Name: microscopic observation of lymphocyte dynamics in rat peyer's patches
Uploaded: 2020-06-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches at JoVE.com

وقد تم دعم هذا البحث من خلال منح من كلية الطب الدفاع الوطني ومنحة البحوث الصحية والعمالية للبحوث المتعلقة بالأمراض المستعصية من وزارة الصحة والعمل والرعاية الاجتماعية، اليابان.

وقد وافقت لجنة بحوث الحيوان بكلية الطب للدفاع الوطني على البروتوكول التجريبي (رقم 16058). تم الحفاظ على الحيوانات على الطعام المختبري القياسي (CLEA Japan Inc ، طوكيو ، اليابان). وعولج المختبرات وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة.
1. جمع وفصل الخلايا الليمفاوية
<p class="jove_content...

<ol>
	<li>Miura, S., Hokari, R., Tsuzuki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+immunity+in+gut+and+lymphoid+cell+trafficking.">Mucosal immunity in gut and lymphoid cell trafficking.</a> Annals of Vascular Diseases. 5, 275-281 (2012).</li><li>Stein, J. V., Nombela-Arrieta, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+control+of+lymphocyte+trafficking:+a+general+overview.">Chemokine control of lymphocyte trafficking: a general overview.</a> Immunology. 116, 1-12 (2005).</li><li>Yopp, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine-1-phosphate+receptors+regulate+chemokine-driven+transendothelial+migration+of+lymph+node+but+not+splenic+T+cells.">Sphingosine-1-phosphate receptors regulate chemokine-driven transendothelial migration of lymph node but not splenic T cells.</a> The Journal of Immunology. 175, 2913-2924 (2005).</li><li>Lucke, S., Levkau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+functions+of+sphingosine-1-phosphate.">Endothelial functions of sphingosine-1-phosphate.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 26, 87-96 (2010).</li><li>Bollman, J. L., Cain, J. C., Grindlay, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+the+collection+of+lymph+from+the+liver,+small+intestine,+or+thoracic+duct+of+the+rat.">Techniques for the collection of lymph from the liver, small intestine, or thoracic duct of the rat.</a> The Journal of Laboratory and Clinical. 333, 1349-1352 (1948).</li><li>Bhalla, D. K., Murakami, T., Owen, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculation+of+Intestinal+Lymphoid+Follicles+in+Rat+Peyer's+Patches.">Microcirculation of Intestinal Lymphoid Follicles in Rat Peyer's Patches.</a> Gastroenterology. 81, 481-491 (1981).</li><li>Miura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+Demonstration+of+Sequential+Migration+Process+of+Lymphocyte+Subpopulations+in+Rat+Peyer's+Patches.">Intravital Demonstration of Sequential Migration Process of Lymphocyte Subpopulations in Rat Peyer's Patches.</a> Gastroenterology. 109, 1113-1123 (1995).</li><li>Tomura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+cellular+movement+in+vivo+with+photoconvertible+fluorescence+protein+"Kaede"+transgenic+mice.">Monitoring cellular movement in vivo with photoconvertible fluorescence protein "Kaede" transgenic mice.</a> Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 10871-10876 (2008).</li><li>Schulz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophy+of+Infected+Peyer's+Patches+Arises+From+Global,+Interferon-Receptor,+and+CD69-independent+Shutdown+of+Lymphocyte+Egress.">Hypertrophy of Infected Peyer's Patches Arises From Global, Interferon-Receptor, and CD69-independent Shutdown of Lymphocyte Egress.</a> Mucosal Immunology. 7, 892-904 (2014).</li><li>Higashiyama, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P-Selectin-Dependent+Monocyte+Recruitment+Through+Platelet+Interaction+in+Intestinal+Microvessels+of+LPS-Treated+Mice.">P-Selectin-Dependent Monocyte Recruitment Through Platelet Interaction in Intestinal Microvessels of LPS-Treated Mice.</a> Microcirculation. 15, 441-450 (2008).</li><li>Shirakabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+colitis+through+blocking+lymphopcytes+entry+to+Peyer's+patches+by+sphingosine-1-phosphate+lyase+inhibitor.">Amelioration of colitis through blocking lymphopcytes entry to Peyer's patches by sphingosine-1-phosphate lyase inhibitor.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 33, 1608-1616 (2018).</li><li>Cenk, S., Thorsten, R. M., Irina, B. M., Ulrich, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+Microscopy:+Visualizing+Immunity+in+Context.">Intravital Microscopy: Visualizing Immunity in Context.</a> Immunity. 21, 315-329 (2004).</li><li>Alex, Y. C. H., Hai, Q., Ronald, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+the+Landscape+of+In+Vivo+Immunity:+Insights+from+Dynamic+In+Situ+Imaging+of+Secondary+Lymphoid+Tissues.">Illuminating the Landscape of In Vivo Immunity: Insights from Dynamic In Situ Imaging of Secondary Lymphoid Tissues.</a> Immunity. 21, 331-339 (2004).</li></ol>

هنا وصفنا بروتوكول لجمع الغدد الليمفاوية الأمعاء الاستوائية الساذجة ومراقبة هجرتهم في الفئران PPs. هذه الإجراءات يمكن أن تكشف عن كيفية تحرك الخلايا الليمفاوية في microvasculature من PPs وجعل من الممكن مقارنة بصريا دينامياتها في ظل حالة طبيعية أو العلاج. الملاحظة المباشرة لهذه الديناميات لها ميزة ك...

