Name: super-resolution live cell imaging of subcellular structures
Uploaded: 2021-01-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures at JoVE.com

ويود المؤلفون أن يشكروا مرفق التصوير المتكامل الأساسي في جامعة جونز هوبكنز على المجاهر وبرامج تحليل البيانات. نشكر ج. سنيدكر وس. إ. يو على التدقيق اللغوي والاقتراحات، وأعضاء المختبر .C العاشر على المناقشات والاقتراحات المفيدة. بدعم من NIGMS / NIH R35GM127075 ، ومعهد هوارد هيوز الطبي ، ومؤسسة ديفيد ولوسيل باكارد ، وصناديق الشركات الناشئة في جامعة جونز هوبكنز (X.C).

1. إعداد كوكتيل تصوير الخلايا الحية (وسائط الخلية الحية)
<ol><li>ملحق شنايدر Drosophila المتوسطة مع 15٪ مصل البقر الجنيني (FBS) و 0.6x البنسلين / العقدية. ضبط درجة الحموضة إلى حوالي 7.0.</li>
	<li>قبل استخدام الوسيطة مباشرة، أضف الأنسولين إلى تركيز نهائي قدره 200 ميكروغرام/مل. ملاحظة: هذه الوسائط أمر بالغ ...

<ol>
	<li>Breedijk, R. M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+live-cell+super-resolution+technique+demonstrated+by+imaging+germinosomes+in+wild-type+bacterial+spores.">A live-cell super-resolution technique demonstrated by imaging germinosomes in wild-type bacterial spores.</a> Scientific Reports. 10 (1), 5312 (2020).</li><li>Maddox, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+mitotic+spindle.">Imaging the mitotic spindle.</a> Methods in Enzymology. 505, 81-103 (2012).</li><li>Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+microscopy+-+tips+and+tools.">Live-cell microscopy - tips and tools.</a> Journal of Cell Science. 122 (6), 753-767 (2009).</li><li>Bates, M., Jones, S. A., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+optical+reconstruction+microscopy+(STORM):+A+method+for+super+resolution+fluorescence+imaging.">Stochastic optical reconstruction microscopy (STORM): A method for super resolution fluorescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (6), 075143 (2013).</li><li>Shroff, H., Galbraith, C. G., Galbraith, J. A., Betzig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+photoactivated+localization+microscopy+of+nanoscale+adhesion+dynamics.">Live-cell photoactivated localization microscopy of nanoscale adhesion dynamics.</a> Nature Methods. 5 (5), 417-423 (2008).</li><li>Vicidomini, G., Bianchini, P., Diaspro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STED+super-resolved+microscopy.">STED super-resolved microscopy.</a> Nature Methods. 15 (3), 173-182 (2018).</li><li>Huff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Airyscan+detector+from+ZEISS:+confocal+imaging+with+improved+signal-to-noise+ratio+and+super-resolution.">The Airyscan detector from ZEISS: confocal imaging with improved signal-to-noise ratio and super-resolution.</a> Nature Methods. 12 (12), (2015).</li><li>Huff, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+2D+superresolution+mode+for+ZEISS+Airyscan.">The new 2D superresolution mode for ZEISS Airyscan.</a> Nature Methods. 14 (12), 1223 (2017).</li><li>Korobchevskaya, K., Lagerholm, B., Colin-York, H., Fritzsche, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+potential+of+Airyscan+microscopy+for+live+cell+imaging.">Exploring the potential of Airyscan microscopy for live cell imaging.</a> Photonics. 4 (4), 41 (2017).</li><li>Ranjan, R., Snedeker, J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centromeres+differentially+coordinate+with+mitotic+machinery+to+ensure+biased+sister+chromatid+segregation+in+germline+stem+cells.">Asymmetric centromeres differentially coordinate with mitotic machinery to ensure biased sister chromatid segregation in germline stem cells.</a> Cell Stem Cell. 25 (5), 666-681 (2019).</li><li>Kahney, E. W., Ranjan, R., Gleason, R. J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetry+from+asymmetry+or+asymmetry+from+symmetry.">Symmetry from asymmetry or asymmetry from symmetry.</a> Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 82, 305-318 (2017).</li><li>Wooten, M., Ranjan, R., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+histone+inheritance+in+asymmetrically+dividing+stem+cells.">Asymmetric histone inheritance in asymmetrically dividing stem cells.</a> Trends in Genetics. 36 (1), 30-43 (2020).</li><li>Wooten, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+histone+inheritance+via+strand-specific+incorporation+and+biased+replication+fork+movement.">Asymmetric histone inheritance via strand-specific incorporation and biased replication fork movement.</a> Nature Structural &amp; Molecular Biology. 26 (8), 732-743 (2019).</li><li>Prasad, M., Jang, A. C. C., Starz-Gaiano, M., Melani, M., Montell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+culturing+Drosophila+melanogaster+stage+9+egg+chambers+for+live+imaging.">A protocol for culturing Drosophila melanogaster stage 9 egg chambers for live imaging.</a> Nature Protocols. 2 (10), 2467-2473 (2007).</li><li>Schermelleh, L., Heintzmann, R., Leonhardt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+super-resolution+fluorescence+microscopy.">A guide to super-resolution fluorescence microscopy.</a> Journal of Cell Biology. 190 (2), 165-175 (2010).</li><li>Sivaguru, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+performance+of+airyscan+and+structured+illumination+superresolution+microscopy+in+the+study+of+the+surface+texture+and+3D+shape+of+pollen.">Comparative performance of airyscan and structured illumination superresolution microscopy in the study of the surface texture and 3D shape of pollen.</a> Microscopy Research and Technique. 81 (2), 101-114 (2018).</li></ol>

