Name: orthotopic kidney auto-transplantation in a porcine model using 24 hours organ preservation and continuous telemetry
Uploaded: 2020-08-21T14:00:00
Duration: 7 min 58 s
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著者らは、パスカル・パシェルンダ、マーケイ・シュルツ、ブリッタ・バンガルト、アンナ・キュメッケの巧みな技術支援に感謝したいと考えています。
著者らは、B.ブラウン財団、メルスンゲン、ドイツ(BBST-S-17-00240)からZ.C.、ドイツ研究財団(ドイツフォルシュングスゲマインズシャフト - DFG)から、RWTHアーヘン大学(#23/19からZ.C.)のSTARTプログラムからの資金の一部を宣言します。FOR-2591、542/5-1、542/6-1まで。2016年からR.T.とSFB/TRR57、SFB/TRR219、BO3755/3-1、BO3755/6-1からP.B。ドイツの教育研究省(BMBF:STOP-FSGS-01GM1901AからP.B.)は、調査設計、データ収集、データ分析、原稿の準備または出版の決定に資金提供者の関与なしに。

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著者らは開示する利益相反を持っていません。

KTのブタモデルは、臨床的に関連する大きな動物の設定15、17、21における新規治療アプローチおよび医療機器の調査を可能にする。ブタと人間の設定の間の解剖学的、病理学的および外科的技術的な類似点は、データの臨床的解釈と臨床検査15、16、17、18、19、21に調査結果および技術の迅速な翻訳を容易にすることができる。
同種性腎臓自動移植のモデルは、単臓器移植に比べて必要な動物の数を減らすことによって3R原理に準拠するだけでなく、例えば別のドナー動物は必要ないが、免疫応答および免疫抑制薬17,21の交論効果なしにIRIおよび保存傷害の影響を調査するユニークな機会を提供する。
プロトコルのわずかな変更は臨床状況の広いスペクトルをモデル化することを可能にする。循環死(DCD)腎臓の後に寄付を用いてKTを模倣するために、血管構造は腎臓検索前に30〜60分間その場でクランプされ、一方、長期にわたる冷たい虚血時間(24時間以上)をモデル広範な保存傷害16、17、28、29に適用することができる。
ブタKTモデルは、小動物(例えばラットおよびマウス)26における固形臓器移植モデルよりも外科的に挑戦性が低いが、結果を改善し、特定の合併症を避けるために心に留めなければならない複数の技術的側面および落とし穴がある。
技術的な間違いや解剖学的変動による移植片の検索または移植中に、下の静脈と大動脈の周りの大きなリンパ管を避けることができないと、高出力リンパ瘻および術後腹部液採取、感染、および潜在的に技術的な故障につながる可能性があります。リンパ管は手術中に完全に避けるか、5-0または6-0ポリプロピレン縫合糸で閉じるべきです。また、リンパ漏れの場合には、バイポーラまたは他の凝固装置の使用を避けるのが賢明です。それは通常、状況の悪化につながります。低出力のリンパ漏れの場合、私たちのチームはフィブリンベースのコラーゲンパッチ(例えば、タコシル)30の適用に良い経験を持っていますが、その高コストはこの設定での適用を制限します。
本プロトコルでは、腎臓の検索と自己移植のための経腹膜アプローチを示す。これは、腎臓移植片が通常腹膜外アプローチを使用して腸骨窩に移植される臨床状況と比較して大きな技術的な違いです。しかし、ほとんどの群はブタモデルにおいてトランス腹膜および同一交所性アプローチを用いているが、豚31では腸骨窩への異所性移植も可能である。しかし、30〜40kgのブタにおける外腸動脈の直径が比較的低いため、血管れん縮の傾向があるため、腎動脈の端から側までの吻合を外部腸骨動脈31に対して行うことが困難になることもある。その後の自己移植を行うために経腹膜アプローチを介して左腎臓を取り出すという事実に関しては、同じ切開を再開し、ストライグトフォワード直交アプローチを使用して移植を行うことがより可能であり、特にプロトコルごとに、動物が1つの損傷を受けた肉体だけで回復するようにネイティブ右腎臓を除去することも必要である。モデルのすべての可能な技術的なバリエーションの包括的な説明は、このプロトコルの範囲を超えており、包括的なレビュー記事31で他の人によって要約されています。
移植された腎臓移植片の転位および血管性アナストモーセの結果的な変位は、ブタKTモデルにおける主要な障害源であり、外科的合併症のために血管閉塞および実験の完全な失敗をもたらす急速に至る。これを避けるために、自動移植後、3-0ポリグラクチンを使用して実行中の縫合糸で腎臓の上の腹膜層を閉じます。さらに、色ドップラー超音波は、腎臓および腹部閉鎖の移植後に直接行われ、腎臓移植片の良好な動脈および静脈灌流を確保する。超音波はまた、毎日およびオンデマンドで、動物の臨床性能に基づいて、腎臓灌流、腎後の問題(例えば尿カテーテルの閉塞またはキンキング)、およびリンパ瘻、出血または感染症による体液採取をスクリーニングするために使用される(図4および図6)。
