Name: super-resolution live cell imaging of subcellular structures
Uploaded: 2021-01-13T13:00:00
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저자는 현미경 및 데이터 분석 소프트웨어에 대한 존스 홉킨스 대학의 통합 이미징 코어 시설에 감사드립니다. J. 스네데커와 Q. E. 유에게 교정과 제안을 해주신 것에 대해 감사드리며, X.C. NIGMS/NIH R35GM127075, 하워드 휴즈 의학 연구소, 데이비드와 루실 패커드 재단, 존스 홉킨스 대학 스타트업 펀드(X.C.)가 지원합니다.

1. 라이브 셀 이미징 칵테일 준비 (라이브 셀 미디어)
<ol><li>15% 태아 소 혈청 (FBS) 및 0.6 x 페니실린 /연쇄 절제술을 가진 슈나이더의 Drosophila 매체를 보충합니다. pH를 약 7.0으로 조정합니다.</li>
	<li>매체를 사용하기 직전에 인슐린을 200 μg/mL의 최종 농도에 추가하십시오. 참고: 이 매체는 시간 경과 영상10,14동안 Drosophila 고환의 정상적인 ?...

<ol>
	<li>Breedijk, R. M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+live-cell+super-resolution+technique+demonstrated+by+imaging+germinosomes+in+wild-type+bacterial+spores.">A live-cell super-resolution technique demonstrated by imaging germinosomes in wild-type bacterial spores.</a> Scientific Reports. 10 (1), 5312 (2020).</li><li>Maddox, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+mitotic+spindle.">Imaging the mitotic spindle.</a> Methods in Enzymology. 505, 81-103 (2012).</li><li>Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+microscopy+-+tips+and+tools.">Live-cell microscopy - tips and tools.</a> Journal of Cell Science. 122 (6), 753-767 (2009).</li><li>Bates, M., Jones, S. A., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+optical+reconstruction+microscopy+(STORM):+A+method+for+super+resolution+fluorescence+imaging.">Stochastic optical reconstruction microscopy (STORM): A method for super resolution fluorescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (6), 075143 (2013).</li><li>Shroff, H., Galbraith, C. G., Galbraith, J. A., Betzig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+photoactivated+localization+microscopy+of+nanoscale+adhesion+dynamics.">Live-cell photoactivated localization microscopy of nanoscale adhesion dynamics.</a> Nature Methods. 5 (5), 417-423 (2008).</li><li>Vicidomini, G., Bianchini, P., Diaspro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STED+super-resolved+microscopy.">STED super-resolved microscopy.</a> Nature Methods. 15 (3), 173-182 (2018).</li><li>Huff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Airyscan+detector+from+ZEISS:+confocal+imaging+with+improved+signal-to-noise+ratio+and+super-resolution.">The Airyscan detector from ZEISS: confocal imaging with improved signal-to-noise ratio and super-resolution.</a> Nature Methods. 12 (12), (2015).</li><li>Huff, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+2D+superresolution+mode+for+ZEISS+Airyscan.">The new 2D superresolution mode for ZEISS Airyscan.</a> Nature Methods. 14 (12), 1223 (2017).</li><li>Korobchevskaya, K., Lagerholm, B., Colin-York, H., Fritzsche, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+potential+of+Airyscan+microscopy+for+live+cell+imaging.">Exploring the potential of Airyscan microscopy for live cell imaging.</a> Photonics. 4 (4), 41 (2017).</li><li>Ranjan, R., Snedeker, J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centromeres+differentially+coordinate+with+mitotic+machinery+to+ensure+biased+sister+chromatid+segregation+in+germline+stem+cells.">Asymmetric centromeres differentially coordinate with mitotic machinery to ensure biased sister chromatid segregation in germline stem cells.</a> Cell Stem Cell. 25 (5), 666-681 (2019).</li><li>Kahney, E. W., Ranjan, R., Gleason, R. J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetry+from+asymmetry+or+asymmetry+from+symmetry.">Symmetry from asymmetry or asymmetry from symmetry.</a> Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 82, 305-318 (2017).</li><li>Wooten, M., Ranjan, R., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+histone+inheritance+in+asymmetrically+dividing+stem+cells.">Asymmetric histone inheritance in asymmetrically dividing stem cells.</a> Trends in Genetics. 36 (1), 30-43 (2020).</li><li>Wooten, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+histone+inheritance+via+strand-specific+incorporation+and+biased+replication+fork+movement.">Asymmetric histone inheritance via strand-specific incorporation and biased replication fork movement.</a> Nature Structural &amp; Molecular Biology. 26 (8), 732-743 (2019).</li><li>Prasad, M., Jang, A. C. C., Starz-Gaiano, M., Melani, M., Montell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+culturing+Drosophila+melanogaster+stage+9+egg+chambers+for+live+imaging.">A protocol for culturing Drosophila melanogaster stage 9 egg chambers for live imaging.</a> Nature Protocols. 2 (10), 2467-2473 (2007).</li><li>Schermelleh, L., Heintzmann, R., Leonhardt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+super-resolution+fluorescence+microscopy.">A guide to super-resolution fluorescence microscopy.</a> Journal of Cell Biology. 190 (2), 165-175 (2010).</li><li>Sivaguru, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+performance+of+airyscan+and+structured+illumination+superresolution+microscopy+in+the+study+of+the+surface+texture+and+3D+shape+of+pollen.">Comparative performance of airyscan and structured illumination superresolution microscopy in the study of the surface texture and 3D shape of pollen.</a> Microscopy Research and Technique. 81 (2), 101-114 (2018).</li></ol>

