Name: murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis
Uploaded: 2020-08-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis at JoVE.com

ونحن ممتنون لجميع أعضاء مختبر دونوالد الذين ساهموا في تحسين هذا البروتوكول على مر السنين، ولجينا شاتيمان التي جعلت إصرارها في تعزيز استخدام قسم المسلسل لتحليل الجروح من الممكن إنشائها. وقد تم دعم هذا العمل بتمويل من المعاهد القومية للصحة/NIAMS إلى مارتين دونوالد (AR067739).

وقد تم الانتهاء من جميع التجارب وفقا للأنظمة الاتحادية وسياسة جامعة ايوا والإجراءات التي وافقت عليها جامعة ايوا IACUC.
1- الحيوانات وتربية الحيوانات
<ol><li>استخدام الفئران الكبار من خط الماوس المطلوب في 8-10 أسابيع من العمر عندما تكون مرحلة بصيلات الشعر في telogen.</li>
	<li>في يوم الجرا...

<ol>
	<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration:+mechanisms,+signaling,+and+translation.">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li><li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-scale+coordination+of+cellular+behaviour+promotes+epidermal+wound+repair+in+live+mice.">Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice.</a> Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li><li>Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+murine+incisional+and+excisional+acute+wound+models.">A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models.</a> Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).</li><li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modeling+Conundrum:+Murine+Models+for+Cutaneous+Wound+Healing.">A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li><li>Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+immunodeficient+TGF-beta+1+knockout+mice.">Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).</li><li>Pietramaggiori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cutaneous+healing+in+diabetic+mice+exposed+to+healthy+peripheral+circulation.">Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation.</a> Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).</li><li>Cold Spring Harbor. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraformaldehyde+in+PBS.">Paraformaldehyde in PBS.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 1 (1), (2006).</li><li>Gerharz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+analysis+of+murine+skin+wound+healing:+standardization+of+experimental+procedures+and+impact+of+an+advanced+multitissue+array+technique.">Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique.</a> Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).</li><li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wounds+in+the+MRL/MPJ+mouse+heal+with+scar.">Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar.</a> Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).</li><li>Le, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor+beta+3+is+required+for+proper+excisional+wound+repair+in+vivo.">Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo.</a> PLoS One. 7 (10), 48040 (2012).</li><li>Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+healing+mediated+by+activation+of+Toll-like+receptor+9.">Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9.</a> Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair:+a+showcase+for+cell+plasticity+and+migration.">Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).</li><li>Hoffman, M., Monroe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+intensity+laser+therapy+speeds+wound+healing+in+hemophilia+by+enhancing+platelet+procoagulant+activity.">Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity.</a> Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Uchiyama, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2+Epidermal+Overexpression+Promotes+Cutaneous+Wound+Healing+via+Activation+of+EGFR/MEK/ERK+Signaling+Mediated+by+EGFR+Ligands.">SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).</li><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Rhea, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+regulatory+factor+6+is+required+for+proper+wound+healing+in+vivo.">Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo.</a> Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).</li></ol>

نموذج الجرح الختان الثنائي هو إجراء قابل للتخصيص للغاية والذي يمكن استخدامه لدراسة العديد من الجوانب المختلفة لتضميد الجروح. قبل البدء في مشروع التئام الجروح، يجب على المحققين إجراء تحليل للطاقة لتحديد عدد الجروح اللازمة للكشف عن عيب في حجم تأثير معين. توجد تناقضات داخل الأدبيات حول ما إ...