24時間の冷たい虚血はしばしば機能障害および遅延移植片機能を引き起こすので、動物は獣医官によって必要と考えられるならば、オンデマンドの医療療法を必要とするかもしれない。これには、中枢静脈ラインを介して投与される5%グルコースおよび/またはリンゲル溶液を用いた輸液療法、フロセミドボーラス注射(臨床状態および検査結果に応じてオリグリア/ア尿症の場合、200mg/日までの60〜80mgのボーラス注射)、および重度の高カリウム高カリウムスルホネートナトリウム(Resonium A)の経口投与が含まれる。実験的な偏見を避けるために、動物の移植後の獣医ケアを担当する獣医官は、適用された治療とグループ化のために盲目にする必要があります。
腎動脈の解剖学は、通常1つの動脈を再構築するドイツの陸上豚ではむしろ簡単であるが、静脈再建中に一定の外科的創造性を必要とする腎静脈枝の解剖学的変化の広いスペクトルがある。しばしば2つの(またはそれ以上の)腎静脈の枝は、腎臓のヒラムと下の静脈の間の異なるレベルで結合する。最も頻繁に観察される変動と可能な再構成オプション17 を 図3に示します。
最初の外科的介入(1日目-15、テレメトリ注入)に続いて、すべての動物は実験の全期間を通して着用するブタジャケットを受け取る。これは、偶発的な傷害および埋め込まれたカテーテルの転位に対する優れた保護を提供し、尿のコレクションの袋の貯蔵のための部屋を提供する。これらのジャケットの使用はまた3R原則に従って精製方法としてクレアチニンクリアランスの評価のための代謝のケージのための必要性を除去するために実現可能な解決である。
当社の住宅施設は、テレメトリとビデオベースのペリオレーシーモニタリングの使用を統合しています。これらの方法は、獣医官や技術者による定期的な訪問を置き換えることはできませんが、迅速な介入を促進し、将来の実験設定をさらに洗練するために重症度評価を改善します。大型動物モデル33には埋め込み型テレメトリデバイスの使用に関する広範な適応症があります。しかし、ECGなどの大手術後の臨床パラムダーの綿密なモニタリングは、血圧、体温が手術集中治療室および中間ケアユニットのヒト臨床設定において標準であると考えられるが、実験手術では動物が麻酔33、34、35から目覚めたときにほとんど中止される。したがって、テレメトリは、これらの動物の継続的な監視のための実行可能な方法を提供します。これらのデータはすべて、術後合併症の可能性を正確かつタイムリーに早期に検出する(例えば、出血性ショック、または温度上昇、低血圧および頻脈によって検出された敗血症)に寄与すると考えています。これは、タイムリーな介入(例えば、治療用抗生物質療法の導入、体液置換、抗凝固の中止、または苦しみを避けるために動物の犠牲)を促進する可能性がある。これらの「リアルタイム」監視の側面に加えて、我々のグループは現在、動物実験36、37、38の重症度評価と洗練に焦点を当てています。これらの実験で収集された大量のテレメトリデータの遡及的分析は、このような外科的介入の重症度をより良く階層化し、実験動物における周術期ケア(例えば鎮痛)を最適化することを可能にするかもしれない。
埋め込み型テレメトリの面では、測定システムの移植後少なくとも12日の期間は、(個人的な通信に基づいて)安定した最適な測定データを確保するために推奨されます。大型動物向けのテレメトリーソリューションを提供する様々なメーカーや、これらのシステムを用いた他の研究グループと様々な実験設定で議論した後、テレメトリ移植と腎臓移植の間に14日間の期間を統合することにしました。以前の日の間に、瘢痕化および治癒プロセスがまだ未完了であるため、動物の動きのために偏差が依然として起こる可能性がある。
その利点にもかかわらず、上記のモデルには一定の制限がある。複雑さと必要なリソースとインフラストラクチャは、モデルの最も重要な制限事項です。時間のかかる実験プロトコル、複雑な技術、および激しい周術フォローアップは、重要な住宅およびOR容量の可用性を必要とし、博士仲間、外科医、獣医官、技術者を含むより大きなチームの関与を必要とします(表1)。したがって、我々の経験的観察に基づいて、通常、1日に2つ以上の手順を実行することは不可能です。ブタモデルの欠点は、小動物モデルと比較して、機械および分子生物学的調査の可能性が限られている。本プロトコルでは、5日間のフォローアップのみが報告された。これは、モデルの最も重要な実験的特性を実証するのに適していましたが、この比較的短いフォローアップは、特定の研究問題(例えば機能の長期回復と急性損傷)に答えるのに十分ではないかもしれません。したがって、フォローアップのプロジェクト関連の拡張が必要な場合があります。この原稿は、豚の整形性腎臓自動移植の実験環境における現在の「ベストプラクティス」を説明しています。このモデルを正常に確立するには特定のステップが必須ですが、マイナーな側面(例えば、膀胱カテーテルの術中使用、大腿動脈と頸動脈への動脈カテーテルの配置)は、学部であり、研究者の裁量で回避/変更することができる。それぞれの方法論的側面の説明と正当性は、現在のプロトコルの範囲を超えて、他の場所で議論されています31.最後に、高齢ドナー、急性腎障害を有する同種移植片および高血圧、糖尿病または動脈硬化などの複数の共罹患および慢性疾患を有するドナーが限界ドナープール8,9の主要な部分を表すブタモデルにおけるECD KTの正確な臨床状況を再現することも困難である。
上記の制限と技術的およびロジスティックな課題に関わらず、KTのこの確立された再現性の大きな動物モデルは、臓器保存および臨床結果を改善するための新しい治療法と技術を調査するユニークな機会を提供し、若い外科医が大規模な動物モデルで臓器移植技術を習得するための優れたプラットフォームを表しています。

