Name: an in vitro hemodynamic loop model to investigate the hemocytocompatibility and host cell activation of vascular medical devices
Uploaded: 2020-08-21T13:00:00
Duration: 8 min 44 s
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लेखक उसकी तकनीकी सहायता के लिए सुश्री ऐलेना Denks के आभारी हैं ।

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funder [ebo kunze industriedesign, Im Dentel 17, 72639 Neuffen, जर्मनी] इस पांडुलिपि के लेखक को उपभोग्य सामग्री और प्रकाशन शुल्क के रूप में एक वित्तीय सहायता प्रदान की [मैक्स Wacker]। फंडर्स की अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह और विश्लेषण, पांडुलिपि को प्रकाशित करने या तैयार करने के निर्णय में कोई अतिरिक्त भूमिका नहीं थी।

इस अध्ययन से पता चला है कि प्रस्तुत इन विट्रो हीमोडायनामिक लूप मॉडल आईएसओ 10993-4 मानक के अनुसार चिकित्सा उपकरणों की इन विट्रो रक्त अनुकूलता के परीक्षण के लिए एक विश्वसनीय तरीका प्रदान करता है।
प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण चरणों में रक्त की ड्राइंग और ट्यूबों को रक्त से भरना शामिल है, जहां हैंडलिंग प्रक्रिया द्वारा रक्त घटकों को सक्रियण से रोकने के लिए अत्यधिक वैक्यूम या आंदोलन से बचा जाना चाहिए। इसके अलावा, प्लाज्मा के नमूनों को तुरंत फ्रीज करना और उन्हें विगलन के बाद बर्फ पर रखना बहुत महत्वपूर्ण है, क्योंकि पूरक और जमावट प्रणाली सक्रियण को लंबे समय तक कमरे के तापमान पर नमूनों को रखकर छेड़छाड़ की जा सकती है।
चूंकि इस मॉडल में अन्य इन विट्रो मॉडल की तुलना में गुण और अवगुण दोनों हैं, इसलिए प्रयोगों को डिजाइन करते समय कई कारकों को ध्यान में रखना होगा।
सबसे पहले, छोरों को विभिन्न प्रयोगात्मक सेटअप फिट करने के लिए लंबाई और व्यास में भिन्न किया जा सकता है। यदि सेटअप में अलग-अलग आंतरिक व्यास की विषम ट्यूब शामिल हैं, तो यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि व्यास में अंतर के परिणामस्वरूप विभिन्न कतरनी ताकतें होंगी, जिससे जमावट प्रभावित होगी और झरना7पूरक होगा। दूसरा, इस प्रयोग में रोटेशन की गति 30 आरपीएम तय की गई थी। इसके परिणामस्वरूप लगभग 25 सेमी/एस का रक्त प्रवाह होगा, जो मानव कोरोनरी धमनी बाईपास ग्राफ्ट25में रक्त प्रवाह वेग के बराबर है । छोरों के घूर्णन से उत्पन्न तनाव दर, प्रमुख पैरामीटर है जो कोशिकाओं और सेल-मुक्त प्रोटीन सहित रक्त घटकों के जैव रासायनिक झरने शुरू करेगा। लेकिन जैसा कि रक्त एक गैर-न्यूटोनियन तरल पदार्थ है, तनाव दर ट्यूब वक्रता से भी प्रभावित होगी, क्रमशः ट्यूबों की लंबाई जो लूप10के लिए बंद हैं। जब भी रोटेशन गति या लूप आकार बदल दिया जाता है, तो यह विचार करना महत्वपूर्ण है कि तनाव दर और रोटेशन गति के बीच संबंध रैखिक नहीं है। रोटेशन की गति और तनाव दर के बीच संबंधों की आज तक पर्याप्त जांच नहीं की जाती है और इन विशेष मापदंडों की जांच करने के लिए आगे के अध्ययन की आवश्यकता है10,26,27. हालांकि, लैमिनार सीमा परत के लिए एक मॉडल के आधार पर, 5 मिमी का दिया ट्यूब व्यास और 25 सेमी/s की रोटेशन गति, दीवार कतरनी तनाव का एक मोटा अनुमान (WS 100-001 मिमी की दूरी के लिए 2.20-22.00 पास्कल के बीच मूल्यों को इंगित करेगा जब रक्त घनत्व 1060 किलोग्राम * मीटर-3 होने का अनुमान है और काइनेटिक चिपचिपाहट 0.0025 पास्कल * एस28,29तक सेट है। दिलचस्प बात यह है कि मानव कोरोनरी धमनियों की वक्रता में प्रवाह गतिशीलता का अधिक विस्तृत कम्प्यूटेशनल विश्लेषण भी 11.33 से 16.77 पास्कल तक रक्त30के वेग, घनत्व और चिपचिपाहट के लिए लगभग तुलनीय मापदंडों पर डब्ल्यूएसएस मूल्यों को दिखाया गया।
इस सीमा के अलावा, प्रस्तुत लूप मॉडल एक दबाव कम प्रणाली है, जो मानव संवहनी प्रणाली के इंट्रावैस्कुलर रक्तचाप अनुपात की नकल नहीं करता है।
अगली महत्वपूर्ण सीमा यह है कि रक्त छोरों के अंदर हवा के संपर्क में है, जो अतिरिक्त हस्तक्षेप लाता है। इस तरह के रक्त-वायु संपर्क दो मापदंडों से प्रभावित होते हैं, जिसमें ट्यूबों की गैस पारमशीलता और उन्हें रक्त से भरते समय छोरों के अंदर हवा का बनाए रखना शामिल है। हर ट्यूब सामग्री में एक निश्चित गैस पारग्लम्यता होती है जो ट्यूबों के अंदर गैस सांद्रता में महत्वपूर्ण परिवर्तन का कारण बन सकती है। जबकि कुछ लेखकों का कहना है कि रक्त घटकों की सक्रियता पर गैस पारगम्यता का परिणामी प्रभाव अस्पष्ट31बना हुआ है, यह ज्ञात है कि रक्त कोगुलेटर का कार्य पीएच-शिफ्ट के प्रति अत्यधिक संवेदनशील है, जो सीओ 2 प्रसार32, 33,34के कारण हो सकता है। यहां, हमने इनडोर वायु स्थितियों के तहत रक्त परफ्यूजन ट्यूबों की जैव अनुकूलता का परीक्षण किया है, जो एक्सट्राकॉर्पोरल रक्त परफ्यूजन के नैदानिक परिदृश्यों के बराबर है। प्रस्तुत मॉडल के भविष्य के सुधार के लिए, एक सीओ2 इनक्यूबेटर में पूरे मॉडल के इनक्यूबेशन और पहले और इनक्यूबेशन के बाद रक्त पीएच सत्यापन प्रदर्शन इस मॉडल को आगे मानकीकृत करने के लिए उपयोगी हो सकता है ।
इसके अलावा, छोरों के अंदर रक्त-वायु इंटरफेस प्लाज्मा प्रोटीन और रक्त35, 36के कोशिका अंशों की सक्रियता का कारण बनसकताहै। ट्यूबों के अंदर हवा के बिना रोलर पंप संचालित उपकरण रक्त-वायु इंटरफ़ेस के मुद्दे से बच सकते हैं, लेकिन वे निश्चित रूप से यहां प्रस्तुत लूप मॉडल की तुलना में हीमोग्लोबिन के महत्वपूर्ण ऊंचा स्तर के साथ रक्त कोशिकाओं को नुकसान पहुंचाते हैं, और प्लाज्मा में हीमोग्लोबिन एलिसा16में परीक्षण किए गए विश्लेषण की संवेदनशीलता में हस्तक्षेप कर सकता है। इस अध्ययन में हमने दिखाया है कि हेपरिन कोटेड पीवीसी ट्यूब जैसे जैव संगत सामग्रियों का उपयोग करते समय लूप मॉडल का हीमोलिटिक प्रभाव कम रहता है। इस प्रकार, मॉडल है, एक तरफ, पंप संचालित मॉडल की तुलना में अत्यधिक सेल क्षति के कारण नहीं है, लेकिन दूसरी ओर रक्त हवा के संपर्क के कारण प्लाज्मा प्रोटीन उत्प्रेरण । ध्यान दें, वैन Oeveren एट अल. एक गेंद वाल्व आधारित पाश16छोरों के अंदर हवा से परहेज मॉडल विकसित की है । यहां प्रस्तुत लूप मॉडल का यह आशाजनक विकल्प रक्त-वायु इंटरफेस की समस्या को दूर कर सकता है, हालांकि, यहां प्रस्तुत मॉडल की तुलना में, बॉल-वाल्व आधारित लूप मॉडल के लिए प्लेटलेट आसंजन अभी भी अधिक है।
स्थिर नियंत्रण के संबंध में, यह ध्यान दें कि ग्लास को स्वयं को स्कंदरात्मक प्रणाली37का एक शक्तिशाली सक्रियक दिखाया गया है। हालांकि, प्रस्तुत सेटअप में, एक ग्लास बीकर (स्टेटिक कंट्रोल) में इनक्यूबेशन रक्त खींचने के बाद सीधे बेसलाइन स्तरों की तुलना में अत्यधिक मेजबान सेल सक्रियण या स्कंदरी प्रणाली की सक्रियता नहीं हुई। अंत में, यदि स्थिर नियंत्रण सक्रियण के उच्च स्तर को दिखाता है, तो उदाहरण के लिए पॉलीप्रोपाइलीन ट्यूब का उपयोग करना उपयोगी हो सकता है।
भले ही यह लूप आधारित हो या पंप-चालित मॉडल, इन इन विट्रो मॉडल में पूरी तरह से प्रामाणिक जैविक बातचीत की कमी होती है जो मुख्य रूप से एक अक्षुण्ण एंडोथेलियम द्वारा योगदान दिया जाता है, जो एक आदर्श रक्त संपर्क सतह है। इस मुद्दे के पीछे तर्क अधिक स्पष्ट है जब एक स्टेंट की तरह एक चिकित्सा उपकरण का परीक्षण किया जा रहा है, जो सक्रियण और प्लाज्मा प्रोटीन के मामले में, एंडोथेलियम की उपस्थिति में रक्त घटकों के साथ अपनी बातचीत के दौरान विभिन्न परिणाम प्रदान कर सकता है । यह संचार प्रणाली की नकल करने वाले इन विट्रो सिस्टम की चर्चा की गई सभी की एक बड़ी खामी है। इसलिए, इस मुद्दे को दूर करने के लिए, नई माइक्रोफ्लुइडिक सिस्टम जो पूरी तरह से एंडोथेलियम से ढके हुए हैं, अपार रुचि प्राप्त कर रहे हैं, लेकिन फिर भी यहां प्रस्तुत लूप मॉडल की तुलना में, वे अभी भी छोटे रक्त की मात्रा और न्यूनतम प्रवाह दरों को समायोजित करने के लिए सीमित हैं38,39
इस प्रकार, हम निष्कर्ष निकालते हैं कि चांडलर लूप मॉडल हृदय अनुसंधान के क्षेत्र में संवहनी चिकित्सा उपकरणों की रक्त जैव अनुकूलता पर मानकीकृत परीक्षण करने के लिए एक मजबूत मॉडल बना हुआ है।

