Name: electrocardiogram recordings in anesthetized mice using lead ii
Uploaded: 2020-06-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electrocardiogram Recordings in Anesthetized Mice using Lead II at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por los Programas de Investigación Científica Básica que son administrados por la National Research Foundation of Korea (NRF) (2015R1C1A2A01052419 y 2018R1D1A1B07042484).

Todos los procedimientos con animales fueron aprobados por el comité local para el cuidado y uso de animales de laboratorio, Universidad Kyung Hee (número de licencia: KHUASP(SE)-18-108) y se ajustaron a la Guía de los Institutos Nacionales de Salud de los Estados Unidos para el cuidado y uso de animales de laboratorio.
1. Animales experimentales
<ol><li>Mantener todos los ratones (39 ratones, Balb/c, machos, 7-u20129 semanas de edad) en una instalación libre de patógenos según la guí...

<ol>
	<li>Ho, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+rate+and+electrocardiography+monitoring+in+mice.">Heart rate and electrocardiography monitoring in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 1, 123-139 (2011).</li><li>Vatner, S. F., Takagi, G., Asai, K., Shannon, R. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoproterenol+exacerbates+a+long+qt+phenotype+in+kcnq1-deficient+neonatal+mice:+Possible+roles+for+human-like+kcnq1+isoform+1+and+slow+delayed+rectifier+k++current.">Isoproterenol exacerbates a long qt phenotype in kcnq1-deficient neonatal mice: Possible roles for human-like kcnq1 isoform 1 and slow delayed rectifier k+ current.</a> The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 310 (1), 311-318 (2004).</li></ol>

Hay varios pasos críticos en el protocolo. El entorno circundante debe estar libre de ruido y vibraciones. Los electrodos ECG deben insertarse debajo de la piel de forma estable y consistente de los cuales el paso de inserción requiere experimentos preliminares hasta que el investigador tenga experiencia técnicamente. Además, el anestésico debe prepararse y almacenarse adecuadamente y utilizarse a la dosis adecuada. Por último, las ondas PQRS deben ubicarse adecuadamente en latidos de ECG individuales en la ventana...

El electrocardiograma (ECG), una prueba que mide la actividad eléctrica de los latidos del corazón, es una herramienta valiosa para evaluar el sistema de conducción cardíaca. Los parámetros medidos por un ECG incluyen frecuencia cardíaca, intervalo PR, duración QRS e intervalo QT. En resumen, el intervalo PR corresponde al tiempo necesario para que un impulso eléctrico viaje desde el nodo del seno auricular a través del nodo auriculoventricular hasta las fibras de Purkinje; La duración de QRS es el tiempo para que la despolarización ventricular se produzca a través del sistema Purkinje y el miocardio ventricular; y el intervalo QT es la duración de la repolarización ventricular.
Las grabaciones de ECG en ratones han ayudado a los investigadores a examinar la función cardíaca y determinar los mecanismos fisiológicos y fisiopatológicos de los fenotipos cardíacos, como la arritmia, la fibrilación auricular y la insuficiencia cardíaca. La mayoría de las investigaciones cardiovasculares han implicado estudios en modelos de ratón genéticamente diseñados. A menudo es difícil obtener datos significativos sobre las grabaciones de ECG de ratones pequeños que han sido manipulados genéticamente.
Existen varios métodos para realizar ECG en ratones1. Los estudios sugieren que las grabaciones de ECG en animales conscientes son preferidas sobre los animales anestesiados cuando sea posible ya que los efectos de la anestesia en la función cardíaca han sido bien establecidos2. Dos protocolos que registran ECG en ratones conscientes son de la nota1. El sistema de radiotelemetría ECG es el estándar de oro para la monitorización continua a largo plazo del ECG en ratones conscientes1,3. A pesar de su fuerza en ser grabado en un estado consciente, las mediciones de ECG acopladas a radiotelemetría tienen varias limitaciones, incluyendo el alto gasto para la configuración y para el implante, su requisito de un operador altamente experimentado, un período de estabilización de más de 1 semana, su necesidad de ratones grandes (> 20 g), y la adquisición de una sola ventaja de grabación ECG1. Otro sistema que utiliza electrodos conductores del tamaño de una pata incrustados en una plataforma permite grabaciones de ECG en ratones conscientes sin anestesia o implantes1,,4. Este sistema no invasivo es un método alternativo en situaciones en las que los sistemas de radiodametría no están disponibles ya que tiene muchas ventajas: sin necesidad de tratamiento quirúrgico, sin necesidad de anestesia, bajo coste por ratón (sólo la configuración inicial es costosa), poco tiempo de medición, y asequibilidad de neonatos1,,4. La principal desventaja de este sistema es que no es adecuado para el monitoreo continuo a largo plazo1.
Aquí introducimos otro método de registro de ECG barato, simple y rápido en ratones anestesiados y demostramos su validez y sensibilidad realizando un ECG después del bloqueo/estimulación autonómica del sistema de conducción cardíaca. Sugerimos este método de ECG para el cribado de los efectos de agentes farmacológicos, modificaciones genéticas y modelos de enfermedades en ratones.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,2,2-tribromoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T48402-25G</td>
			<td>anesthetics, Avertin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal</td>
			<td>Japan SLC, Inc., Shizuoka, Japan</td>
			<td></td>
			<td>Balb/c mice, male, aged 7-9 weeks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A0123</td>
			<td>parasympathetic antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioAmp</td>
			<td>AD Instruments, Bella Vista, Australia</td>
			<td>ML132</td>
			<td>bio amplifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbachol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4382</td>
			<td>parasympathetic agonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrodes with acupuncture needles</td>
			<td>DongBang Acupuncture Inc., Sungnam, Korea</td>
			<td>DB106</td>
			<td>0.20 x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoprenaline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2760</td>
			<td>sympathetic agonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabChart 8</td>
			<td>AD Instruments, Bella Vista, Australia</td>
			<td></td>
			<td>data analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse food</td>
			<td>LabDiet, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>5L79</td>
			<td>Mouse diet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab 2/28</td>
			<td>AD Instruments, Bella Vista, Australia</td>
			<td></td>
			<td>data acquisition system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propranolol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0884</td>
			<td>sympathetic antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS Statistics program</td>
			<td>SPSS</td>
			<td>SPSS 25.0</td>
			<td>statistics program</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electrocardiogram recordings in anesthetized mice using lead ii

