Name: super-resolution live cell imaging of subcellular structures
Uploaded: 2021-01-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures at JoVE.com

Forfatterne vil takke Integrated Imaging Core-anlegget ved Johns Hopkins University for mikroskoper og programvare for dataanalyse. Vi takker J. Snedeker og Q. E. Yu for korrekturlesing og forslag, og X.C. labmedlemmer for nyttige diskusjoner og forslag. Støttet av NIGMS/NIH R35GM127075, Howard Hughes Medical Institute, David and Lucile Packard Foundation og Johns Hopkins University oppstartsfond (X.C.).

1. Forberedelse av levende celle bildecocktail (live celle media)
<ol><li>Supplement Schneiders Drosophila medium med 15% foster bovint serum (FBS) og 0,6x penicillin/streptomycin. Juster pH til ca. 7,0.</li>
	<li>Rett før du bruker mediet, tilsett insulin i en endelig konsentrasjon på 200 μg/ml. MERK: Dette mediet er avgjørende for å opprettholde normal celledeling og utvikling av Drosophila testis under tidsforløp bildebehandling10,14</su...

<ol>
	<li>Breedijk, R. M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+live-cell+super-resolution+technique+demonstrated+by+imaging+germinosomes+in+wild-type+bacterial+spores.">A live-cell super-resolution technique demonstrated by imaging germinosomes in wild-type bacterial spores.</a> Scientific Reports. 10 (1), 5312 (2020).</li><li>Maddox, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+mitotic+spindle.">Imaging the mitotic spindle.</a> Methods in Enzymology. 505, 81-103 (2012).</li><li>Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+microscopy+-+tips+and+tools.">Live-cell microscopy - tips and tools.</a> Journal of Cell Science. 122 (6), 753-767 (2009).</li><li>Bates, M., Jones, S. A., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+optical+reconstruction+microscopy+(STORM):+A+method+for+super+resolution+fluorescence+imaging.">Stochastic optical reconstruction microscopy (STORM): A method for super resolution fluorescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (6), 075143 (2013).</li><li>Shroff, H., Galbraith, C. G., Galbraith, J. A., Betzig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+photoactivated+localization+microscopy+of+nanoscale+adhesion+dynamics.">Live-cell photoactivated localization microscopy of nanoscale adhesion dynamics.</a> Nature Methods. 5 (5), 417-423 (2008).</li><li>Vicidomini, G., Bianchini, P., Diaspro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STED+super-resolved+microscopy.">STED super-resolved microscopy.</a> Nature Methods. 15 (3), 173-182 (2018).</li><li>Huff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Airyscan+detector+from+ZEISS:+confocal+imaging+with+improved+signal-to-noise+ratio+and+super-resolution.">The Airyscan detector from ZEISS: confocal imaging with improved signal-to-noise ratio and super-resolution.</a> Nature Methods. 12 (12), (2015).</li><li>Huff, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+2D+superresolution+mode+for+ZEISS+Airyscan.">The new 2D superresolution mode for ZEISS Airyscan.</a> Nature Methods. 14 (12), 1223 (2017).</li><li>Korobchevskaya, K., Lagerholm, B., Colin-York, H., Fritzsche, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+potential+of+Airyscan+microscopy+for+live+cell+imaging.">Exploring the potential of Airyscan microscopy for live cell imaging.</a> Photonics. 4 (4), 41 (2017).</li><li>Ranjan, R., Snedeker, J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centromeres+differentially+coordinate+with+mitotic+machinery+to+ensure+biased+sister+chromatid+segregation+in+germline+stem+cells.">Asymmetric centromeres differentially coordinate with mitotic machinery to ensure biased sister chromatid segregation in germline stem cells.</a> Cell Stem Cell. 25 (5), 666-681 (2019).</li><li>Kahney, E. W., Ranjan, R., Gleason, R. J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetry+from+asymmetry+or+asymmetry+from+symmetry.">Symmetry from asymmetry or asymmetry from symmetry.</a> Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 82, 305-318 (2017).</li><li>Wooten, M., Ranjan, R., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+histone+inheritance+in+asymmetrically+dividing+stem+cells.">Asymmetric histone inheritance in asymmetrically dividing stem cells.</a> Trends in Genetics. 36 (1), 30-43 (2020).</li><li>Wooten, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+histone+inheritance+via+strand-specific+incorporation+and+biased+replication+fork+movement.">Asymmetric histone inheritance via strand-specific incorporation and biased replication fork movement.</a> Nature Structural &amp; Molecular Biology. 26 (8), 732-743 (2019).</li><li>Prasad, M., Jang, A. C. C., Starz-Gaiano, M., Melani, M., Montell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+culturing+Drosophila+melanogaster+stage+9+egg+chambers+for+live+imaging.">A protocol for culturing Drosophila melanogaster stage 9 egg chambers for live imaging.</a> Nature Protocols. 2 (10), 2467-2473 (2007).</li><li>Schermelleh, L., Heintzmann, R., Leonhardt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+super-resolution+fluorescence+microscopy.">A guide to super-resolution fluorescence microscopy.</a> Journal of Cell Biology. 190 (2), 165-175 (2010).</li><li>Sivaguru, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+performance+of+airyscan+and+structured+illumination+superresolution+microscopy+in+the+study+of+the+surface+texture+and+3D+shape+of+pollen.">Comparative performance of airyscan and structured illumination superresolution microscopy in the study of the surface texture and 3D shape of pollen.</a> Microscopy Research and Technique. 81 (2), 101-114 (2018).</li></ol>