चिकित्सा उपकरणों का हेमोकंप्मेंटेबिलिटी परीक्षण नए उपकरणों जैसे वैस्कुलर स्टेंट या एक्सट्राकॉर्पोरल झिल्ली ऑक्सीजन के लिए परफ्यूजन ट्यूब के विकास में एक महत्वपूर्ण कदम है। आज तक, पशु मॉडल को मनुष्यों में इसके कार्यान्वयन से पहले चिकित्सा उपकरणों के परीक्षण की प्रक्रिया को अंतिम रूप देने के लिए मानक उपकरण के रूप में माना जाता है। अब से, यह इन विट्रो मॉडल है कि आगे जानवरों पर जांच को कम करने में सहायता में वैकल्पिक खोजने के लिए आवश्यक है । इस अध्ययन में, हमने, विट्रो हीमोडायनामिक लूप मॉडल में एक लघु का पता लगाया है। इस प्रस्तुत विधि का लक्ष्य आईएसओ 10993-4 मानक के अनुसार चिकित्सा उपकरणों की इन विट्रो रक्त अनुकूलता का परीक्षण करना है।
आईएसओ 10993-4 मानक रक्त नमूना1पर जांच की जाने वाली नैदानिक मापदंडों के मानकीकृत सेटों का वर्णन करता है। संक्षेप में, ये थ्रोम्बोसिस (प्लेटलेट एकत्रीकरण और गिनती), जमाव (फाइब्रिनोपेप्टाइड ए, एफपीए), हेमेटोलॉजिकल विश्लेषण (पूरे रक्त कोशिका गिनती), हीमोलिसिस सूचकांक (मुक्त प्लाज्मा हीमोग्लोबिन) और पूरक प्रणाली (टर्मिनल पूरक परिसर, sC5b9) हैं। हालांकि, अतिरिक्त मार्कर, जैसे न्यूट्रोफिल पॉलीमॉर्फोक्लियर इलास्टेज (पीएमएन), इंटरल्यूकिन 6 (आईएल-6) और ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर - अल्फा (टीएनएफ) ल्यूकोसाइट्स की सक्रियण स्थिति को दर्शाते हुए भी माप के लिए हिसाब लगाया जा सकता है। रक्त प्लाज्मा में मौजूद परिसंचारी सेल मुक्त प्रोटीन को निर्धारित करने और निर्धारित करने के लिए, सैंडविच एंजाइमेटिक लिंक्ड इम्यूनोसोर्बेंट परख (एलिसा) एक पारंपरिक और सबसे विश्वसनीय विधि का प्रतिनिधित्व करता है2,3। इसी तरह, मेजबान कोशिकाओं (जैसे, ल्यूकोसाइट्स) की फेनोटाइप और सक्रियण स्थिति को प्रवाह साइटोमेट्री (एफएएफएस) द्वारा अणुओं की कोशिका सतह अभिव्यक्ति का पता लगाकर निर्धारित किया जा सकता है जो एकल कोशिका निलंबन आधारित रीडआउट प्रदान करता है, जहां फ्लोरोसेंट लेबल विशिष्ट एंटीबॉडी लक्षित कोशिका सतह अणुओं से बांधते हैं4। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम) को आईएसओ 10993-4 मानक 1 द्वारा परीक्षण सामग्री पर थ्रोम्बस गठन निर्धारित करने की भी सिफारिश कीजातीहै। इस विधि को एक्स-रे माइक्रोटोमोग्राफी (μCT) के साथ पूरित किया जा सकता है, जैसे कि थ्रोम्बस का संरचनात्मक विश्लेषण करने के लिए, इसकी मोटाई, आकार और स्थानीयकरण 3 डी प्रदान की गई छवि5में।
इस इन विट्रो हीमोडायनामिक मॉडल का उपयोग करने के पीछे तर्क प्लेटलेट्स जैसे रक्त घटकों की बुनियादी शारीरिक गतिशीलता को समझकर सर्वोत्तम प्रदर्शन और संगत चिकित्सा उपकरणों के लिए स्क्रीन करना है, जो प्राथमिक हीमोलासिस या ल्यूकोसाइट्स में शामिल हैं और विभिन्न प्रकार के संवहनी उपकरणों के साथ उनकी बातचीत। इस तरह के इन विट्रो सिस्टम की अत्यधिक मांग की जाती है क्योंकि वे पशु अध्ययन की आवश्यकता को कम करते हैं।
यहां प्रस्तुत लूप मॉडल इन मांगों को पूरा करता है । इस मॉडल को पहली बार 1958 में ए.B चांडलर ने रक्त थ्रोम्बी के उत्पादन के लिए वर्णित किया था और इसलिए इसे चांडलर लूप मॉडल 6 भी कहाजाताहै। अब तक, इस मॉडल का उपयोग चिकित्सा उपकरणों 7 ,8, 8, 9,10, 11 , 12,13,14की रक्त जैव अनुकूलता की जांच करने के लिए प्रयोगों और संशोधनों की एक श्रृंखला में किया गया है। इसमें पॉलीमर ट्यूब होते हैं, जो आंशिक रूप से रक्त से भरे होते हैं और फिर से क्लोबल लूप में आकार लेते हैं। ये छोरों अपने रक्तस्रावी प्रभाव के साथ संवहनी प्रवाह की स्थिति अनुकरण करने के लिए एक तापमान नियंत्रित पानी स्नान में घुमाते हैं । पॉलीमर ट्यूबों के अंदर रक्त प्रवाह को प्रेरित करने के लिए छोरों के अंदर यांत्रिक बॉल वाल्व का उपयोग करने वाले पंप चालित मॉडल या मॉडल जैसे वैकल्पिक तरीकों को पहले ही15,16वर्णित किया गया है । हालांकि, यहां प्रस्तुत विधि का समग्र लाभ यह है कि रक्त कोशिकाओं और प्रोटीन पर लागू यांत्रिक बल कम है, हीमोलिसिस से परहेज करता है, और रक्त और कनेक्टर के बीच कोई संपर्क नहीं है, जो संभवतः प्रवाह अशांति और रक्त घटकों की सक्रियता का कारण बन सकता है। लूप के अंदर मुख्य सक्रिय कारक परीक्षण सामग्री ही और हवा है कि अंदर फंस गया है । यह त्रुटि को मापने के स्रोतों को कम करने और उच्च प्रजनन क्षमता प्रदान करने में मदद करता है, भले ही रक्त-वायु इंटरफेस प्रोटीन डेनैचेशन17का कारण बन सकता है। लंबाई या आकार प्रतिबंधों के बिना टयूबिंग सामग्री और स्टेंट व्यास की किस्मों की जांच करना भी संभव है जिससे विभिन्न लंबाई और आंतरिक व्यास की ट्यूबों के उपयोग की अनुमति मिल सके। इसके अलावा, गलत लूप बंद करने और अनकोटेड ट्यूब सतह के संपर्क में आने पर होस्ट हीमोकोबिलिटी भी जांच संभव है। इस इन विट्रो हीमोडायनामिक लूप मॉडल के अन्य समान चिकित्सा अनुप्रयोग यह है कि इसका उपयोग पहले-मानव चरण I नैदानिक परीक्षण से पहले प्रीक्लिनिकल विकास या व्यक्तिगत दवा सुरक्षा स्क्रीनिंग के दौरान इम्यूनोथेरपीटिक्स (दवाओं) और रक्त घटकों के बीच बातचीत का अध्ययन करने के लिए भी किया जा सकता है, या थ्रोम्बस सामग्री की पीढ़ी के लिए जिसका उपयोग आगे के प्रयोगों में किया जा सकता है18,19,20।
यह अध्ययन परफ्यूजन ट्यूबों और/या स्टेंट की हीमोकोबिलिटी के परीक्षण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करता है । यहां, अनकोटेड और कोटेड पीवीसी ट्यूबों (हेपपीवीसी: हेपरिन कोटिंग, पॉलीपीवीसी: बायोएक्टिव बहुलक के साथ कोटिंग) के बीच तुलना। प्लेटलेट्स की सक्रियता कम हो गई, लेकिन अनकोटेड ट्यूबों की तुलना में दोनों कोटेड ट्यूबों के लिए जमावट प्रणाली (एफपीए) की उच्च सक्रियता पाई गई। यहां उपयोग की जाने वाली हेपपीवीसी ट्यूबों को एक सहलेता हुआ बाध्य हेपरिन के साथ संशोधित किया जाता है ताकि उन्हें थ्रोम्बोरिस्ट21 बनाया जा सके और विभिन्न मापदंडों को अनुकूलित करने और चित्रित करने के लिए पहले से ही एक लूप मॉडल मेंनियोजितकिया जा चुका है । इस अध्ययन में उपयोग की जाने वाली पॉलीपीवीसी ट्यूब व्यावसायिक रूप से उपलब्ध ट्यूब हैं जो एक्सट्राकॉर्पोरल ब्लड परफ्यूजन की नैदानिक सेटिंग्स में उपयोग की जाती हैं और उनकी थ्रोम्बोजेनिसिटी23को कम करने के लिए हेपरिन बहुलक से लेपित की जाती हैं। कभी-कभी, नैदानिक अनुप्रयोगों में भी अनकोटेड पीवीसी ट्यूब का उपयोग किया जाता है। इसलिए, हमने लेटेक्स ट्यूबों को एक सकारात्मक नियंत्रण समूह के रूप में शामिल किया जिसमें प्लेटलेट्स, जमाव प्रणाली और आईएल-6, टीएनएफ और पीएमएन इलास्टेस जैसे घुलनशील कारकों की अत्यधिक सक्रियता दिखाई गई। थ्रॉम्बस गठन तब देखा गया जब गलत लूप क्लोजर नकली था। इससे बेसलाइन स्थितियों की तुलना में जमाव और पूरक प्रणाली के साथ-साथ ल्यूकोसाइट्स और प्लेटलेट्स की सक्रियता हुई। इसके अलावा, यहां इस्तेमाल किए गए स्टेंट सामग्री (नंगे धातु नितिनोल स्टेंट, कार्बन-गर्भवती विस्तारित पॉलीटेट्राफ्लोरोएथिलीन से ढके हुए) के लिए रक्त संपर्क ने पीएमएन इलास्टेस के संदर्भ में प्लेटलेट और ल्यूकोसिट सक्रियण को अधिक प्रेरित किया। कुल मिलाकर, प्रस्तुत मॉडल ने किसी भी परीक्षण किए गए संवहनी उपकरणों में हीमोलिसिस को प्रेरित नहीं किया क्योंकि वे लेटेक्स ट्यूबों को छोड़कर बेसलाइन या स्थिर स्थितियों के बराबर थे, जहां लाल रक्त कोशिका (आरबीसी) हीमोलिसिस स्पष्ट था। इसके अलावा, इन पर्फ्यूजन ट्यूबों की जांच या तो इमेजिंग द्वारा या हिस्टोलॉजी द्वारा की जा सकती है। हालांकि हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन व्यवहार्य हो सकता है, हमने मुख्य रूप से एलिसा और प्रवाह साइटोमेट्री पर ध्यान केंद्रित किया ताकि इन प्रयोगों को अंजाम दिया जा सके और इस तरह कई प्रयोगशालाओं के लिए यहां प्रस्तुत मॉडल के आधार पर प्रयोगों के संचालन की व्यवहार्यता को सक्षम किया जा सके। इस प्रकार, यह विधि आईएसओ 10993-4 मानक की सिफारिशों के अनुसार संवहनी चिकित्सा उपकरणों की रक्त जैव अनुकूलता का परीक्षण करने के लिए एक व्यवहार्य विधि का प्रतिनिधित्व करती है। इसके अलावा, इस विधि का उपयोग तब भी किया जा सकता है जब भी रक्त और सामग्रियों के बीच बातचीत का प्रवाह स्थितियों के तहत परीक्षण किया जाना चाहिए, वीवो स्थितियों में नकल करना।