Name: an in vitro hemodynamic loop model to investigate the hemocytocompatibility and host cell activation of vascular medical devices
Uploaded: 2020-08-21T13:00:00
Duration: 8 min 44 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Hemodynamic Loop Model to Investigate the Hemocytocompatibility and Host Cell Activation of Vascular Medical Devices at JoVE.com

Yazarlar Bayan Elena Denks'e teknik yardımlarından dolayı müteşekkirler.

<ol>
	<li>International Organisation for Standardisation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DIN+ISO+10993-4:+Biological+evaluation+of+medical+devices+-+Part+4:+Selection+of+tests+for+interactions+with+blood.">DIN ISO 10993-4: Biological evaluation of medical devices - Part 4: Selection of tests for interactions with blood.</a> International Organisation for Standardisation. , (2017).</li><li>Mayes, J. T., Schreiber, R. D., Cooper, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+application+of+an+enzyme-linked+immunosorbent+assay+for+the+quantitation+of+alternative+complement+pathway+activation+in+human+serum.">Development and application of an enzyme-linked immunosorbent assay for the quantitation of alternative complement pathway activation in human serum.</a> Journal of Clinical Investigation. 73 (1), 160-170 (1984).</li><li>Maiolini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sandwich+method+of+enzyme-immunoassay.+II.+Quantification+of+rheumatoid+factor.">A sandwich method of enzyme-immunoassay. II. Quantification of rheumatoid factor.</a> Journal of Immunological Methods. 20, 25-34 (1978).</li><li>Shapiro, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+Cytometry:+The+Glass+Is+Half+Full.">Flow Cytometry: The Glass Is Half Full.</a> Methods in Molecular Biology. 1678, 1-10 (2018).</li><li>Betke, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Slurry+Composition+on+Properties+of+Cellular+Alumina:+A+Computed+Tomographic+Study.">Impact of Slurry Composition on Properties of Cellular Alumina: A Computed Tomographic Study.</a> Advanced Engineering Materials. 19 (10), (2017).</li><li>Chandler, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+thrombotic+coagulation+of+the+blood;+a+method+for+producing+a+thrombus.">In vitro thrombotic coagulation of the blood; a method for producing a thrombus.</a> Laboratory Investigation. 7 (2), 110-114 (1958).</li><li>Fink, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+study+of+blood+compatibility+of+vascular+grafts+made+of+bacterial+cellulose+in+comparison+with+conventionally-used+graft+materials.">An in vitro study of blood compatibility of vascular grafts made of bacterial cellulose in comparison with conventionally-used graft materials.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 97 (1), 52-58 (2011).</li><li>Lenz-Habijan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+Thrombogenicity+of+a+Bare+and+Antithrombogenic+Coated+Flow+Diverter+in+an+In+Vitro+Flow+Model.">Comparison of the Thrombogenicity of a Bare and Antithrombogenic Coated Flow Diverter in an In Vitro Flow Model.</a> Cardiovascular and Interventional Radiology. 43 (1), 140-146 (2020).</li><li>Olsen, A. L., Long, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+catheter+thrombogenicity+in+a+modified+chandler+loop+model+using+goat+blood.">Comparison of catheter thrombogenicity in a modified chandler loop model using goat blood.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 106 (12), 3143-3151 (2018).</li><li>Touma, H., Sahin, I., Gaamangwe, T., Gorbet, M. B., Peterson, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Numerical+investigation+of+fluid+flow+in+a+chandler+loop.">Numerical investigation of fluid flow in a chandler loop.</a> Journal of Biomechanical Engineering. 136 (7), (2014).</li><li>Slee, J. B., Alferiev, I. S., Levy, R. J., Stachelek, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+the+ex+vivo+Chandler+Loop+Apparatus+to+assess+the+biocompatibility+of+modified+polymeric+blood+conduits.">The use of the ex vivo Chandler Loop Apparatus to assess the biocompatibility of modified polymeric blood conduits.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51871 (2014).</li><li>Feyerabend, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+compatibility+of+magnesium+and+its+alloys.">Blood compatibility of magnesium and its alloys.</a> Acta Biomaterialia. 25, 384-394 (2015).</li><li>Lukas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Immobilized+Antithrombin+III+on+the+Thromboresistance+of+Polycarbonate+Urethane.">Effect of Immobilized Antithrombin III on the Thromboresistance of Polycarbonate Urethane.</a> Materials. 10 (4), 355 (2017).</li><li>Paul, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aptamers+influence+the+hemostatic+system+by+activating+the+intrinsic+coagulation+pathway+in+an+in+vitro+Chandler-Loop+model.">Aptamers influence the hemostatic system by activating the intrinsic coagulation pathway in an in vitro Chandler-Loop model.</a> Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 16 (2), 161-169 (2010).</li><li>Link, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocompatibility+Testing+of+Blood-Contacting+Implants+in+a+Flow+Loop+Model+Mimicking+Human+Blood+Flow.">Hemocompatibility Testing of Blood-Contacting Implants in a Flow Loop Model Mimicking Human Blood Flow.</a> Journal of Visualized Experiments. (157), e60610 (2020).</li><li>van Oeveren, W., Tielliu, I. F., de Hart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+modified+chandler,+roller+pump,+and+ball+valve+circulation+models+for+in+vitro+testing+in+high+blood+flow+conditions:+application+in+thrombogenicity+testing+of+different+materials+for+vascular+applications.">Comparison of modified chandler, roller pump, and ball valve circulation models for in vitro testing in high blood flow conditions: application in thrombogenicity testing of different materials for vascular applications.</a> International Journal of Biomaterials. 2012, 673163 (2012).</li><li>Maa, Y. F., Hsu, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+denaturation+by+combined+effect+of+shear+and+air-liquid+interface.">Protein denaturation by combined effect of shear and air-liquid interface.</a> Biotechnology and Bioengineering. 54 (6), 503-512 (1997).</li><li>Mutch, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+the+Chandler+loop+to+examine+the+interaction+potential+of+NXY-059+on+the+thrombolytic+properties+of+rtPA+on+human+thrombi+in+vitro.">The use of the Chandler loop to examine the interaction potential of NXY-059 on the thrombolytic properties of rtPA on human thrombi in vitro.</a> British Journal of Pharmacology. 153 (1), 124-131 (2008).</li><li>Fletcher, E. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracorporeal+human+whole+blood+in+motion,+as+a+tool+to+predict+first-infusion+reactions+and+mechanism-of-action+of+immunotherapeutics.">Extracorporeal human whole blood in motion, as a tool to predict first-infusion reactions and mechanism-of-action of immunotherapeutics.</a> International Immunopharmacology. 54, 1-11 (2018).</li><li>Krajewski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocompatibility+evaluation+of+different+silver+nanoparticle+concentrations+employing+a+modified+Chandler-loop+in+vitro+assay+on+human+blood.">Hemocompatibility evaluation of different silver nanoparticle concentrations employing a modified Chandler-loop in vitro assay on human blood.