Name: gm-free generation of blood-derived neuronal cells
Uploaded: 2021-02-13T13:00:00
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라이너 사프리치 박사의 기억력에 전념합니다.
저자는 특히 호세 마누엘 가르시아 베르두고와 비센테 헤르란츠-페레즈가 비교 신경생물학 연구소, 생물 다양성 및 진화 생물학 연구소, 발렌시아 대학, CIBERNED, 발렌시아, 스페인에서 EM 실험 및 분석을 수행한 것에 대해 특히 감사하고 있으며, 이는 Prometeo Grant의 연구 자금 지원으로 지원되었다. 이 작품의 나머지 는 ACA 셀 생명 공학 GmbH 하이델베르크, 독일에 의해 지원되었다.

실험을 수행할 때 윤리 승인을 얻었다.
1. 인간 말초 혈액 단핵 세포의 분리 (PBMC)
<ol><li>모든 기부자가 기관 지침에 따라 혈액을 철회하기 전에 정보에 입각한 동의서에 서명하도록 하십시오.</li>
	<li>표준 프로토콜에 따라 숙련 된 의료 인력에 의해 건강한 기증자로부터 30 mL의 혈액을 가져 가라.</li>
	<li>밀도 그라데이션 미디어를 통해 PBMC를 분리합니다. 인산염 완충식염(PBS)?...

<ol>
	<li>Peng, J., Zeng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+in+Regenerative+Medicine:+Neurodegenerative+Diseases.">The Role of Induced Pluripotent Stem Cells in Regenerative Medicine: Neurodegenerative Diseases.</a> Stem Cell Research and Therapy. 2 (4), 32 (2011).</li><li>Sorells, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hippocampal+neurogenesis+drops+sharply+in+children+to+undetectable+levels+in+adults.">Human hippocampal neurogenesis drops sharply in children to undetectable levels in adults.</a> Nature. 555 (7696), 377-381 (2018).</li><li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+Stem+Cell+Lines+Derived+from+Human+Blastocysts.">Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts.</a> Science. 282 (5391), 1145-1147 (1998).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+From+Adult+Human+Fibroblast+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells From Adult Human Fibroblast by Defined Factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li><li>Liu, G. -. H., Yi, F., Suzuki, K., Qu, J., Izpisua Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+neural+stem+cells:+a+new+tool+for+studying+neural+development+and+neurological+disorders.">Induced neural stem cells: a new tool for studying neural development and neurological disorders.</a> Cell Research. 22 (7), 1087-1091 (2012).</li><li>Becker-Koji&#263;, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+by+ACA+Induces+Pluripotency+in+Human+Blood+Progenitor+Cells.">Activation by ACA Induces Pluripotency in Human Blood Progenitor Cells.</a> Cell Technologies in Biology and Medicine. 2, 85-101 (2013).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocytochemistry:+Human+Neural+Stem+Cells.">Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. , e267 (2007).</li><li>Becker-Koji&#263;, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+glycoprotein+ACA+is+upstream+regulator+of+human+heamtopoiesis.">A novel glycoprotein ACA is upstream regulator of human heamtopoiesis.</a> Cell Technologies in Biology and Medicine. 2, 69-84 (2013).</li><li>Li, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurochemical+Regulation+of+the+Expression+and+Function+of+Glial+Fibrillary+Acidic+Protein+in+Astrocytes.">Neurochemical Regulation of the Expression and Function of Glial Fibrillary Acidic Protein in Astrocytes.</a> Glial. 68 (5), 878-897 (2020).</li><li>Melkov&#225;, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+Functions+of+Microtubule+Associated+Proteins+Tau+and+MAP2c:+Similarities+and+Differences.">Structure and Functions of Microtubule Associated Proteins Tau and MAP2c: Similarities and Differences.</a> Biomolecules. 9 (3), 105 (2019).</li><li>Menezes, J. R., Luskin, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+neuron-specific+tubulin+defines+a+novel+population+in+the+proliferative+layers+of+the+developing+telencephalon.">Expression of neuron-specific tubulin defines a novel population in the proliferative layers of the developing telencephalon.</a> Journal of Neuroscience. 14 (9), 5399-5416 (1994).</li><li>Bernal, A., Arranz, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nestin-expressing+progenitor+cells:+function,+identity+and+therapeutic+implications.">Nestin-expressing progenitor cells: function, identity and therapeutic implications.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 75 (12), 2177-2195 (2018).</li></ol>

본 업무에서 기재된 인간 세포를 재프로그래밍하는 비GM 방법은 비조작된 인간 말초 혈액으로부터 얻은 전 생체 생성 및 자가 갱신 PSC의 확장으로 이어지는 비분화 과정을 개시하는 GPI 연계 인간 막 당단백질 의 뒤에 있는 신호(들) 기계류의 핵 활성화에 기초한다. 이러한 세포는 적절한 배지에서 배양될 때 상이한세균층(6)에속하는 세포로 재분화할 수 있다.
<p class="jove...