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 ml tube, K3 EDTA</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>32332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Ig, &#954;/Negative Control Compensation Particles Set</td>
			<td>Becton Dickinson BioSciences</td>
			<td>552843</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD45 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>368512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSR Fortessa II cell analyzer</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>647465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer Citrate Tubes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>369714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer one-use holder</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>364815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer Safety-Lok butterfly canula 21 G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaker glass ROTILABO short 10 ml</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>X686.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaker glass ROTILABO short 50 ml</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>X688.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 421 anti-human CD162 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>328808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 421 anti-human CD41 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>303730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge ROTINA 420 | 420 R</td>
			<td>Hettich Zentrifugen</td>
			<td>4701 | 4706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 50 ml</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHC Super modified, 5mm PVC tubing</td>
			<td>Corline Sweden</td>
			<td>1807-148</td>
			<td>Referred to as hepPVC tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular Precision Cutter</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 007-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Closing Unit (complete with tension bands)</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 008-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric tape Scotch Super 33+</td>
			<td>VWR</td>
			<td>MMMA331933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA MAX Deluxe Set Human IL-6</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>430504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA MAX Deluxe Set Human TNF-a</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>430204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 0,1 &#8211; 2,5 &#181;L, gray</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 0,5 &#8211; 10 &#181;L, gray</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 10 &#8211; 100 &#181;L, yellow</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 100 &#8211; 1,000 &#181;L, blue</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 20 &#8211; 200 &#181;L, yellow</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. sample bag, 0,5 &#8211; 5 mL, violet</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>03690-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes polystyrene 5.0 ml round bottom</td>
			<td>Corning BV</td>
			<td>352052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum Gold Plus</td>
			<td>Bio-Sell</td>
			<td>FBS.GP.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD14 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>367116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluency plus stent 13.5 x 60 mm</td>
			<td>Angiomed GmbH &#38; Co</td>
			<td>FVM14060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Free Hemoglobin fHb Reagent</td>
			<td>Bioanalytics GmbH</td>
			<td>004001-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco PBS Tablets</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>18912014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves Vasco Nitril white L</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td>9208437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves Vasco Nitril white M</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td>9208429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 25% aequous solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G6257-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin, 25.000 IE in 5 ml</td>
			<td>Rotexmedica, Trittau, Germany</td>
			<td>PZN 3862340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Fibrinopeptide A (FPA) ELISA Kit</td>
			<td>H&#246;lzel Diagnostika</td>
			<td>abx253234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kodan tincture forte colourless</td>
			<td>Sch&#252;lke &#38; Mayr GmbH</td>
			<td>104012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex tube, ID 5 mm</td>
			<td>Laborhandel24 GmbH</td>
			<td>305 0507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loop Stand</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 009-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medimex venous tourniquet classic</td>
			<td>ROESER Medical GmbH</td>
			<td>310005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader Infinite 200 Pro M Plex</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>TEC006418I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate shaker PMS-1000i</td>