초해상도 현미경 법은 나노미터4,5,6의10초까지 높은 공간 해상도를 제공한다. STORM 및 PALM 현미경 검사법은 최대 20~50nm(XY 해상도)의 해상도를 허용하며, STED 현미경 검사법은 20~100nm(XY 해상도)의 해상도를 제공합니다. SIM 현미경 검사법의 공간 해상도는 100nm15로제한됩니다. 그러나, 그것의 높은 광자 밀도 및 긴 취득 시간...

빛의 회절 한계를 넘어 분해와 라이브 세포에서 세포 극체 구조 및 단백질 역학을 시각화하는 것은 일반적으로 매우 도전1-3. 스토차스-광학-재건-현미경 검사법(STORM), 사진 활성화-국소화-현미경검사(PALM) 및 자극-방출 고갈(STED)4,5,6 현미경 검사법과 같은 다수의 초해상도 기술이 개발되었지만, 표본 제제의 합병증뿐만 아니라 생존력 및 활동 전 생체 내 사용을 유지해야 할 필요성뿐만 아니라 종래의 초심 마이크로 이미징의 사용을 제한한다. 종래의 공초점 현미경 검사는 ~230nm XY 해상도를 넘어 공간 해상도에 도달할 수 없으며 복잡한 세포 하위 구조를 관찰하기에는 종종 충분하지 않습니다5,6. 그러나, 최근 공초점 현미경검사, Airyscan 초해상도 이미징의 개발은 약 140nm(XY-해상도)7,8을 달성할 수 있으며, 라이브 이미징과 호환되는 비교적 간단한 시료 제제를 갖는다. 이 이미징 감지 시스템은 긴 수집 시간이 필요하기 때문에 높은 공간 해상도는 시간적 해상도9의비용으로 제공됩니다. 따라서 라이브 셀 이미징이 높은 공간 해상도로 확장되도록 하는 방법이 필요합니다.
여기서, 우리는 상세한 공간 정보로 세포 극체 구조를 해독하기 위한 최적 해상도로 그대로 조직으로 살아있는 세포를 관찰하는 방법을 개발했습니다. 이 방법은 시료를 이동하거나 퇴행성없이 장시간(~10시간) 동안 안정적으로 장착할 수 있도록 설계되었습니다. 이 기술에 사용되는 살아있는 세포 매체는 세포 기능을 지원하고 초해상도 현미경으로 최대 10 시간 동안 표백을 피할 수 있습니다. 마지막으로, 이 프로토콜은 저산소증, 습도 및 온도 의 변화, 영양소 피로와 같은 오랜 기간 동안 레이저의 지속적인 조명으로 인한 대부분의 스트레스를 최소화합니다.
이 프로토콜을 사용하여 Drosophila 남성 생식선 줄기 세포 (GSC)를 이미지, 우리는 마이크로 투비의 비대칭 활동이 후생 유전학적으로 구별 자매 크로마티드와 우선 상호 작용을 허용하는 방법을 관찰 할 수 있었다10,11,12,13. 이러한 유형의 세포 이벤트는 매우 역동적이며 STORM, PALM 또는 STED와 같은 다른 초해상도 이미징 방법을 사용하여 라이브 셀에서 시각화하기가 매우 어렵습니다. 우리는 이 방법이 조직에 거주하는 살아있는 세포의 동적 세포 극성 구조를 이해하는 것을 목표로 세포 생물학자에게 매우 유용해질 것으로 예상합니다. 이 방법은 단백질의 역학을 공부하는 것과 같은 많은 지역에 적용될 수 있습니다; 세포의 움직임을 이해; 및 계보 추적 및 셀룰러 분화 프로세스, 다른 가능한 응용 프로그램 중.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adobe Illustrator CS6 (figure making software)</td>
			<td>Adobe</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis membrane</td>
			<td>Spectra/Por 1-4 Standard RC Dialysis Membrane</td>
			<td>Cat No. 08-67121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. 26140079</td>
			<td>15% (V/V)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji (analysis software)</td>
			<td>NIH</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Image fluorescence intensity quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom cell culture dishes (FluroDish)</td>
			<td>World Precision Instrument, Inc.</td>
			<td>FD35PDL-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris (image reconstruction software)</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3D image reconstruction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imerssion oil</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Immersol 518F/30 &#176;C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. No. 15550</td>
			<td>200 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat No. - 15140-122</td>
			<td>0.6x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider Drosophila media</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat No. - 11720-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disc confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td>equipped with an evolve camera (Photometrics), using a 63x Zeiss objective (1.4 NA).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper</td>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Wet to form humid chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 800 confocal microscope with AiryScan super-resolution module</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td>equipped with highly sensitive GaAsP (Gallium Arsenide Phosphide) detectors using a 63x Zeiss objective (1.4 NA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN (imaging software)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