توفر طرق الفحص المجهري فائقة الدقة دقة مكانية عالية يصل إلى 10s من نانومتر4،5،6. تسمح طرق الفحص المجهري STORM و PALM بدقة تصل إلى 20 إلى 50 نانومتر (دقة XY)، في حين يوفر المجهر STED دقة تتراوح بين 20 و100 نانومتر (دقة XY). الدقة المكانية للميكروسكوبي SIM يقتصر...

تصور الهياكل دون الخلوية وديناميات البروتين في الخلايا الحية مع القرار وراء حد الحيود للضوء وعادة ما يكون تحديا كبيرا1-3. في حين تم تطوير تقنيات متعددة فائقة الدقة مثل الاستشحات البصري - إعادة الإعمار - المجهر (STORM) ، والتنظير الضوئي المنشط - التعريب الدقيق (PALM) وحفز الانبعاثات - الاستنفاد (STED)4،5،6 المجهر ، والمضاعفات في إعداد العينات ، فضلا عن الحاجة إلى الحفاظ على الجدوى والنشاط في الجسم الحي ، والحد من استخدام المجهر فائقة الدقة التقليدية لتصوير العينات الحية. لا يمكن أن يصل المجهر البؤري التقليدي إلى الدقة المكانية بعد دقة XY ~ 230 نانومتر وغالبا ما يكون غير كاف لمراقبة الهياكل الفرعية الخلوية المعقدة5و6. ومع ذلك ، فإن التطور الأخير في المجهر confocal ، Airyscan فائقة الدقة التصوير ، قادرة على تحقيق ما يقرب من 140 نانومتر (XY القرار)7،8 ولديه إعداد عينة بسيطة نسبيا التي تتوافق مع التصوير الحي. منذ هذا النظام الكشف عن التصوير يتطلب وقتا طويلا اقتناء، قرارها المكانية عالية لا تأتي على حساب القرار الزمني9. لذلك، هناك حاجة إلى طريقة لضمان أن يتم توسيع التصوير بالخلايا الحية مع دقة مكانية عالية.
هنا، طورنا طريقة لمراقبة الخلايا الحية في الأنسجة السليمة بدقتها المثلى لفك الهياكل دون الخلوية مع معلومات مكانية مفصلة. تم تصميم هذه الطريقة على هذا النحو بحيث يمكن تركيب العينات بشكل ثابت لفترة طويلة من الزمن (~ 10 ساعة) دون تحريك أو تدهور. يمكن لوسائط الخلايا الحية المستخدمة في هذه التقنية دعم الوظيفة الخلوية وتجنب الbleaching الضوئي لمدة تصل إلى 10 ساعات تحت المجهر فائق الدقة. وأخيرا، يقلل هذا البروتوكول من معظم الضغوط الناجمة عن الإضاءة المستمرة لأشعة الليزر على مدى فترات طويلة من الزمن مثل نقص الأكسيجة، والتغيرات في الرطوبة ودرجة الحرارة، فضلا عن استنفاد المغذيات.
باستخدام هذا البروتوكول لتصوير Drosophila الذكور الخلايا الجذعية الجرثومية (GSCs)، كنا قادرين على ملاحظة كيف النشاط غير المتماثل من microtubules يسمح للتفاعل التفضيلي مع الكروماتيدات الشقيقة المتميزة وراثيا10،11،12،13. هذه الأنواع من الأحداث الخلوية هي ديناميكية للغاية ويصعب جدا تصور في الخلايا الحية باستخدام طرق التصوير فائقة الدقة الأخرى مثل العاصفة، بالم، أو الأمراض المنقولة جنسيا. نتوقع أن تصبح هذه الطريقة مفيدة للغاية لعلماء الأحياء الخلية لأنها تهدف إلى فهم الهياكل دون الخلوية الديناميكية للخلايا الحية الموجودة في الأنسجة. هناك العديد من المجالات التي يمكن تطبيق هذه الطريقة على, مثل دراسة ديناميات البروتينات; فهم حركة الخلايا؛ وتتبع النسب وعمليات التمايز الخلوي، من بين تطبيقات أخرى ممكنة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adobe Illustrator CS6 (figure making software)</td>
			<td>Adobe</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis membrane</td>
			<td>Spectra/Por 1-4 Standard RC Dialysis Membrane</td>
			<td>Cat No. 08-67121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. 26140079</td>
			<td>15% (V/V)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji (analysis software)</td>
			<td>NIH</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Image fluorescence intensity quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom cell culture dishes (FluroDish)</td>
			<td>World Precision Instrument, Inc.</td>
			<td>FD35PDL-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris (image reconstruction software)</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3D image reconstruction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imerssion oil</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Immersol 518F/30 &#176;C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. No. 15550</td>
			<td>200 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat No. - 15140-122</td>
			<td>0.6x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider Drosophila media</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat No. - 11720-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disc confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td>equipped with an evolve camera (Photometrics), using a 63x Zeiss objective (1.4 NA).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper</td>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Wet to form humid chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 800 confocal microscope with AiryScan super-resolution module</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td>equipped with highly sensitive GaAsP (Gallium Arsenide Phosphide) detectors using a 63x Zeiss objective (1.4 NA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN (imaging software)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