			<td>VWR</td>
			<td>444-0041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Metric non-phthalate PVC tubing, ID 5 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>NALG8703-0508</td>
			<td>Referred to as PVC tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NexTemp (Standard) Single-Use Clinical Thermometer</td>
			<td>Medical Indicators</td>
			<td>2112-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MaxiSorp ELISA Plates, uncoated</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>423501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10256970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde Solution, 4% in PBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AAJ19943K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD16Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>302008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD62P (P-Selectin) Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette controller, pipetus</td>
			<td>VWR</td>
			<td>612-1874</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips epT.I.P.S. 0.2 - 5 ml</td>
			<td>OMNILAB-LABORZENTRUM GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>5186480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips epT.I.P.S. standard 0,1 - 10&#181;l</td>
			<td>Th. Geyer GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>9409410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips epT.I.P.S. standard 2 - 200&#181;l</td>
			<td>Th. Geyer GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>0030 000.870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips epT.I.P.S. standard 50 - 1000&#181;l blue</td>
			<td>Th. Geyer GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>0030 000.919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMN (Neutrophil) Elastase Human ELISA Kit</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BMS269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Probe stand ROTILABO combi</td>
			<td>CARL ROTH</td>
			<td>K082.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack for rotation unit (12 slots 3/8 &#39;&#39; with variable slot width)</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 011-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer (10X)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>420301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent reservoirs</td>
			<td>VWR</td>
			<td>613-1184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotation Unit</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 010-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe-Lock micro test tubes 0.5 ml</td>
			<td>OMNILAB-LABORZENTRUM GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>5409320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe-Lock micro test tubes 1.5 ml</td>
			<td>OMNILAB-LABORZENTRUM GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>5409331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sc5b9 Human ELISA KIT</td>
			<td>TECOmedicalGroup</td>
			<td>A029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel no 10</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9999403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning electron microscope XL30 ESEM-FEG</td>
			<td>Philips</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw top bottle ROTILABO Clear glass, 1000 ml, GL 45</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>X715.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw top bottle ROTILABO Clear glass, 500 ml, GL 45</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>X714.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-micro cuvette 1.6 ml</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>67.746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette 10.0 ml</td>
			<td>Corning BV</td>
			<td>4488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 25.0 ml</td>
			<td>Corning BV</td>
			<td>4489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 5.0 ml</td>
			<td>Corning BV</td>
			<td>4487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon tube, inner diameter 8 mm, outer diameter 12 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BURK8803-0812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprout mini centrifuge</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>552034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stop Solution for TMB Substrate</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>77316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swabs, sterile</td>
			<td>Fuhrmann GmbH</td>
			<td>32055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 ml</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>300296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature controlled water basin</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 020-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tert-Butanol, 99.5%, extra pure, ACROS Organics</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10000730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB Substrate Set</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>421101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trillium PVC tube, 5 mm ID</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>161100107100103</td>
			<td>Referred to as polyPVC tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A4974,0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-Vis Spektrometer Lambda 2</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>33539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vornado Mini Vortexer</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>55BV101-B-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XN-3000 workstation blood analyzer</td>
			<td>Sysmex Europe</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;-CT Phoenix Nanotom S</td>
			<td>GE Sensing &#38; Inspection, Wunstorf, Germany</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro hemodynamic loop model to investigate the hemocytocompatibility and host cell activation of vascular medical devices

