Name: isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis
Uploaded: 2020-06-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Detta arbete stöds av NIH bidrag AI125701 och AI139721, Cancer Research Institute CLIP program och American Cancer Society bevilja RSG-18-222-01-LIB till N.Z. Vi tackar Karla Gorena och Sebastian Montagnino från Flow Cytometry Facility. Data som genereras i Flow Cytometry Shared Resource Facility stöddes av University of Texas Health Science Center i San Antonio (UTHSCSA), NIH/ NCI bevilja P30 CA054174-20 (Clinical and Translational Research Center [CTRC] vid UTHSCSA), och UL1 TR001120 (Clinical and Translational Science Award).

Alla djurförsök som utförs efter detta protokoll måste godkännas av respektive institutionella Animal Care and Use Committee (IACUC). Alla förfaranden som beskrivs här har godkänts av IACUC UT Health San Antonio.
1. Adoptivöverföring av P14 T-celler till C57BL/6-mottagare och LCMV-infektion
<ol><li>Använd P14-möss vid 6-12 veckors ålder. Se till att könet på givaren P14 TCR transgen mus ska matcha kön C57BL/ 6 mottagaren möss. Annars kommer celler som manliga T-celler som ö...

<ol>
	<li>Mueller, S. N., Gebhardt, T., Carbone, F. R., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T+cell+subsets,+migration+patterns,+and+tissue+residence.">Memory T cell subsets, migration patterns, and tissue residence.</a> Annual Review of Immunology. 31, 137-161 (2013).</li><li>Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+memory+T+cells:+local+specialists+in+immune+defence.">Tissue-resident memory T cells: local specialists in immune defence.</a> Nature Reviews: Immunology. 16, 79-89 (2016).</li><li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease.">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nature Medicine. 21, 688-697 (2015).</li><li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+memory.+Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses.">T cell memory. Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346, 98-101 (2014).</li><li>Thome, J. J., Farber, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+concepts+in+tissue-resident+T+cells:+lessons+from+humans.">Emerging concepts in tissue-resident T cells: lessons from humans.</a> Trends in Immunology. 36, 428-435 (2015).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hobit+and+Blimp1+instruct+a+universal+transcriptional+program+of+tissue+residency+in+lymphocytes.">Hobit and Blimp1 instruct a universal transcriptional program of tissue residency in lymphocytes.</a> Science. 352, 459-463 (2016).</li><li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-box+Transcription+Factors+Combine+with+the+Cytokines+TGF-beta+and+IL-15+to+Control+Tissue-Resident+Memory+T+Cell+Fate.">T-box Transcription Factors Combine with the Cytokines TGF-beta and IL-15 to Control Tissue-Resident Memory T Cell Fate.</a> Immunity. 43, 1101-1111 (2015).</li><li>Milner, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx3+programs+CD8(+)+T+cell+residency+in+non-lymphoid+tissues+and+tumours.">Runx3 programs CD8(+) T cell residency in non-lymphoid tissues and tumours.</a> Nature. 552, 253-257 (2017).</li><li>Liu, Y., Ma, C., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Specific+Control+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells.">Tissue-Specific Control of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Critical Reviews in Immunology. 38, 79-103 (2018).</li><li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance.">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161, 737-749 (2015).</li><li>Qiu, Z., Sheridan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+Lymphocytes+from+the+Mouse+Small+Intestinal+Immune+System.">Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e57281 (2018).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9, 209-222 (2014).</li><li>Ma, C., Mishra, S., Demel, E. L., Liu, Y., Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+Controls+the+Formation+of+Kidney-Resident+T+Cells+via+Promoting+Effector+T+Cell+Extravasation.">TGF-beta Controls the Formation of Kidney-Resident T Cells via Promoting Effector T Cell Extravasation.</a> Journal of Immunology. 198, 749-756 (2017).</li><li>Gebhardt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+patterns+of+peripheral+migration+by+memory+CD4++and+CD8++T+cells.">Different patterns of peripheral migration by memory CD4+ and CD8+ T cells.</a> Nature. 477, 216-219 (2011).</li><li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARTC2.2/P2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8(+)+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets.">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8(+) T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> Journal of Immunology. 202, 2153-2163 (2019).</li><li>Fernandez-Ruiz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver-Resident+Memory+CD8(+)+T+Cells+Form+a+Front-Line+Defense+against+Malaria+Liver-Stage+Infection.">Liver-Resident Memory CD8(+) T Cells Form a Front-Line Defense against Malaria Liver-Stage Infection.</a> Immunity. 45, 889-902 (2016).</li><li>Beura, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalizing+the+environment+recapitulates+adult+human+immune+traits+in+laboratory+mice.">Normalizing the environment recapitulates adult human immune traits in laboratory mice.</a> Nature. 532, 512-516 (2016).</li></ol>