ノーベル賞受賞者の外科医ジョセフ・マレー1の先駆的なグループによって行われた1954年に一卵性双生児間の最初の成功したヒト腎移植が成功して以来、腎臓移植(KT)は末期腎疾患(ESRD)2の患者の治療の主力として進化してきた。KTは透析2と比較して優れた長期的な臨床結果と生活の質を示す。KT後の短期および長期生存率は、外科技術、臓器保存、免疫抑制療法、およびクリティカルケアの進歩により、地球規模2、3、4で広く利用可能になった。
重大な臓器不足のために、同種移植片の需給3、5、6の間には絶え間なく格差が拡大している。2018年には、約12,031人の患者がドイツでKTを待っていましたが、移植のための臓器が極端に不足しているため、ドナー腎臓を受け取ることができたのは20%未満(2,291人)に過ぎません。残念ながら、臓器提供者の絶対数だけでなく、移植のために提供される同種移植片の一般的な品質は、過去数十年で低下しています8,9.移植のために受け入れられなければならなかった、損傷を受けた腎臓同種移植片または「限界」の腎臓同種移植片の数に増加傾向が認められた。ECD同種移植片の使用は、待ち時間および待機リストの罹患率および死亡率を減少させるが、しかしながら、原発移植片非機能(PNF)および/または遅延移植片機能(DGF)8、9、10などの移植片関連合併症の発生率の増加と関連している。さらなる研究は、同種移植片の利用を最適化し、ドナープールを拡大し、最終的に患者の転帰を改善する可能性のある限界同種移植片を保護し、再調整するために不可欠である3,6.
大規模な動物移植モデルのリソース集約的で複雑な性質のために、多数の研究が小動物を使用して、またはex vivo設定11、12、13、14、15で行われます。これらのモデルは重要な科学的データを提供することができますが、これらの知見を臨床現場に翻訳することはしばしば限られています。異形性腎臓自動移植のブタモデルは、臨床的に関連するin vivo設定で新しい革新的な治療アプローチをテストすることを可能にする確立された再現性モデルであり、潜在的に長いフォローアップ期間と反復サンプルコレクション16、17のための豊富な可能性を有する。同等の大きさの利点を超えて、臨床現場への比較的直接的な翻訳(特に医療機器開発および薬剤投与量)、虚血再灌流傷害(IRI)応答および腎臓損傷の点での外科的解剖学的および生理学的類似性を、翻訳研究17、18、19においてこのモデルの使用を支持する。このモデルはまた、臨床臓器移植20の技術的課題のために若い移植外科医を準備するための優れたトレーニング機会を提供する。
人間の設定に比べて多くの違いがあり、モデルの様々な技術的な変更は、文献16、17、19、20、21で見つけることができます。本稿では、豚の直交性腎臓自動移植のモデルを確立するのに役立つ技術的な詳細、落とし穴、および推奨事項を包括的に説明します。記載されたテレメトリおよびビデオ監視方法および私達の特に設計されたハウジングの施設は動物の厳密な重大度の評価および臨床観察を可能にする。経皮尿カテーテルおよび指定されたブタのジャケットの使用は、代謝ケージを使用せずに腎機能の詳細な評価の可能性を提供する。これらの技術的な変更は、3Rの原理(交換、削減および改良)の現代的な課題に準拠し、大型動物モデル22を用いて動物実験を改善するための潜在的な解決策として説明されている。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anesthesia materials, drugs and medications</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirin 500mg i.v., powder for solution for injection&#160;</td>
			<td>Bayer Vital AG, Leverkusen, Germany</td>
			<td>4324188</td>
			<td>antiplatelet agents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine sulfate solution for injection, 100mg</td>
			<td>Dr. Franz K&#246;hler Chemie GmbH, Bensheim, Germany&#160;</td>
			<td>1821288</td>
			<td>parasympatholytic agent, premedication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen ointment for eyes and nose</td>
			<td>Bayer Vital AG, Leverkusen, Germany</td>
			<td>1578675</td>
			<td>eye ointment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Discardit II syringes, 2ml, 5ml, 10ml,20ml</td>
			<td>Becton Dickinson GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>300928, 309050,309110, 300296&#160;</td>
			<td>syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Micolance 3 (20G yellow) Cannula</td>
			<td>Becton Dickinson GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>305888</td>
			<td>venous catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Venflon Pro Safety (20G pink)</td>
			<td>Becton Dickinson GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>4491101</td>
			<td>venous catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Buprenovet)</td>
			<td>Bayer Vital AG, Leverkusen, Germany</td>
			<td>794-996</td>
			<td>analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefuroxime 750mg, powder for preparing&#160; injection solution</td>
			<td>FRESENIUS KABI Deutschland GmbH, Bad Homburg, Germany</td>
			<td>J01DC02</td>
			<td>antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien Hi-Contour, Endotracheal Tube 7,5 with Cuffed Murphy Eye</td>
			<td>Covidien Deutschland GmbH,Neustadt/Donau, Germany</td>
			<td>COV-107-75E</td>
			<td>endotracheal Tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FENTANYL 0,5 mg Rotexmedica solution for injection&#160;</td>
			<td>Rotexmedica GmbH Arzneimittelwerk, Trittau, Germany</td>
			<td>4993593</td>
			<td>opioide analgetic agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Furosemide-ratiopharm 250 mg/25 ml solution for injection</td>
			<td>Ratiopharm GmbH, Ulm, Germany</td>
			<td>1479542</td>
			<td>loop diuretics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose 5% solution for infusion (500ml, 250ml)</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co. KG, Melsungen, Germany&#160;</td>
			<td>3705273,03705422</td>
			<td>infusion fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose 20% solution for infusion</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co. KG, Melsungen, Germany&#160;</td>
			<td>4164483</td>
			<td>osmotic diuresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin-Sodium 5000 I.E./ml</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co. KG, Melsungen, Germany&#160;</td>
			<td>15782698</td>
			<td>anticoagulant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Piramal (Isoflurane)</td>
			<td>Piramal Critical Care Deutschland GmbH, Hallbergmoos, Germany</td>
			<td>9714675</td>
			<td>volatile anaesthetic agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (Ketamine hydrochloride) 10%</td>
			<td>Medistar Arzneimittelvertrieb GmbH, Ascheberg, Germany</td>
			<td>0004230</td>
			<td>general anaestetic agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIDAZOLAM 15mg/3ml</td>
			<td>Rotexmedica GmbH Arzneimittelwerk, Trittau, Germany</td>
			<td>828093</td>
			<td>hybnotica, sedative agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0,9% solution for infusion (500ml,1000ml)</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co. KG, Melsungen, Germany&#160;</td>
			<td>864671.8779</td>
			<td>infusion fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Norepinephrine (Arterenol)</td>
			<td>Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, Frankfurt, Germany</td>
			<td>16180</td>
			<td>increase in blood pressure&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ preservation solution (e.g. HTK)</td>
			<td>Dr. Franz K&#246;hler Chemie GmbH, Bensheim, Germany&#160;</td>
			<td>should be decided based on preference and experimental design</td>
			<td>organ preservation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pantoprazole 40mg/solution for injection</td>
			<td>Laboratorios Normon,Madrid, Spain</td>
			<td>11068</td>
