Name: murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis
Uploaded: 2020-08-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis at JoVE.com

Vi er takknemlige til alle medlemmene av Dunnwald Lab som har bidratt til optimalisering av denne protokollen gjennom årene, og til Gina Schatteman hvis utholdenhet i å fremme bruk av seriell seksjonering for såranalyse gjorde etableringen mulig. Dette arbeidet ble støttet av finansiering fra NIH/NIAMS til Martine Dunnwald (AR067739).

Alle eksperimenter ble fullført i samsvar med og overholdelse av føderale forskrifter og University of Iowa politikk og prosedyrer har blitt godkjent av University of Iowa IACUC.
1. Dyr og husdyrhold
<ol><li>Bruk voksne mus av ønsket muselinje ved 8-10 ukers alder når hårsekken scenen er i telogen.</li>
	<li>På operasjonsdagen skiller du mus i rene bur og individuelt hus for å minimere sårforstyrrelser.</li>
</ol>2. Kirurgi
MERK: Det ...

<ol>
	<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration:+mechanisms,+signaling,+and+translation.">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li><li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-scale+coordination+of+cellular+behaviour+promotes+epidermal+wound+repair+in+live+mice.">Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice.</a> Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li><li>Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+murine+incisional+and+excisional+acute+wound+models.">A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models.</a> Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).</li><li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modeling+Conundrum:+Murine+Models+for+Cutaneous+Wound+Healing.">A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li><li>Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+immunodeficient+TGF-beta+1+knockout+mice.">Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).</li><li>Pietramaggiori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cutaneous+healing+in+diabetic+mice+exposed+to+healthy+peripheral+circulation.">Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation.</a> Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).</li><li>Cold Spring Harbor. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraformaldehyde+in+PBS.">Paraformaldehyde in PBS.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 1 (1), (2006).</li><li>Gerharz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+analysis+of+murine+skin+wound+healing:+standardization+of+experimental+procedures+and+impact+of+an+advanced+multitissue+array+technique.">Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique.</a> Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).</li><li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wounds+in+the+MRL/MPJ+mouse+heal+with+scar.">Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar.</a> Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).</li><li>Le, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor+beta+3+is+required+for+proper+excisional+wound+repair+in+vivo.">Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo.</a> PLoS One. 7 (10), 48040 (2012).</li><li>Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+healing+mediated+by+activation+of+Toll-like+receptor+9.">Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9.</a> Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair:+a+showcase+for+cell+plasticity+and+migration.">Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).</li><li>Hoffman, M., Monroe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+intensity+laser+therapy+speeds+wound+healing+in+hemophilia+by+enhancing+platelet+procoagulant+activity.">Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity.</a> Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Uchiyama, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2+Epidermal+Overexpression+Promotes+Cutaneous+Wound+Healing+via+Activation+of+EGFR/MEK/ERK+Signaling+Mediated+by+EGFR+Ligands.">SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).</li><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Rhea, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+regulatory+factor+6+is+required+for+proper+wound+healing+in+vivo.">Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo.</a> Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).</li></ol>

Den bilaterale eksisjonelle sårmodellen er en svært tilpassbar prosedyre som kan brukes til å studere mange forskjellige aspekter ved sårheling. Før du begynner et sårhelingsprosjekt, bør etterforskerne utføre en kraftanalyse for å bestemme antall sår som trengs for å oppdage en defekt av en bestemt effektstørrelse. Det finnes uoverensstemmelser i litteraturen om hvorvidt individuelle mus eller sår skal brukes som biologiske repliker, men en fersk studie viste at det ikke er noen signifikant sammenheng mello...