Som vävnad specifik immunitet är ett snabbt expanderande område av forskning, ackumulerande bevis tyder på att immunceller, särskilt lymfocyter befolkningen kan identifieras i nästan alla organ i vuxna mänskliga eller infekterade eller immuniserade möss. LCMV mus infektion modell är en väletablerad modell för att studera antigen-specifika T-cell svar, effektor och minne T cell differentiering inklusive TRM biologi över flera vävnader. Här beskrev vi ett protokoll för att analysera CD8+</sup...

Vävnad-resident minne (TRM) T-celler representerar en av de mest rikliga T-cell populationer i vuxna mänskliga och infekterade möss. TRM-celler ger den första raden av immun försvar och är kritiskt involverade i olika fysiologiska och patologiska processer1,2,3,4,5. Jämföra med cirkulerande T-celler, TRM celler bära distinkta ytmarkörer med unika transkription program6,7,8. Utöka vår kunskap om TRM biologi är nyckeln till att förstå T cell svar som är avgörande för framtida utveckling av T cell-baserade vacciner och immunterapier.
Förutom gemensamt delade molekylära markörer av TRMs över alla icke-lymfoida vävnader, ackumulerande bevis tyder på att vävnadsspecifika funktioner är en central komponent i TRM biologi9. Njure hamnar många immunceller inklusive TRM celler efter infektion och erbjuder en stor möjlighet att studera TRM cellbiologi i en icke-slemhinnan vävnad. Akut LCMV (lymfatisk choriomeningitis virus) infektion via intraperitoneal väg är en väletablerad systemisk infektion modell för att studera antigen-specifika T-cell svar hos möss. Infektionen är oftast löst i 7-10 dagar i vilda typ möss och lämna ett stort antal LCMV-specifika minne T-celler i en mängd olika vävnader, inklusivenjuren 10. P14 TCR (T-cell receptor) transgena möss bära CD8+ T-celler känner igen en av de immun-dominerande epitopes av LCMV presenteras av MHC-I (klass jag större histocompatibility komplex) molekyl H2-Db i C57BL/6 möss. Kombinera congenically märkt P14 T cell adoptivöverföring och LCMV infektion i möss, CD8+ effektor och minne T celler spåras, inklusive TRM differentiering och homeostas.
I vissa barriär vävnader, såsom intestinala intraepithelial lymfocyter (IEL) fack och spottkörtlar, etablerade lymfocyt isolering förfarande ger hög andel av TRM celler med minimal blodburna T-cells kontaminering i musen LCMV modell11. Men i icke-barriär vävnader, såsom njure, täta vaskulära nätverk innehåller ett stort antal cirkulerande CD8+ T-celler. Det har dokumenterats väl att även framgångsrik perfusion inte effektivt kan ta bort alla cirkulerande CD8+ T-celler. För att övervinna detta tekniska hinder har intravaskulär antikroppsfärgning fastställts som en av de vanligaste teknikerna i TRM labs12. I korthet, 3-5 minuter före dödshjälp, levereras 3 μg/mus anti-CD8-antikropp (för att märka CD8+ T-celler) intravenöst. Intakt blodkärlsvägg förhindrar snabb diffusion av antikroppen inom denna korta tidsperiod (dvs. 3-5 minuter) och endast intravaskulära celler är märkta. Efter standard lymfocyt isolering protokoll, intravaskulära kontra extravaskulära celler kan lätt särskiljas med hjälp av flödescytometri.
Här kommer vi att beskriva ett standardprotokoll som vanligen används i TRM labs att utföra intravaskulär märkning, lymfocytisolering och flödescytometri analys av njure CD8+ T-celler med hjälp av en C57BL/6 mus som har fått CD45.1+ P14 T-celler och LCMV infektion 30 dagar före13. Samma protokoll kan användas för att studera både effektor och minne T-celler i njuren.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37C incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin a-CD8a antibody(Clone 53-6.7)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0081-U025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30073.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collegenase B</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11088807001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Graduated Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS 5692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mojosort Mouse CD8 Na&#239;ve T Cells Isolation Kit</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>480043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>overhead heat lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00333PZZG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17089101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30096.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid Brass Mouse Restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc</td>
			<td>SAI-MBR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swing Bucket Centrifuge with refrigerator</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture 6-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of mouse kidney-resident cd8+ t cells for flow cytometry analysis