super-resolution live cell imaging of subcellular structures

كانت هناك منذ فترة طويلة مقايضة حاسمة بين الدقة المكانية والزمنية في التصوير. وقد تم تقليديا التصوير خارج الحد الحيود للضوء يقتصر على استخدامها فقط على عينات ثابتة أو الخلايا الحية خارج الأنسجة المسماة مع إشارة الفلورسنت قوية. تتطلب تقنيات تصوير الخلايا الحية فائقة الدقة الحالية استخدام مسابير مضان خاصة ، أو إضاءة عالية ، أو اكتساب صور متعددة مع معالجة ما بعد الاستحواذ ، أو في كثير من الأحيان مزيج من هذه العمليات. وتحد هذه الشروط المسبقة بشكل كبير من العينات والسياقات البيولوجية التي يمكن تطبيق هذه التقنية عليها.
هنا نحن نصف طريقة لأداء فائقة الدقة (~ 140 نانومتر XY القرار) الوقت الفاصل الزمني التصوير الخلايا الحية في الموقع. هذه التقنية متوافقة أيضا مع كثافة الفلورسنت المنخفضة ، على سبيل المثال ، EGFP أو mCherry الموسومة داخليا في الجينات المعبر عنها بشكل منخفض. كدليل على المبدأ ، استخدمنا هذه الطريقة لتصور هياكل فرعية متعددة في اختبار Drosophila. أثناء إعداد الأنسجة ، يتم الحفاظ على كل من البنية الخلوية ومورفولوجيا الأنسجة داخل الخصية المشرحة. هنا ، نستخدم هذه التقنية لتصوير ديناميات microtubule ، والتفاعلات بين microtubules والغشاء النووي ، فضلا عن ارتباط microtubules إلى centromeres.
تتطلب هذه التقنية إجراءات خاصة في إعداد العينات وتركيب العينات وشل حركة العينات. بالإضافة إلى ذلك، يجب الحفاظ على العينات لعدة ساعات بعد تشريح دون المساس وظيفة الخلوية والنشاط. في حين أننا قمنا بتحسين ظروف التصوير الحي فائق الدقة على وجه التحديد في الخلايا الجذعية الجرثومية الذكور Drosophila (GSCs) والخلايا الجرثومية السلف في أنسجة الخصية تشريح، وهذه التقنية تنطبق على نطاق واسع على مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا المختلفة. إن القدرة على مراقبة الخلايا في ظل ظروفها الفسيولوجية دون التضحية بالدقة المكانية أو الزمنية ستكون بمثابة أداة لا تقدر بثمن للباحثين الذين يسعون إلى معالجة الأسئلة الحاسمة في بيولوجيا الخلايا.

يوفر تصوير الخلايا الحية خارج حدود الحيود في أنسجة دروسوفيلا، وخاصة بالنسبة ل GSCs، فرصة للتحقيق في ديناميكيات الأحداث دون الخلوية في سياق تطور دورة الخلية. في الآونة الأخيرة ، أظهرت دراسة تستخدم هذا البروتوكول أن أنشطة microtubule في مركز الأم مقابل سنتروسوم الابنة غير متماثلة زمنيا في GSCs<...

Watch this Scientific Journal Video about Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures at JoVE.com

Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures

هنا هو بروتوكول فائقة الدقة التصوير بالخلايا الحية في الأنسجة سليمة. لقد قمنا بتوحيد شروط تصوير مجموعة الخلايا الجذعية البالغة الحساسة للغاية في بيئة الأنسجة الأصلية. وتنطوي هذه التقنية على تحقيق التوازن بين الاستبانة الزمنية والمكانية للسماح بالملاحظة المباشرة للظواهر البيولوجية في الأنسجة الحية.

فائقة الدقة تصوير الخلايا الحية من الهياكل دون الخلوية

There has long been a crucial tradeoff between spatial and temporal resolution in imaging. Imaging beyond the diffraction limit of light has traditionally ...