इस अध्ययन में, पॉलीविनाइल क्लोराइड (पीवीसी) से बने 5 मिमी के भीतरी व्यास वाले ट्यूबों की हीमोक्वता और विभिन्न बायोएक्टिव संजूगेट्स के साथ लेपित अनकोटेड पीवीसी ट्यूब, लेटेक्स ट्यूब, और पीवीसी ट्यूबों के अंदर रखे गए इंट्रावैस्कुलर एप्लिकेशन के लिए एक स्टेंट की तुलना में की गई थी। हीमोकंपनि का मूल्यांकन एक इन विट्रो हीमोडायनामिक लूप मॉडल का उपयोग करके किया गया था जिसे आईएसओ मानक 10993-4 द्वारा अनुशंसित किया गया है। ट्यूबों को समान लंबाई के खंडों में काटा गया था और स्प्लिस में किसी भी अंतर से बचने के लिए लूप बनाने के लिए बंद कर दिया गया था, फिर मानव रक्त से भरा हुआ था और 3 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में घुमाया गया था। इसके बाद, ट्यूबों के अंदर रक्त पूरे रक्त कोशिका गिनती, हीमोलिसिस (मुक्त प्लाज्मा हीमोग्लोबिन), पूरक प्रणाली (एससी5बी-9), जमाव प्रणाली (फाइब्रिनोपेप्टाइड ए), और ल्यूकोसिटे सक्रियण (पॉलीमॉर्फोक््यूक्लियर इलास्टेज, ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर और इंटरल्यूकिन-6) के विश्लेषण के लिए एकत्र किया गया। मेजबान सेल सक्रियण प्लेटलेट सक्रियण, ल्यूकोसाइट तीक्ष्ण स्थिति और मोनोसाइट प्लेटलेट के लिए निर्धारित किया गया था जो प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग करके एकत्रित होते हैं। गलत लूप क्लोजर के प्रभाव की जांच एक्स-रे माइक्रोटोमोग्राफी और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के साथ की गई थी, जिसने स्प्लिस में थ्रोम्बस फॉर्मेशन दिखाया था । लेटेक्स ट्यूबों ने रक्त के प्लाज्मा और सेलुलर घटकों दोनों की सबसे मजबूत सक्रियता दिखाई, जो एक खराब हीमोकंप्मेंटेबिलिटी का संकेत है, जिसके बाद स्टेंट समूह और अनकोटेड पीवीसी ट्यूब्स हैं। लेपित पीवीसी ट्यूबों प्लेटलेट सक्रियण स्थिति में एक महत्वपूर्ण कमी नहीं दिखा था, लेकिन अनकोटेड पीवीसी ट्यूबों की तुलना में पूरक और जमावट झरना में वृद्धि हुई दिखाया । लूप मॉडल में ही कोशिकाओं या घुलनशील कारकों की सक्रियता नहीं हुई, और हीमोलिसिस का स्तर कम था। इसलिए, प्रस्तुत इन विट्रो हीमोडायनामिक लूप मॉडल यांत्रिक बलों द्वारा रक्त घटकों की अत्यधिक सक्रियता से बचा जाता है और दाता रक्त और संवहनी चिकित्सा उपकरणों के बीच इन विट्रो इंटरैक्शन की जांच करने की विधि के रूप में कार्य करता है।