Mikroskopimetoder med superoppløsning gir romlig oppløsning så høy som 10-tallet med nanometer4,5,6. Mikroskopimetodene STORM og PALM tillater oppløsning på opptil 20 til 50 nm (XY-oppløsning), mens STED-mikroskopi gir en oppløsning på 20 til 100 nm (XY-oppløsning). Den romlige oppløsningen til SIM-mikroskopi er begrenset til 100 til 130 nm15. På grunn av sin høye fotontetthet og lange oppkjøpstid er det...

Visualisering av subcellulære strukturer og proteindynamikk i levende celler med oppløsning utover diffraksjonsgrensen for lys er vanligvis svært utfordrende1-3. Mens flere superoppløselige teknikker som Stochastic-Optical-Reconstruction-Microscopy (STORM), Photo-Activated-Localization-Microscopy (PALM) og Stimulated-Emission-Depletion (STED)4,5,6 mikroskopi er utviklet, komplikasjoner i prøvepreparering samt behovet for å opprettholde levedyktighet og aktivitet ex vivo, begrense bruken av konvensjonell superoppløselig mikroskopi for avbildning av levende prøver. Konvensjonell konfektmikroskopi kan ikke nå romlig oppløsning utover ~230 nm XY-oppløsning og er ofte utilstrekkelig til å observere intrikate cellulære understrukturer5,6. En nylig utvikling innen konfokal mikroskopi, Airyscan super-resolution imaging, er imidlertid i stand til å oppnå omtrent 140 nm (XY-oppløsning)7,8 og har et relativt enkelt prøvepreparering som er kompatibelt med levende bildebehandling. Siden dette bildedeteksjonssystemet krever lang oppkjøpstid, kommer den høye romlige oppløsningen på bekostning av tidsoppløsning9. Derfor er det nødvendig med en metode for å sikre at levende celleavbildning utvides med høy romlig oppløsning.
Her utviklet vi en metode for å observere levende celler i intakt vev med optimal oppløsning for å dechiffrere subcellulære strukturer med detaljert romlig informasjon. Denne metoden er utformet slik at prøver kan monteres stabilt i lang tid (~ 10 timer) uten å bevege seg eller degenerere. Live cellemediet som brukes i denne teknikken kan støtte cellulær funksjon og unngå fotobleaching i opptil 10 timer under et mikroskop med superoppløsning. Til slutt minimerer denne protokollen de fleste påkjenninger forårsaket av konstant belysning av lasere over lengre perioder som hypoksi, endringer i fuktighet og temperatur, samt næringsutmattelse.
Ved å bruke denne protokollen til å bilde Drosophila mannlige bakterie stamceller (GSC), var vi i stand til å observere hvordan den asymmetriske aktiviteten til mikrotubuler gir mulighet for preferanseinteraksjon med epigenetisk distinkte søsterkromotider10,11,12,13. Denne typen cellulære hendelser er svært dynamiske og er svært vanskelige å visualisere i levende celler ved hjelp av andre bildemetoder med superoppløsning, for eksempel STORM, PALM eller STED. Vi forventer at denne metoden vil bli svært nyttig for cellebiologer, da de tar sikte på å forstå de dynamiske subcellulære strukturene til levende celler som bor i vev. Det er mange områder der denne metoden kan brukes på, for eksempel å studere dynamikken i proteiner; forstå bevegelsen av celler; og avledningssporing og cellulære differensieringsprosesser, blant andre mulige applikasjoner.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adobe Illustrator CS6 (figure making software)</td>
			<td>Adobe</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis membrane</td>
			<td>Spectra/Por 1-4 Standard RC Dialysis Membrane</td>
			<td>Cat No. 08-67121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. 26140079</td>
			<td>15% (V/V)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji (analysis software)</td>
			<td>NIH</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Image fluorescence intensity quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom cell culture dishes (FluroDish)</td>
			<td>World Precision Instrument, Inc.</td>
			<td>FD35PDL-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris (image reconstruction software)</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3D image reconstruction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imerssion oil</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Immersol 518F/30 &#176;C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. No. 15550</td>
			<td>200 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat No. - 15140-122</td>
			<td>0.6x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider Drosophila media</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat No. - 11720-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disc confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td>equipped with an evolve camera (Photometrics), using a 63x Zeiss objective (1.4 NA).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper</td>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Wet to form humid chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 800 confocal microscope with AiryScan super-resolution module</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td>equipped with highly sensitive GaAsP (Gallium Arsenide Phosphide) detectors using a 63x Zeiss objective (1.4 NA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN (imaging software)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