</a> Acta Biomaterialia. 9 (7), 7460-7468 (2013).</li><li>Larm, O., Larsson, R., Olsson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+non-thrombogenic+surface+prepared+by+selective+covalent+binding+of+heparin+via+a+modified+reducing+terminal+residue.">A new non-thrombogenic surface prepared by selective covalent binding of heparin via a modified reducing terminal residue.</a> Biomaterials, Medical Devices, and Artificial Organs. 11 (2-3), 161-173 (1983).</li><li>Gong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubing+loops+as+a+model+for+cardiopulmonary+bypass+circuits:+both+the+biomaterial+and+the+blood-gas+phase+interfaces+induce+complement+activation+in+an+in+vitro+model.">Tubing loops as a model for cardiopulmonary bypass circuits: both the biomaterial and the blood-gas phase interfaces induce complement activation in an in vitro model.</a> Journal of Clinical Immunology. 16 (4), 222-229 (1996).</li><li>Tevaearai, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trillium+coating+of+cardiopulmonary+bypass+circuits+improves+biocompatibility.">Trillium coating of cardiopulmonary bypass circuits improves biocompatibility.</a> The International Journal of Artificial Organs. 22 (9), 629-634 (1999).</li><li>Ma, Y. Q., Plow, E. F., Geng, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P-selectin+binding+to+P-selectin+glycoprotein+ligand-1+induces+an+intermediate+state+of+alphaMbeta2+activation+and+acts+cooperatively+with+extracellular+stimuli+to+support+maximal+adhesion+of+human+neutrophils.">P-selectin binding to P-selectin glycoprotein ligand-1 induces an intermediate state of alphaMbeta2 activation and acts cooperatively with extracellular stimuli to support maximal adhesion of human neutrophils.</a> Blood. 104 (8), 2549-2556 (2004).</li><li>Bandyk, D. F., Galbraith, T. A., Haasler, G. B., Almassi, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+velocity+of+internal+mammary+artery+and+saphenous+vein+grafts+to+the+coronary+arteries.">Blood flow velocity of internal mammary artery and saphenous vein grafts to the coronary arteries.</a> Journal of Surgical Research. 44 (4), 342-351 (1988).</li><li>Gardner, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+examination+of+the+fluid+mechanics+and+thrombus+formation+time+parameters+in+a+Chandler+rotating+loop+system.">An examination of the fluid mechanics and thrombus formation time parameters in a Chandler rotating loop system.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 84 (4), 494-508 (1974).</li><li>Gaamangwe, T., Peterson, S. D., Gorbet, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+the+Effect+of+Blood+Sample+Volume+in+the+Chandler+Loop+Model:+Theoretical+and+Experimental+Analysis.">Investigating the Effect of Blood Sample Volume in the Chandler Loop Model: Theoretical and Experimental Analysis.</a> Cardiovascular Engineering and Technology. 5 (2), 133-144 (2014).</li><li>B&#246;swirth, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Technische Str&#246;mungslehre. 8 edn. , (2010).</li><li>Cartwright, I. J., Pockley, A. G., Galloway, J. H., Greaves, M., Preston, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+dietary+omega-3+polyunsaturated+fatty+acids+on+erythrocyte+membrane+phospholipids,+erythrocyte+deformability+and+blood+viscosity+in+healthy+volunteers.">The effects of dietary omega-3 polyunsaturated fatty acids on erythrocyte membrane phospholipids, erythrocyte deformability and blood viscosity in healthy volunteers.</a> Atherosclerosis. 55 (3), 267-281 (1985).</li><li>Wong, K. K. L., Wu, J., Liu, G., Huang, W., Ghista, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+arteries+hemodynamics:+effect+of+arterial+geometry+on+hemodynamic+parameters+causing+atherosclerosis.">Coronary arteries hemodynamics: effect of arterial geometry on hemodynamic parameters causing atherosclerosis.</a> Medical &amp; biological engineering &amp; computing. 58, 1831-1843 (2020).</li><li>Kania, R. E., Herman, P., Ar, A., Tran Ba Huy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+pitfalls+in+middle+ear+gas+studies:+errors+introduced+by+the+gas+permeability+of+tubing+and+additional+dead+space.">Technical pitfalls in middle ear gas studies: errors introduced by the gas permeability of tubing and additional dead space.</a> Acta Oto-Laryngologica. 125 (5), 529-533 (2005).</li><li>Foley, M. E., McNicol, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in-vitro+study+of+acidosis,+platelet+function,+and+perinatal+cerebral+intraventricular+haemorrhage.">An in-vitro study of acidosis, platelet function, and perinatal cerebral intraventricular haemorrhage.</a> The Lancet. 1 (8024), 1230-1232 (1977).</li><li>Engstrom, M., Schott, U., Romner, B., Reinstrup, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acidosis+impairs+the+coagulation:+A+thromboelastographic+study.">Acidosis impairs the coagulation: A thromboelastographic study.</a> The Journal of Trauma. 61 (3), 624-628 (2006).</li><li>Dirkmann, D., Hanke, A. A., Gorlinger, K., Peters, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+and+acidosis+synergistically+impair+coagulation+in+human+whole+blood.">Hypothermia and acidosis synergistically impair coagulation in human whole blood.</a> Anesthesia &amp; Analgesia. 106 (6), 1627-1632 (2008).</li><li>Ritz-Timme, S., Eckelt, N., Schmidtke, E., Thomsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genesis+and+diagnostic+value+of+leukocyte+and+platelet+accumulations+around+"air+bubbles"+in+blood+after+venous+air+embolism.">Genesis and diagnostic value of leukocyte and platelet accumulations around "air bubbles" in blood after venous air embolism.</a> International Journal of Legal Medicine. 111 (1), 22-26 (1998).</li><li>Thorsen, T., Klausen, H., Lie, R. T., Holmsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bubble-induced+aggregation+of+platelets:+effects+of+gas+species,+proteins,+and+decompression.">Bubble-induced aggregation of platelets: effects of gas species, proteins, and decompression.</a> Undersea &amp; Hyperbaric Medicine : Journal of the Undersea and Hyperbaric Medical Society, Inc. 20 (2), 101-119 (1993).</li><li>Streller, U., Sperling, C., Hubner, J., Hanke, R., Werner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+evaluation+of+novel+blood+incubation+systems+for+in+vitro+hemocompatibility+assessment+of+planar+solid+surfaces.">Design and evaluation of novel blood incubation systems for in vitro hemocompatibility assessment of planar solid surfaces.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B. 66 (1), 379-390 (2003).</li><li>Hesh, C. A., Qiu, Y., Lam, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+microfluidics+and+the+blood-endothelium+interface.">Vascularized microfluidics and the blood-endothelium interface.</a> Micromachines. 11 (1), 18 (2019).</li><li>Nordling, S., Nilsson, B., Magnusson, P. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+in+vitro+model+for+studying+the+interactions+between+human+whole+blood+and+endothelium.">A novel in vitro model for studying the interactions between human whole blood and endothelium.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52112 (2014).</li></ol>

