Name: flim-fret measurements of protein-protein interactions in live bacteria.
Uploaded: 2020-08-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about FLIM-FRET Measurements of Protein-Protein Interactions in Live Bacteria. at JoVE.com

Мы признательны д-ру Людовику Ричерту за его ценную помощь в сборе данных FLIM, а также в техническом обслуживании и разработке установки FLIM. Эта работа финансировалась за счет грантов фонда pour la Recherche en Chimie (https://icfrc.fr/). VN финансируется Фондом за Recherche M'dicale (FRM-SPF201809006906). YM признателен Институту Франции (IUF) за поддержку и предоставление дополнительного времени для исследований. IJS и JG признают Институт по доставке наркотиков в Страсбурге за его финансовую поддержку.

1. Плазмидная конструкция
<ol><li>Усиление двумя ПЦР (ПЦР1 и 3) последовательностей ДНК (использование геномной ДНК P. aeruginosa PAO1) из 700 базовых пар вверх и вниз по течению регионов, соответствующих месту вставки в геноме P. aeruginosa с полимеразой ДНК высокой точности. Добавьте сайты огран...

FLIM-FRET предлагает некоторые ключевые преимущества по сравнению с интенсивностью на основе изображений FRET. Срок службы флуоресценции является неотъемлемым параметром флюорофора. Как следствие, он не зависит ни от локальных концентраций фторфоров, ни от интенсивности возбуждения света....