بقع بير (PPs) تتكون من مئات من بصيلات اللمفية في بروبريا لامينا من الأمعاء الدقيقة. وتنقسم PPs إلى بصيلات، والمنطقة بين الخلايا، ومراكز الجرثومية الموجودة في الجزء السفلي من المسام، حيث يتم تحفيز الخلايا الليمفاوية عن طريق عرض المستضد. لا توجد أوعية اللمفاوية afferent، والمستضدات غزو بروبريا لامينا من تجويف الأمعاء عبر طبقة الخلايا الظهارية. وتسمى المنطقة الظهارية التي تغطي بصيلات اللمفية الظهارة المرتبطة بصيلات، والتي في إطارها تخصص تتخللها الخلايا M امتصاص مستضدات المخاطي. الخلايا M تأخذ في المستضدات من الجانب الإنارة ويتم القبض على المستضدات ثم بواسطة الخلايا التشعبية وتقديم نحو الخلايا الليمفاوية الساذجة التي تتدفق إلى PPs من خلال endothelium من venuhelial عالية (HEVs)1. Pps تلعب دورا هاما في مناعة الأمعاء وترتبط مع مرحلة مبكرة من الالتهاب. العديد من التفاعلات الجزيئية تنطوي على دخول الخلايا الليمفاوية إلى الأجهزة اللمفاوية الثانوية (SLOs), بما في ذلك جزيئات التصاق, chemokines2,3, وsphingosine-1-فوسفات4; وهكذا، هناك العديد من الأهداف العلاجية المتوقعة. لذلك ، فإن مراقبة ديناميكيات الخلايا اللمفاوية داخل PPs تمكننا من إلقاء نظرة على المرحلة المبكرة من الالتهاب وفحص فائدة العديد من الأدوية الواعدة.
تركز الطريقة هنا على هجرة الخلايا الليمفاوية في PPs ، والتي تشمل العديد من الإجراءات (التشبية في القناة الصدرية5 وجمع الخلايا الليمفاوية والمراقبة على المدى الطويل بعد الحقن في الخلايا الليمفاوية التي تم جمعها). وبما أن هذه الإجراءات معقدة وكان من الصعب أن نرى بالضبط كيف تم تنفيذ كل إجراء في التقارير السابقة، فقد ذكرنا هنا بعض النصائح لتحقيق ملاحظة ناجحة. على سبيل المثال، كان تحبيب الأنابيب في القناة الصدرية صعباً للغاية، وكان معدل النجاح الأولي للزباة أقل من 50٪. ومع ذلك، قمنا بتحسين الأسلوب وحققنا نسبة نجاح تتجاوز 80٪. ذكرنا بعض النصائح الأخرى في هذه المخطوطة التي تعتبر ضرورية لمراقبة ناجحة لتمكين التقييم الكمي للهجرة عبر الغدد الليمفاوية في ظل عدة شروط.
في التقارير السابقة ، كان من الصعب فهم التغيرات ثلاثية الأبعاد مع مرور الوقت ، مثل الحقن الوريدي للحبر الهندي لطخة بنية الأوعية الدموية من PPs6، أو المجهر يجري أحادية البؤر7. في السنوات الأخيرة، طريقة الرصد باستخدام بعض الحيوانات المعدلة وراثيا بروتين الفلورانس الفلورية الضوئية مثل الفئران Kaede قد أوضحت الحركات الخلوية المنهجية في الجسم الحي8. وأوضحت الدراسة الأخرى CD69 اغلاق مستقل من خروج الخلايا الليمفاوية من PPs9. استخدمنا التصوير المجهري بالليزر confocal (CLSM) بسبب قدرته التحليلية العالية. الآن يمكننا الحصول بسهولة على صور عالية الدقة واستخدامها لتحليل ديناميكيات الخلايا اللمفاوية.
في هذا التقرير، أظهرنا سلسلة من الطرق لتقييم هجرة الخلايا اللمفاوية في PPs. أولاً، أظهرنا طرقاً محسنة لتكبوس القناة الصدرية لجمع الخلايا الليمفاوية. ثانيا، قمنا بتحسين أساليب الرصد بعدة طرق للحفاظ على الأعضاء الموضوعية كلما أمكن تحت المراقبة المجهرية، مما يمكننا من الحصول على صور عالية الجودة لمدة 3 ساعات. ثالثاً، قمنا بتحديد حجم الحركات الخلوية لهجرة الخلايا اللمفاوية لتقييم آثار بعض الأدوية. وستسهم هذه البروتوكولات المعدلة في تطوير تقييمات المناعة المخاطية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:913px;" width="913">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:316px;">A1R+</td>
			<td style="width:213px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:265px;">Comfocal Laser Scanning Microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">C1157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hoechest 33342</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:119px;">099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Texas Red&#8211;dextran</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">D1863</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microscopic observation of lymphocyte dynamics in rat peyer's patches