Tissue-resident minne T cell (TRM) är ett snabbt expanderande område för immunologi forskning. Isolera T-celler från olika icke-lymfoida vävnader är en av de viktigaste stegen för att undersöka TRMs. Det finns små variationer i lymfocytisoleringsprotokoll för olika organ. Njure är en väsentlig icke-lymfoida organ med många immun cell infiltration särskilt efter patogen exponering eller autoimmun aktivering. Under de senaste åren har flera laboratorier inklusive vår egen börjat karakterisera njure bosatt CD8+ T-celler i olika fysiologiska och patologiska inställningar i både mus och människa. På grund av överflödet av T-lymfocyter, utgör njure en attraktiv modell organ för att studera TRMs i icke-slemhinna eller icke-barriär vävnader. Här kommer vi att beskriva ett protokoll som vanligen används i TRM-fokuserade laboratorier för att isolera CD8+ T-celler från mus njurar efter systemisk virusinfektion. Kortfattat, med hjälp av en akut lymfatisk choriomeningitis virus (LCMV) infektion modell i C57BL/6 möss, vi visar intravaskulära CD8+ T cell märkning, enzymatisk matsmältning och densitet gradient centrifugation att isolera och berika lymfocyter från mus njurar att göra prover redo för den efterföljande flödet cytometri analys.

Det protokoll som beskrivs här sammanfattas i ett flödesdiagram (Bild 1A). På dag 30 post LCMV infektion, vi utfört intravaskulära märkning av CD8+ T-celler. 5 minuter senare, var båda njurarna av djuret dissekeras, malet och utsätts för kollagenas matsmältning. Lymfocyter var ytterligare renas från de smälta proverna via Percoll centrifugation och analyseras av flöde cytometri. Som framgår av figur 1B, även efter densitet centrifugerin...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis at JoVE.com

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Efter virusinfektion, hamnar njure ett relativt stort antal CD8+ T-celler och erbjuder en möjlighet att studera icke-mucosal TRM celler. Här beskriver vi ett protokoll för att isolera mus njure lymfocyter för flöde cytometry analys.