Funder [ebo kunze industriedesign, Im Dentel 17, 72639 Neuffen, Almanya] bu el yazması [Max Wacker] yazarına sarf malzemeleri ve yayın ücretleri şeklinde bir mali destek sağladı. Fon, çalışmanın tasarımı, veri toplama ve analizi, yayımlama kararı veya makalenin hazırlanmasında ek bir rol emmedi.

Bu çalışma, sunulan in vitro hemodinamik döngü modelinin, tıbbi cihazların in vitro kan uyumluluğunu ISO 10993-4 standardına uygun olarak test etmek için güvenilir bir yöntem sunduğunu göstermiştir.
Protokoldeki kritik adımlar arasında kan çekilmesi ve tüplerin kanla doldurulması yer almakta olup, kan bileşenlerinin işlem prosedürü ile aktivasyonundan kaçınmak için aşırı vakum veya ajitasyondan kaçınılmalıdır. Ayrıca, tamamlayıcı ve pıhtılaşma sistemi aktivasyonu daha uzun bir süre oda sıcaklığında tutularak değiştirilebilir gibi, plazma örnekleri hemen dondurmak ve erime sonra buz üzerinde tutmak çok önemlidir.
Bu model, diğer in vitro modellere kıyasla hem yararları hem de cezaları olduğundan, deneylertasarlarken çeşitli faktörlerin dikkate alınması gerekir.
İlk olarak, döngüler çeşitli deneysel kurulumları uyacak şekilde uzunluk ve çap olarak çeşitli olabilir. Kurulum, değişen iç çaplarda zıt tüpler içeriyorsa, çap farklılıklarının farklı kesme kuvvetlerine yol açacağı ve pıhtılaşmayı etkileyip basamaklama7'yitamamladığı unutulmamalıdır. İkinci olarak, bu deneyde dönüş hızı 30 rpm olarak ayarlandı. Bu yaklaşık bir kan akımı neden olacak 25 cm / s, hangi insan koroner arter bypass greftleri kan akımı hızı ile karşılaştırılabilir25. Döngülerin döndürülmesi ile oluşturulan gerinim hızı, hücreler ve hücresiz proteinler de dahil olmak üzere kan bileşenlerinin biyokimyasal basamaklarını başlatacak başlıca parametredir. Ama kan newton olmayan bir sıvı olduğu için, gerinim oranı da tüp eğriliği, sırasıyla döngüler10kapalı tüplerin uzunluğu etkilenecektir. Döndürme hızı veya döngü boyutu değiştirildiğinde, gerilme hızı ile dönüş hızı arasındaki korelasyonun doğrusal olmadığını göz önünde bulundurmak önemlidir. Dönüş hızı ile gerinim hızı arasındaki korelasyon günümüze kadar yeterince incelenmemekte ve bu özel parametrelerin10,26,27olarak araştırılması için ileri çalışmalar yapılması gerekmektedir. Ancak, laminar sınır tabakası için bir modele göre, verilen tüp çapı 5 mm ve 25 cm/s dönüş hızı, duvar kesme stresinin kaba bir tahmini (WSS) kan yoğunluğu 1060 kg*m-3 olduğu tahmin edildiğinde ve kinistik viskozite 0,0025 pascal *s28,29olarak ayarlanır ken tüp duvarına 1,00-0,01 mm bir mesafe için 2.20-22.00 pascal arasındaki değerleri gösterir. İlginçtir, ayrıca insan koroner arterlerin eğrilik akış dinamikleri daha ayrıntılı bir hesaplama analizi 11,33 ile 16,77 pascal arasında değişen WSS değerleri gösterdi kabaca karşılaştırılabilir parametrelerde kan30.
Bu sınırlamanın yanı sıra, sunulan döngü modeli, insan vasküler sisteminin intravasküler kan basıncı oranlarını taklit etmeyen basınçsız bir sistemdir.
Bir sonraki önemli sınırlama, kanın döngülerin içindeki havayla temas halinde olmasıdır, bu da ek parazitler getirir. Böyle bir kan-hava teması tüplerin gaz geçirgenliği ve kan ile doldururken döngüler içinde hava nın istinat içeren iki parametre tarafından etkilenir. Her tüp malzeme tüpler içinde gaz konsantrasyonlarında önemli değişikliklere yol açabilir belirli bir gaz geçirgenlik vardır. Bazı yazarlar kan bileşenlerinin aktivasyonu üzerinde gaz geçirgenliği sonucu etkisi belirsiz kalır devletiken 31, Bu kan pıhtılaştırıcıların fonksiyonu son derece bir pH-shift duyarlı olduğu bilinmektedir, BU CO2 difüzyon neden olabilir32,33,34. Burada, kapalı hava koşullarında kan perfüzyon tüplerinin biyouyumluluğunu test ettik, ekstrakorporeal kan perfüzyonunun klinik senaryoları ile karşılaştırılabilir. Sunulan modelin gelecekteki iyileştirmeleri için, co2 inkübatörde tüm modelin kuluçkaya yatırılması ve kuluçkadan önce ve sonra kan pH doğrulaması yapılması bu modeli daha da standartlaştırmak için yararlı olabilir.
Ayrıca, döngüler içinde kan-hava arayüzü plazma proteinleri ve kan hücre fraksiyonları aktivasyonu yol açabilir35,36. Tüpler içinde hava olmadan silindir pompası tahrikli cihazlar kan-hava arayüzü sorunu önlemek olabilir, ama kesinlikle burada sunulan döngü modeli ile karşılaştırıldığında hemoglobin önemli yüksek seviyelerde kan hücrelerine zarar neden, ve plazma hemoglobin ELISA test analit duyarlılığı ile müdahale edebilir16. Bu çalışmada heparin kaplı PVC tüpler gibi biyouyumlu malzemeler kullanılırken döngü modelinin hemolitik etkisinin minimal düzeyde kalmıştır. Böylece, model, bir yandan, pompa tahrikli modellere göre aşırı hücre hasarına neden değil, diğer taraftan kan hava sılatemas nedeniyle plazma proteinleri indükleyen. Dikkat, van Oeveren ve ark döngüler içinde hava kaçınarak bir top-valf tabanlı döngü modeli geliştirdi16. Burada sunulan döngü modeli için bu umut verici alternatif kan-hava arayüzü sorunu üstesinden gelebilir, Ancak, burada sunulan modelile karşılaştırıldığında, trombosit yapışma sıyrık hala top-valf tabanlı döngü modeli için daha yüksektir.
Statik kontrol ile ilgili olarak, bu cam kendisi koagülör sisteminin güçlü bir aktivatör olduğu gösterilmiştir dikkat edin37. Ancak, sunulan kurulumda, bir cam kabındaki kuluçka (statik kontrol) aşırı konak hücre aktivasyonuna veya pıhtılaşma sisteminin aktivasyonuna doğrudan kan çektikten sonra temel seviyelere göre yol açmadı. Sonuç olarak, statik kontrol yüksek düzeyde aktivasyon gösteriyorsa, örneğin polipropilen tüpleri kullanmak yararlı olabilir.
Ne olursa olsun bir döngü tabanlı veya pompa odaklı bir model olup olmadığını, bu in vitro modelleri tamamen esas olarak sağlam bir endotel tarafından katkıda bulunulan otantik biyolojik etkileşimleri eksikliği, ideal bir kan temas yüzeyi. Bu sorunun arkasındaki mantık, endotel varlığında kan bileşenleri ile etkileşimi sırasında, aktivasyon ve plazma proteinleri açısından farklı sonuçlar verebilir bir stent gibi bir tıbbi cihaz test edilirken daha belirgindir. Bu dolaşım sistemini taklit eden tüm in vitro sistemlerin önemli bir dezavantajı olarak ilan eder. Bu nedenle, bu sorunu aşmak için, tamamen endotel ile kaplı yeni mikroakışkan sistemler büyük ilgi kazanıyor, ama yine de burada sunulan döngü modeli ile karşılaştırıldığında, hala daha küçük kan hacimleri ve minimum akış oranları karşılamak için sınırlıdır38,39
Böylece, Chandler Loop modeli kardiyovasküler araştırma alanında vasküler tıbbi cihazların kan biyouyumluluğu üzerinde standart testler yapmak için sağlam bir model olmaya devam ettiği sonucuna varıyoruz.