super-resolution live cell imaging of subcellular structures

이미징에서 공간과 시간적 해상도 사이에는 오랫동안 중요한 절충이 있었습니다. 빛의 회절 한계를 넘어 화상 진찰은 전통적으로 강한 형광 신호로 표지된 조직의 외부의 고정 된 견본 또는 살아있는 세포에만 이용되는 것을 제한되었습니다. 현재 의수분해능 라이브 셀 이미징 기술은 특수 형광 프로브, 높은 조명, 인수 후 처리를 사용한 여러 이미지 수집 또는 종종 이러한 프로세스의 조합을 사용해야 합니다. 이러한 전제 조건은 이 기술이 적용될 수 있는 생물학적 샘플 및 컨텍스트를 크게 제한합니다.
여기서는 시투에서 수퍼 분해능(~140nm XY-해상도) 시간 경과 형광 라이브 세포 이미징을 수행하는 방법을 설명합니다. 이 기술은 또한 낮은 형광 강도와 호환, 예를 들어, EGFP 또는 mCherry 내인성 낮은 발현 유전자에 태그. 원칙의 증거로, 우리는 Drosophila 고환에 있는 다중 세포극 구조물을 구상하기 위하여 이 방법을 이용했습니다. 조직 준비 중, 세포 구조와 조직 형태는 해부 된 고환 내에서 유지된다. 여기서는 이 기술을 사용하여 마이크로튜블러 역학, 마이크로투블러와 핵멤브레인 간의 상호 작용, 미로펠에 대한 마이크로투블러 부착을 이미지화합니다.
이 기술은 시료 준비, 시료 장착 및 시편의 고정에 특별한 절차가 필요합니다. 추가적으로, 견본은 세포 기능 및 활동을 손상시키지 않고 해부 후에 몇 시간 동안 유지되어야 합니다. 우리는 Drosophila 남성 생식선 줄기 세포 (GSCs) 및 해부 된 고환 조직에서 선천성 세균 세포에서 특히 살아있는 슈퍼 해상도 이미징을위한 조건을 최적화했지만,이 기술은 다양한 다른 세포 유형에 광범위하게 적용됩니다. 공간적 또는 현세적 해상도를 희생하지 않고 생리학적 조건하에서 세포를 관찰하는 능력은 세포 생물학에서 중요한 질문을 해결하려는 연구진에게 귀중한 도구가 될 것입니다.

Drosophila 조직에 있는 회절 한계를 넘어 살아있는 세포 화상 진찰, 특히 GSCs를 위해, 세포 주기 진행의 맥락에서 세포 극성 사건의 역학을 조사할 기회를 제공합니다. 최근, 이 프로토콜을 이용한 연구는 어머니 중심에서 미세수염 활동이 딸 중심체에 비해 일시적으로 GSC10에서비대칭임을 보여주었다. 어머니 중추는 미토틱 입력 전에 약 4 시간 전에 마이크로 투하를 방출하?...