			<td>proton pump inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paveron N 25mg/ml solution for injection (Papaverine Hydrochloride)</td>
			<td>LINDEN Arzneimittel-Vertrieb-GmbH, Heuchelheim, Germany</td>
			<td>2748990</td>
			<td>spasmolytic agent for vasodilatation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital (Narcoren)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim vetmedica GmbH, Ingelheim, Germany</td>
			<td>1,204,924,565</td>
			<td>used for euthanasia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propofol 1% (10mg/ml) MCT Fresenius</td>
			<td>FRESENIUS KABI Deutschland GmbH, Bad Homburg, Germany</td>
			<td>654210</td>
			<td>general anaesthetic agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer solution</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co. KG, Melsungen, Germany&#160;</td>
			<td>1471411</td>
			<td>infusion fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterofundin ISO solution for infusion (1000ml)</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co. KG, Melsungen, Germany&#160;</td>
			<td>1078961</td>
			<td>Infusion fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stresnil (Azaperone) 40mg/ml</td>
			<td>Elanco</td>
			<td>797-548</td>
			<td>sedative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urine catheter ruffle 12CH&#160;</td>
			<td>Wirutec R&#252;sch 
			Medical Vertriebs GmbH, Sulzbach, Germany</td>
			<td>R&#220;SCH-180605-12</td>
			<td>transurethral urinecatheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Appose ULC Skin Stapler</td>
			<td>Covidien Deutschland GmbH,Neustadt/Donau, Germany</td>
			<td>8886803712</td>
			<td>skin stapler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavafix Certo 375&#160;</td>
			<td>B. Braun Deutschland GmbH &#38; Co. KG, Melsungen, Germany&#160;</td>
			<td>4153758</td>
			<td>central venous catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMKA Easytel +L-EPTA Transponder</td>
			<td>emka TECHNOLOGIES S.A.S,Paris,France</td>
			<td>L-EEEETA 100</td>
			<td>telemetry transponder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMKA Reciever and Data Analyzer System</td>
			<td>emka TECHNOLOGIES S.A.S,Paris,France</td>
			<td>Reviever&#160;</td>
			<td>telemetry receiver</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather Disposable Scapel (11)(21)</td>
			<td>Feather, Japan</td>
			<td>8902305.395</td>
			<td>scapel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolene 2-0, blue monofil VISI-BLACK, FS needle</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td>
			<td>EH7038H</td>
			<td>skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolene 3-0,blue monofil,FS1 needle</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td>
			<td>EH7694H</td>
			<td>skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolene 5-0 (simply angulated, C1 needle) blue monofil VISI-BLACK</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td>
			<td>EH7227H</td>
			<td>vascular</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolene 5-0 (double armed, C1 needle) 60cm</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td>
			<td>KBB5661H</td>
			<td>vascular</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolene 6-0 (double armed, C1 needle) 60cm</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td>
			<td>EH7228H</td>
			<td>vascular</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sempermed derma PF Surgical Gloves Seril Gr. 7, 7.5, 8&#160;</td>
			<td>Semperit investment Asia Pte Ltd, Singapore</td>
			<td>4200782,4200871,4200894</td>
			<td>surgical gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sentinex&#174; PRO Surgical Gowns Spunlace XL 150cm</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher GmbH &#38; Co. KG, Neuwied, Germany</td>
			<td>19302</td>
			<td>surgical gown</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tachosil</td>
			<td>Takeda Pharma Vertrieb GmbH &#38; Co. KG, Berlin, Germany</td>
			<td>MAXI 9,5 x 4,8 cm</td>
			<td>haemostasis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Telasorp Belly wipes (green 45x45cm)</td>
			<td>PAUL HARTMANN AG,Heidenheim, Germany</td>
			<td>4542437</td>
			<td>abdominal towel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pediatric urine catheter</td>
			<td>Uromed Kurt Drews KG, Oststeinbeck, Germany</td>
			<td>PZN 03280856</td>
			<td>used for the uretero-cutaneus stoma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VICRYL- 0 MH Plus</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td>
			<td>V324</td>
			<td>fascial closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VICRYL - 3-0, SH1 Plus needle, 75cm</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td>
			<td>W9114</td>
			<td>subcutaneous suture, peritoneal suture,&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VICRYL - 3-0, SH1 Plus needle, 4*45cm</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td>
			<td>V780</td>
			<td>subcutaneous suture, peritoneal suture,&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VICRYL - ligatures Sutupak purple braided, 3-0</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td>
			<td>V1215E</td>
			<td>threats for ligature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M&#8482; Standard Surgical Mask 1810F</td>
			<td>3M Deutschland GmbH, Neuss, Germany</td>
			<td>3M-ID&#160;7000039767</td>
			<td>surgical mask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anatomical forceps Standard</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>PZ0260</td>
			<td>anatomical forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atraumatic tweezers steel, De Bakey Tip 1,5mm 8&#34;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>GF0840</td>
			<td>anatmical atraumatic forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar forceps 16 cm straight, Branch 0,30 mm pointed, universal fit</td>
			<td>B&#252;hler Instrumente Medizintechnik GmbH,Tuttlingen, Germany</td>
			<td>08/0016-A</td>