super-resolution live cell imaging of subcellular structures

Det har lenge vært en avgjørende avveining mellom romlig og tidsmessig oppløsning i avbildning. Avbildning utover diffraksjonsgrensen for lys har tradisjonelt vært begrenset til å bare brukes på faste prøver eller levende celler utenfor vev merket med sterkt fluorescerende signal. Nåværende superoppløselige live celleavbildningsteknikker krever bruk av spesielle fluorescenssonder, høy belysning, flere bildeanskaffelser med etteranskaffelsesbehandling, eller ofte en kombinasjon av disse prosessene. Disse forutsetningene begrenser de biologiske prøvene og kontekstene som denne teknikken kan anvendes på.
Her beskriver vi en metode for å utføre superoppløsning (~ 140 nm XY-oppløsning) tidsforløp fluorescens levende celleavbildning in situ. Denne teknikken er også kompatibel med lav fluorescerende intensitet, for eksempel EGFP eller mCherry endogent merket ved lavt uttrykte gener. Som et prinsippbevis har vi brukt denne metoden til å visualisere flere subcellulære strukturer i Drosophila testis. Under vevsforberedelse opprettholdes både cellulær struktur og vevsmorfologi i dissekerte testis. Her bruker vi denne teknikken til å avbilde mikrotubuldynamikk, samspillet mellom mikrotubuler og atommembranen, samt vedlegg av mikrotubuler til sentromerer.
Denne teknikken krever spesielle prosedyrer i prøvepreparering, prøvemontering og immobilisering av prøver. I tillegg må prøvene opprettholdes i flere timer etter disseksjon uten at det går ut over cellulær funksjon og aktivitet. Mens vi har optimalisert betingelsene for levende superoppløselig avbildning spesielt i Drosophila mannlige bakterie stamceller (GSC) og stamceller i dissekert testisvev, er denne teknikken bredt anvendelig for en rekke forskjellige celletyper. Evnen til å observere celler under deres fysiologiske forhold uten å ofre enten romlig eller tidsmessig oppløsning vil fungere som et uvurderlig verktøy for forskere som ønsker å ta opp viktige spørsmål i cellebiologi.

Levende celleavbildning utover diffraksjonsgrensen i Drosophila-vev, spesielt for GSC-er, gir en mulighet til å undersøke dynamikken i subcellulære hendelser i sammenheng med cellesyklusprogresjon. Nylig har en studie som bruker denne protokollen vist at mikrotubule aktiviteter ved mors sentrosom versus datteren sentrosom er temporally asymmetrisk i GSC10. Morsentrosomet utstråler mikrotubuler ca 4 timer før den mititotiske inngangen, mens datterens sentrosom bare utstråler mikrotub...