Kutan sårheling er en kompleks biologisk prosess med sekvensielt overlappende faser. Det krever koordinering av cellulære og molekylære prosesser som er timelig og romlig regulert for å gjenopprette barrierefunksjonen til det skadede epitelet. I den første fasen migrerer betennelse, nøytrofiler og makrofager inn i såret, mobiliserer lokalt og systemisk forsvar1. Etter og overlappende den inflammatoriske fasen er spredningsstadiet. Fibroblaster begynner raskt å spre seg og migrere inn i granuleringsvevet. Keratinocytes bort fra forkant retningsbestemt spre seg mot såret som differensierte keratinocytter i forkant migrere for å re-epitelialisere såret2. Til slutt begynner ombyggings- og modningsfasen, hvor fibroblaster i granuleringsvevet begynner å syntetisere og deponere kollagen. Ombygging og organisering av den nye matrisen kan vare opptil 1 år etter skade3. På grunn av kompleksiteten av overlappende hendelser som involverer kryss-snakk mellom flere celletyper, og til tross for år med forskning, forblir mange av de cellulære og molekylære mekanismene underliggende sårheling dårlig forstått.
Musemodellen er den dominerende pattedyrmodellen for å undersøke mekanismer for sårheling på grunn av deres brukervennlighet, relativt lave kostnader og genetiskmanipulabilitet 1,4,5. Selv om ulike typer sår har blitt beskrevet i murine-modellen, er det vanligste et eksisjonelt sår (enten bilateral punch eller direkte punch biopsi), etterfulgt av snittsårmodeller4. Den eksisjonelle sårmodellen har en klar fordel over snittmodellen som det iboende genererer kontrollvev som ikke har gjennomgått helbredelsesprosessen. Punch biopsivevet som er utskåret som en del av den kirurgiske protokollen, kan behandles på samme måte som det sårede vevet og brukes til å etablere de homeostatiske forholdene for et ønsket kriterium. Utskåret kontrollvev kan også være nyttig hvis man vurderer effekten av en hudforbehandling eller bekrefter vellykket genendring på skadestedet4.
Healing parametere kan vurderes ved mange forskjellige teknikker, inkludert planimetry eller histologi. Imidlertid kan planimetry bare evaluere synlige egenskaper av såret, og på grunn av tilstedeværelsen av en scab, ofte ikke korrelerer med målinger av helbredelse som visualiseres ved histologi, og dermed gjør histologi til "gullstandarden" av analyse4. Til tross for at histologisk analyse er gullstandarden, utføres den oftest på en vilkårlig undergruppe av såret6,7. For eksempel er det for tiden vanlig å kutte såret i "halvparten" før innebygging og snitting av såret for å redusere tid og ressurser brukt på snitting av materialer og dataanalyse. Metoden for morfometrisk analyse beskrevet i denne protokollen ble utviklet for å omfatte hele sårvevet, for å nøyaktig reflektere sårmorfologiske egenskaper, og for å øke sannsynligheten for å oppdage sårhelende defekter med en liten effektstørrelse. I denne protokollen beskriver vi en kirurgisk metode for å generere det mest studerte murine såret, det bilaterale fulltykkelsessåret, samt en detaljert og streng metode for histologisk analyse som sjelden brukes i feltet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep</td>
			<td>NOVAPLUS</td>
			<td>V9100</td>
			<td>70% Isopropyl alcohol, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy pads</td>
			<td>Cellpath</td>
			<td>22-222-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black plastic sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Something firm yet manipulatable about the size of a sheet of paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brightfield microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>With digital acquisition capabilities and a 4X objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 60 #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental wax sheets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Include a ruler for scale, if applicable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection teasing needle (straight)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding molds</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 22 x 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding rings</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Conair</td>
			<td></td>
			<td>Moist dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brushes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Type 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing cassette</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M490-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>ASR</td>
			<td></td>
			<td>.009 Regular Duty</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punches</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Size as determined by researcher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide boxes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrosted microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 037 246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature control water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue embedding station</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a paraffin dispenser and a cold plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a oven with a vacuum pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic opthalmic ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, tapered tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WypAll X60</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34865</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis

Murine excisional wound modellen har blitt brukt mye for å studere hver av de sekvensielt overlappende faser av sårheling: betennelse, spredning og ombygging. Murine sår har en histologisk veldefinert og lett gjenkjennelig sårseng over hvilke disse forskjellige fasene av helbredelsesprosessen er målbare. Innenfor feltet er det vanlig å bruke en vilkårlig definert "midten" av såret for histologiske analyser. Imidlertid er sår en tredimensjonal enhet og ofte ikke histologisk symmetrisk, som støtter behovet for en veldefinert og robust kvantifiseringsmetode for å oppdage morfometriske defekter med liten effektstørrelse. I denne protokollen beskriver vi prosedyren for å lage bilaterale, fulltykkelse eksisjonelle sår hos mus, samt en detaljert instruksjon om hvordan man måler morfometriske parametere ved hjelp av et bildebehandlingsprogram på utvalgte serielle seksjoner. De todimensjonsmålingene av sårlengde, epidermal lengde, epidermal område og sårområde brukes i kombinasjon med den kjente avstanden mellom seksjoner for å ekstrapolere det tredimensjonale epidermale området som dekker såret, det generelle sårområdet, epidermalvolum og sårvolum. Selv om denne detaljerte histologiske analysen er mer tids- og ressurskrevende enn konvensjonelle analyser, øker strengheten sannsynligheten for å oppdage nye fenotyper i en iboende kompleks sårhelingsprosess.

Figur 5 viser området i målte og beregnede verdier oppnådd ved å utføre morfometrisk analyse på villtype sår generert i forskjellige musestammer av flere kirurger og analysert av forskjellige individer. Villtype mus fra forskjellige stammer kan vise statistiske forskjeller som beskrevet både i våre studier og ilitteraturen 9,10. Basert på disse representative resultatene anbefaler vi at i løpet av en studie brukes mus fra ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis at JoVE.com

Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

Denne protokollen beskriver hvordan man genererer bilaterale, fulltykkelsessår hos mus og hvordan man senere overvåker, høster og forbereder sårene for morfometrisk analyse. Inkludert er en grundig beskrivelse av hvordan du bruker serielle histologiske seksjoner til å definere, nøyaktig kvantifisere og oppdage morfometriske defekter.