Белково-белковые взаимодействия (ИЦП) контролируют различные ключевые процессы вклетках 1. Роли ИЦП различаются в зависимости от состава белка, сродства функций и мест в клетках2. ИЦП могут быть исследованы с помощью различныхметодов 3. Например, ко-иммунопреципиентация является относительно простым, надежным и недорогим методом, широко используемым инструментом для выявления или подтверждения ИЦП. Тем не менее, изучение ИЦП может быть сложной задачей, когда взаимодействующие белки имеют низкий уровень экспрессии или когда взаимодействия являются переходными или актуальными только в конкретных средах. Изучение ИЦП, происходящих между различными ферментами пиовердина пути в P. aeruginosa требует, чтобы репрессии общего железа совместно фактором репрессора меха освобождается, чтобы выражение всех белков пиовердина путь, которые будут выражены вклетке 4,5,6. Эта общая регулировка для всех протеинов путя приводит к в своевременных выражениях в клетке, как ожидается, для содействия их взаимодействию. Разнообразие с зрения размера, природы, уровней экспрессии и количества белков этого метаболического пути затрудняет изучение в восстановленных системах6. Поэтому изучение ИЦП в их клеточной среде имеет решающее значение для дальнейшего понимания биологических функций белков в их родном контексте.
Лишь немногие методы, включая флуоресценцию позволяют исследовать ИЦП в живыхклетках 7. Среди различных параметров флуоресценции, которые могут быть измерены, срок службы флуоресценции (т.е. среднее время флюорофор остается в возбужденном состоянии, прежде чем излучать фотон), вероятно, является одним из самых интересных параметров для изучения в живых клетках. Срок службы флуоресценции флюорофора очень чувствителен к окружающей среде, и поэтому FLIM может предоставить химическую или физическую информацию о флюорофорнойсреде 8. Это включает в себя наличие Фюрстер резонансной передачи энергии (FRET), которые могут возникнуть в присутствии "приемщика" флуоресценции, расположенной на небольшом расстоянии от флуоресценции "донор". Передача энергии приводит к значительному сокращению срока службы донорской флуоресценции(рисунок 1A),что делает флуоресценцию пожизненной микроскопии (FLIM) мощным подходом к изучению белково-белковых взаимодействий непосредственно в живых клетках. FLIM может дополнительно предоставить пространственную информацию о том, где происходит взаимодействие вячейках 7,8. Такой подход чрезвычайно силен для изучения ИЦП в ситуациях, когда возможна маркировка флюорофорами двух взаимодействующих партнеров.
Для возникновения ФРЕТ - критические условия на расстоянии между двумя флюорофорамитребуются 8,9. Два фторфора не должны быть удалены друг от друга более чем на 10 нм. Поэтому при разработке экспериментов FLIM-FRET необходимо принимать предостережения, чтобы донор и приемник флуоресценции имели возможность находиться близко друг к другу в взаимодействующих комплексах. Хотя это может показаться сдерживающим, это на самом деле истинное преимущество, как расстояние зависимости FRET гарантирует, что два помеченных белков, проходящих FRET должны физически взаимодействовать (Рисунок 1A). Таким образом, трудности с получением четких ответов на вопросы о ИЦП в экспериментах по колокализации (два колокализованных белка не обязательно взаимодействуют) не являются проблемой с использованием FLIM-FRET.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61602/61602fig1.jpg"> Рисунок 1: Принцип анализа FLIM-FRET. Каждый пиксель многомерного изображения FLIM-FRET содержит информацию о распаде флуоресценции, зарегистрированном в данном конкретном месте (#counts - количество обнаруженных фотонов в канале t). (A) Классическое изображение FLIM, как правило, ложного цвета жизни закодированы 2D изображение (слева). Снижение среднего срока службы флуоресценции донора - как видно из изменения цветовой шкалы - можно наблюдать в присутствии ФРЕТ и является информативным о наличии ИЦП в этой пространственной области. (B) Перекрытие между спектром выбросов донора и спектром поглощения приемоктора необходимо для возникновения ФРЕТ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61602/61602fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
Второе требование ДЛЯ ФРЕТ заключается в том, что спектр выбросов донора и спектр поглощения приемора должны перекрываться8 (рисунок 1B). Флуоресценция возбуждения донора должна быть на длинах волн, которые вносят очень мало в прямое возбуждение флуоресценции приемора. Не все комбинации флюорофоров возможны, и мы дополнительно рекомендуем преимущественно использовать доноров с моноэкспонентным распадом флуоресценции для облегчения интерпретаций FLIM-FRET10. Несколько пар белков флуоресценции отвечают этим требованиям, в том числе популярная пара eGFP-mCherry11 (для обзора палитры доступных флуоресцентных белковых пар FRETсм. 12,13).
FLIM-FRET позволяет измерять упадок флуоресценции донора FRET на каждом пикселе изображения FLIM(рисунок 1A). Существуют два основных метода определения срока службы флуоресценции, которые отличаются по приобретению и анализу: частотный домен (FD)14 и домен времени (TD). TD FLIM является более распространенным и осуществляется с использованием импульсного освещения в сочетании с различными возможными конфигурациями обнаружения, включая gatingметоды 15, полосакамеры 16 или времени коррелированных одного фотона подсчета (TCSPC)методы 8. Как для методов FD, так и для TD срок службы флуоресценции непосредственно не измеряется, а требует анализа измеренных данных для оценки продолжительности жизни (ы) или наличия взаимодействий. Для методов TCSPC наиболее широко используемый анализ основывается на установке распада с помощью одной или нескольких экспоненциальных функций с использованием наименее квадратных итеративных революций, которые минимизируют взвешенную сумму остатков.
Наконец, FLIM-FRET может быть выполнен как с помощью одного фотона или мультифотонных возбуждений. Последние имеют ряд преимуществ, таких как уменьшение аутофторесценции и фотодемаж из фокусной плоскости. Мультифотонные возбуждения позволяют также более длинную глубину возбуждения при работе в толстых 3D образцах8. Напротив, одно фотон возбуждение, как правило, более эффективным, как два фотона поглощения поперечных сечений флуоресцентных белковограничены 17.
Здесь мы предлагаем протокол для измерений ИЦП FLIM-FRET в живых P. aeruginosa в конкретном случае двух взаимодействующих белков (PvdA и PvdL), выраженных с очень разным количеством копий, чтобы продемонстрировать качество и надежность метода при выявлении критических особенностей ИЦП. Белки PvdA и PvdL участвуют в биосинтезе пиовердина. PvdA является L-орнитин N5-оксигеназа и синтезирует L-N5-формил-N5-гидроксиорнитин из L-орнитин по гидроксилации (PvdA) и формилирования (PvdF)18. PvdL является не рибосомным пептидным синтезом (NRPS) ферментом, состоящим из четырех модулей. Первый модуль катализает ациляцию миристической кислоты. Второй модуль катализает активацию L-Glu и его конденсации в миристический коА. Затем третий модуль конденсирует аминокислоту L-Tyr, которая затем изомерируется в D-Tyr. Наконец, четвертый модуль связывает L-Dab (Diaminobutyric кислоты) аминокислоты для формирования ацилатного трипептида L-Glu/D-Tyr/L-Dab6. PvdL, таким образом, отвечает за синтез трех первых аминокислот прекурсора пиовердина. Взаимодействие белка PvdA с PvdL удивительно, так как PvdL, в отличие от PvdI и PvdJ, не несет модуль, специфичный для L-N5-formyl-N5-гидроксиорнитин. Это взаимодействие предполагает, что все ферменты, ответственные за биосинтез прекурсора пиовердина, расположены в больших переходных и динамическихмногоэнзиматических комплексах 19,20.
В этом докладе мы подробно объяснить, как построить бактериальных штаммов, выражаюющих родной двух взаимодействующих eGFP и mCherry помечены белками. Мы также описываем подготовку образцов и условия для эффективной визуализации клеток FLIM-FRET. Наконец, мы предлагаем пошаговую учебную программу для анализа изображений, включая недавно разработанный инструмент, предоставляющий расширенные возможности визуализации для простого толкования сложных данных FLIM-FRET. С помощью этого доклада мы хотели бы убедить не только предприимчивых, но и большинство биологов в том, что FRET-FLIM является доступным и мощным методом, способным решать свои вопросы о ИЦП непосредственно в родной клеточной среде.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:901px;" width="900">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">525/50 nm band-pass filter</td>
			<td style="width:251px;">F37-516, AHF, Germany</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:186px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">680 nm short pass filter</td>
			<td>F75-680, AHF, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose</td>
			<td style="width:251px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ammonium Sulfate (NH4)2SO4</td>
			<td style="width:251px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DreamTaq DNA polymerase 5U/&#956;L</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>EP0714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">E. coli TOP10</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C404010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fiber-coupled avalanche photo-diode</td>
			<td>SPCM-AQR-14- FC, Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass coverslips (Thickness No. 1.5, 20&#215;20mm</td>
			<td style="width:251px;">Knitel glass</td>
			<td>MS0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">High-Fidelity DNA polymerase Phusion 2U/&#956;L</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>F530S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lysogeny broth (LB)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>1.10285</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Magnesium Sulfate Heptahydrate (MgSO4 . 7H2O)</td>
			<td style="width:251px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>10034-99-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope slides (25&#215;75mm)</td>
			<td style="width:251px;">Knitel glass</td>
			<td>MS0057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NucleoSpin Gel and PCR Clean-up</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>740609.50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NucleoSpin Plasmid</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>740588.10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Phosphate Dibasic (K2HPO4)</td>
			<td style="width:251px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>RES20765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Phosphate Monobasic (KH2PO4)</td>
			<td style="width:251px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Succinate (Disodium)</td>
			<td style="width:251px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>14160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPCImage, SPCM software</td>
			<td>Becker &#38; Hickl</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile inoculating loop</td>
			<td style="width:251px;">Nunc</td>
			<td>7648-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">T4 DNA ligase 1U/&#956;L</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15224017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TCSPC module</td>
			<td>SPC830, Becker &#38; Hickl, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ti:Sapphire laser</td>
			<td>Insight DeepSee, Spectra Physics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tubes 50mL</td>
			<td style="width:251px;">Falcon</td>
			<td style="width:139px;">352070</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flim-fret measurements of protein-protein interactions in live bacteria.