Watch this Scientific Journal Video about Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures at JoVE.com

Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures

Presentert her er en protokoll for super-oppløsning live-celle avbildning i intakt vev. Vi har standardisert betingelsene for å avbilde en svært følsom stamcellepopulasjon for voksne i sitt opprinnelige vevsmiljø. Denne teknikken innebærer å balansere tidsmessig og romlig oppløsning for å muliggjøre direkte observasjon av biologiske fenomener i levende vev.

Superoppløsning live celleavbildning av subcellulære strukturer

There has long been a crucial tradeoff between spatial and temporal resolution in imaging. Imaging beyond the diffraction limit of light has traditionally ...

Vår protokoll bruker vanlige fluoroforsoner og enkle prøveforberedelsesteknikker som opprettholder den avbildede cellen i fysiologisk tilstand for å studere svært dynamisk cellulær prosess og detaljerte subcellulære strukturer. Denne teknikken lar oss undersøke cellulære prosesser med superoppløsning og under fysiologiske forhold i en lengre periode uten å ofre enten den spesielle eller midlertidige oppløsningen. Begynn med å kutte en 12 til 14 kilodalton molekylvekt cutoff dialysemembran i små biter og suge brikkene med 100 mikroliter levende cellemedium i omtrent fem minutter.Mens membranene suger, kutt den ytre ringen av et 50 milliliterrør i små biter og steriliser bitene i 70% etanol. For testikler disseksjon og montering, overfør ti to til tre dager gamle bedøvede mannlige fluer inn i en disseksjonsfat under et dissekeringsmikroskop og bruk fine tang for å fjerne testiklene. Når alle testiklene er samlet inn, vask testiklene to ganger i levende cellemedium og bruk en pipettespiss til å spre 100 til 150 mikroliter levende cellemedium til den tilberedte glassbunnsfatet.Bruk fine tang for å overføre fly testikler til midten av parabolen og fjerne alle unntatt ca 10 mikroliter av mediet. Legg raskt den pre-våte membranen på testiklene og legg to til tre små plastvekter på membranen. Tilsett umiddelbart 100 til 150 mikroliter friskt levende cellemedium og legg ringen tilbake på den forhøyede siden av parabolen.Sett dekselet tilbake på ringen og virvle et stykke papir i vann før du legger papiret på dekselslippet. Dekk deretter parabolen med et lokk og fest parabolen på scenen til et mikroskop med superoppløsning. For bakterie stamcelleavbildning åpner du bildebehandlingsprogramvaren og slår på det overførte lyset.Bruk 63X-målet til å fokusere på testiklene vev og slå på lasere. Klikk Live"for å finne germinale stamceller. Juster fokus og klikk Rammestørrelse"for å sette rammestørrelsen til mellom 512 x 512 og 1024 x 1024 piksler, og Gjennomsnitt"for å sette rammegjennomsnittet til en eller to.Klikk Master Gain"for å sette elektronen multipliserende gevinst til mindre enn 800, og lasere"for å sette laserkraften til 1% til 2%Zoom inn i regionen eller cellen av interesse for å redusere bildeinnhentingstiden og for å redusere fotobleking, og bekreft at bildet er optimalt konfigurert før du klikker Start eksperiment"For å starte tidsforløpet bildeopptak. Hvis Airyscan Acquisition ikke er konfigurert optimalt"vises, klikker du Optimal"i seksjonene rammestørrelse, Z-Stack og Skanneområde", og optimaliserer tidsintervallet, antall Z-skiver og varigheten av tidsforløpavbildningen, i henhold til eksperimentell design og type prøve. Etter avbildning velger du Behandling, Batch" og Airyscan Processing, og velger bildene som skal behandles.Klikk deretter Kjør prosess"for å få superoppløsningsbildene. Levende celleavbildning av drosophila-testikler som uttrykker alfa tubulin GFP i tidlige bakterieceller ved hjelp av et spinnende skivekonfokalt mikroskop, tillater visualisering av den asymmetriske intensiteten av GFP-signaler ved to sentrosomer, som et lysere signal på modersentrosomet og et relativt svakere signal ved dattersentrosomene. Forskjellen i lysstyrke gjenspeiles sannsynligvis av den tidsmessige asymmetrien i mikrotubulkjernen, men den detaljerte morfologien og mengden mikrotubuler kan ikke løses ved hjelp av spinnende plate konfokal mikroskopi.Levende celle superoppløsningsavbildning gjør det derimot mulig å visualisere og kvantifisere mikrotubulmorfologi og tall. Denne forbedrede oppløsningen avslører også mønstre av asymmetrisk mikrotubulkjerne, forlengelse og økt interaksjon med atommembranen. Levende celleavbildning tillater også visualisering av asymmetrisk kjernefysisk membraninvaginering, men ikke av individuelle mikrotubuler som direkte kommer inn i kjernen.I motsetning tillater denne superoppløsningsteknikken for levende celler direkte observasjon av disse hendelsene ved samtidig avbildning av både mikrotubuler og kjernefysisk lamina. Under metafase kan begge søsterskromaterene oppdages som ett signal ved hjelp av spinnende skivemikroskopi, selv om mikrotubulens sentrale vedlegg ikke kan observeres. I motsetning tillater superoppløsning live bildebehandling visualisering av mikrotubule centromere vedlegg i tidlig profase.Sørg for å plassere en membran over testiklene for å sikre at de ikke beveger seg eller flyter under avbildning og for å optimalisere mikroskopinnstillingene for å unngå fotobleking og fototoksisitet. Det er mange måter denne metoden kan brukes på, for eksempel å undersøke proteindynamikk, lineær stressing eller cellulært forsvar og prosesser.

