Name: super-resolution live cell imaging of subcellular structures
Uploaded: 2021-01-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures at JoVE.com

Författarna vill tacka Integrated Imaging Core-anläggningen vid Johns Hopkins University för mikroskop och dataanalysprogramvara. Vi tackar J. Snedeker och Q. E. Yu för korrekturläsning och förslag, och X.C. labbmedlemmar för hjälpsamma diskussioner och förslag. Stöds av NIGMS / NIH R35GM127075, Howard Hughes Medical Institute, David och Lucile Packard Foundation och Johns Hopkins University startup fonder (X.C.).

1. Förberedelse av levande cellbildcocktail (levande cellmedia)
<ol><li>Komplettera Schneiders Drosophila medium med 15% fetala nötkreatur serum (FBS) och 0,6x penicillin/streptomycin. Justera pH-talet till cirka 7,0.</li>
	<li>Strax innan du använder mediet, tillsätt insulin till en slutlig koncentration på 200 μg/ml. OBS: Detta medium är avgörande för att upprätthålla normal celldelning och utveckling av Drosophila testiklar under timelapse imaging10,...

<ol>
	<li>Breedijk, R. M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+live-cell+super-resolution+technique+demonstrated+by+imaging+germinosomes+in+wild-type+bacterial+spores.">A live-cell super-resolution technique demonstrated by imaging germinosomes in wild-type bacterial spores.</a> Scientific Reports. 10 (1), 5312 (2020).</li><li>Maddox, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+mitotic+spindle.">Imaging the mitotic spindle.</a> Methods in Enzymology. 505, 81-103 (2012).</li><li>Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+microscopy+-+tips+and+tools.">Live-cell microscopy - tips and tools.</a> Journal of Cell Science. 122 (6), 753-767 (2009).</li><li>Bates, M., Jones, S. A., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+optical+reconstruction+microscopy+(STORM):+A+method+for+super+resolution+fluorescence+imaging.">Stochastic optical reconstruction microscopy (STORM): A method for super resolution fluorescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (6), 075143 (2013).</li><li>Shroff, H., Galbraith, C. G., Galbraith, J. A., Betzig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+photoactivated+localization+microscopy+of+nanoscale+adhesion+dynamics.">Live-cell photoactivated localization microscopy of nanoscale adhesion dynamics.</a> Nature Methods. 5 (5), 417-423 (2008).</li><li>Vicidomini, G., Bianchini, P., Diaspro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STED+super-resolved+microscopy.">STED super-resolved microscopy.</a> Nature Methods. 15 (3), 173-182 (2018).</li><li>Huff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Airyscan+detector+from+ZEISS:+confocal+imaging+with+improved+signal-to-noise+ratio+and+super-resolution.">The Airyscan detector from ZEISS: confocal imaging with improved signal-to-noise ratio and super-resolution.</a> Nature Methods. 12 (12), (2015).</li><li>Huff, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+2D+superresolution+mode+for+ZEISS+Airyscan.">The new 2D superresolution mode for ZEISS Airyscan.</a> Nature Methods. 14 (12), 1223 (2017).</li><li>Korobchevskaya, K., Lagerholm, B., Colin-York, H., Fritzsche, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+potential+of+Airyscan+microscopy+for+live+cell+imaging.">Exploring the potential of Airyscan microscopy for live cell imaging.</a> Photonics. 4 (4), 41 (2017).</li><li>Ranjan, R., Snedeker, J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centromeres+differentially+coordinate+with+mitotic+machinery+to+ensure+biased+sister+chromatid+segregation+in+germline+stem+cells.">Asymmetric centromeres differentially coordinate with mitotic machinery to ensure biased sister chromatid segregation in germline stem cells.</a> Cell Stem Cell. 25 (5), 666-681 (2019).</li><li>Kahney, E. W., Ranjan, R., Gleason, R. J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetry+from+asymmetry+or+asymmetry+from+symmetry.">Symmetry from asymmetry or asymmetry from symmetry.</a> Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 82, 305-318 (2017).</li><li>Wooten, M., Ranjan, R., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+histone+inheritance+in+asymmetrically+dividing+stem+cells.">Asymmetric histone inheritance in asymmetrically dividing stem cells.</a> Trends in Genetics. 36 (1), 30-43 (2020).</li><li>Wooten, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+histone+inheritance+via+strand-specific+incorporation+and+biased+replication+fork+movement.">Asymmetric histone inheritance via strand-specific incorporation and biased replication fork movement.</a> Nature Structural &amp; Molecular Biology. 26 (8), 732-743 (2019).</li><li>Prasad, M., Jang, A. C. C., Starz-Gaiano, M., Melani, M., Montell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+culturing+Drosophila+melanogaster+stage+9+egg+chambers+for+live+imaging.">A protocol for culturing Drosophila melanogaster stage 9 egg chambers for live imaging.</a> Nature Protocols. 2 (10), 2467-2473 (2007).</li><li>Schermelleh, L., Heintzmann, R., Leonhardt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+super-resolution+fluorescence+microscopy.">A guide to super-resolution fluorescence microscopy.</a> Journal of Cell Biology. 190 (2), 165-175 (2010).</li><li>Sivaguru, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+performance+of+airyscan+and+structured+illumination+superresolution+microscopy+in+the+study+of+the+surface+texture+and+3D+shape+of+pollen.">Comparative performance of airyscan and structured illumination superresolution microscopy in the study of the surface texture and 3D shape of pollen.</a> Microscopy Research and Technique. 81 (2), 101-114 (2018).</li></ol>