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An In Vitro Hemodynamic Loop Model to Investigate the Hemocytocompatibility and Host Cell Activation of Vascular Medical Devices

यहां प्रस्तुत एक मानकीकृत इन विट्रो हीमोडायनामिक लूप मॉडल के लिए एक प्रोटोकॉल है। यह मॉडल आईएसओ (मानकीकरण के लिए अंतर्राष्ट्रीय संगठन) मानक 10993-4 के अनुसार होने के लिए परफ्यूजन ट्यूब या संवहनी स्टेंट की हीमोकंप्लाटि का परीक्षण करने की अनुमति देता है।

वैस्कुलर मेडिकल डिवाइसेज की हेमोसिटोकम्पेबिलिटी और होस्ट सेल एक्टिवेशन की जांच करने के लिए एक इन विट्रो हेमोडायनामिक लूप मॉडल

In this study, the hemocompatibility of tubes with an inner diameter of 5 mm made of polyvinyl chloride (PVC) and coated with different bioactive ...

यह हीमोडायनामिक लूप मॉडल शोधकर्ताओं को पर्सियन ट्यूबिंग या स्टेंट जैसे संवहनी उपकरणों की इन-विट्रो हीमो अनुकूलता का परीक्षण करने की अनुमति देता है। मानकीकृत परिस्थितियों में। इसलिए यह तकनीक यांत्रिक बल द्वारा रक्त पर कोई प्रभाव नहीं डालती है और इस तरह रक्त घटकों की आंतरिक सक्रियता से भ्रामक परिणामों से बचती है।एक प्रयोग का प्रयास करने से पहले, उचित यांत्रिक भाग विधानसभा, सही लूप क्लोजर सिस्टम निर्माण और छोरों में धीमी गति से रक्त लोड होने का अभ्यास किया जाना चाहिए। लूप असेंबली तैयार करने के लिए, एक ट्यूब कटर का उपयोग एक सपाट सतह पर ट्यूबिंग के 250 सेंटीमीटर लंबे, पांच मिलीमीटर आंतरिक व्यास के टुकड़ों को काटने के लिए करें। और एक पाश आकार उत्पन्न करने के लिए खोजी ट्यूब के बाहरी व्यास फिटिंग सिलिकॉन ट्यूब के एक छोटे टुकड़े में ट्यूबों के खुले अंत प्लग।तनाव बैंड कनेक्टर के लॉकिंग पेंच को सावधानीपूर्वक कस लें और समापन बल को समायोजित करें ताकि दो झुकने के बीच कोई अंतर न रहे। अगर लॉकिंग का पेंच पूरी तरह से कड़ा हो जाए और पॉलीकार्बोनेट बैंड का टेंशन दो बेंडिंग के बीच के गैप को बंद करने के लिए बहुत कम लगता है, तो लॉकिंग सिस्टम खोलें और टेंशन बैंड के कुछ मिलीमीटर काट लें । स्टेंट लूप असेंबली तैयार करने के लिए, दो लूप खोलें और ट्यूब को टेंशन बैंड सिस्टम से बाहर निकालें।फिर निर्माता द्वारा निर्देश के अनुसार ट्यूब के बीच में स्टेंट डालें। जब प्रयोग के लिए छोरों की उचित संख्या उत्पन्न की गई है रोटेशन इकाई के पाश पालने में छोरों सुरक्षित, एक ३७ डिग्री पानी स्नान के बाहर और पानी स्नान के अंदर रोटेशन इकाई के लिए पाश पालना देते हैं । इसके बाद, रक्त के हर दो छोरों के लिए एक 10 मिलीलीटर सिरिंज को 150 माइक्रोलीटर या हौसले से तैयार हेपरिन स्टॉक समाधान के साथ एकत्र किया जाना है और अत्यधिक वैक्यूम के कारण होमोलिसिस या सेल सक्रियण से बचने के लिए ध्यान रखते हुए, धीरे-धीरे सीरिंज में रक्त एकत्र करने के लिए 21 गेज तितली का उपयोग करें।जब सभी रक्त एकत्र किए गए हैं तो रक्त को एक ग्लास बीकर में स्थानांतरित करें और रक्त और हेपरिन को धीरे-धीरे मिलाने के लिए पांच मिलीलीटर सीरोलॉजिकल पिपेट का उपयोग करें। जब एक सजातीय समाधान पिपेट टिप के साथ प्राप्त किया गया है जो पूरी तरह से ट्यूब में नहीं डाला गया है, तो ध्यान से, प्रत्येक लूप को पांच मिलीलीटर रक्त से भरें। प्रत्येक लूप को भरने के बाद बंद करें और पुष्टि करें कि लूप, टेंशन बैंड और रैक ठीक से सुरक्षित हैं।फिर प्रति मिनट 30 क्रांतियों पर तीन घंटे के लिए छोरों को घुमाएं। रोटेशन के अंत में, छोरों को दो मिनट के लिए रैक में खड़े होने की अनुमति दें ताकि कनेक्टर्स को ध्यान से खोलने और डुप्लिकेट से रक्त को व्यक्तिगत 10 मिलीलीटर ग्लास बीकर्स में खींचने से पहले लूप नीचे से जमा होने दें। जब सभी रक्त एकत्र किए गए हैं तो प्रत्येक ट्यूब को 10 मिलीलीटर पीबीएस के साथ कुल्ला किया गया है और प्रत्येक ट्यूब के अंत से एक सेंटीमीटर नमूना को ध्यान से काटने के लिए स्केलपेल का उपयोग करें।चार डिग्री सेल्सियस पर 2% ग्लूटारल्डिहाइड में रात भर नमूनों को इनक्यूबेट करें, इसके बाद 15 मिनट इनक्यूबेशन और कमरे के तापमान पर 1% ऑस्मियम टेट्रोक्साइड । ऑस्मियम टेट्रोक्साइड इनक्यूबेशन के अंत में, 20 मिनट प्रति एकाग्रता के लिए एक आरोही इथेनॉल श्रृंखला में नमूनों को निर्जलित करें, इसके बाद 100% इथेनॉल में 30 मिनट निर्जलीकरण करें। 