التئام الجروح الجلدية هو عملية بيولوجية معقدة مع مراحل متداخلة بالتتابع. وهو يتطلب تنسيق العمليات الخلوية والجزيئية التي يتم تنظيمها زمانيا ومكانيا من أجل استعادة وظيفة الحاجز للظهارة التالفة. في المرحلة الأولى، الالتهاب، العدلات والظامة تهاجر إلى الجرح، وحشد الدفاعات المحلية والنظامية1. وبعد المرحلة التحريضية وتداخلها هي مرحلة الانتشار. تبدأ الخلايا الليفية في الانتشار بسرعة والهجرة إلى أنسجة التحبيب. Keratinocytes بعيدا عن الحافة الرائدة تتكاثر اتجاهها نحو الجرح كما keratinocytes متباينة في الحافة الرائدة تهاجر لإعادة الظهارة الجرح2. وأخيرا، تبدأ مرحلة إعادة عرض ونضج، خلالها الخلايا الليفية في الأنسجة الحبيبية بدء توليف وإيداع الكولاجين. إعادة عرض وتنظيم المصفوفة الجديدة يمكن أن تستمر حتى 1 سنة بعد الإصابة3. بسبب تعقيد الأحداث المتداخلة التي تنطوي على عبر الحديث بين أنواع الخلايا المتعددة، وعلى الرغم من سنوات من البحث، العديد من الآليات الخلوية والجزيئية الكامنة التئام الجروح لا تزال غير مفهومة.
نموذج الفأر هو نموذج الثدييات السائدة للتحقيق في آليات التئام الجروح نظرا لسهولة استخدامها، وانخفاض التكلفة نسبيا و المنقلبية الوراثية1،4،5. على الرغم من أن أنواع مختلفة من الجروح قد وصفت في نموذج مورين, الأكثر شيوعا هو جرح ختان (إما لكمة ثنائية أو خزعة لكمة مباشرة), تليها نماذج الجرح شقي4. نموذج الجرح الختان له ميزة متميزة على نموذج شقي كما أنه يولد بطبيعته الأنسجة السيطرة التي لم تخضع لعملية الشفاء. يمكن معالجة نسيج الخزعة التي يتم استئصالها كجزء من البروتوكول الجراحي بنفس الطريقة التي تتم بها معالجة الأنسجة المجروحة واستخدامها لتحديد الظروف المثلية للمعيار المطلوب. قد تكون أنسجة التحكم المُخَلَّة مفيدة أيضًا إذا قيّم آثار المعالجة المسبقة للجلد أو تأكيد التغيير الجيني الناجح في وقت الإصابة4.
يمكن تقييم المعلمات الشفاء من خلال العديد من التقنيات المختلفة، بما في ذلك قياس الألواح أو علم الأنسجة. ومع ذلك ، يمكن تقييم المقاييس فقط تقييم الخصائص المرئية للجرح ، وبسبب وجود الجرب ، في كثير من الأحيان لا يرتبط بقياسات الشفاء التي تصورها الأنسجة ، مما يجعل علم الأنسجة "المعيار الذهبي" للتحليل4. على الرغم من التحليل النسيجي كونه معيار الذهب، وغالبا ما يتم تنفيذها على مجموعة فرعية تعسفية من الجرح6،7. على سبيل المثال، قطع الجرح في "نصف" قبل تضمين وقسمة الجرح هو حاليا ممارسة شائعة للحد من الوقت والموارد التي تنفق على مواد القسم وتحليل البيانات. وقد تم تطوير طريقة تحليل morphometric الموصوفة في هذا البروتوكول لتشمل كامل أنسجة الجرح، لتعكس بدقة الخصائص المورفولوجية للجرح، وزيادة احتمال الكشف عن عيوب التئام الجروح ذات الحجم الصغير. في هذا البروتوكول، ونحن بالتفصيل طريقة جراحية لتوليد الجرح مورين الأكثر شيوعا درس، والثنائية كامل سمك الجرح الختان، فضلا عن طريقة مفصلة وصارمة لتحليل النسيجية نادرا ما تستخدم في هذا المجال.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep</td>
			<td>NOVAPLUS</td>
			<td>V9100</td>
			<td>70% Isopropyl alcohol, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy pads</td>
			<td>Cellpath</td>
			<td>22-222-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black plastic sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Something firm yet manipulatable about the size of a sheet of paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brightfield microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>With digital acquisition capabilities and a 4X objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 60 #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental wax sheets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Include a ruler for scale, if applicable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection teasing needle (straight)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding molds</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 22 x 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding rings</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Conair</td>
			<td></td>
			<td>Moist dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brushes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Type 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing cassette</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M490-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>ASR</td>
			<td></td>
			<td>.009 Regular Duty</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punches</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Size as determined by researcher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide boxes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrosted microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 037 246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature control water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue embedding station</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a paraffin dispenser and a cold plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a oven with a vacuum pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic opthalmic ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, tapered tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WypAll X60</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34865</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis

وقد استخدم نموذج الجرح استئصال المورين على نطاق واسع لدراسة كل من المراحل المتداخلة بالتتابع من التئام الجروح: التهاب, انتشار وإعادة عرض. يتلقّى مورين جروح هدّم جيّدا نوعيّة جيّدا ويمكن التعرف على سرير جرح على أيّ هذا مراحل مختلفة من ال يشفي عملية يكون قابل للقياس. داخل الحقل، من الشائع استخدام "وسط" محدد بشكل تعسفي للجرح لإجراء تحليلات النسيج. ومع ذلك، فإن الجروح هي كيان ثلاثي الأبعاد وغالباً ما لا تكون متماثلة من الناحية النسيجية، مما يدعم الحاجة إلى طريقة واضحة المعالم وقوية للقياس الكمي للكشف عن عيوب المورفوميتري ذات الحجم الصغير للتأثير. في هذا البروتوكول، نحن وصف الإجراء لإنشاء الثنائية، كامل سمك الجروح الختان في الفئران، فضلا عن تعليمات مفصلة حول كيفية قياس معلمات morphometric باستخدام برنامج معالجة الصور على أقسام تسلسلية مختارة. وتستخدم قياسات البعدين لطول الجرح، وطول البشرة، ومنطقة البشرة، ومنطقة الجرح بالاقتران مع المسافة المعروفة بين الأقسام لاستقراء منطقة البشرة ذات الأبعاد الثلاثة التي تغطي الجرح، ومنطقة الجرح العام، وحجم البشرة وحجم الجرح. على الرغم من أن هذا التحليل النسيجي التفصيلي يستهلك الوقت والموارد أكثر من التحليلات التقليدية ، فإن دقته تزيد من احتمال اكتشاف الأنماط الظاهرية الجديدة في عملية شفاء الجروح المعقدة بطبيعتها.

5- يصور الشكل 5 النطاق في القيم المقاسة والمحسوبة التي تم الحصول عليها من خلال إجراء تحليل مُرفومتري على الجروح البرية التي تُولَّد في سلالات ماوس مختلفة من قبل جراحين متعددين وتحليلها من قبل أفراد مختلفين. يمكن للفئران البرية من نوع من سلالات مختلفة عرض الاختلافات الإحصائ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis at JoVE.com

Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

يصف هذا البروتوكول كيفية توليد الجروح الثنائية ذات السماكة الكاملة في الفئران وكيفية مراقبة الجروح وحصدها وإعدادها لتحليلها. يتضمن وصفاً متعمقاً لكيفية استخدام أقسام النسيج التسلسلية لتحديد عيوب المورفوميات وتحديدها بدقة والكشف عنها.

