Name: acute kidney injury model induced by cisplatin in adult zebrafish
Uploaded: 2021-05-15T13:00:00
Duration: 13 min 25 s
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<p class="jove_content">इस शोध को फंडाकाओ डी एम्पारो à पेस्क्विसा डो एस्टाडो डी साओ पाउलो - एफएपीपी (2015/21644-9; 2017/05264-7 द्वारा समर्थित किया गया था; 2017/05687-5; 2018/20722-4), कॉन्सेल्हो नैसिनल डी डेसेवोल्विमेंटो सिएंटीफिको ई टेकनोलोलोगिको (सीएनपीक्यू) और कोर्डेनाकाओ डी एपेरफेइकोओमेंटो डी पेसोसोल डी एनीवेल सुपीरियर (केप्स), वित्तीय कोड 001। हम साओ पाउलो विश्वविद्यालय के जैव विज्ञान संस्थान में मारिया रीता डॉस सैंटोस ई पासोस-ब्यूनो और जेनेटिक्स और विकासवादी जीव विज्ञान विभाग की जेब्राफिश सुविधा की प्रयोगशाला में अपने सहयोगियों को धन्यवाद देते हैं। हम कृपया पांडुलिपि पर टिप्पणियों और सुझावों के लिए क्रिस्टियान नफाह डी सूजा ब्रेडा और थेरेसा रक़ील डी ओलिविएरा रामल्हो को धन्यवाद देते हैं । हम इस वीडियो की रिकॉर्डिंग, संस्करण और उत्पादन के लिए बायोमेडिकल साइंसेज संस्थान की मल्टीमीडिया टीम से मार्सिओ विल्लर मार्टिंस की बहुत सराहना करते हैं और धन्यवाद देते हैं।</p>

<p class="jove_content">लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।</p>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1x PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Made by diluting 10 X PBS (prepared in lab) in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>31 G 1.0 cc insulin syringe</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>990256</td>
			<td>Needle: BD Precision Glide 300110</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.5 L Fish tank</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td></td>
			<td>Part of the aquactic system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mM Tris/HCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared from solid Tris Base (Promega, H5135), adjusted to pH 7.4-8 with HCl (Merck, 1003171000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Falcon tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-3% Agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16500-500</td>
			<td>Dissolve 2 or 3% agarose (w/v) in 1x PBS, warm until dissolve.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2% FBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12657-09</td>
			<td>Dilute 2% (w/v) directly in 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>Dissolve 4% PFA (w/v) in warm 1x PBS, mix until dissolve in a hot plate in a fume hood. Aliquot and store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50% Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Made by diluting 100% ethanol in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Made by diluting 100% ethanol in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90% Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Made by diluting 100% ethanol in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Ethanol</td>
			<td>Synth</td>
			<td>00A1115.01.BJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Xylene</td>
			<td>Synth</td>
			<td>00X1001.11.BJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 40 &#181;m</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cisplatin</td>
			<td>Blau Farmac&#234;utica</td>
			<td>16020227</td>
			<td>C-PLATIN 1 mg/mL. Store at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cork board sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from local stationary store</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td>Stock solution 20 mg/ml dissolved in water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>4445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology cassette</td>
			<td>Ciencor</td>
			<td>2921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immuno stain chamber</td>
			<td>Ciencor</td>
			<td>EP-51-05022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>NAPCO</td>
			<td>5400</td>
			<td>Set to 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insect pins</td>
			<td>Papillon</td>
			<td></td>
			<td>Model micro15x20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In Situ Cell Death Detection Kit</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>12156792910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal mold</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>3803081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette 200-1000 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>Use 1 mL tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS-222 (Tricaine)</td>
			<td>Fluka Analytical</td>
			<td>A5040-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9%</td>
			<td>Synth</td>
			<td>C1060.01.AG</td>
			<td>Dissolve 0.9% NaCl (w/v) in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nail polish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prefer transparent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer chamber</td>
			<td>Precicolor HGB</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur plastic pipet</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>P31201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>J.ProLab</td>
			<td>0307-1/6</td>
			<td>60 and 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic spoon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from local store</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>P8102</td>
			<td>Diluite from stock 20 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade</td>
			<td>Solidor</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sponge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from local store</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Cromoline</td>
			<td>10621/07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACSCanto II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Stereoscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Zoom.V16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>AxioVert.A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Jung Supercut</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>Ohaus Corporation</td>
			<td>AR2140</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acute kidney injury model induced by cisplatin in adult zebrafish