			<td>biopolar forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp atraumatic,curved, De bakey 78 mm, 3&#34;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>GF0900</td>
			<td>bulldog clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DE BAKEY-SATINSKY vascular clamp 215mm</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>GF1661</td>
			<td>vascular clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors Mayo,250 mm, 10&#34;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>SC2232</td>
			<td>&#160; Scissors for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors Metzenbaum-Fino, 260 mm, 101/4&#34;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>SC2290</td>
			<td>Scissors for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Draeger CATO Anesthetic machine with PM8050 Monitor</td>
			<td>Dr&#228;ger, Dr&#228;gerwerk AG &#38; Co. KGaA, L&#252;beck, Germany&#160;</td>
			<td>106782</td>
			<td>Ventilation System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Fine Tweezers, ADSON 180 mm</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>ADSONPZ0571</td>
			<td>fine forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gosset abdomenal wall spreader</td>
			<td>CHIRU-INSTRUMENTE, Kaierstuhl,Germany</td>
			<td>09-621512</td>
			<td>abdominal retractor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HALSTEAD MOSQUITO,curved, surgical 125mm</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>KL2291</td>
			<td>mosquite clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HF surgical device ICC 300, Electrocautery</td>
			<td>Erbe Elektromedizin Gmbh; T&#252;bingen, Germany</td>
			<td>20132-043</td>
			<td>cautery, biopolar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICRO HALSTED-MOSQUITO 100mm, curved</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>KL2187</td>
			<td>mosquite clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro steel needle holder straight 0,5mm, with spring lock</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>MN1324D</td>
			<td>microsurgical needle holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical/watermaker tweezers LINZ 150mm 6&#34; Ergo round handle</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>MN0087</td>
			<td>fine microsurgical forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle holder Mayo-hegar,190 mm, 71/2&#34;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>NH1255</td>
			<td>needle holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Overhold Slimline Fig. 0 8 1/2&#34;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>KL4400</td>
			<td>overholds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze 10X10</td>
			<td>Paul HaRTMANN AG,Heidenheim, Germany</td>
			<td>401725</td>
			<td>sterile gauze</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction tip OP-Flex Handpiece Yankauer</td>
			<td>Pfm Medical AG, K&#246;ln, Germany</td>
			<td>33032182</td>
			<td>suction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical forceps Standard 5 3/4&#34;&#160;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>PZ1260</td>
			<td>surgical forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical scissors standard pointed-blunt (thread/cloth scissors)175 mm, 7&#34;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>SC1522</td>
			<td>surgical Scissors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanit vascular scissors POTTS-SMITH,185 mm, 71/4&#34;60&#176;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>SC8562</td>
			<td>Pott scissors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tunneling instrument</td>
			<td>Marina Medical Instruments Inc,Davies,US</td>
			<td>MM-TUN06025</td>
			<td>subcutaneous tunneling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel loops</td>
			<td>Medline International Germany GmbH,Kleve, Germany</td>
			<td>VLMINB</td>
			<td>hold and adjust the vessel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wound spreaders Weitlander, Stump,110 mm, 41/4&#34;</td>
			<td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td>WH5210</td>
			<td>wound care</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Further material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Eickemeyer - Medizintechnik f&#252;r Tier&#228;rzte KG, Tuttlingen, Germany&#160;</td>
			<td> 
			648050 MHP-E1220</td>
			<td>maintain body temperature during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laryngoscope, customized</td>
			<td>Wittex GmbH, Simbach, Germany</td>
			<td>333222230</td>
			<td>&#160;expose the vocal cord</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal temperature probe</td>
			<td>Asmuth Medizintechnik, Minden, Germany</td>
			<td>ASD-RA4</td>
			<td>measure body temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray wound film</td>
			<td>Mepro-Dr. Jaeger und Bergmann GmbH, Vechta, Germany</td>
			<td>2830</td>
			<td>&#160;keep sterile condition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile organ bag</td>
			<td>Raguse Gesellschaft f&#252;r medizinische Produkte, Ascheberg, Germany</td>
			<td>800059</td>
			<td>organ preservation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>swine jacket small, adult Landrasse swine 30-50kg, customized for Emka Telemetry and urinary catheterization&#160;</td>
			<td>Lomir Biomedical Inc., United Kingdom</td>
			<td>SS J1LAPMP</td>
			<td>swine jackets to pretect implanted catheters and store urine bag</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Ultrasound device, Sonosite Edge-II</td>
			<td>FUJIFILM SonoSite GmbH, Frankfurt, Germany</td>
			<td>V21822</td>
			<td>ultrasound and color Doppler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urine bag 2000ml Volume</td>
			<td>ASID BONZ GmbH, Herrenberg, Germany&#160;</td>
			<td>2062578</td>
			<td>disposable urine bag connected to the uretero-cutaneous fistula catheter</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic kidney auto-transplantation in a porcine model using 24 hours organ preservation and continuous telemetry