Tıbbi cihazların hemokomupati testi, ekstrakorporeal membran oksijenasyonu için vasküler stent ler veya perfüzyon tüpleri gibi yeni cihazların geliştirilmesinde önemli bir adımdır. Bugüne kadar, hayvan modelleri insanlarda uygulanmadan önce tıbbi cihazların test prosedürü sonuçlandırmak için standart araçlar olarak kabul edilir. Bundan böyle, hayvanlar üzerinde yapılan araştırmaların en aza indirilmesine yardımcı olacak alternatif in vitro modelleri bulmak gerekmektedir. Bu çalışmada, bu nedenle, bir minyatür in vitro hemodinamik döngü modeli araştırdık. Sunulan bu yöntemin amacı, tıbbi cihazların in vitro kan uyumluluğunu ISO 10993-4 standardına uygun olarak test etmektir.
ISO 10993-4 standardı, kan örneğinde araştırılacak standart klinik parametreler kümelerini tanımlar1. Kısaca tromboz (trombosit agregasyonu ve sayısı), koagülasyon (fibrinopeptid A, FPA), hematolojik analiz (tam kan hücre sayımı), hemoliz indeksi (serbest plazma hemoglobin) ve kompleman sistemi (terminal kompleman kompleksi, sC5b9). Ancak, nötrofil polimorfonükleer elastaz (PMN), interlökin 6 (IL-6) ve tümör nekroz faktörü - lökositlerin aktivasyon durumunu yansıtan alfa (TNF) gibi ek belirteçler de ölçümler için hesaplanabilir. Belirlemek ve kan plazmasında mevcut dolaşan hücre serbest proteinleri ölçmek için, sandviç enzimatik bağlı immünosorbent tahsiyon (ELISA) geleneksel ve en güvenilir yöntem2temsil ,3. Aynı şekilde, konak hücrelerin fenotip ve aktivasyon durumu (örneğin, lökositler) akış sitometri (FACS) tarafından moleküllerin hücre yüzey ekspresyonunu tespit ederek ölçülebilir tek hücre süspansiyon tabanlı okumalar sağlar, floresan etiketli belirli antikorlar hedeflenen hücre yüzey molekülleri bağlı4. IsO 10993-4 standart1ile test edilen malzemede trombüs oluşumunu belirlemek için taramalı elektron mikroskobu (SEM) de önerilir. Bu yöntem X-ışını mikrotomografisi (μCT) ile tamamlanabilir, trombüs örneğin, kalınlığı, boyutu ve lokalizasyonu için yapısal analiz yapmak için 3D render görüntü5.
Bu in vitro hemodinamik modeli kullanmanın ardındaki mantık, primer hemostaz veya lökositler ile ilgili trombositler ve farklı vasküler cihazlarla etkileşimi olan trombositler gibi kan bileşenlerinin temel fizyolojik dinamiklerini anlayarak en iyi performans gösteren ve uyumlu tıbbi cihazları taramaktır. Bu tür in vitro sistemleri hayvan çalışmaları için ihtiyacı azaltmak gibi son derece talep edilmektedir.
Burada sunulan döngü modeli bu talepleri karşılar. Bu model ilk olarak 1958 yılında A.B. Chandler tarafından kan trombüsünün üretimi için tanımlanmıştır ve bu nedenle Chandler Loop modeli6olarak da adlandırılır. Şimdiye kadar, bu model tıbbi cihazların kan biyouyumluluğunu araştırmak için deneyler ve değişiklikler bir dizi kullanılmıştır7,8,9,10,11,12,13,14. Kısmen kanla doldurulmuş ve yeniden tıkalı döngülere dönüşen polimer tüplerden oluşur. Bu döngüler, hemorheolojik etkileri ile vasküler akış koşullarını simüle etmek için sıcaklık kontrollü bir su banyosunda döner. Pompa tahrikli modeller veya polimer tüpler içinde bir kan akışını neden döngüler içinde mekanik bilyalı vanalar kullanan modeller gibi alternatif yöntemler zaten tarif edilmiştir15,16. Ancak, burada sunulan yöntemin genel avantajı, kan hücreleri ve proteinlere uygulanan mekanik kuvvetin düşük olması, hemolizden kaçınılması ve kan ve konektörler arasında herhangi bir temas olmamasıdır, bu da muhtemelen akış türbülanslarına ve kan bileşenlerinin aktivasyonuna yol açabilir. Döngü içindeki ana aktive edici faktörler test materyalinin kendisi ve içinde sıkışıp kalan havadır. Bu ölçüm hata kaynaklarını en aza indirmek ve yüksek tekrarlanabilirlik sunmak için yardımcı olur, kan-hava arayüzü protein denatürasyonu yol açabilir bile17. Uzunluk veya boyut kısıtlaması olmaksızın tüp malzeme çeşitlerinin ve stent çaplarının araştırılması da mümkündür. Ayrıca, yanlış döngü kapatma ve kaplamasız tüp yüzeyine maruz kalma konak hemouyumlulukları araştırmak da mümkündür. Bu in vitro hemodinamik döngü modelinin diğer benzer tıbbi uygulamalar da immünoterapötikler arasındaki etkileşimleri incelemek için kullanılabilir olmasıdır (ilaçlar) ve kan bileşenleri ilk-in-man faz I klinik deneme öncesinde ya preklinik gelişim veya bireysel ilaç güvenliği taraması sırasında, ya da daha fazla deney de kullanılabilir trombüs malzeme üretimi için18,19,20.
Bu çalışmada perfüzyon tüpleri ve / veya stent hemouyumlulukları test etmek için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır. Burada, kaplamasız ve kaplamalı PVC tüpler (hepPVC: heparin kaplama, poliPVC: biyoaktif polimer ile kaplama) arasındaki karşılaştırma. Trombositlerin indirilmiş aktivasyonu, ancak pıhtılaşma sisteminin daha yüksek aktivasyonu (FPA) kaplamasız tüplere kıyasla her iki kaplamalı tüp için de bulunmuştur. Burada kullanılan hepPVC tüpler kovalent bağlı heparin ile trombodirençli21 yapmak için modifiye edilir ve zaten optimize etmek ve farklı parametreleri karakterize etmek için bir döngü modeli nde istihdam edilmiştir22. Bu çalışmada kullanılan poliPVC tüpler, ekstrakorporeal kan perfüzyonunun klinik ortamlarında kullanılan ticari olarak mevcut tüplerdir ve trombojenitelerini azaltmak için heparin polimer ile kaplanır23. Bazen klinik uygulamalarda kaplamasız PVC tüpler bile kullanılır. Bu nedenle trombositlerin aşırı aktivasyonu, pıhtılaşma sistemi ve IL-6, TNF ve PMN elastaz gibi çözünür faktörleri gösteren pozitif kontrol grubu olarak lateks tüpleri dahil ettik. Yanlış döngü kapatma simüle edildiğinde trombüs oluşumu fark edildi. Bu da koagülasyon ve kompleman sisteminin aktivasyonunun yanı sıra taban koşulları ile karşılaştırıldığında lökosit ve trombositlerin aktivasyonuna yol açmıştır. Ayrıca, burada kullanılan stent malzemeye kan teması (çıplak metal nitinol stent, karbon emdirilmiş genişletilmiş politetetrafloroetilen ile kaplı) PMN elastaz açısından daha yüksek trombosit ve lökosit aktivasyonuna yol açtı. Genel olarak, sunulan model, kırmızı kan hücresi (RBC) hemolizi bariz olduğu lateks tüpleri dışında, bazal veya statik koşullarla karşılaştırılabilir olarak test edilen vasküler cihazların hiçbirinde hemolizi neden olmadı. Ayrıca bu perfüzyon tüpleri görüntüleme veya histoloji ile incelenebilir. Histolojik değerlendirmeler mümkün olsa da, daha çok elisa ve akış sitometrisi üzerinde yoğunlaştık ve böylece birçok laboratuvar için burada sunulan modele dayalı deneylerin yürütülmesinin fizibilitelerini sağladık. Bu yöntem, vasküler tıbbi cihazların kan biyouyumluluğunu ISO 10993-4 standardının önerileri doğrultusunda test etmek için uygulanabilir bir yöntemi temsil eder. Ayrıca, bu yöntem kan ve malzemeler arasındaki etkileşim akış koşulları altında test edilmelidir zaman kullanılabilir, in vivo koşulları taklit.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 ml tube, K3 EDTA</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>32332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Ig, &#954;/Negative Control Compensation Particles Set</td>
			<td>Becton Dickinson BioSciences</td>
			<td>552843</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD45 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>368512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSR Fortessa II cell analyzer</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>647465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer Citrate Tubes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>369714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer one-use holder</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>364815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer Safety-Lok butterfly canula 21 G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaker glass ROTILABO short 10 ml</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>X686.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaker glass ROTILABO short 50 ml</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>X688.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 421 anti-human CD162 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>328808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 421 anti-human CD41 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>303730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge ROTINA 420 | 420 R</td>
			<td>Hettich Zentrifugen</td>
			<td>4701 | 4706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 50 ml</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHC Super modified, 5mm PVC tubing</td>
			<td>Corline Sweden</td>
			<td>1807-148</td>
			<td>Referred to as hepPVC tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular Precision Cutter</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 007-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Closing Unit (complete with tension bands)</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 008-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric tape Scotch Super 33+</td>
			<td>VWR</td>