<p class="jove_content">सिस्प्लैटिन आमतौर पर कीमोथेरेपी के रूप में प्रयोग किया जाता है। हालांकि कैंसर के इलाज वाले व्यक्तियों में इसका सकारात्मक प्रभाव पड़ता है, लेकिन सिस्प्लैटिन अपने कम आणविक वजन के कारण गुर्दे में आसानी से जमा हो सकता है। इस तरह के संचय ट्यूबलर कोशिकाओं की मौत का कारण बनता है और तीव्र गुर्दे की चोट (AKI) के विकास को प्रेरित कर सकता है, जो गुर्दे के कार्य, ऊतक क्षति और प्रतिरक्षा कोशिकाओं की घुसपैठ में त्वरित कमी की विशेषता है। यदि विशिष्ट खुराक में प्रशासित सिस्प्लैटिन पशु मॉडल में एक AKI प्रेरक के रूप में एक उपयोगी उपकरण हो सकता है। ज़ेब्राफ़िश गुर्दे के कार्य, गुर्दे के उत्थान और चोट का अध्ययन करने के लिए एक दिलचस्प मॉडल के रूप में दिखाई दिया है, क्योंकि गुर्दे की संरचनाएं स्तनधारियों के साथ कार्यात्मक समानताओं का संरक्षण करती हैं। सिस्प्लैटिन के साथ इंजेक्शन वयस्क जेब्राफिश से पता चलता है कि 24 घंटे के बाद इंजेक्शन (एचपीआई) के बाद जीवित रहने, गुर्दे की कोशिका मृत्यु और सूजन मार्कर में कमी आई है। इस मॉडल में इम्यून सेल्स घुसपैठ और सेल डेथ का आकलन फ्लो साइटोमेट्री और ट्यूनल परख से किया जा सकता है। यह प्रोटोकॉल इंट्रापेरिटोनियल सिस्प्लैटिन इंजेक्शन द्वारा वयस्क जेब्राफिश में AKI को प्रेरित करने की प्रक्रियाओं का वर्णन करता है और बाद में यह दर्शाता है कि प्रवाह साइटोमेट्री प्रसंस्करण और सेल डेथ ट्यूनल परख के लिए गुर्दे के ऊतकों को कैसे इकट्ठा किया जाए। ये तकनीकें सिस्प्लैटिन के प्रभावों को नेफ्रोटॉक्सिक एजेंट के रूप में समझने के लिए उपयोगी होंगी और वयस्क जेब्राफिश में AKI मॉडल के विस्तार में योगदान देंगी। इस मॉडल का उपयोग गुर्दे के उत्थान का अध्ययन करने के लिए भी किया जा सकता है, उन यौगिकों की तलाश में जो गुर्दे की क्षति का इलाज या रोकथाम करते हैं और AKI में सूजन का अध्ययन करते हैं। इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल में उपयोग किए जाने वाले तरीकों से ऊतक क्षति और सूजन के लक्षण वर्णन में सुधार होगा, जो गुर्दे से जुड़े comorbidities में चिकित्सीय लक्ष्य हैं। </p>

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Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

<p class="jove_content">यह प्रोटोकॉल वयस्क जेब्राफिश में एक्यूट किडनी इंजरी (AKI) को नेफ्रोटॉक्सिक एजेंट के रूप में सिस्प्लैटिन का उपयोग करके प्रेरित करने की प्रक्रियाओं का वर्णन करता है। हमने तकनीक की प्रजनन क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए कदम और गुर्दे के ऊतकों में सूजन और सेल मृत्यु का विश्लेषण करने के लिए दो तकनीकों को विस्तृत किया, प्रवाह साइटोमेट्री और ट्यूनल, क्रमशः।</p>

वयस्क जेब्राफिश में सिस्प्लैटिन द्वारा प्रेरित एक्यूट किडनी इंजरी मॉडल

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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