يستخدم بروتوكولنا مسابير الفلوروفور العادية وتقنيات إعداد العينات البسيطة التي تحافظ على الخلية المصورة في حالة فسيولوجية لدراسة العملية الخلوية الديناميكية للغاية والهياكل الخلوية الفرعية التفصيلية. تسمح لنا هذه التقنية بالتحقيق في العمليات الخلوية بدقة فائقة وفي ظل ظروف فسيولوجية لفترة طويلة دون التضحية بالدقة الخاصة أو المؤقتة. تبدأ بقطع 12 إلى 14 كيلودالتون الوزن الجزيئي قطع غشاء غسيل الكلى إلى قطع صغيرة ونقع القطع مع 100 ميكرولتر من متوسط الخلية الحية لمدة خمس دقائق تقريبا.في حين يتم نقع الأغشية، وقطع الحلقة الخارجية من أنبوب 50 ملليلتر إلى قطع صغيرة وتعقيم القطع في الإيثانول 70٪. لتشريح الخصيتين وتصاعد، ونقل عشرة يومين إلى ثلاثة أيام من العمر الذباب الذكور تخدير في طبق تشريح تحت المجهر تشريح واستخدام ملقط غرامة لإزالة الخصيتين. عندما يتم جمع جميع الخصيتين، وغسل الخصيتين مرتين في المتوسط الخلية الحية واستخدام طرف ماصة لنشر 100 إلى 150 ميكرولتر من المتوسط الخلية الحية إلى الطبق السفلي الزجاج المعدة.استخدام ملقط غرامة لنقل الخصية يطير إلى وسط الطبق وإزالة جميع ما عدا حوالي 10 ميكرولتر من المتوسط. بسرعة، ضع الغشاء الرطب قبل على الخصيتين ووضع اثنين إلى ثلاثة أوزان بلاستيكية صغيرة على الغشاء. على الفور، إضافة 100 إلى 150 ميكرولتر من الخلايا الحية الطازجة المتوسطة ووضع الخاتم مرة أخرى على الجانب مرتفعة من الطبق.ضع الغطاء على الحلقة ودوامة قطعة من ورق الأنسجة في الماء قبل وضع الورق على زلة الغطاء. ثم، تغطية الطبق مع غطاء وتأمين الطبق على خشبة المسرح من المجهر فائقة الدقة. لتصوير الخلايا الجذعية الجرثومية، افتح برنامج التصوير ثم قم بتشغيل الضوء المرسل.استخدم هدف 63X للتركيز على أنسجة الخصيتين و تشغيل الليزر. انقر فوق Live"لتحديد موقع الخلايا الجذعية الجرثومية. ضبط التركيز وانقر فوق حجم الإطار"لتعيين حجم الإطار إلى ما بين 512 في 512 و 1024 بواسطة 1024 بكسل، ومتوسط"لتعيين متوسط الإطار إلى واحد أو اثنين.