			<td>MMMA331933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA MAX Deluxe Set Human IL-6</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>430504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA MAX Deluxe Set Human TNF-a</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>430204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 0,1 &#8211; 2,5 &#181;L, gray</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 0,5 &#8211; 10 &#181;L, gray</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 10 &#8211; 100 &#181;L, yellow</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 100 &#8211; 1,000 &#181;L, blue</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 20 &#8211; 200 &#181;L, yellow</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. sample bag, 0,5 &#8211; 5 mL, violet</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>3123000071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>03690-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes polystyrene 5.0 ml round bottom</td>
			<td>Corning BV</td>
			<td>352052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum Gold Plus</td>
			<td>Bio-Sell</td>
			<td>FBS.GP.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD14 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>367116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluency plus stent 13.5 x 60 mm</td>
			<td>Angiomed GmbH &#38; Co</td>
			<td>FVM14060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Free Hemoglobin fHb Reagent</td>
			<td>Bioanalytics GmbH</td>
			<td>004001-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco PBS Tablets</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>18912014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves Vasco Nitril white L</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td>9208437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves Vasco Nitril white M</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td>9208429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 25% aequous solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G6257-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin, 25.000 IE in 5 ml</td>
			<td>Rotexmedica, Trittau, Germany</td>
			<td>PZN 3862340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Fibrinopeptide A (FPA) ELISA Kit</td>
			<td>H&#246;lzel Diagnostika</td>
			<td>abx253234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kodan tincture forte colourless</td>
			<td>Sch&#252;lke &#38; Mayr GmbH</td>
			<td>104012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex tube, ID 5 mm</td>
			<td>Laborhandel24 GmbH</td>
			<td>305 0507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loop Stand</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 009-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medimex venous tourniquet classic</td>
			<td>ROESER Medical GmbH</td>
			<td>310005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader Infinite 200 Pro M Plex</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>TEC006418I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate shaker PMS-1000i</td>
			<td>VWR</td>
			<td>444-0041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Metric non-phthalate PVC tubing, ID 5 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>NALG8703-0508</td>
			<td>Referred to as PVC tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NexTemp (Standard) Single-Use Clinical Thermometer</td>
			<td>Medical Indicators</td>
			<td>2112-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MaxiSorp ELISA Plates, uncoated</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>423501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10256970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde Solution, 4% in PBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AAJ19943K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD16Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>302008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD62P (P-Selectin) Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette controller, pipetus</td>
			<td>VWR</td>
			<td>612-1874</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips epT.I.P.S. 0.2 - 5 ml</td>
			<td>OMNILAB-LABORZENTRUM GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>5186480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips epT.I.P.S. standard 0,1 - 10&#181;l</td>
			<td>Th. Geyer GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>9409410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips epT.I.P.S. standard 2 - 200&#181;l</td>
			<td>Th. Geyer GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>0030 000.870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips epT.I.P.S. standard 50 - 1000&#181;l blue</td>
			<td>Th. Geyer GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>0030 000.919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMN (Neutrophil) Elastase Human ELISA Kit</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BMS269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Probe stand ROTILABO combi</td>
			<td>CARL ROTH</td>
			<td>K082.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack for rotation unit (12 slots 3/8 &#39;&#39; with variable slot width)</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 011-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer (10X)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>420301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent reservoirs</td>
			<td>VWR</td>
			<td>613-1184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotation Unit</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 010-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe-Lock micro test tubes 0.5 ml</td>
			<td>OMNILAB-LABORZENTRUM GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>5409320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe-Lock micro test tubes 1.5 ml</td>
			<td>OMNILAB-LABORZENTRUM GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>5409331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sc5b9 Human ELISA KIT</td>
			<td>TECOmedicalGroup</td>
			<td>A029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel no 10</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9999403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning electron microscope XL30 ESEM-FEG</td>
			<td>Philips</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw top bottle ROTILABO Clear glass, 1000 ml, GL 45</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>X715.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw top bottle ROTILABO Clear glass, 500 ml, GL 45</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>X714.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-micro cuvette 1.6 ml</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>67.746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette 10.0 ml</td>
			<td>Corning BV</td>
			<td>4488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 25.0 ml</td>
			<td>Corning BV</td>
			<td>4489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette, 5.0 ml</td>
			<td>Corning BV</td>
			<td>4487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon tube, inner diameter 8 mm, outer diameter 12 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BURK8803-0812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprout mini centrifuge</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>552034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stop Solution for TMB Substrate</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>77316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swabs, sterile</td>
			<td>Fuhrmann GmbH</td>
			<td>32055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 ml</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>300296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature controlled water basin</td>
			<td>ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany</td>
			<td>CLS 020-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tert-Butanol, 99.5%, extra pure, ACROS Organics</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10000730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB Substrate Set</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>421101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trillium PVC tube, 5 mm ID</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>161100107100103</td>
			<td>Referred to as polyPVC tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A4974,0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-Vis Spektrometer Lambda 2</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>33539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vornado Mini Vortexer</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>55BV101-B-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XN-3000 workstation blood analyzer</td>
			<td>Sysmex Europe</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;-CT Phoenix Nanotom S</td>
			<td>GE Sensing &#38; Inspection, Wunstorf, Germany</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro hemodynamic loop model to investigate the hemocytocompatibility and host cell activation of vascular medical devices

