельного костного мозга для анализа массовой цитометрии нейтрофил-линейных клеток

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...