100% इथेनॉल इनक्यूबेशन के अंत में, एक्स-रे माइक्रो सीटी स्कैनर का उपयोग करके, पांच किलोवोल्ट के त्वरण वोल्टेज पर इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी स्कैन करके नमूनों को इमेजिंग करने से पहले नमूनों को कमरे के तापमान पर रात भर सूखने दें।रक्त नमूनों के प्रवाह साइटोमेट्रिक विश्लेषण के लिए। प्रत्येक नमूने से रक्त के 100 माइक्रोलीटर को नौ पांच मिलीलीटर एफएसीएस ट्यूबों में स्थानांतरित करें और प्रकाश से संरक्षित कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए 4% पावर फॉर्मेल्डिहाइड प्रति ट्यूब के 100 माइक्रोलीटर के अलावा नमूनों को ठीक करें। धोने के बाद, लाल रक्त कोशिका लाइसिस बफर प्रति ट्यूब के एक मिलीलीटर में प्रत्येक गोली को फिर से निलंबित करें, कमरे के तापमान पर पांच मिनट इनक्यूबेशन के लिए, प्रकाश से संरक्षित।इनक्यूबेशन के अंत में, प्रति ट्यूब पीबीएस के एक मिलीलीटर में अपकेंद्री द्वारा नमूनों को धोएं और बर्फ पर अपने सुपरनेटेंट के बिना नमूनों को रखें। एकल दाग मुआवजा मोती तैयार करने के लिए FACS बफर के व्यक्तिगत एक मिलीलीटर मात्रा में सकारात्मक और नकारात्मक मोतियों की चार बूंदें जोड़ें, और सजातीय मनका निलंबन प्राप्त करने के लिए समाधान भंवर । प्रत्येक समाधान के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें चार या पांच मिलीलीटर FACS ट्यूबों में से प्रत्येक के लिए 100 माइक्रोलीटर के रूप में लेबल और प्रति ट्यूब FACS बफर के एक मिलीलीटर के साथ मोती धोने।इसके बाद कोमल मिश्रण के साथ प्रत्येक प्रयोगात्मक और फ्लोरेसेंस माइनस एक ट्यूब में उपयुक्त भंवर एंटीबॉडी कॉकटेल के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें। कमरे के तापमान पर 30 मिनट इनक्यूबेशन के लिए, प्रकाश से संरक्षित। इनक्यूबेशन के अंत में, प्रति नमूना ताजा FACS बफर के एक मिलीलीटर के साथ नमूनों को धोएं और प्रति ट्यूब FACS बफर के 250 माइक्रोलीटर में छर्रों को फिर से रखें।मानक प्रोटोकॉल के अनुसार, प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा सेल नमूनों पर मोतियों का विश्लेषण करने से पहले। रक्त कोशिका वितरण माइक्रो सीटी और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप इमेजिंग द्वारा कटा हुआ दो bloops की पूरी सतह पर कल्पना की जा सकती है, जबकि अंतराल के बिना बंद छोरों में कोई थक्के मनाया जाता है । पूरे रक्त कोशिका गिनती का विश्लेषण, किसी भी परीक्षण की स्थिति, प्लेटलेट और ल्यूकोसिटे संख्या के बीच एरिथ्रोसाइट संख्या में महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाता है, हालांकि, लेटेक्स लूप समूह में काफी कम हो जाता है और मुफ्त हीमोग्लोबिन संख्या नाटकीय रूप से बढ़ जाती है, जो लेटेक्स की बहुत खराब जैव अनुकूलता का संकेत देती है।जबकि सभी परीक्षण संवहनी उपकरण जमावट प्रणाली और प्रशंसा घटक की बढ़ी हुई सक्रियता को प्रेरित करते हैं। हेपरिन लेपित पीवीसी लूप पॉलीमर लेपित, पीवीसी लूप की तुलना में दोनों प्रकार के सक्रियणों के निम्न स्तर के लिए एक प्रवृत्ति प्रदर्शित करते हैं। लेटेक्स लूप टीएनएफ आईएल-6 और पीएमएन इलास्टेस के उच्चतम स्तर को प्रदर्शित करते हैं, जो लेटेक्स द्वारा ल्यूकोसाइट्स की शक्तिशाली सक्रियण को रेखांकित करते हैं।लेटेक्स ट्यूबों से बरामद सीडी 41 सकारात्मक प्लेटलेट्स, सीडी 62पी के लिए बेहद उच्च औसत फ्लोरेसेंस तीव्रता प्रदर्शित करते हैं, जबकि एकीकृत अभिव्यक्ति ग्रेनुलोसाइट्स और लिम्फोसाइट्स पर काफी कम हो जाती है। ब्याज की, लेटेक्स ट्यूबों से मोनोसाइट्स में अभिन्न स्तर अधिक होते हैं, जो मोनोसाइट सक्रिय प्लेटलेट इंटरैक्शन का सुझाव देते हैं। वास्तव में मोनोसाइट प्लेटलेट समुच्चय के लिए धुंधला लेटेक्स और स्टेंट छोरों में एकत्रीकरण के लिए एक वृद्धि की प्रवृत्ति का पता चलता है ।लेटेक्स लूप के भीतर मोनोसाइट्स की कम आवृत्ति के बावजूद। आंतरिक रक्त घटक सक्रियण से बचने के लिए एक उचित लूप बंद सुनिश्चित करना और देखभाल के साथ रक्त को संभालना महत्वपूर्ण है। इसलिए इस प्रक्रिया का पालन करते हुए, सूजन या दवा अनुसंधान में उपयोग किए जाने वाले एलोजेनिक प्रोटीन या TRUCKs और रक्त घटकों के बीच बातचीत का विश्लेषण करना संभव है।