Bu çalışmada, polivinil klorürden (PVC) yapılmış ve farklı biyoaktif konjugatlarla kaplanmış 5 mm'lik iç çapı olan tüplerin hemouyumluluğu, pvc tüplerin içine yerleştirilen intravasküler uygulama için kaplamasız PVC tüpler, lateks tüpler ve bir stent ile karşılaştırıldı. Hemokompatiyonisin değerlendirilmesi ISO standardı 10993-4 tarafından önerilen in vitro hemodinamik döngü modeli kullanılarak yapıldı. Tüpler aynı uzunlukta parçalar halinde kesilmiş ve splice herhangi bir boşluk kaçınarak döngüler oluşturmak için kapalı, daha sonra insan kanı ile doldurulmuş ve 37 °C'de bir su banyosunda 3 saat döndürülür. Daha sonra tüplerin içindeki kan tam kan hücre sayımı, hemoliz (serbest plazma hemoglobini), kompleman sistemi (sC5b-9), koagülasyon sistemi (fibrinopeptid A) ve lökosit aktivasyonu (polimorfonükleer elastaz, tümör nekroz faktörü ve interlökin-6) analizi için toplandı. Trombosit aktivasyonu, lökosit integrin durumu ve akış sitometrisi kullanılarak monosit trombosit agregaları için konak hücre aktivasyonu belirlendi. Yanlış döngü kapanmasının etkisi x-ışını mikrotomografisi ve taramalı elektron mikroskobu ile incelendi, bu da splice'de trombüs oluşumunu gösterdi. Lateks tüpleri, hem plazma hem de hücresel kan bileşenlerinin en güçlü aktivasyonunu gösterdi, bu da kötü bir hemokomuuyumolduğunu gösteriyor, bunu stent grubu ve kaplamasız PVC tüpler izledi. Kaplamalı PVC tüpler trombosit aktivasyon durumunda önemli bir azalma göstermedi, ancak kaplamasız PVC tüplere göre kompleman ve pıhtılaşma basamaklarında artış gösterdi. Döngü modelinin kendisi hücrelerin aktivasyonuna veya çözünen faktörlere yol açmadı ve hemoliz düzeyi düşüktü. Bu nedenle, sunulan in vitro hemodinamik döngü modeli mekanik kuvvetler tarafından kan bileşenlerinin aşırı aktivasyon unu önler ve donör kan ve vasküler tıbbi cihazlar arasındaki in vitro etkileşimleri araştırmak için bir yöntem olarak hizmet vermektedir.