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Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures

여기에 제출된 것은 손상되지 않은 조직에서 초해상도 라이브 세포 이미징을 위한 프로토콜입니다. 우리는 그것의 네이티브 조직 환경에 있는 높게 민감한 성인 줄기 세포 인구를 화상 진찰을 위한 조건을 표준화했습니다. 이 기술은 살아있는 조직에서 생물학적 현상의 직접적인 관찰을 허용하는 시간적 및 공간 해상도의 균형을 포함한다.

세포 전 형 구조의 슈퍼 해상도 라이브 세포 이미징

There has long been a crucial tradeoff between spatial and temporal resolution in imaging. Imaging beyond the diffraction limit of light has traditionally ...

우리의 프로토콜은 고동적인 세포 과정 및 상세한 세포 구조를 연구하기 위하여 생리적인 조건에서 심상화세포를 유지하는 정규 불소 포프로브 및 간단한 견본 준비 기술을 이용합니다. 이 기술은 우리가 특별하거나 임시 해상도 중 하나를 희생하지 않고 장기간 동안 슈퍼 해상도와 생리 적 조건에서 세포 과정을 조사 할 수 있습니다. 12~14킬로달톤의 분자량 차단 투석 막을 작은 조각으로 자르고 약 5분 동안 100마이크로리터의 살아있는 세포 배지로 조각을 담그십시오.멤브레인이 몸을 담그는 동안 50 밀리리터 튜브의 외부 링을 작은 조각으로 자르고 조각을 70 % 에탄올로 소독합니다. 고환해부 및 장착의 경우, 10 2~3일 된 마취된 남성이 해부 현미경하에서 해부 접시에 파리를 옮기고 미세 한 집게를 사용하여 고환을 제거하십시오. 모든 고환이 수집되면, 살아있는 세포 배지에서 고환을 두 번 세척하고 파이펫 팁을 사용하여 100 에서 150 마이크로리터의 살아있는 세포 배지를 준비된 유리 바닥 접시에 퍼뜨리게 한다.미세 한 집게를 사용하여 비행 고환을 접시의 중심으로 옮기고 매체의 약 10 마이크로 리터를 제외한 모든 것을 제거하십시오. 빨리, 고환에 미리 젖은 멤브레인을 배치하고 멤브레인에 2 ~ 3 개의 작은 플라스틱 무게를 놓습니다. 즉시 신선한 라이브 셀 배지 100~150마이크로리터를 추가하고 링을 접시의 높은 측면에 다시 놓습니다.덮개를 다시 링에 놓고 종이를 덮개 슬립에 놓기 전에 티슈 페이퍼를 물에 휘둘러 놓습니다. 그런 다음 뚜껑으로 접시를 덮고 슈퍼 해상도 현미경의 무대에서 접시를 고정하십시오. 생식선 줄기 세포 이미징의 경우 이미징 소프트웨어를 열고 전달된 빛을 켭니다.63X 목표를 사용하여 고환 조직에 집중하고 레이저를 켭니다. 생검 줄기 세포를 찾으려면 라이브"를 클릭합니다. 포커스를 조정하고 프레임 크기를 클릭"하여 프레임 크기를 512x512x 1024픽셀로 설정하고 평균화"를 설정하여 프레임 평균을 하나 또는 두 개로 설정합니다.마스터 게인을 클릭하여 전자곱게인을 800 미만으로 설정하고, 레이저"는 레이저 전력을 지역 또는 관심 셀로 1%에서 2%로 확대하여 이미지 획득 시간을 줄이고 사진 표백을 줄이고, 시작 실험을 클릭하기 전에 이미지가 최적으로 구성되었는지 확인하여 타임랩스 영상 캡처를 시작합니다. Airyscan 획득이 최적으로 구성되지 않은 경우"가 표시되고, 프레임 크기, Z-스택 및 스캔 영역 섹션에서 최적의"을 클릭하고, 실험 설계 및 시편의 유형에 따라 시간 간격, Z 슬라이스 수 및 시간 경과 이미징의 기간을 최적화합니다. 이미징 후 처리, 배치 및 Airyscan 처리를 선택하고 처리할 이미지를 선택합니다.그런 다음 프로세스 실행"을 클릭하여 슈퍼 해상도 이미지를 얻습니다. 회전 디스크 공초점 현미경을 사용하여 초기 단계 세균 세포에서 알파 tubulin GFP를 표현하는 drosophila 고환의 살아있는 세포 화상 진찰은, 어머니 중심에서 밝은 신호로, 2 개의 센트로솜에서 GFP 신호의 비대칭 강도의 시각화를 허용하고 딸 중원에서 상대적으로 약한 신호로. 밝기의 차이는 미세투막 핵의 측두체 비대칭에 의해 반영될 가능성이 높지만, 미세투부의 상세한 형태와 양은 회전 디스크 공초점 현미경 검사를 사용하여 해결할 수 없다.대조적으로, 살아있는 세포 슈퍼 해상도 화상 진찰은 microtubule 형태와 숫자의 시각화 그리고 정량화를 허용합니다. 이 향상된 해상도는 또한 비대칭 미세tubule 핵의 패턴을 보여줍니다, 신장과 핵 막과의 증가 상호 작용. 살아있는 세포 화상 진찰은 또한 비대칭 핵막 질의 시각화를 허용합니다, 그러나 직접 핵을 입력하는 개별 적인 microtubules의.대조적으로, 이 살아있는 세포 슈퍼 해상도 기술은 마이크로투부와 핵 라미나 둘 다의 동시 화상 진찰에 의해 이 사건의 직접적인 관찰을 허용합니다. 메타단계에서는, 두 자매 중심엽골은 현미경 을 방사능 디스크 현미경검사법을 사용하여 하나의 신호로 검출될 수 있습니다, 마이크로투블러 중앙 부착을 관찰할 수 없지만. 대조적으로, 슈퍼 해상도 라이브 이미징은 초기 단계에서 마이크로 튜블러 중심의 부착물의 시각화를 허용합니다.고환 위에 멤브레인을 배치하여 이미징 중에 움직이거나 떠다니지 않도록 하고 사진 표백 및 사진 독성을 피하기 위해 현미경 설정을 최적화해야 합니다. 단백질 역학, 선형 응력 또는 세포 방어 및 프로세스를 조사하는 것과 같은 이 방법이 적용될 수 있는 여러 가지 방법이 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Super-resolution Imaging of the Bacterial Division Machinery