El electrocardiograma es una herramienta valiosa para evaluar el sistema de conducción cardíaca. La investigación en animales ha ayudado a generar información genética y farmacológica novedosa sobre el electrocardiograma. Sin embargo, realizar mediciones de electrocardiogramas en animales pequeños in vivo, como ratones, ha sido un desafío. Para ello, utilizamos un método de registro de electrocardiograma en ratones anestesiados con muchas ventajas: es un procedimiento técnicamente simple, es barato, tiene un tiempo de medición corto y es asequible, incluso en ratones jóvenes. A pesar de las limitaciones con el uso de anestesia, las comparaciones entre el control y los grupos experimentales se pueden realizar con mayor sensibilidad. Tratamos ratones con agonistas y antagonistas del sistema nervioso autónomo para determinar la validez de este protocolo y comparamos nuestros resultados con informes anteriores. Nuestro protocolo ECG detectó aumento de las frecuencias cardíacas y los intervalos QTc en el tratamiento con atropina, disminución de las frecuencias cardíacas e intervalos QTc después del tratamiento con carbachol, y mayores frecuencias cardíacas e intervalos QTc con isoprenalina, pero no notó ningún cambio en los parámetros de ECG en la administración de propranolol. Estos resultados son soportados por informes anteriores, lo que confirma la fiabilidad de este protocolo ECG. Por lo tanto, este método se puede utilizar como un enfoque de cribado para realizar mediciones de ECG que de otro modo no se intentarían debido a los altos costos y dificultades técnicas.

Experimentos farmacológicos
Para determinar si nuestra medición de ECG no invasiva refleja la influencia de la modulación autonómica en el sistema de conducción cardíaca, los ratones Balb/c normales fueron desafiados con agonistas y antagonistas del sistema nervioso autónomo (ANS). La atropina y el carbachol se utilizaron para provocar el bloqueo autonómico parasimpático y la estimulación, respectivamente, mientras que propranolol e isoprenalina se administraron para...

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Electrocardiogram Recordings in Anesthetized Mice using Lead II

Presentamos un protocolo ECG que es técnicamente fácil, barato, rápido y asequible en ratones pequeños, y se puede realizar con mayor sensibilidad. Sugerimos este método como un enfoque de cribado para el estudio de agentes farmacológicos, modificaciones genéticas y modelos de enfermedades en ratones.