臓器移植の時代には、臓器が不足している現在、腎臓移植用の同種移植片のプールを拡大する様々な戦略が採用されています。しかし、拡張基準ドナー(ECD)からの同種移植片の使用は、臓器提供者の不足を部分的に緩和することができ、ECD臓器は劣った結果および術後合併症に対する潜在的に高いリスクを運ぶ。動的臓器保存技術、虚血再灌流および保存傷害の変調、および同種移植片療法は、KTにおける同種移植片の利用率および患者の転帰を改善する取り組みにおいて科学的関心のスポットライトを浴びている。
前臨床動物実験は、特に医療機器や医薬品開発において、翻訳研究において重要な役割を果たしています。エキビボまたは小さな動物実験に対するブタの整形外科的な自動移植モデルの主な利点は、臨床現場との外科的解剖学的および生理学的類似性の範囲内にある。これにより、新しい治療法と技術の調査が可能になり、知見の臨床翻訳が容易になります。このプロトコルは、24時間の保存時間とテレメトリモニタリングを使用して、ブタの直交性腎臓自動移植モデルの包括的かつ問題指向の記述を提供する。麻酔、動物ハウジング、周術期フォローアップ、モニタリングの高度に標準化された最先端の方法と洗練された外科技術の組み合わせは、このモデルの再現性と成功を保証します。