انقر فوق كسب رئيسي"لتعيين الإلكترون ضرب كسب إلى أقل من 800، والليزر"لتعيين قوة الليزر إلى 1٪إلى 2٪التكبير في المنطقة أو الخلية ذات الاهتمام للحد من وقت التقاط الصورة والحد من تبييض الصور، والتأكد من أن الصورة قد تم تكوينها على النحو الأمثل قبل النقر فوق بدء التجربة"لبدء التقاط صورة الفاصل الزمني. إذا لم يتم تكوين اقتناء Airyscan على النحو الأمثل"يتم عرض، انقر فوق الأمثل"في حجم الإطار، Z-المكدس، ومسح المنطقة"أقسام، وتحسين الفاصل الزمني، وعدد من شرائح Z ومدة التصوير الفاصل الزمني، وفقا للتصميم التجريبي ونوع العينة. بعد التصوير، حدد معالجة، دفعة"و Airyscan معالجة، وحدد الصور التي سيتم معالجتها.ثم انقر فوق تشغيل عملية"للحصول على الصور فائقة الدقة. التصوير بالخلايا الحية من الخصيتين drosophila التعبير عن ألفا tubulin GFP في الخلايا الجرثومية في مرحلة مبكرة باستخدام المجهر confocal القرص الغزل، ويسمح تصور كثافة غير متناظرة من إشارات GFP في اثنين من centrosomes، كإشارة أكثر إشراقا في المركزية الأم وإشارة أضعف نسبيا في سنتروسومات ابنة. من المرجح أن ينعكس الفرق في السطوع من خلال عدم التماثل الزمني لنوى microtubule ، ولكن لا يمكن حل مورفولوجيا مفصلة وكمية من microtubules باستخدام المجهر الغزل قرص confocal.في المقابل ، يسمح التصوير الفائق للخلايا الحية بالتصور والتحديد الكمي لمورفولوجيا الخلايا الدقيقة والأرقام. ويكشف هذا القرار المحسن أيضا عن أنماط من نواة الميكروتبول غير المتماثلة، والاطالة، وزيادة التفاعل مع الغشاء النووي. يسمح تصوير الخلايا الحية أيضا بتصور تجويف الغشاء النووي غير المتماثل ، ولكن ليس للخلايا الدقيقة الفردية التي تدخل النواة مباشرة.في المقابل ، تسمح تقنية الدقة الفائقة للخلايا الحية هذه بالملاحظة المباشرة لهذه الأحداث عن طريق التصوير المتزامن لكل من الخلايا الدقيقة والصفائح النووية. خلال ميتافيزي، يمكن الكشف عن كل من centromeres الشقيقة كإشارة واحدة باستخدام المجهر قرص الغزل، على الرغم من أن المرفق المركزي microtubule لا يمكن ملاحظتها. في المقابل ، يسمح التصوير الحي فائق الدقة بتصور مرفق ميكروتوبيول سنترومير في البروبوهاز المبكر.تأكد من وضع غشاء فوق الخصية للتأكد من أنها لا تتحرك أو تطفو أثناء التصوير وتحسين إعدادات المجهر لتجنب تبييض الصور وسمية الصورة. هناك العديد من الطرق التي يمكن تطبيق هذه الطريقة، مثل التحقيق في ديناميات البروتين، والإجهاد الخطي، أو الدفاعات والعمليات الخلوية.