Grabaciones de electrocardiograma en ratones anestesiados usando plomo II

The electrocardiogram is a valuable tool for evaluating the cardiac conduction system. Animal research has helped generate novel genetic and ...

La importancia de nuestro protocolo es que la medición del electrocardiograma se puede realizar con gran sensibilidad en un pequeño ratón que ha sido manipulado genética o farmacológicamente. El protocolo es ventajoso en el que es simple, rápido, barato y sensible. Además, se puede realizar en ratones pequeños, incluso neonatos.Creemos que este método contribuiría a la comprensión de las regiones inexploradas de arritmia en el área cardiovascular. Demostrar el procedimiento será Tae Woong Ha de mi laboratorio. Comience abriendo el software de análisis y desfinándolo para la adquisición de datos de ECG.Vaya a Configuración y Configuración de canal y establezca la frecuencia de muestreo en 2.000 muestras por segundo. Ajuste el rango a 20 milivoltios y el amplificador de entrada a 200 Hertz de paso bajo. A continuación, vaya a Análisis de ECG y Configuración de ECG y, a continuación, elija Ratón en el ajuste preestablecido de configuración de detección y análisis.En el panel Promedio, elija concatenar y ciclos cardíacos consecutivos en una sola señal media o vista de promediación y una vista de tabla. En el panel QTc, seleccione el método Bazett, que se define como el valor corregido de frecuencia cardíaca del intervalo QT. Coloque el ratón en la escala de precisión y registre su peso.Después de asegurarse de que el ratón está correctamente anestesiado insertar electrodos con agujas de acupuntura en las extremidades delanteras derecha e izquierda y la extremidad posterior izquierda. Asegúrese de que la profundidad y la posición del electrodo sean consistentes a lo largo de los experimentos. Conecte los otros extremos de los electrodos haciendo clic en los tres conectores de presión en el otro extremo de los cables de plomo del cable bioamplificador de tres cables e inyecte medicamentos aproximadamente tres minutos después de los anestésicos.10 minutos después de administrar los anestésicos, comience a registrar el ECG. Una vez completada la grabación, utilice los datos del ECG de 12 a 17 minutos después de la inyección de anestésicos para su análisis. Cuando haya terminado, retire cuidadosamente los electrodos.Para determinar si esta medición de ECG no invasiva refleja la influencia de la modulación autonómica en el sistema de conducción cardíaca, los ratones BALB/c normales fueron desafiados con agonistas y antagonistas del sistema nervioso autónomo. En comparación con el control del vehículo, la frecuencia cardíaca aumentó significativamente en ratones tratados con atropina e isoprenalina y cayó con carbachol. Además, el intervalo QTc aumentó en ratones tratados con atropina e isoprenalina y disminuyó en ratones tratados con carbachol.Aquí se muestran vistas representativas de las gráficas y vistas promediadas de las señales de ECG en atropina, carbachol y ratones tratados con vehículos. Al intentar este protocolo, lo más importante es asegurarse de que los electrodos ECG se insertan de forma segura durante todo el experimento. Realice múltiples experimentos preliminares hasta que las señales de ECG sean estables y consistentes.Nuestras publicaciones anteriores con ratones confirmaron variaciones de ECG que se habían reportado en estudios genéticos humanos, lo que apoya la utilidad de este método en áreas de investigación cardiovascular como la arritmia.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Mediciones in vitro de la constricción de la tráquea Utilizando ratones

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Medicina

Endotracheal Intubation in Mice via Direct Laryngoscopy Using an Otoscope

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Intubación endotraqueal en ratones<em&gt; Vía</em&gt; La laringoscopia directa utilizando un otoscopio

Mice, both wildtype and transgenic, are the principal mammalian model in biomedical research currently. Intubation and mechanical ventilation are ...

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Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

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Medición ascendente aórtica Rigidez<em&gt; En Vivo</em&gt; En ratones usando ultrasonido

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound ...

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In Vitro Enzyme Measurement to Test Pharmacological Chaperone Responsiveness in Fabry and Pompe Disease

In Vitro Medición de la enzima a prueba chaperonas farmacológicas respuesta de Fabry y la enfermedad de Pompe

The use of personalized medicine to treat rare monogenic diseases like lysosomal storage disorders (LSDs) is challenged by complex clinical trial designs, ...

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Cardiac arrhythmias and cardiovascular diseases are a major public health problem in developed countries. A major goal in preventive medicine is the ...