我々のグループは、小動物および大型動物における固体臓器移植モデルに関して数年の経験を有し、豚の整形性腎臓自動移植モデルを利用し、様々な実験設定16、25、26、27で再現可能な結果を得た。実験の設定に応じて、実験チーム全体の十分な学習曲線を確保する予備実験として3〜5の自動移植を行うことをお勧めします。本設置では、外科医を訓練するために5回の移植が必要であり、移植手術の分野における8年間の実験的および5年間の臨床外科経験を有し、これらの実験を行った。これは、これらの技術への外科医の以前の暴露によって異なる場合があります。
このプロトコルの枠組みの中で、5つの豚の整形性腎臓自動移植実験のセットの結果が実証されている。トランスポンダ移植は、観察期間を通じて十分なテレメトリ信号を有する各動物(部分的なトランスポンダー機能不全を有する1匹の動物を除く)で成功した。トランスポンダ移植のためのナイフ間間隔は85分±5分(表1)であった。移植片の検索に続いて、すべての動物は住宅施設でよく回復した。検索手術のためのナイフ間間隔は135分±32分(頸部カテーテルの挿入、トンネリングおよび固定のための約30〜45分を含む)。左腎臓は、24時間(24時間±30分)の目標冷たい虚血時間を有する冷水浴中に貯蔵された。翌日、麻酔の誘発および再ラパロトミーの後、対側(右)腎臓を取り除き、続いて先に述べたように貯蔵された左腎臓移植片の異所性自動移植を行った。自己移植手術のナイフ間間隔は、27分±168分(右腎臓の排泄を含む)であった。暖かい虚血時間は34分±7分であった。各移植された腎臓移植片は、再灌流後の尿の産生が最小限であったが直接的であった。腹部閉鎖後、色ドップラー超音波は、すべての症例において腎臓の満足のいく動脈および静脈灌流を示した(図4)。麻酔から回復したすべての動物と有意な合併症は観察期間を通して観察されなかった。毎日の血液および尿サンプルを採取した。すべての豚は、フォローアップ中に良好な臨床状態にあり、5日後に屠殺された。血清クレアチニンとカリウム値はPOD3-4でピークに達した。血液pHは正常範囲内にとどまっている(図5)。尿の出力は、術後の最初の4日間で正常な値に回復した。白血球数は、フォローアップ期間の終わりにわずかに増加した(図5)。連続したテレメトリモニタリングによって測定された体温は、術後の期間にわたってわずかな変動を示した。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig1.jpg"> 図1: 研究フローチャートとプロトコル 使用される略語: POD術後日;心電図心電図検査. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig1large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig2.jpg"> 図2:最大6匹の動物のリアルタイムかつ連続テレメトリモニタリングを備えた動物用住宅施設(A)最大6匹の動物の住宅・テレメトリ監視に適した施設の模式図。単一のホールディングボックスのサイズは、EU指令2010/63とETS 123付録A.パネルA-Eのガイドラインに基づいて決定されました。(B)6匹の動物の住宅のための動物室。(C) テレメトリデータの連続登録に使用されるパソコン付きの観測室。(D) 動物のリアルタイム映像と熱映像。(E) 社会的孤立を避けるために、動物と動物の音響・嗅覚の接触を確保する個人<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig2large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig3.jpg"> 図3:異形性腎臓の自己移植と解剖学的変動と再建の可能性.(A,B)「標準的な」血管解剖学の場合の正交性腎臓自動移植モデルのステップ(C)バリエーション 1: 1 つの大きな静脈はドナー腎臓に付属していますが、レシピエント側には 2 つの静脈があります。管理:小さい静脈は合字によって閉じられ、吻合は腎静脈の間でエンドツーエンドで行われる。(D)バリエーション 2: 1 つの大きな静脈はドナー腎臓に付属しているが、反対側に適切なレシピの血管がない(例えば、サイズのミスマッチ)。管理:下の静脈に腎静脈のエンドツーサイド吻当。(E)バリエーション 3: 両側に 2 つの類似した大きさの静脈.管理:2つの静脈性アナストモーゼによる再建。(F)バリエーション 4: 2つの類似した大きさの静脈がドナー腎臓に付属するが、反対側には適切なレシピエント血管はない。管理:2つの腎静脈の場合には下静脈に腎静脈のエンドツーサイド吻当。(G)バリエーション5:ドナー腎臓は早期分岐を示す静脈を伴い、反対側には1つの大きな静脈がある。管理:レシピエント側に1つの大きな静脈を有するドナー腎静脈の短い共通チャネルのエンドツーエンドの吻合。(H)バリエーション 6: ドナー腎臓には早期分岐を伴う単一の腎静脈が付属するが、反対側には適切なレシピエント血管はない。管理:下の静脈にドナー腎静脈の短い共通チャネルの側の吻当を終了する。この図は、より頻繁なバリエーションの一握りを示しており、ドイツの競走豚で可能なすべてのバリエーションの点で統計的に包括的ではありません。使用される略語:KG-腎臓移植片;RK右腎臓;IVC劣った大静脈。AO-aorta<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig3large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig4.jpg"> 図4:代表的な色ドップラー超音波画像は、直交性腎臓自動移植および腹部閉鎖後の。(A)色ドップラー超音波は、腎臓および腹部閉鎖の移植後に直接行われ、腎臓移植片の良好な動脈および静脈灌流を確保し、潜在的な刺激性血管のキンキングをスクリーニングする。超音波はまた、様々な問題をスクリーニングする動物の臨床性能に基づいて、毎日およびオンデマンドで使用されました。(B-E)移植後の腎臓移植片の代表的な超音波画像。色付きと無色の腎臓移植片の画像ドップラー(B,C)は、優れた動脈(D)および静脈灌流(E)を示す。この図は、同じ動物からの代表的な画像を示しています。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig4large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig5.jpg"> 図5 :24時間の冷間虚血時間を有する異所性腎臓自動移植モデルの代表的な検査所見と遠隔測定データ(A) 血清カリウム値 (B) 血清クレアチニン値 (C) pH (D) 白血球数 (WBC) (E) 尿出力.(F)4回連続の腎移植における観察期間を通して遠隔測定モニタリングによって登録された平均体温(部分トランスポンダ機能不全による5番目の動物からのデータは提示されていない)。使用される略語: POD術後日。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig5large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig6.jpg"> 図6:周辺術の合併症および落とし穴の例(A-C)移植された腎臓移植片の移植後の鬱血は、移植後のPOD3に続く親切な自動移植である。(D)輻輳の理由は、皮膚のレベルで縫合糸が引き締まり過ぎ、カテーテルのキンキングと見なされた。縫合糸をほぼ完全に24時間で整形した後に、鬱血が解消された(E)ここでは、直交性腎臓の自動移植に続くPOD2上の他の腎臓移植片が示されている。アステリックス(*)は、移植片の下竿の周りの流体コレクション(血まみれのコレクション対リンパ球)を示しています。腎臓の上腹の閉鎖と我々の技術のためにこれらのコレクションは、通常、局所圧縮の有利な効果のために自己制限である。動物は、局所的な発見、出血または感染の徴候の観点から注意深く監視されるべきである。(F)住宅施設で毎日(およびオンデマンドで)行われる修飾色ドップラー超音波は、その学業利用(例えば、ドキュメンテーション、動脈系レジスタンス指数の登録)に加えて、早期のサブクリニカル段階における潜在的な合併症を認識する上で重要な診断役割を有する。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig6large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<table border="1" fo:font-size="9px" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td rowspan="2">実験タスク/ステップ</td>
			<td rowspan="2">日</td>
			<td rowspan="2">時間 (分)</td>
			<td rowspan="2">外科 医</td>
			<td rowspan="2">獣医官</td>
			<td rowspan="2">獣医技術者</td>
			<td rowspan="2">研究室の技術者</td>
			<td rowspan="2">博士課程の学生</td>
			<td>合計</td>
		</tr>
<tr>
<td>Nr</td>
		</tr>
<tr>
<td>プリオプリブケア</td>
			<td>D-29 から D-15</td>
			<td>Na。</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>遠隔測定移植手術</td>
			<td>D-15</td>
			<td>85±5</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>遠隔測定移植後の術後ケア</td>
			<td>D-15 から D-1 へ</td>
			<td>Na。</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>移植片検索手術</td>
			<td>D-1</td>
			<td>135±32</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>8</td>
		</tr>
<tr>
<td>腎臓自動移植手術</td>
			<td>D 0</td>
			<td>168 ±27</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>8</td>
		</tr>
<tr>
<td>腎自動移植後の術後ケア</td>
			<td>D 0 から D5</td>
			<td>Na。</td>
			<td></td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>2</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>犠牲</td>
			<td>D 5</td>
			<td>Na。</td>
			<td></td>
			<td>2</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>4</td>
		</tr>
</tbody></table>表 1.ブタ腎臓自動移植モデルの様々な実験ステップを実行するための必要な人材および時間スケジュールの説明。