Research

JoVE Journal

Medicine

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Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

एक के रूप में मस्तिष्क Microslices की excitotoxic उत्तेजना<em&gt; इन विट्रो</em&gt; स्ट्रोक के मॉडल

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Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the ...

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

नवजात मातृ जुदाई का एक माउस मॉडल में Perigenital संवेदनशीलता और प्रोस्टेटिक मस्त सेल सक्रियण का आकलन

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एक अनुदेशात्मक वीडियो-महाधमनी प्रत्यारोपण के एक माउस मॉडल में आस्तीन तकनीक का उपयोग करना

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माउस में संवहनी रिसाव का आकलन करने के लिए एक अनुकूलित इवांस ब्लू प्रोटोकॉल

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ...

Hemocompatibility Testing of Blood-Contacting Implants in a Flow Loop Model Mimicking Human Blood Flow

मानव रक्त प्रवाह की नकल करने वाले फ्लो लूप मॉडल में रक्त-संपर्क प्रत्यारोपण का हीमोकॉम्पिटीशन परीक्षण

The growing use of medical devices (e.g., vascular grafts, stents, and cardiac catheters) for temporary or permanent purposes that remain in the ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

चूहा लिवर प्रत्यारोपण मॉडल में हेमोडायनामिक परिवर्तनों का अनुकरण करके अंग इस्केमिया-रिफ्यूजन इंजरी

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...