Белково-белковые взаимодействия (ИЦП) контролируют различные ключевые процессы в клетках. Микроскопия флуоресценции в течение всей жизни (FLIM) в сочетании с переносом резонансной энергии Фюрстера (FRET) обеспечивает точную информацию о ИЦП в живых клетках. FLIM-FRET опирается на измерение распада флуоресценции донора FRET на каждом пикселе изображения FLIM, предоставляя количественную и точную информацию о ИЦП и их пространственных клеточных организациях. Мы предлагаем здесь подробный протокол для измерений FLIM-FRET, который мы применили для мониторинга ИЦП в живых Pseudomonas aeruginosa в конкретном случае двух взаимодействующих белков, выраженных с очень разными номерами копий, чтобы продемонстрировать качество и надежность метода при выявлении критических особенностей ИЦП. В этом протоколе подробно описаны все необходимые шаги для характеристики ИЦП - от бактериальных мутантных конструкций до окончательного анализа с использованием недавно разработанных инструментов, обеспечивающих расширенные возможности визуализации для простого толкования сложных данных FLIM-FRET.

Эмпирические кумулятивные функции распределения (ecdf) жизней флуоресценции, измеренные для различных бактериальных штаммов, показаны на рисунке 8. Если ПРОИСХОДИТ ФРЕТ, экдфы смещаются в сторону более короткой продолжительности жизни(рисунок 8A.8B).</st...

Watch this Scientific Journal Video about FLIM-FRET Measurements of Protein-Protein Interactions in Live Bacteria. at JoVE.com

FLIM-FRET Measurements of Protein-Protein Interactions in Live Bacteria.

Мы описываем здесь протокол для характеристики белково-белковых взаимодействий между двумя сильно по-разному выраженными белками в живых Pseudomonas aeruginosa с использованием измерений FLIM-FRET. Протокол включает в себя бактерии штамма конструкций, бактерий иммобилизации, изображений и пост-изображения данных анализа процедур.