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Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

大型動物モデルは、前臨床移植研究に不可欠な役割を果たしています。臨床セットアップとの類似性により、本稿で説明する直交性腎臓自動移植のブタモデルは、臓器保存技術および治療介入の検査のための優れた生体内設定を提供する。

24時間臓器保存と連続テレメトリを用いた豚モデルにおける異形性腎臓自動移植

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

このプロトコルは、24時間の臓器保存時間と周術遠隔測定モニタリングを使用して、ブタの異所性腎臓自動移植モデルを確立するための重要な手順をすべて説明します。小動物モデルに関する元生体研究に対するこの大型動物自動移植モデルの主な利点は、外科的解剖学的および臨床現場との病態生理学的類似性である。大学病院RWTHアーヘンの私たちのチームは、手順を実証します.一晩絶食成雌豚で適切なレベルの沈下を確認した後、鼠径部に3〜5センチメートルの切開を行い、360度の方法で大腿動脈を解剖する。11個のメスを使って動脈管を作り、テレメトリデバイスの動脈センサーを挿入します。左脇腹に皮下ポーチを作った後、テレメトリトランスポンダーを側面にトンネルし、トランスポンダーを3-Oポリプロピレン単一結び目縫合糸で筋肉筋膜に固定します。次に、胸郭の左右に2つの小さな切開を行い、赤と白のECG電極を指定された場所にトンネルします。電極が固定されたら、テレメトリデータの登録を開始します。安定した信号取得時に、縫合糸とスプレーフィルムドレッシングで鼠径部切開部を閉じ、動物に適切なサイズのブタジャケットを置きます。最初の手術の14日後、麻酔動物の右側にある頸部溝に4〜5センチメートルの切開を行い、皮下および筋肉組織を解剖してジャグラー静脈を露出させる。皮をむくシートインジャまたはセルディンガー法を使用して、頸部カテーテルを挿入します。5-0ポリプロピレン縫合糸でカテーテルを固定し、2つの層で切開を閉じます。外科的消毒および生殖不能のドレープの後、中腹開術を行い腹部を開き、標準的な腹部レトラクタを使用して外科分野を露出させる。腹膜層を開き、単極性焼灼器、双極鉗子、および細かいはさみを使用して、接着組織から左腎臓および尿管を解剖する。その後、3-0ポリグラクチン縫合糸を使用して、腎臓のヒラムに少なくとも10センチメートル遠位の左尿管をリゲートし、分割する。移植片腎臓を取り出すために、大動脈と大静脈に近い腎動脈および静脈を閉じるために血管クランプを使用する。そして、アサリの上の容器を切断します。その後、腎臓を後ろのテーブルチームに与え、5-0ポリプロピレン縫合糸を使用して腎動脈と腎静脈の切り株を閉じます。検索直後に、標準的な14ゲージの末梢カテーテルを使用して腎動脈をカニュール化し、少なくとも500ミリリットルの氷冷器官保存液で腎臓を洗い流す。フラッシュ後、コンピュータ制御冷却回路を使用して、摂氏4度で24時間の目標冷たい虚血時間で臓器保存液に貯蔵するための無菌オルガンバッグに移植片を包む。血管クランプの2〜5分前に、1キログラム当たり100の国際単位を静脈内に注入し、その後、実証通りに対して右腎臓を除去し、中央値開腹術を再開する。血管クランプの2〜5分前に、1キログラム当たり100の国際単位を静脈内に注入し、その後、実証したように対側右腎臓を除去する。保存された移植片腎臓を外科分野に入れ、平均動脈血圧と心拍数を使用して持続的な注入としてノルエピネフリンの1キログラムあたり0.1〜1マイクログラムの投与を開始し、効率を監視する。腎静脈のエンドツーエンド吻合のために、5-0ポリプロピレンを使用して2つのコーナーステッチを配置し、連続的に後壁を縫合します。後方壁を完成させた後、頭蓋コーナーステッチの一端を使用して頭蓋頭蓋方向に前壁を縫合し、ヘパリナイズ生理食塩水のミリリットル当たり100国際単位で静脈を洗い流します。腎動脈のエンドツーエンド吻合のために、示されているように連続的な方法で後壁を縫合するパラシュート技術を使用する前に6-0ポリプロピレン頭蓋コーナーステッチを使用してください。二重武装6-0ポリプロピレン縫合の他端と前壁を縫合し、ヘパリナイズ生理食塩水のミリリットル当たり100国際単位で動脈を洗い流す。吻合が完了した後、尾骨角の2本の糸を結び、静脈血管および動脈クランプを順次開けて腎臓の再灌流を可能にする。再灌流後、5ミリリットルのパパベリンを腎動脈の外壁に局所的に投与し、20%グルコース溶液を1回の80ミリグラム用量のフルロセミドで静脈内投与する。次に、12のフランスの小児尿カテーテルを腹壁と皮膚を通り抜け、合字を使用してカテーテルを尿管に固定します。腎臓の上に腹膜層を閉じて、移植片の転位と血管吻合のキンキングを防ぎます。そして、実証したように4層の腹部を閉じます。最後に、色ドップラー超音波を使用して、完全にリカンベント動物を住宅施設に戻す前に、腎臓移植片の十分な動脈および静脈灌流を確保する。この代表的な5つの豚の整形性腎臓自動移植実験では、観察期間中に登録された十分なテレメトリ信号を有する各動物におけるトランスポンダー移植および自動移植手順が成功した。腹部閉鎖後、色ドップラー超音波は、すべての症例において腎臓の満足のいく動脈および静脈灌流を明らかにした。血清カリウムおよびクレアチン値は術後3~4日目にピークを迎え、その後徐々に回復を示した。血液pHは正常範囲内にとどまり、尿の出力は術後の最初の4日間にわたって正常な値に回復した。このプロトコルは、臨床的に重要な大型動物モデルにおける臓器保存技術または元生体内または生体内療法の効果に関する様々な質問に答えるために使用することができる。

Research

JoVE Journal

Medicine

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アクティブポルト大静脈シャントを使用して、ブタ肝臓調達と同所移植の技術

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

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マウス収縮圧力を測定するために子宮内テレメトリ<em&gt;インビボ</em

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