Research

JoVE Journal

Biology

Super-resolution Imaging of the Bacterial Division Machinery

فائقة التصوير القرار من ماكينات شعبة الجرثومي

Bacterial cell division requires the coordinated  assembly of more than ten essential proteins at midcell1,2. Central  to this process is the formation of ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

حيوي داخلي المجهري للهياكل التصوير التحت خلوية في الفئران لايف تعرب عن البروتينات الفلورية

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

Test Samples for Optimizing STORM Super-Resolution Microscopy

عينات الاختبار لتحسين STORM فائقة الدقة المجهر

STORM is a recently developed super-resolution microscopy technique with up to 10 times better resolution than standard fluorescence microscopy ...

Imaging Cell Membrane Injury and Subcellular Processes Involved in Repair

التصوير خلية غشاء من الإصابات والعمليات التحت خلوية المشاركة في اصلاح

The ability of injured cells to heal is a fundamental cellular process, but cellular and molecular mechanisms involved in healing injured cells are poorly ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

إعداد عينة للفحص المجهري للقوة الذرية Virion واحد والتصوير الفلوري فائقة الدقة

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy (f3D-SIM)

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy f3D-SIM

فائقة الدقة التصوير من Cytokinetic Z الدائري في البكتيريا تعيش طريق سريع منظم 3D الإضاءة المجهري (F3D-SIM)

Imaging of biological samples using fluorescence microscopy has advanced substantially with new technologies to overcome the resolution barrier of the ...

Open-source Single-particle Analysis for Super-resolution Microscopy with VirusMapper

المصدر المفتوح تحليل واحد الجسيمات لسوبر قرار المجهري مع VirusMapper

Super-resolution fluorescence microscopy is currently revolutionizing cell biology research. Its capacity to break the resolution limit of around 300 nm ...

Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins

تصوير يعيش خلية من الخلايا الفطرية للتحقيق في أوضاع الدخول والتعريب سوبسيلولار من ديفينسينس النباتية المضادة للفطور

Small cysteine-rich defensins are one of the largest groups of host defense peptides present in all plants. Many plant defensins exhibit potent in vitro ...

Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells

الدولة الأرض استنفاد القرار فائقة التصوير في خلايا الثدييات

Advances in fluorescent microscopy and cell biology are intimately correlated, with the enhanced ability to visualize cellular events often leading to ...

Application of High-speed Super-resolution SPEED Microscopy in Live Primary Cilium

تطبيق القرار فائقة السرعة سرعة الفحص المجهري في هدب الأولية الحية

The primary cilium is a microtubule-based protrusion on the surface of many eukaryotic cells and contains a unique complement of proteins that function ...