Superupplösta mikroskopimetoder ger rumslig upplösning så hög som 10s nanometer4,5,6. Storm- och PALM-mikroskopimetoderna möjliggör upplösning upp till 20 till 50 nm (XY-upplösning), medan STED-mikroskopi ger upplösning på 20 till 100 nm (XY-upplösning). Sim-mikroskopin har en rumslig upplösning på 100 till 130 nm15. Men på grund av dess höga fotontäthet och långa förvärvstid är det extremt utmanan...

Visualisera subcellulära strukturer och proteindynamik i levande celler med upplösning utöver ljusets diffraktionsgräns är vanligtvis mycketutmanande 1-3. Medan flera superupplösningstekniker som Stochastic-Optical-Reconstruction-Microscopy (STORM), Photo-Activated-Localization-Microscopy (PALM) och Stimulated-Emission-Depletion (STED)4,5,6 mikroskopi har utvecklats, komplikationer i provberedning samt behovet av att upprätthålla livskraft och aktivitet ex vivo, begränsa användningen av konventionella superupplösning mikroskopi för bildbehandling levande prover. Konventionell konfokal mikroskopi kan inte nå rumslig upplösning bortom ~ 230 nm XY-upplösning och är ofta otillräcklig för att observera invecklade celluläraunderstrukturer 5,6. En ny utveckling inom konfokal mikroskopi, Airyscan superupplösningsavbildning, kan dock uppnå cirka 140 nm (XY-upplösning)7,8 ochhar en relativt enkel provberedning som är kompatibel med levande avbildning. Eftersom detta bildbehandlingsdetekteringssystem kräver en lång förvärvstid, kommer dess höga rumsliga upplösning till priset av temporal upplösning9. Därför behövs en metod för att säkerställa att levande cellavbildning utökas med hög rumslig upplösning.
Här utvecklade vi en metod för att observera levande celler i intakt vävnad med optimal upplösning för att dechiffrera subcellulära strukturer med detaljerad rumslig information. Denna metod är utformad som sådan så att prover kan monteras stabilt under en längre tid (~ 10 h) utan att flytta eller degenerera. Livecellmedierna som används i denna teknik kan stödja cellulär funktion och undvika fotoblekning i upp till 10 timmar under ett superupplöst mikroskop. Slutligen minimerar detta protokoll de flesta påfrestningar som orsakas av konstant belysning av lasrar under längre tidsperioder som hypoxi, förändringar i fuktighet och temperatur samt näringsutmattning.
Med hjälp av detta protokoll för att avbilda Drosophila manliga könsceller (GSCs), kunde vi observera hur mikrotubulernas asymmetriska aktivitet möjliggör förmånlig interaktion med epigenetiskt distinkta systerkromatider10,11,12,13. Dessa typer av cellulära händelser är mycket dynamiska och är mycket svåra att visualisera i levande celler med andra superupplösningsavbildningsmetoder som STORM, PALM eller STED. Vi förväntar oss att denna metod kommer att bli mycket användbar för cellbiologer eftersom de syftar till att förstå de dynamiska subcellulära strukturerna hos levande celler som bor i vävnader. Det finns många områden där denna metod kan tillämpas på, till exempel att studera proteinernas dynamik; förstå cellernas rörelse; och härstamningsspårning och cellulära differentieringsprocesser, bland andra möjliga applikationer.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adobe Illustrator CS6 (figure making software)</td>
			<td>Adobe</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis membrane</td>
			<td>Spectra/Por 1-4 Standard RC Dialysis Membrane</td>
			<td>Cat No. 08-67121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. 26140079</td>
			<td>15% (V/V)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji (analysis software)</td>
			<td>NIH</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Image fluorescence intensity quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom cell culture dishes (FluroDish)</td>
			<td>World Precision Instrument, Inc.</td>
			<td>FD35PDL-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris (image reconstruction software)</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3D image reconstruction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imerssion oil</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Immersol 518F/30 &#176;C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. No. 15550</td>
			<td>200 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat No. - 15140-122</td>
			<td>0.6x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider Drosophila media</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat No. - 11720-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disc confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td>equipped with an evolve camera (Photometrics), using a 63x Zeiss objective (1.4 NA).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper</td>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Wet to form humid chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 800 confocal microscope with AiryScan super-resolution module</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td>equipped with highly sensitive GaAsP (Gallium Arsenide Phosphide) detectors using a 63x Zeiss objective (1.4 NA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN (imaging software)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