FLIM-FRET Измерения белково-белковых взаимодействий в живых бактериях.

Protein-protein interactions (PPIs) control various key processes in cells. Fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM) combined with F&#246;rster ...

FILM-FRET является мощным методом, который позволяет подтвердить предполагаемые или прогнозируемые взаимодействия белка-белка. В этом протоколе мы представляем способ анализа данных в конкретных случаях несбалансированного количества доноров и принимаетеля. FILM-FRET способен предоставлять информацию о белково-белковых взаимодействиях непосредственно в живых клетках.Важно исследовать лично-белковые взаимодействия в родной клеточной среде, в частности, когда флуоресцентный белок выражается в эндогенном уровне. Начните с выращивания P.aeruginosa, E.coli TOP10, и E.coli помощник бактерий каждый из пяти миллилитров LB без антибиотиков при 30 градусов по Цельсию во время встряхивания в одночасье. На следующий день, измерить оптическую плотность культур и смешать равное количество P.aeruginosa, E.coli TOP10 и E.coli помощник в 1,5 миллилитров микротрубки.Центрифуга трубки в течение пяти минут на 9, 300 раз G гранулы бактерий, а затем отказаться от супернатанта и повторно гранулы в 50 микролитров LB. Плита пятно смеси на разогретой LB агар и инкубировать его в течение пяти часов при 37 градусов по Цельсию. После инкубации, соскребать пятно с стерильной петли прививки и повторно его в один миллилитр LB. Плита 100 микролитров этой бактериальной суспензии на LB агар, содержащий 10 микрограммов на миллилитр хлорамфеникол и 30 микрограммов на миллилитр гентамицин и инкубировать два дня при 37 градусах по Цельсию для устранения E.coli TOP10 и E.coli помощник бактерий. Resuspend одной колонии в один миллилитр LB и инкубировать его при 37 градусов по Цельсию с орбитальной тряски в течение четырех часов, а затем центрифугировать трубку в течение трех минут в 9, 300 раз G и отказаться от 950 микролитров супернатанта.Resuspend гранулы в 50 микролитров LB и изолировать смесь на LB агар, содержащий сахарозу и не хлорид натрия. Инкубировать пластину на ночь при 30 градусах по Цельсию. Пятно изолированных колоний на LB агар и LB агар, содержащий 15 миллиграммов на миллилитр гентамицин для того, чтобы проверить на чувствительность гентамицина.Поместите стеклянный слайд микроскопа на плоскую горизонтальную поверхность и расположить два стеклянных слайда, увенчанных двумя слоями клейкой ленты вокруг него. Pipette 70 микролитров капли 1%melted агарозы на стеклянную горку и место четвертой слайд на вершине, чтобы сгладить капли агарозы. Нажмите вниз осторожно в течение минуты.Смей верхнюю горку и урони около трех микролитров бактерий в трех-четырех местах в разных местах на агарозной площадке. Обложка агарозы площадку с микроскопией стеклянной крышкой и исправить его с расплавленным парафином, чтобы запечатать его на стеклянную горку, начиная с четырех углов. Поместите слайд микроскопии на сцену с крышкой перед целью.Поверните башню кубика фильтра, чтобы выбрать кубик eGFP и откройте затвор лампы флуоресценции, а затем отправьте свет флуоресценции к окуляру микроскопа. Сосредоточьте цель на бактериях с помощью ручки микроскопа. Выберите область интереса к образцу с помощью джойстика, который управляет моторизованной стадией.Отправить флуоресценции выбросов путь обратно к детектору, а затем повернуть назад фильтр куб башни, чтобы выбрать дихроический куб для 930 нанометрового лазера и установить мощность лазера до 20 милливатт. Установите размер области интереса до 30 микрометров, которая регулирует напряжение, работающее на зеркалах galvo, и определяет диапазон их движений. Включите детектор и начните сканирование образца.Выберите поле зрения для визуализации, тонко перемещая сцену из компьютерного интерфейса. Это может быть сделано на установку путем перемещения креста на изображение в микроскоп управления программным обеспечением, которое будет определять новый центр изображения и нажатия стадии перемещения. Хорошее поле зрения для приобретения должно содержать от 10 до 30 неподвижных бактерий все в фокусе.Если вы заинтересованы в извлечении одной клетки FILM-FRET данных, убедитесь, что бактерии хорошо индивидуализированы. Откройте программное обеспечение для визуализации и убедитесь, что скорость подсчета фотона не слишком высока, чтобы избежать эффекта накопления, который может повлиять на измерения продолжительности жизни. При необходимости снизить интенсивность лазера, чтобы сохранить скорость подсчета фотона на низком уровне.Отрегулируйте параметры приобретения, включая время сбора приобретения. Нажмите кнопку «Пуск» и дождись завершения приобретения. Для анализа данных откройте RStudio и создайте новый проект.Создайте новую папку в основной папке проекта и назовите ее данными, а затем переместите все файлы анализа в эту папку. Откройте новый файл скрипта или дополнительный скрипт flim_analysis.r. Установите специальный пакет FlimDiagRam для анализа данных о фильмах и позвоните пакету в рабочее пространство.Здесь показаны эмпирические кумулятивные распределительные функции жизней флуоресценции, измеряемые для различных бактериальных штаммов. Если ПРОИСХОДИТ ФРЕТ, функции смещаются в сторону более коротких сроков службы. Важно отметить, что FRET не может произойти, когда взаимодействие двух белков приводит к большому расстоянию между двумя флюрофорами, что нельзя отличить от отсутствия взаимодействия.Таким образом, это может быть необходимо для обозначения белков в разных позициях, чтобы максимизировать шансы зондирования взаимодействия. Из-за большой разницы в выражениях белка между PvdA и PvdL, тот же комплекс не приводит к аналогичным FILM-FRET данных. Несбалансированные стоихиометрии приводят к различиям в вкладе свободных по сравнению с связанными донорами белками в зарегистрированном распределении сроков службы флуоресценции.Сюжет диаграммы может быть использован для предоставления важной информации о стоитиометрии. В pvdA-eGFP mCherry-PvdL мутант, количество доноров помечены PvdA гораздо выше, чем количество mCherry-PvdL. Среди всех доноров, присутствующих в выборке, лишь немногие из них взаимодействуют с PvdL.Одно тау-одно значение, сосредоточенное примерно на 2,3 наносекунды, позволяет предположить, что каждый донор PvdA-eGFP может передаваться только с помощью одного принимаетеля mCherry-PvdL. Когда маркировка обращена вспять, большинство белков eGFP-PvdL, как ожидается, будут взаимодействовать с PvdA-mCherry, что подтверждается более высокими значениями альфа-один. Значения tau одно стали более распределенными предлагая что множественные протеины PvdA могут связать к одному протеину PvdL.Установка FLIM становится доступной во все большем числе объектов визуализации. Образцы изображений в FILM-FRET не сложнее, чем изображения в видео микроскопии.