الخلايا الليمفاوية الساذجة إعادة تدوير من الدم إلى الأنسجة اللمفاوية في ظل حالة فسيولوجية ومن المسلم به عادة كظاهرة هامة في مناعة الأمعاء. إن الستروما للأعضاء اللمفاوية الثانوية، مثل بقع بير (PPs) أو الغدد الليمفاوية المتوسطة، هي المكان الذي تشعر فيه الخلايا الليمفاوية الساذجة بمضادات. تنتشر الخلايا الليمفاوية الساذجة عبر مجرى الدم للوصول إلى الغدد الصماء العالية ، وهي بوابة الدخول إلى PPs. وتشير التقديرات إلى أن بعض العوامل المناعية تؤثر على هجرة الخلايا اللمفاوية، ولكن التقييم الدقيق لديناميات دوران الأوعية الدقيقة صعب للغاية، ويمكن أن يساهم إنشاء طريقة لمراقبة هجرة الخلايا اللمفاوية في الجسم الحي في توضيح الآليات الدقيقة. قمنا بتحسين طريقة جمع الخلايا الليمفاوية من القناة الليمفاوية ومراقبة الديناميكيات التفصيلية لللمفيات الأمعاء المدارية في أجهزة فئران الغدد الليمفاوية. اخترنا التصوير المجهري بالليزر confocal لمراقبة الفئران PPs في الجسم الحي وسجلها باستخدام التصوير الفوتوغرافي الفاصل الزمني. يمكننا الآن الحصول على صور واضحة يمكن أن تسهم في تحليل ديناميات الخلايا اللمفاوية.

جمع الخلايا الليمفاوية من اللمف لإعداد الفئران لتكبيب القناة الصدرية، وجعل شق في القناة الصدرية المتوترة كما هو مبين في الشكل 1 ومن ثم الحفاظ على الفئران في قفص بولمان كما هو مبين في الشكل 2.
عندما يتم جمع الخلايا الليمفاوية بشكل ج?...

Watch this Scientific Journal Video about Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches at JoVE.com

Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

هنا ، نحن وصف طريقة دقيقة لجمع الخلايا الليمفاوية القناة الصدرية ومراقبة هجرة الأمعاء الاستوائية الليمفاوية في بقع الفئران بير لمدة 3 ساعات باستخدام التصوير الفوتوغرافي الفاصل الزمني. يمكن لهذه التقنية توضيح كيفية تأثر ديناميكيات الخلايا اللمفاوية في ظل الظروف الالتهابية.

المراقبة المجهرية لديناميات الخلايا الليمفاوية في بقع الجرذ بير

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

بطء الإفراج تسليم المخدرات من خلال Elvax 40W إلى الجرذ الشبكية: الآثار المترتبة على علاج الحالات المزمنة

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

أسلوب LC-MS/MS الأمثل لتحليل العينات السريرية إيفاكافتور، والايضات الرئيسية، ولوماكافتور في السوائل البيولوجية لمرضى التليف الكيسي الفائق

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

Implantation of hiPSC-derived Cardiac-muscle Patches after Myocardial Injury in a Guinea Pig Model

غرس المستمدة من هيبسك بقع عضلة القلب بعد "إصابة احتشاء عضلة القلب" في "نموذج خنزير غينيا"

Due to the limited regeneration capacity of the heart in adult mammals, myocardial infarction results in an irreversible loss of cardiomyocytes. This loss ...

A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application

إصابة بالون فئلي من ضغط الشريان السباتي الجرذ مع تطبيق علاجي شامل

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

الوخز بالإبر في نموذج الفئران من الربو

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

Advanced Cardiac Rhythm Management by Applying Optogenetic Multi-Site Photostimulation in Murine Hearts

إدارة إيقاع القلب المتقدمة من خلال تطبيق التحفيز الضوئي متعدد المواقع البصري الوراثي في قلوب الفئران

Ventricular tachyarrhythmias are a major cause of mortality and morbidity worldwide. Electrical defibrillation using high-energy electric shocks is ...

The Microscopic Transcanal Approach in Stapes Surgery Revisited

The microscopic transcanal (aka transmeatal) surgical approach was first described in the 60s, offering a minimally invasive means of reaching the ...

Microscopic Replantation of Penile Glans Amputation Due to Circumcision

إعادة الزرع المجهري لبتر جلان القضيب بسبب الختان

Circumcision using a disposable stapler is becoming quite popular in China. However, improper surgical procedures also bring the risk of penile glans ...

Microscopic Cyst Resection for the Treatment of Patients Diagnosed with Epididymal Cyst

استئصال الكيس المجهري لعلاج المرضى الذين تم تشخيص إصابتهم بكيس البربخ

Epididymal cysts mostly occur in men aged 20-40 years old. Previous reports have covered concerns about postoperative complexes, including postoperative ...

Rat Model of Normothermic Ex-Situ Perfused Heterotopic Heart Transplantation

نموذج الفئران لزراعة القلب غير المتجانسة خارج الموقع النورمومري

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the ...