super-resolution live cell imaging of subcellular structures

Det har länge varit en avgörande kompromiss mellan rumslig och tidsmässig upplösning i bildbehandling. Avbildning utanför ljusgränsen har traditionellt begränsats till att endast användas på fasta prover eller levande celler utanför vävnaden märkt med stark fluorescerande signal. Nuvarande superupplösta livecellavbildningstekniker kräver användning av speciella fluorescenssonder, hög belysning, flera bildförvärv med bearbetning efter förvärv eller ofta en kombination av dessa processer. Dessa förutsättningar begränsar avsevärt de biologiska prover och sammanhang som denna teknik kan tillämpas på.
Här beskriver vi en metod för att utföra superupplösning (~ 140 nm XY-upplösning) time-lapse fluorescens live cell imaging in situ. Denna teknik är också kompatibel med låg fluorescerande intensitet, till exempel EGFP eller mCherry endogent märkta vid lågt uttryckta gener. Som ett principbevis har vi använt denna metod för att visualisera flera subcellulära strukturer i Drosophila testikel. Under vävnadspreparat upprätthålls både cellstrukturen och vävnadsmorfologin inom den dissekerade testiken. Här använder vi denna teknik för att avbilda mikrotubuledynamik, interaktionerna mellan mikrotubuler och kärnmembranet, liksom fastsättning av mikrotubuli till centromerer.
Denna teknik kräver speciella procedurer vid provberedning, provmontering och immobilisering av prover. Dessutom måste proverna underhållas i flera timmar efter dissekering utan att kompromissa med cellulär funktion och aktivitet. Medan vi har optimerat förutsättningarna för levande superupplösningsavbildning specifikt i Drosophila manliga könsceller (GSCs) och stamceller i dissekerad testikelvävnad, är denna teknik i stort sett tillämplig på en mängd olika celltyper. Förmågan att observera celler under deras fysiologiska förhållanden utan att offra vare sig rumslig eller temporal upplösning kommer att fungera som ett ovärderligt verktyg för forskare som försöker ta itu med viktiga frågor inom cellbiologi.

Levande cell imaging utöver diffraktion gränsen i Drosophila vävnad, särskilt för GSCs, ger en möjlighet att undersöka dynamiken i subcellulära händelser i samband med cell cykeln progression. Nyligen har en studie som använder detta protokoll visat att mikrotubule aktiviteter vid modern centrrum jämfört med dottern centrosom är temporalt asymmetriska i GSCs10. Modern centrosom emanates microtubules cirka 4 timmar före mitotiska posten, medan dottern centrosome bara utstrål...