세균 본부 기계의 슈퍼 해상도 이미징

Bacterial cell division requires the coordinated  assembly of more than ten essential proteins at midcell1,2. Central  to this process is the formation of ...

연구

생물학

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

형광 단백질을 표현 라이브 마우스의 이미징 세포 이하의 구조물의 intravital 현미경

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

Test Samples for Optimizing STORM Super-Resolution Microscopy

최적화 STORM 슈퍼 해상도 현미경에 대한 테스트 샘플

STORM is a recently developed super-resolution microscopy technique with up to 10 times better resolution than standard fluorescence microscopy ...

Imaging Cell Membrane Injury and Subcellular Processes Involved in Repair

이미징 세포 막 상해 및 수리에 관여하는 세포 내 프로세스

The ability of injured cells to heal is a fundamental cellular process, but cellular and molecular mechanisms involved in healing injured cells are poorly ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

단일 비리온 원자력 현미경 검사및 초분해성 형광 이미징을 위한 샘플 준비

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy (f3D-SIM)

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy f3D-SIM

고속 3D 구조 조명 현미경을 사용하여 라이브 박테리아의 Cytokinetic Z 반지의 슈퍼 해상도 이미징 (F3D-SIM)

Imaging of biological samples using fluorescence microscopy has advanced substantially with new technologies to overcome the resolution barrier of the ...

Open-source Single-particle Analysis for Super-resolution Microscopy with VirusMapper

VirusMapper 슈퍼 해상도 현미경을위한 오픈 소스 단일 입자 분석

Super-resolution fluorescence microscopy is currently revolutionizing cell biology research. Its capacity to break the resolution limit of around 300 nm ...

Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins

조사 항목의 모드와 항진균 공장 Defensins의 Subcellular 지 방화 하는 곰 팡이 세포의 라이브 셀 이미징

Small cysteine-rich defensins are one of the largest groups of host defense peptides present in all plants. Many plant defensins exhibit potent in vitro ...

Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells

포유류 세포에 있는 바닥 상태 고갈 슈퍼 해상도 영상

Advances in fluorescent microscopy and cell biology are intimately correlated, with the enhanced ability to visualize cellular events often leading to ...

Application of High-speed Super-resolution SPEED Microscopy in Live Primary Cilium

The primary cilium is a microtubule-based protrusion on the surface of many eukaryotic cells and contains a unique complement of proteins that function ...