Research

JoVE Journal

Biology

Super-resolution Imaging of the Bacterial Division Machinery

Super-oppløsning Imaging av Bakteriell divisjon Machinery

Bacterial cell division requires the coordinated  assembly of more than ten essential proteins at midcell1,2. Central  to this process is the formation of ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

Intramikros for Imaging subcellulære strukturer i levende mus Uttrykke Fluorescent Proteiner

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

Test Samples for Optimizing STORM Super-Resolution Microscopy

Test Prøver for Optimalisere STORM Super-oppløsning Mikros

STORM is a recently developed super-resolution microscopy technique with up to 10 times better resolution than standard fluorescence microscopy ...

Imaging Cell Membrane Injury and Subcellular Processes Involved in Repair

Imaging cellemembranen Injury og subcellulære prosesser involvert i reparasjons

The ability of injured cells to heal is a fundamental cellular process, but cellular and molecular mechanisms involved in healing injured cells are poorly ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

Prøvepreparering for mikroskopi av enkeltvirionakroskopi og superoppløselig fluorescensavbildning

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy (f3D-SIM)

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy f3D-SIM

Super-Resolution Imaging av Cytokinetic Z Ring i levende bakterier Bruke Fast 3D-Strukturert Illumination Mikros (F3D-SIM)

Imaging of biological samples using fluorescence microscopy has advanced substantially with new technologies to overcome the resolution barrier of the ...

Open-source Single-particle Analysis for Super-resolution Microscopy with VirusMapper

Open-source Single-partikkel Analyse for Super-oppløsning Mikroskopi med VirusMapper

Super-resolution fluorescence microscopy is currently revolutionizing cell biology research. Its capacity to break the resolution limit of around 300 nm ...

Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins

Live-celle avbilding av Fungal cellene å undersøke moduser av oppføringen og Subcellular lokalisering av soppdrepende anlegget Defensins

Small cysteine-rich defensins are one of the largest groups of host defense peptides present in all plants. Many plant defensins exhibit potent in vitro ...

Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells

Bakken staten uttømming super-oppløsning Imaging i pattedyrceller

Advances in fluorescent microscopy and cell biology are intimately correlated, with the enhanced ability to visualize cellular events often leading to ...

Application of High-speed Super-resolution SPEED Microscopy in Live Primary Cilium

Anvendelse av høyhastighets super-oppløsning hastighet mikroskopi i Live primære Flimmerhår

The primary cilium is a microtubule-based protrusion on the surface of many eukaryotic cells and contains a unique complement of proteins that function ...