Watch this Scientific Journal Video about Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures at JoVE.com

Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures

Presenteras här är ett protokoll för superupplösning live-cell imaging i intakt vävnad. Vi har standardiserat förutsättningarna för avbildning av en mycket känslig vuxen stamcellspopulation i sin inhemska vävnadsmiljö. Denna teknik innebär balansering av tidsmässig och rumslig upplösning för att möjliggöra direkt observation av biologiska fenomen i levande vävnad.

Superupplösning Live Cell Imaging av subcellulära strukturer

There has long been a crucial tradeoff between spatial and temporal resolution in imaging. Imaging beyond the diffraction limit of light has traditionally ...

Vårt protokoll använder regelbundna fluorofor sonder och enkla prov förberedelse tekniker som upprätthåller den avbildade cellen i fysiologiskt skick för att studera mycket dynamiska cellulära process och detaljerade sub-cellulära strukturer. Denna teknik gör det möjligt för oss att undersöka cellulära processer med superupplösning och under fysiologiska förhållanden under en längre period utan att offra vare sig den speciella eller tillfälliga upplösningen. Börja med att skära ett 12 till 14 kilodalton molekylviktsavskuret dialysmembran i små bitar och blötlägg bitarna med 100 mikroliter levande cellmedel i cirka fem minuter.Medan membranen blötläggs, skär den yttre ringen på ett 50 milliliter rör i små bitar och sterilisera bitarna i 70% etanol. För testiklar dissekering och montering, överför tio två till tre dagar gamla sövd hanflugor i en dissekeringsform under ett dissekerande mikroskop och använd fina tång för att ta bort testikorna. När alla testiklar har samlats in, tvätta testikel två gånger i levande cellmedium och använd en pipettspets för att sprida 100 till 150 mikroliter levande cellmedel till den beredda glasbottenformen.Använd fina tångar för att överföra flugtesten till mitten av skålen och ta bort alla utom cirka 10 mikroliter av mediet. Placera snabbt det fört blöta membranet på testikorna och placera två till tre små plastvikter på membranet. Tillsätt omedelbart 100 till 150 mikroliter färskt levande cellmedium och placera tillbaka ringen på skålens förhöjda sida.Placera locket tillbaka på ringen och virvla runt ett mjukpapper i vatten innan du lägger papperet på täckspingen. Täck sedan skålen med ett lock och säkra skålen på scenen i ett superupplösningsmikroskop. För bakteriecellsavbildning, öppna bildframställningsprogramvaran och tänd det överförda ljuset.Använd 63X-målet för att fokusera på testiklarvävnaden och slå på lasrarna. Klicka på Live"för att hitta könsceller. Justera fokus och klicka på Bildrutestorlek" för att ställa in bildrutestorleken till mellan 512 och 1024 med 1 024 pixlar och I genomsnitt"för att ställa in bildrutegenomsnittet till en eller två.Klicka på Bakgrundsvinst"för att ställa in elektronförökningsvinsten till mindre än 800 och Lasrar"för att ställa in lasereffekten på 1%till 2%Zooma in på regionen eller cellen av intresse för att minska bildförvärvstiden och för att minska fotoblekningen och bekräfta att bilden har konfigurerats optimalt innan du klickar på Startexperimentet"för att starta tidsfördröjningsbilden. Om Airyscan Acquisition inte är konfigurerat optimalt"visas klickar du på Optimal"i bildrutestorleken, Z-Stack och Scan Area"-avsnitten och optimerar tidsintervallet, antalet Z-segment och varaktigheten för timelapse-avbildningen, enligt experimentell design och typ av prov. Efter avbildning väljer du Bearbetning, Batch och Airyscan Processing och väljer de bilder som ska bearbetas.Klicka sedan på Kör process"för att få superupplösningsbilderna. Levande cell imaging av drosophila testiklar uttrycker alfa tubulin GFP i tidiga skeden könsceller med hjälp av en snurrande skiva confocal mikroskop, tillåter visualisering av den asymmetriska intensiteten av GFP signaler vid två centrrum, som en ljusare signal vid modern centrosome och en relativt svagare signal på dottern centrosomes. Skillnaden i ljusstyrka återspeglas sannolikt av den temporala asymmetrin i mikrotubulekärnan, men den detaljerade morfologin och kvantiteten av mikrotubbulerna kan inte lösas med hjälp av snurrande skiva konfokal mikroskopi.Däremot tillåter live cell superupplösning imaging visualisering och kvantifiering av mikrotubule morfologi och siffror. Denna förbättrade upplösning avslöjar också mönster av asymmetrisk mikrotubule nukleation, förlängning och ökad interaktion med kärnmembranet. Levande cellavbildning möjliggör också visualisering av asymmetrisk nukleär membraninvaginering, men inte av enskilda mikrotubuli som direkt kommer in i kärnan.Däremot tillåter denna live cell super resolution teknik direkt observation av dessa händelser genom samtidig bildbehandling av både mikrotubuler och nukleära lamina. Under metafas kan båda systercentromererna detekteras som en signal med snurrande skivmikroskopi, även om mikrotubule centralfästet inte kan observeras. Däremot tillåter superupplösning live imaging visualisering av mikrotubule centromere-tillbehöret i tidig profas.Var noga med att placera ett membran över testikelerna för att säkerställa att de inte rör sig eller flyter under avbildning och för att optimera mikroskopinställningarna för att undvika fotoblekning och fototoxicitet. Det finns många sätt att tillämpa denna metod, till exempel för att undersöka proteindynamik, linjär stress eller cellulärt försvar och processer.