Research

JoVE Journal

Biology

Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid (MYTH) System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid MYTH System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

Сплит-Убиквитин основе дрожжей Мембрана два-Hybrid (МИФ) Система: Мощный инструмент для выявления белок-белковых взаимодействий

The fundamental biological and clinical importance of integral membrane proteins prompted the development of a yeast-based system for the high-throughput ...

Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions

Микрожидкостных сотрудничества культуре эпителиальных клеток и бактерий по расследованию Растворимый Сигнал-опосредованного взаимодействия

The human gastrointestinal (GI) tract is a unique environment in which intestinal epithelial cells and non-pathogenic (commensal) bacteria coexist. It has ...

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

В естественных условиях обнаружения белок-белковых взаимодействий на микро-узорной поверхности

Unraveling the interaction network of molecules in-vivo is key to understanding the mechanisms that regulate cell function and metabolism. A multitude of ...

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Изображениями белок-белковых взаимодействий В естественных условиях</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

Белок-белковых взаимодействий визуализируется бимолекулярного флуоресценции комплементации табачными протопластов и листья

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Исследование белок-белковых взаимодействий в живых клетках с помощью биолюминесценции резонансный перенос энергии

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy (f3D-SIM)

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy f3D-SIM

Супер-Resolution Imaging из Cytokinetic Z Кольцо в живых бактерий Использование быстрого 3D-Structured Illumination микроскопии (F3D-SIM)

Imaging of biological samples using fluorescence microscopy has advanced substantially with new technologies to overcome the resolution barrier of the ...

Probing High-density Functional Protein Microarrays to Detect Protein-protein Interactions

Исследование высокой плотности белковых Функциональные Microarrays для обнаружения белок-белковых взаимодействий

High-density functional protein microarrays containing ~4,200 recombinant yeast proteins are examined for kinase protein-protein interactions using an ...

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance (SPR)

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance SPR

В режиме реального времени измерения мембранного белка: рецептор взаимодействий с использованием поверхностного плазмонного резонанса (SPR)

Protein-protein interactions are pivotal to most, if not all, physiological processes, and  understanding the nature of such interactions is a central ...