Murine Excisional Wound Healing Modell og histologisk morfometrisk såranalyse

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

Denne protokollen bruker histologisk analyse for å oppnå robuste morfometriske målinger av mus eksisjonelle sår. Ved hjelp av denne teknikken kan vi analysere hele såret ved hjelp av et delsett av serielle seksjoner, slik at vi kan oppdage feil som ellers kunne gå glipp av. Å demonstrere prosedyren vil være Lindsey Rhea, en forskningsmedarbeider fra laboratoriet mitt.Etter å ha bekreftet mangel på respons på pedalrefleks i en bedøvet voksen mus, bruk salve på dyrets øyne og bruk en elektrisk barberhøvelklipper i en caudal-rostral bevegelse for å fjerne pelsen på baksiden av musen på skuldernivå. Bruk et barberblad holdt i en 20 graders vinkel fra baksiden i en rostral-caudal bevegelse for å fjerne gjenværende hår fra den eksponerte huden, og rengjør deretter huden med ett povidone jod og en 70% isopropylalkohol prep pad tørk. For sårinduksjon, draper et rent papirbasert håndkle på en flat overflate dekket med tannvoks og plasser musen på håndkleet i utsatt stilling.Klyp musens hud mellom skulderbladene langs den dorsale midtlinjen og trekk den sandwichede huden fold bort fra kroppen. Bytte musen til en sideliggende posisjon, plasser en biopsi punch av ønsket sårstørrelse så nær kroppen som mulig og la huden slappe av. Trykk ned på slaget ved hjelp av en gyngebevegelse for å punktere alle lagene i huden og fjerne punch biopsier fra såret ved hjelp av steril saks og pinsett for å frigjøre slaget fra den omkringliggende huden etter behov.La deretter musen gjenopprette med overvåking og analgesi. For morfometrisk analyse av sårsengen, åpne et digitalt farget sårbilde. Hvis du vil angi skala- og måleinnstillinger, velger du Angi skalering under Analyser, og angir avstanden i piksler, den kjente avstanden og lengdeenheten.Velg Global og OK for å beholde skalaen den samme for hvert åpne bilde, og velg Analyser og angi målinger for å bekrefte at det er merket av i områdeboksen. For å måle sårlengden, velg frihånd, og bruk verktøyet til å spore langs det dermal-epidermale krysset, fra den siste hårsekken av det uskadede vevet på den ene siden av såret til den første hårsekken av det uskadede vevet på den andre siden. Hvis epidermis ikke dekker hele såret, følg dermal-epidermal krysset på den ene siden av såret der den migrerende tungen slutter og fortsetter å følge det overlegne aspektet av granuleringsvevet eller krysset mellom granuleringsvevet og scab til den migrerende tungen og den første hårsekken til det uskadede vevet på den andre siden av såret er nådd.Klikk deretter Analyser og mål. Lengden på målingen vises i de samme enhetene som angitt i skalaen. Hvis epidermis ikke dekker hele såret, mål avstanden mellom hver epidermal forkant etter det overlegne aspektet av granuleringvevet eller krysset mellom granuleringsvevet og scab til den første hårsekken.For å måle sårområdet, bruk frihåndsverktøyet til å spore langs det overlegne aspektet av epidermis eller det overlegne aspektet av granuleringsvevet som starter fra det siste hårsekken av det uskadede vevet på den ene siden av såret til den første hårsekken av det uskadede vevet på den andre siden. Fortsett å spore vertikalt langs hårsekken inn i granuleringsvevet. Når den motsatte hårsekken og fettvev eller muskel er nådd, følg den underlegne grensen til granuleringsvevet til motsatt side av såret og bli med i utgangspunktet langs hårsekken for å lukke området.Hvis såret ikke er fullstendig epitelialisert, spor langs det overlegne aspektet av epidermis til forkant og gå tilbake til utgangspunktet etter dermal-epidermal krysset. Som illustrert, når vi tok 2D-målinger gjennom hele såret, var vi i stand til å beregne parametere som ikke er mulige med 2D-analyse kun på midten av såret, som er en vanlig metode i feltet. I dette eksperimentet ble 2D-målinger av sårområdet brukt og i gjennomsnitt over hele såret eller en midtre undergruppe av såret og viste ingen signifikant forskjell mellom eksperimentelle grupper eller analysemetoder.Det beregnede sårvolumet var imidlertid betydelig forskjellig mellom de eksperimentelle gruppene, noe som viste viktigheten av en grundig histologisk analyse av sårhelingsparametere. Generering av konsekvent store sår for histologisk analyse og utføre streng seriell snitting er avgjørende for en nøyaktig morfometrisk analyse. Ustinentinerte seksjoner kan brukes til immunofluorescence eller Massons trichrome farging for å måle andre aspekter ved sårheling mens flash frosne sår kan brukes sammen med morphometry for kvantitativ proteinanalyse.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Sebrafisk Keratocyte eksplantater å studere Collective Cell Migrasjon og reepithelialization i Kutan Wound Healing

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automatisert Kvantifisering av Hematopoietiske Cell - stromal Cell Samhandling i Histologiske Bilder av Undecalcified Bone

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Etablering av en klinisk relevant<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock Cataract Surgery Modell for Gransker Epithelial Wound Reparasjon i Native mikromiljøet

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Optimalisering av Wound Scratch analysen å oppdage endringer i Murint Mesenchymale stromal Cell Migration Etter Skade ved Løselig sigarettrøyk Extract

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenoviral Gene Therapy for diabetiker keratopathy: Effekter på sårtilheling og stamcelle Marker uttrykk i Menneskerettighets Organ-dyrkede hornhinner og limbale Epitelceller

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

Culture of Murine embryonale metatarsals: en fysiologisk modell av endochondral Forbening

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

Rapid Isolering av BMPR-IB + adipose-avledet stromale celler for bruk i en Calvarial Defect Healing Model

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

En enhet for utøvende Cell migrasjon / Wound Healing i en 96-brønns plate

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

Histologiske analyser av akutt alkoholskader i sebrafisk

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

Analyse av protein-protein-interaksjoner og samlokalisering mellom komponenter av gap-, tett- og adherens-junks i murine mammarykjertler

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...