مورين استئصال الجروح التئام نموذج وتحليل الجروح الفسطولوجي

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

يستخدم هذا البروتوكول التحليل النسيجي للحصول على قياسات مورفومية قوية لجروح ختان الماوس. باستخدام هذه التقنية، يمكننا تحليل الجرح بأكمله باستخدام مجموعة فرعية من المقاطع التسلسلية، مما يسمح لنا بالكشف بشكل أكثر دقة عن العيوب التي قد لا يمكن تفويتها. إثبات الإجراء سيكون ليندسي ريا، باحث مشارك من مختبري.بعد التأكد من عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في الماوس الكبار تخدير، وتطبيق مرهم على عيون الحيوان واستخدام مقص الحلاقة الكهربائية في حركة caudal-rostral لإزالة الفراء على الجزء الخلفي من الماوس على مستوى الكتف. استخدام شفرة الحلاقة التي عقدت في زاوية 20 درجة من الخلف في حركة rostral-caudal لإزالة أي الشعر المتبقية من الجلد المكشوف، ثم تنظيف الجلد مع اليود povidone واحد واحد 70٪ isopropyl الكحول الإعدادية مسح وسادة. لتحريض الجرح، ستائر منشفة نظيفة على ورقة على سطح مستو مغطاة بالشمع الأسنان ووضع الماوس على منشفة في موقف عرضة.قرصة جلد الماوس بين ريش الكتف على طول خط الوسط الظهر وسحب الجلد تقع أضعاف بعيدا عن الجسم. تحويل الماوس إلى وضعية جانبية، وضع لكمة خزعة من حجم الجرح المطلوب أقرب إلى الجسم قدر الإمكان والسماح للبشرة الاسترخاء. اضغط لأسفل على لكمة باستخدام حركة هزاز لثقب جميع طبقات الجلد وإزالة الخزعات لكمة من الجرح باستخدام مقص معقم وملاقط لتحرير لكمة من الجلد المحيطة بها عند الضرورة.ثم تسمح للماوس لاسترداد مع الرصد وال مسكن. لتحليل morphometric من سرير الجرح، وفتح صورة الجرح الملون الرقمية. لتعيين تفضيلات المقياس والقياس، ضمن تحليل، حدد تعيين مقياس وأدخل المسافة بالبكسل والمسافة المعروفة ووحدة الطول.حدد العمومية و موافق للاحتفاظ بالمقياس نفسه لكل صورة مفتوحة وحدد تحليل و تعيين قياسات للتأكد من تحديد خانة المنطقة. لقياس طول الجرح، حدد حر، واستخدام أداة لتتبع على طول تقاطع الجلد البشرة، بدءا من بصيلات الشعر الأخيرة من الأنسجة غير المصابة على جانب واحد من الجرح إلى بصيلات الشعر الأولى من الأنسجة غير المصابة على الجانب الآخر. إذا لم تغطي البشرة الجرح بأكمله ، فاتبع تقاطع البشرة الجلدي على جانب واحد من الجرح حيث ينتهي اللسان المهاجر ويستمر في متابعة الجانب المتفوق من أنسجة التحبيب أو التقاطع بين أنسجة التحبيب والجرب حتى يتم الوصول إلى اللسان المهاجر وجريب الشعر الأول من الأنسجة غير المصابة على الجانب الآخر من الجرح.ثم انقر فوق تحليل وقياس. سيظهر طول القياس في نفس الوحدات كما هو مُحدد في المقياس. إذا لم يغطي البشرة الجرح بأكمله، قم بقياس المسافة بين كل حافة رائدة للبشرة تتبع الجانب المتفوق من نسيج التحبيب أو الوصل بين أنسجة التحبيب والجرب إلى بصيلات الشعر الأولى.لقياس منطقة الجرح، استخدم أداة اليد الحرة لتتبع على طول الجانب المتفوق من البشرة أو الجانب المتفوق من نسيج التحبيب بدءا من بصيلات الشعر الأخيرة من الأنسجة غير المصابة على جانب واحد من الجرح إلى بصيلات الشعر الأولى من الأنسجة غير المصابة على الجانب الآخر. الاستمرار في تتبع عموديا على طول بصيلات الشعر في أنسجة التحبيب. مرة واحدة يتم التوصل إلى بصيلات الشعر المقابلة والأنسجة الدهنية أو العضلات، اتبع الحدود السفلية من أنسجة التحبيب إلى الجانب الآخر من الجرح والانضمام إلى نقطة البداية على طول بصيلات الشعر لإغلاق المنطقة.إذا لم يكن الجرح ظهاراً كاملاً، فتتبعه على طول الجانب المتفوق من البشرة حتى الحافة الرائدة واعود إلى نقطة البداية التالية لتقاطع البشرة الجلدي. كما هو موضح، عند أخذ قياسات 2D في جميع أنحاء الجرح بأكمله، كنا قادرين على حساب المعلمات غير ممكن مع تحليل 2D على منتصف الجرح فقط، وهو أسلوب شائع الاستخدام في هذا المجال. في هذه التجربة، استخدمت قياسات 2D لمنطقة الجرح ومتوسط على الجرح كله أو مجموعة فرعية الأوسط من الجرح وكشفت عن أي فرق كبير بين المجموعات التجريبية أو طرق التحليل.غير أن حجم الجرح المحسوب كان مختلفاً اختلافاً كبيراً بين المجموعات التجريبية، مما يدل على أهمية التحليل النسيجي المتعمق لبارامترات التئام الجروح. إن توليد جروح ذات حجم ثابت للتحليل النسيجي وإجراء أقسام تسلسلية صارمة أمران حاسمان لتحليل دقيق للمورفوميات. يمكن استخدام الأقسام غير الملطخة للفلوروس المناعية أو تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان لقياس جوانب أخرى من التئام الجروح بينما يمكن استخدام الجروح المجمدة إلى جانب القياس المرفّع للتحليل الكمي للبروتين.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

الزرد خلية قرنية إإكسبلنتس لدراسة الهجرة الجماعية خلية وعودة التظهرن في شفاء الجروح الجلدية

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

الكمي الآلي للخلية المكونة للدم - التفاعلات خلية انسجة في صور النسيجية من Undecalcified العظام

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

إنشاء ذات الصلة سريريا<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; موك الساد نموذج جراحة للتحقيق الظهارية إصلاح الجرح في المكروية الأم

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

تعظيم الاستفادة من الفحص الجرح خدش للكشف عن تغيرات في الفئران الوسيطة اللحمية الهجرة الخلية بعد الأضرار التي كتبها القابلة للذوبان استخراج دخان السجائر

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

العلاج الجيني الفيروسة الغدانية لمرضى السكري اعتلال القرنية: التأثيرات على شفاء الجروح ووقف علامة الخلية التعبير في الإنسان القرنيات الجهاز مثقف والخلايا الظهارية الحوفي

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

ثقافة الفئران الجنينية الأمشاط: نموذج الفسيولوجي من غضروفي التعظم

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

عزل السريع لBMPR-IB + الدهنية المشتقة الخلايا اللحمية للاستخدام في قبي عيب شفاء نموذج

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

جهاز لأداء الهجرة خلية / شفاء الجروح في لوحة 96-حسنا

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

التحاليل النسيجية لإصابات الكبد الكحولية الحادة في الزرد

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

تحليل التفاعلات البروتين البروتين والمشاركة في توطين بين مكونات الفجوة، ضيق، والمالطيون تقاطعات في الغدد الثديية الفئران

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...