Isolering av Mus Njure-Resident CD8+ T-celler för Flow cytometri Analys

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

CD8+T-celler bär distinkta funktioner i olika vävnad, som ett kritiskt exempel på icke-slemhinnan och icke-lymfoid vävnad. Det är viktigt att direkt karakterisera njure-resident celler att fullt ut förstå T-cellbiologi. Här kommer vi att demonstrera vår bekväma metod för att isolera njure-resident CD8 + T celler tillmötesgående efterföljande flöde cytometri analys.Denna metod skulle kunna ge insikt i studier av effector och minne CD8 + T-celler som genereras efter infektioner samt autoimmuna svar. Förfarandet kommer att utföras av Dr.Chaoyu Ma, en forskare för mitt laboratorium. Börja med att späda ut biotin anti CD8 alfa antikropp till 15 mikrogram per milliliter i PBS, se till att det finns tillräckligt för att administrera 200 mikroliter till varje mus.Före injektionen, värm svansvenen av musen med en overhead värmelampa i fem till 10 minuter för att vidga den. Dra 200 mikroliter av den för utspädda antikroppsblandningen i en 28-gauge insulinspruta och avlägsna eventuella luftbubblor genom att flytta kolven uppåt och nedåt. Böj nålen för att skapa en 150-graders vinkel mellan nålen och sprutan, fasa upp, så att nålen är parallell med svansvenen.Hindra musen med en gnagare hindra och spraya svansen med 70%etanol för att göra venen väl synlig. Håll svansen vid den distala änden med tummen och långfingret på den icke-dominanta handen, placera sedan pekfingret under injektionsstället. Med det framträdande handsticket nålen i venen parallellt mot hjärtats riktning och injicera långsamt 200 mikroliter av antikroppen.Ta bort nålen och försiktigt komprimera injektionsstället tills blödningen upphör. Efter att ha avlivat musen, dissekera njuren med sax och överföra den till en 1,5-milliliter mikro centrifug röret. Lämna proverna på is tills vidare bearbetning.Förbered sex-brunns plattor med tre milliliter av matsmältningslösning i varje brunn, med hjälp av en brunn per mus, och lagra dem på is. Tillsätt 300 mikroliter av matsmältningslösning i varje provrör och finhacka njurproverna med en rak vårsax. Överför de malda njurproverna till sex-brunnsplattorna med matsmältningslösningen.Inkubera proverna vid 37 grader Celsius med skonsam gungning i 45 minuter, homogenisera sedan vävnaden med kolvens fläns av en tre-milliliter spruta och överför den till 15-milliliter koniska rör. Snurra proverna ner på 500 gånger g och fyra grader Celsius i fem minuter. Ta bort supernatanten och resuspend pelleten i tre milliliter av RPMI med 10%FCS.Snurra ner provet vid 500 gånger g och fyra grader Celsius i fem minuter, ta sedan bort supernatanten och resuspend cellpelleten med fem milliliter av 44%densitetsgradient medium och RPMI mix. Sätt spetsen på en tre-milliliter pipett som innehåller tre milliliter av 67%densitet gradient medium och PBS direkt till botten av varje rör och långsamt släppa lösningen så att den tunga lösningen bildar ett distinkt skikt längst ner. Snurra proverna på 900 gånger g i 20 minuter med reducerade inställningar för accelerator och broms, ta sedan försiktigt bort rören från centrifugen utan att störa lagren.Ta bort det översta lagret med en överföringspipett utan att vidröra lymfocytskiktet och överför lymfocytskiktet till ett nytt 15-milliliterrör. Fyll röret med PBS och 5% FCS, blanda sedan genom att långsamt invertera röret fyra till sex gånger. Efter centrifugering proverna på 500 gånger G och fyra grader Celsius i fem minuter, ta bort supernatant och resuspend cell pelleten med 500 mikroliter av komplett RPMI medium.Cellerna är nu redo för flödescytometrifärgning. Även efter densitet centrifugering-medierad lymfocyt anrikning, var det mycket vanligt att se en stor del av icke lymfocyter i den slutliga produkten. Men efter att få på levande lymfocyter, CD8 + T lymfocyter var lätt att identifiera.Som väntat, endast extra-vaskulär CD8 + T-celler effektivt förvärvade vävnad resident minne T-cell fenotyper, såsom uppreglering av CD69 och nedreglering av Ly6C. I motsats till de infekterade mössen var de allra flesta CD8+T-celler som isolerats från unga naiva möss inhysa i SPF-anläggningen märkta med CD8 alfaantikropp och tillhörde därför det intravaskulära kupén. Denna teknik har kraftigt påskyndat undersökningen av vävnad-resident immunceller i tätt vascularized organ.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Flödescytometrisk analys av immunceller Inom Murine artärer

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Hel-djur Imaging och Flödescytometrisk Tekniker för analys av antigen-specifika CD8 + T-cellssvar efter Nanoparticle Vaccination

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

Användning av flödescytometri att bedöma staten Chromatin i T-celler

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolering och flödescytometrisk analys av immunceller från ischemisk Mouse Brain

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescensaktiverad cellsortering för Rening av Plasmacytoid dendritiska celler från benmärg från mus

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

Isolering och flödescytometrisk analys av Human Endocervikala Gamma Delta T-celler

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Mätning av T-cell alloreaktivitet Använda Imaging Flow Cytometry

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolering och In Vitro kultur av murina och mänskliga alveolära makrofager

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

Multicolor flöde flödescytometri-baserade kvantifiering av mitokondrier och lysosomer i T-celler

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Beredning av hela benmärgen för Masscytometri analys av neutrofila-Lineage celler

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...