Research

JoVE Journal

Biology

Super-resolution Imaging of the Bacterial Division Machinery

Super-upplösning avbildning av de bakteriella Division Maskin

Bacterial cell division requires the coordinated  assembly of more than ten essential proteins at midcell1,2. Central  to this process is the formation of ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

Intravital Mikroskopi för Imaging subcellulära strukturer i levande möss som uttrycker fluorescerande proteiner

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

Test Samples for Optimizing STORM Super-Resolution Microscopy

Test Prover för Optimera STORM Super-resolution Mikroskopi

STORM is a recently developed super-resolution microscopy technique with up to 10 times better resolution than standard fluorescence microscopy ...

Imaging Cell Membrane Injury and Subcellular Processes Involved in Repair

Imaging Cell Membrane Skador och Subcellulära processer som ingår i reparations

The ability of injured cells to heal is a fundamental cellular process, but cellular and molecular mechanisms involved in healing injured cells are poorly ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

Provberedning för single virion atomic force mikroskopi och superupplösning fluorescensavbildning

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy (f3D-SIM)

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy f3D-SIM

Super-upplösning avbildning av Cytokinetic Z Ring i levande bakterier Använda Snabb 3D-Structured Illumination Mikroskopi (F3D-SIM)

Imaging of biological samples using fluorescence microscopy has advanced substantially with new technologies to overcome the resolution barrier of the ...

Open-source Single-particle Analysis for Super-resolution Microscopy with VirusMapper

Öppen källkod Single-partikelanalys för Super högupplösande mikroskopering med VirusMapper

Super-resolution fluorescence microscopy is currently revolutionizing cell biology research. Its capacity to break the resolution limit of around 300 nm ...

Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins

Live-cell avbildning av svampceller att undersöka lägen träder och subcellulär lokalisering av svampdödande växt Defensins

Small cysteine-rich defensins are one of the largest groups of host defense peptides present in all plants. Many plant defensins exhibit potent in vitro ...

Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells

Grundtillståndet utarmning super resolution Imaging i däggdjursceller

Advances in fluorescent microscopy and cell biology are intimately correlated, with the enhanced ability to visualize cellular events often leading to ...

Application of High-speed Super-resolution SPEED Microscopy in Live Primary Cilium

Tillämpningen av höghastighetståg super-resolution hastighet mikroskopi i levande primära cilier

The primary cilium is a microtubule-based protrusion on the surface of many eukaryotic cells and contains a unique complement of proteins that function ...