FACS çizimleri dışında sunulan tüm veriler bir istatistik yazılımı ile analiz edildi. FACS çizimleri akış sitometri yazılımı kullanılarak analiz edildi.
Tam kan hücre sayımı analizi, test edilen tüm koşullar arasında eritrositler açısından anlamlı bir farklılık göstermedi(Şekil 2). Ancak, trombositler ve lökositler lateks grubunda büyük ölçüde azaltıldı, lateks çok kötü bir biyouyumluluk gösteren. Bu durum lateks grubunda serbest hemoglobin düzeylerinin artmasıyla daha da vurgulanır ve lateks grubu dışında diğer vasküler cihazların veya koşulların hiçbirinin geniş hemolize yol açamamaz(Şekil 2). Ayrıca, kaplamalı PVC tüpler, polyPVC ve hepPVC, test edilen stent trombosit ve lökosit kaybı ile tromboza yol açmazken, lateks en yüksek trombosit ve lökosit kaybını sergilerken, bunu azalmış bir eğilim gösteren kaplamasız PVC tüpler izledi.
Tüm test edilen vasküler cihazlar pıhtılaşma sistemi (FPA) ve kompleman bileşeninin (sC5b-9) aktivasyonunun artmasına yol açsa da, hepPVC döngüleri özellikle poliPVC döngülere kıyasla FPA ve sC5b-9 seviyelerinde azalma eğilimi sergilemiştir(Şekil 3). İlginçtir, kaplamasız PVC ve Gap döngüleri, istatistiksel anlamlılık düzeyine ulaşmasa da, polyPVC'ye göre daha düşük FPA seviyeleri gösterdi. Bununla birlikte, lateks döngüler taban çizgisi ve statik koşullara kıyasla FPA düzeylerinde önemli ölçüde artış sergiledi.
Tüm kan hücresi sayımlarına uygun olarak, lateks döngüleri tnf, IL-6 ve PMN elastaz(Şekil 4)en yüksek düzeyde sergilenen, TNF ve IL-6(Şekil 4A,B)açısından grupların geri kalanı ile karşılaştırıldığında istatistiksel anlamlılık düzeyine ulaşan , PMN elastaz açısından statik ve temel koşullara ise (Şekil 4C). Bu sonuçlar lökositlerin lateks ile güçlü aktivasyonunu göstermektedir. Aktivasyon belirteçlerinin temel düzeyleri her zaman statik koşullarla karşılaştırılabilir, kan uygun bir heparinizasyon gösteren.
İlginçtir ki, gap kaynaklı döngüler için trombosit ve lökosit sayılarının koagülatör sistemi (FPA) ve lökositlerin (PMN elastaz) orta düzeyde aktivasyonu ile azaldığı gösterilmiştir, ancak ortaya çıkan akış türbülansları ve kan teması yla yanlış döngü kapanması, kaplamasız, pürüzlü kesme yüzeyine konik olarak görünür pıhtılaşmasına yol açmıştır (Şekil 1F). Pıhtılar ve tüm birleştirme yüzeyi üzerindeki dağılımı μCT ve SEM görüntüleri ile belirginken, döngüler dış kapatma cihazı ile kapatıldığında pıhtı bulunamadı ve döngü uçları arasında boşluk kalmamıştır(Şekil 5).
Trombosit spesifik belirteçleri, CD41 ve trombosit aktivasyon markerı CD62P ile boyanmış konak kan hücrelerinin akış sitometrik analizi Şekil 6A,B'degösterilmiştir. Burada, kan trombositlerinde CD62P için son derece yüksek ortanca floresan yoğunluğu (MFI) sergilenen lateks tüpleri, stent takip ederken, heparin kaplı poliPVC tüpler poliPVC tüplerin anti-trombojenik özelliğini gösteren trombositlerin minimal aktivasyonunu sergilemiştir. Ayrıca lökositler CD45 ve SSC (yan dağılım) esaslı granülerite (i) granülositlere göre sınıflandırıldı; (ii) monositler ve (iii) lenfositler (Şekil 7), ve CD162+ integrin ekspresyonu trombositler üzerinde CD62P ile etkileşime girdiği bilinen lökositlerin her bir alt popülasyonunda tespit edildi24. Bu integrin ifadeleri büyük ölçüde granülositler ve lenfositler lateks döngüler azalmıştır fark edildi. Bu sonuç lateks döngülerindeki lökositlerin toplam frekanslarının düşük seviyeleri ile uyumluydu(Şekil 2). Genel olarak granülositler ve lenfositlere göre monositler arasında integrin düzeyleri daha yüksekti, bu da aktive trombositlerle monosit etkileşiminin olasılığını gösteriyordu. Bu bağlamda, monosit trombosit agregaları da CD14 (monosit marker olarak) ve CD41 (trombosit marker olarak) ile kan hücreleri boyama ve sonuçta çift pozitif hücreleri yani CD14+CD41+MPA (Şekil 8) olarak değerlendirildi. Burada, stent grubunun MPA'da en yüksek CD41 ifadesini sergilediğini, bunu lateks grubunun izlediğini ve monosit sıklığının azalmasına rağmen MPA'yı oluşturma eğiliminin arttığını gösterdiğini fark ettik (<1 %) lateks döngüleri içinde.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61570/61570fig01.jpg"> Şekil 1: In vitro hemodinamik döngü modeline ve modifikasyonlarına genel bakış. (A) Dış döngü kapatma sistemi ile boşluk deneyi için döngü, splice hiçbir boşluk bırakarak. (B) PoliPVC kaplı PVC tüp ve stent içinde (ok) yapılmış döngü. (C) Lateks tüpten oluşan döngü. (D) Dış döngü kapatma sistemi tüp uçları (ok) arasında bir boşluk bırakarak olmadan boşluk deneyi için döngü. (E) Su banyosunun içindeki döngü beşiğine yerleştirilen ve kanla doldurulmuş döngüler. (F) Trombüs, döndürmeden sonra splice (ok) boşluğuna neden olur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61570/61570fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61570/61570fig02.jpg"> Şekil 2: Kan hücre sayımı ve plazma hemoglobin sonuçları. (A) Eritrositsayısı. (B) Trombosit sayısı. (F) Lökosit sayısı. (D) Serbest plazma hemoglobin. Sonuçlar lateksin yetersiz biyouyumluluğunu gösteriyor, aşırı hemolise yol açıyor. Veriler ortalama değer olarak sunulur; hata çubukları SEM. n=1'i gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61570/61570fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61570/61570fig03.jpg"> Şekil 3: Pıhtılaşma ve kompleman sisteminin aktivasyonu için sonuçlar. (A) Koagülasyon sistemi aktivasyonu, Fibrinopeptid A (FPA) (B) Kompleman sistemi aktivasyonu düzeyleri ile ölçülen, sC5b-9 düzeyleri ile ölçülür. Lateks tüplerfpa önemli yüksek seviyelerde uyarılmış iken, kompleman aktivasyonu tüm test malzemeler için güçlüydü. Veriler ortalama değer olarak sunulur, hata çubukları SEM. *p<0.05, n=1'i gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61570/61570fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61570/61570fig04.jpg"> Şekil 4: Lökosit aktivasyon belirteçleri. (A) Tümör nekroz faktör alfa (TNF). (B) Interlökin 6 (IL-6) (C) PMN Elastaz. Sonuçlar, analiz edilen belirteçlerin yüksek düzeyleri nedeniyle lökositlerin aktivasyonunun arttığını, bunu stent döngülerinin izlediğini ve bunun sadece PMN Elastaz için artışa yol açtığını, ancak TNF veya IL-6'nın değil. Veriler ortalama değer olarak sunulur, hata çubukları SEM. *p<0.5; **p<0.01, n=1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61570/61570fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61570/61570fig05.jpg"> Şekil 5: Döngülerin birleştirilmesi. (A) μ bilgisayarlı tomografi (μCT) yanlış kapanış (boşluk) ile döngüler. Kırmızı alanlar trombüs materyalini gösteriyor. (B) Tüpün luminal tarafının işlenmesi. Dikdörtgen seçim tarama elektron mikroskopisi (SEM)(C)için alanı gösterir. (D) harici döngü kapatma cihazı ile döngülerin ct ve splice hiçbir boşluk ve (E) render ve luminal yüzey görünümü. Trombüs malzemesi bulunamadı. (F) (E) dikdörtgen seçimSEM görüntü . Kesme yüzeyinde trombüs malzemesi bulunamadı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61570/61570fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61570/61570fig06.jpg"> Şekil 6: Trombosit aktivasyonu için FACS çizimi (CD62P). (A) Temsili FACS arsa (temel durum) kan CD41+ trombosit gösteren. (B) Statik RT ve taban çizgisi koşullarına göre farklı vasküler cihazların ortalama floresan yoğunluğu (MFI) tarafından yansıtılan trombosit aktivasyon durumunu gösteren grafik. Veri çubukları tek ölçümlerden elde edilen verileri sunar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61570/61570fig06large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61570/61570fig07.jpg"> Şekil 7: Lökosit integrin (CD162) için FACS çizimi. (A) Temsili FACS çizimi (temel durum) kan CD45+ lökosit ve alt grupları gösteren(B) Lökosit CD162+ integrin ortalama floresan yoğunluğunu gösteren grafik (MFI) statik ve temel koşullara göre vasküler cihazların farklı türleri. Veri çubukları tek ölçümlerden elde edilen verileri sunar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61570/61570fig07large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61570/61570fig08.jpg"> Şekil 8: Trombosit monosit agregaları için FACS çizimi (CD41/CD14). (A) Temsili FACS arsa (temel durum) kan monositler için gating gösteren (CD45+/ CD14+), trombosit (CD41+) ve monosit trombosit agregalar (CD41+/CD14+) (B) Grafik CD41 gösteren+ ortalama floresan yoğunluğu (MFI) çeşitli vasküler cihazlar için monosit trombosit agregalar statik ve taban koşulları ile karşılaştırıldığında. Veri çubukları tek ölçümlerden elde edilen verileri sunar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61570/61570fig08large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Hemodynamic Loop Model to Investigate the Hemocytocompatibility and Host Cell Activation of Vascular Medical Devices at JoVE.com

An In Vitro Hemodynamic Loop Model to Investigate the Hemocytocompatibility and Host Cell Activation of Vascular Medical Devices

Burada sunulan bir standart in vitro hemodinamik döngü modeli için bir protokoldür. Bu model perfüzyon tüpleri veya vasküler stentlerin hemouyumluluğunun ISO (International Organization for Standardization) standardı 10993-4'e uygun olarak test edilmesine olanak sağlar.

Vasküler Tıbbi Cihazların Hemositokomisyonla uyumluluğunu ve Konak Hücre Aktivasyonunu Araştırmak için Bir In Vitro Hemodinamik Döngü Modeli

In this study, the hemocompatibility of tubes with an inner diameter of 5 mm made of polyvinyl chloride (PVC) and coated with different bioactive ...

Bu hemodinamik döngü modeli araştırmacılar perfüzyon tüpleri veya stent gibi vasküler cihazların in-vitro hemo uyumluluğunu test etmek için izin verir. standart koşullar altında. Yani bu teknik mekanik kuvvet ile kan üzerinde herhangi bir etki yapmaz ve böylece kan bileşenlerinin içsel aktivasyonu ile yanıltıcı sonuçlar önlemek.Bir deney denemeden önce, uygun mekanik parça montajı, mükemmel döngü kapatma sistemi yapımı ve döngülere yavaş kan yüklemeuygulanmalıdır. Döngü tertibatını hazırlamak için, düz bir yüzeyüzerinde 250 santimetre uzunluğunda, beş milimetrelik iç çaplı boru parçalarını kesmek için bir tüp kesici kullanın. Ve tüplerin açık sonları silikon tüp kısa bir parça içine bir döngü şekli oluşturmak için araştırmacı tüp dış çapı uygun takın.Gerilim bandı konektörünün kilitleme vidasını dikkatlice sıkın ve iki bükme arasında boşluk kalmayacak şekilde kapanış kuvvetini ayarlayın. Kilitleme vidası tamamen sıkılırsa ve polikarbonat bandının gerilimi iki bükme arasındaki boşluğu kapatamayacak kadar düşük görünüyorsa, kilitleme sistemini açın ve gerilim bandının birkaç milimetresini kesin. Bir stent halkası montajı hazırlamak için, döngülerden ikisini açın ve tüpü gerilim bandı sisteminden alın.Daha sonra üretici tarafından talimat olarak tüpün ortasına stent takın. Deney için uygun sayıda döngü oluşturulduğunda, dönüş ünitesinin döngü beşiğindeki döngüleri 37 derecelik su banyosunun dışında sabitleyin ve döngü beşiğini su banyosunun içindeki dönüş ünitesine takın. Daha sonra, 150 mikrolitre veya taze hazırlanmış heparin stok çözeltisi ile toplanacak kan her iki döngü için bir 10 mililitreşşü doldurun ve şırıngaiçine yavaşça kan toplamak için 21 gauge kelebek kullanın, aşırı vakum nedeniyle homolysis veya hücre aktivasyonu önlemek için özen.Tüm kan toplandığında kanı cam bir kabına aktarın ve kanı ve heparini hafifçe karıştırmak için beş mililitrelik serolojik pipet kullanın. Pipet ucu tam olarak tüpe takılmamış bir homojen çözelti elde edildiğinde, her döngüyü beş mililitre kanla doldurun. Her döngü doldurulduktan sonra kapatın ve döngü, gerilim bandı ve rafın düzgün şekilde sabitlendiğini onaylayın.Sonra dakikada 30 devrimler üç saat döngüleri döndürün. Döndürmenin sonunda, konektörleri dikkatlice açmadan ve kopyalardan kanı tek tek 10 mililitrelik cam gagalara çekmeden önce, döngülerin iki dakika rafta durmasına izin verin. Tüm kan toplandığında her tüpü 10 mililitre PBS ile durulayın ve her tüpün ucundan bir santimetrelik bir örneği dikkatlice kesmek için neşter kullanın.Örnekleri bir gecede %2 glutaraldehit ile dört santigrat derecede kuluçkaya yatırın, ardından oda sıcaklığında 15 dakikalık kuluçka ve %1 osmiyum tetroksit. Osmiyum tetroksit inkübatasyonunun sonunda, artan etanol serisindeki numuneleri konsantrasyon başına 20 dakika dehidratasyon, ardından %100 etanolte 30 dakikalık bir dehidratasyon. %100 etanol inkübatasyonunun sonunda, numuneleri bir x-ışını mikro CT tarayıcısı kullanarak beş kilovoltluk bir ivme geriliminde elektron mikroskobu tarayarak görüntülemeden önce oda sıcaklığında bir gecede kurutun.Kan örneklerinin akış sitometrik analizi için. Her numuneden 100 mikrolitre kan dokuz beş mililitreLIK FACS tüplerinin her birine aktarın ve numuneleri, ışıktan korunan oda sıcaklığında 15 dakika boyunca tüp başına %4 güç formaldehitinin 100 mikrolitresini ilave edin. Yıkadıktan sonra, her peleti bir mililitre likit kırmızı kan hücresi lisis tamponu ile tekrar askıya alın, oda sıcaklığında ışıktan korunan beş dakikalık bir kuluçka için.Kuluçka sonunda, numuneleri tüp başına bir mililitre PBS'de santrifüj le yıkayın ve numuneleri süpernatants olmadan buza yerleştirin. Tek leke kompanzasyon boncuk hazırlamak için FACS tampon bireysel bir mililitre hacimleri için pozitif ve negatif boncuk dört damla dört damla ekleyin ve homojen boncuk süspansiyonlar elde etmek için çözümler girdap. Belirtildiği gibi etiketlenmiş dört veya beş mililitreLIK FACS tüplerin her birine her çözeltiden 100 mikrolitre ekleyin ve boncukları tüp başına bir mililitre FACS tamponuyla yıkayın.Sonraki nazik karıştırma ile her deneysel ve floresan eksi bir tüp için uygun girdap antikor kokteyl 100 mikrolitre ekleyin. Oda sıcaklığında 30 dakikalık bir kuluçka için, ışıktan korunur. Kuluçka sonunda, numune başına bir mililitre taze FACS tamponu ile numuneleri yıkayın ve tüp başına 250 mikrolitre FACS tamponunda peletleri yeniden askıya alın.Standart protokollere göre, hücre örneklerindeki boncukları akış sitometrisi ile analiz etmeden önce. Kan hücresi dağılımları mikro BT ve taramaelektron mikroskop görüntüleme spliced iki bloops tüm yüzeyi üzerinde görselleştirilebilir boşluksuz kapalı döngülerde pıhtı gözlenmez iken. Tüm kan hücresi sayısının analizi, test edilen koşullar arasında eritrosit sayılarında önemli farklılıklar göstermez, trombosit ve lökosit numaraları ancak, lateks döngü grubunda önemli ölçüde azalır ve serbest hemoglobin sayıları önemli ölçüde artar, lateks çok kötü bir biyouyumluluk gösteren.Test edilen tüm vasküler cihazlar pıhtılaşma sistemi ve iltifat bileşeni artan bir aktivasyon neden iken. Heparin kaplı PVC döngüler polimer kaplı, PVC döngüler ile karşılaştırıldığında aktivasyon her iki tip azalmış düzeyleri için bir eğilim sergiler. Lateks döngüleri TNF IL-6 ve PMN elastaz en yüksek düzeyde sergi, lateks tarafından lökositgüçlü aktivasyonu vurgulayarak.Lateks tüplerden elde edilen CD41 pozitif trombositler, CD62P için son derece yüksek bir median floresan yoğunluğu sergilerken, entegre ekspresyon granülositler ve lenfositlerde önemli ölçüde azalır. İlgi, integral düzeyleri lateks tüplerden monositler daha yüksek, monosit aktif trombosit etkileşimleri düşündürmektedir. Gerçekten de monosit trombosit agregaları için boyama lateks ve stent döngülerinde agregasyon eğiliminin arttığını ortaya koymaktadır.Lateks döngüleri içinde monositlerin azaltılmış frekansına rağmen. İçsel kan bileşeni aktivasyonu önlemek için uygun bir döngü kapanmasını sağlamak ve dikkatli kan işlemek için önemlidir. Bu prosedürü takiben, allojenik proteinler veya TIR'lar ve inflamasyon veya farmasötik araştırmalarda kullanılan kan bileşenleri arasındaki etkileşimi analiz etmek mümkündür.

Research

JoVE Journal

Medicine

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Rekabetçi bir mürin Kemik İliği Transplantasyon Modelinde Donör Hücre Aşı belirleme Kantitatif Gerçek-zamanlı PCR kullanarak

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Fare Aortocaval Fistül Teknik Yönleri

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Bir olarak Beyin Microslices arasında excitotoxic uyarılması<em&gt; In vitro</em&gt; İnme Model

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Monitoring of Systemic and Hepatic Hemodynamic Parameters in Mice

Farelerde Sistemik ve Karaciğer Hemodinamik Parametrelerin İzleme

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. ...

Establishment of a Human Multiple Myeloma Xenograft Model in the Chicken to Study Tumor Growth, Invasion and Angiogenesis

Chicken İnsan Multipl Miyelom Xenograftlarında Modeli Kurulması Tümör Büyüme, Invasion ve Anjiogenez Eğitim için

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the ...

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

Yenidoğan Anneden Ayrılma Fare Modelinde perigenital Duyarlılık ve Prostat Mast Hücre aktivasyonu Değerlendirilmesi

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Kol tekniği aort transplantasyonu - eğitici bir Video bir fare Model kullanma

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

An Optimized Evans Blue Protocol to Assess Vascular Leak in the Mouse

En iyi duruma getirilmiş bir Evans mavi Mouse vasküler sızıntı değerlendirmek için iletişim kuralı

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ...

Hemocompatibility Testing of Blood-Contacting Implants in a Flow Loop Model Mimicking Human Blood Flow

İnsan Kan Akışını Taklit Eden Akış Döngüsü Modelinde Kanla Temas Eden İmplantların Hemokomuuyum Testi

The growing use of medical devices (e.g., vascular grafts, stents, and cardiac catheters) for temporary or permanent purposes that remain in the ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Sıçan Karaciğer Nakli Modelinde Hemodinamik Değişiklikleri Simüle Ederek Organ İskemi-Reperfüzyon Yaralanması

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...