기본 및 전임상 줄기 세포 연구 방법의 개발은 신경 질환에 대한 줄기 세포 기반 치료의 임상 적용을 장려합니다. 이러한 잠재적 치료는 기능적 회복1로이어지는 인간 신경 세포의 생성 방법에 비판적으로 의존한다.
신경 줄기 세포 (NSC) 자체 갱신 하 고 성인 신경 발생 이라고 하는 프로세스에 평생 새로운 뉴런으로 분화. 만 매우 제한 된 뇌 영역 은 성인기에 신생아 뉴런을 생성 할 수있는 NsCs를 항구. 이러한 NSC는 학습과 메모리에 관여하는 성숙한 뉴런을 초래할 수 있으므로 분실되거나 손상된 뉴런을 대체할 수 있습니다. 불행하게도, 이러한 NSC는 제한된 양에 존재하고이 제한된 신경 발생은 청소년 발달 동안 급속하게감소2. 따라서 신경 세포의 다른 소스는 세포 치료 목적으로 고려되어야합니다.
퇴행성 신경 질환은 표준 약리학적 접근법을 사용하여 치료하기가 어렵습니다. 많은 치료 신경 장애를 수용 하기위한 새로운 치료 전략은 질병과 부상 조직의 세포 대체 요법에 기초. NSC 이식은 손상된 세포를 대체하고 유익한 효력을 제공할 수 있었습니다. 신경세포 교체를 위한 그밖 근원은 포유류 분폭물3의내세포 질량에서 파생되는 인간 배아 줄기 세포 (ESC) 및 ESC 같이 광대한 자기 갱신 능력을 가지고 있고 각종 세포 혈통으로 분화할 수 있는 iPSCs4를포함합니다. 또한 만능 상태5를피하는 인간 섬유아세포로부터 직접 리프로그래밍하여 NSC를 생성할 수 있다.
세포 대체 요법은 여전히 어려운 문제입니다. ESC, 태아 또는 iPS는 많은 난치성 신경 질환을 치료하기위한 신경 세포의 세대에 대한 소스가 될 수 있지만 손상된 조직의 자가 성 성인 SCs 세포 교체는 면역학적, 윤리적 및 안전 문제를 우회하는 더 나은 대안입니다.
PLCγ/PI3K/Akt/mTor/PTEN의 인산화를 통해 항체-교차연결에 의한 인간 GPI 연계 단백질의 활성화는 혈액 전구 세포의 비차별화를 시작하고 혈액 유래 만능 줄기 세포(BD-PSC)6. 이 세포는 밝은 필드, 면역 형광 및 전염 전자 현미경 검사 (TEM) 분석을 통해 확인 된 바와 같이 신경 세포를 향해 시험관 내 분화.
이 작품에서 우리는 BD-PSC의 GM 없는 생성 및 그들의 성공적인 재 분화 신경 표현형을 가진 세포로 기술합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Albumin Fraction V</td>
			<td>Roth</td>
			<td>T8444.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP Cy3 conjugate</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB3402C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MAP2 Alexa Fluor 555</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB3418A5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Nestin Alexa Fluor 488</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB5326A4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Tuj1 Alexa Fluor 488</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>560381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AO/PI Cell Viability kit</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>872045</td>
			<td>Biozym discontinued. The product produced by Logos Biosystems.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid 2-phosphate sequimagnes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Serum free 50x</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>11530536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic FGF solution</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>10647225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biocoll</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>L6115-BC</td>
			<td>density gradient media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA Frac V 7.5%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15260037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-045-801</td>
			<td>nano-sized magnetic beads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slides Luna</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>872010</td>
			<td>Biozym discontinued. The product produced by Logos Biosystems.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber Slides Lab-Tek</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10234121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-MEM/F12</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>FG4815-BC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durcupan</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>44610</td>
			<td>epoxy resin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>S0115/1030B</td>
			<td>Discontinued. Available under: TMS-013-B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GDNF recombinant human</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>10679963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMax 100x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050038</td>
			<td>L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5882-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium cell</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3149-50KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human BDNF</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>11588836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscove (IMDM)</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>FG0465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin mouse</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>10267092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15326-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna FL Automated Cell Counter</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>872040</td>
			<td>Biozym discontinued. The product produced by Logos Biosystems.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Buffer</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA 100x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniMACS Trenns&#228;ulen</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Morada digital camera</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiplatte Nunclon 4 wells</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10507591</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 Supplement 100x</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>11520536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10888022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS sterile</td>
			<td>Roth</td>
			<td>9143.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-ornithine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4957-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Glue-3 Loctite</td>
			<td>Henkel</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM FEI Technai G2 Spirit</td>
			<td>FEI Europe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracut UC-6</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate C</td>
			<td>EMS</td>
			<td>22400</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

gm-free generation of blood-derived neuronal cells

많은 인간 신경 장애는 두뇌에 있는 신경 세포 및 신경교 세포의 변성에 기인합니다. 약리학 및 기타 치료 전략의 한계로 인해 현재 부상또는 병에 걸린 뇌에 사용할 수있는 치료법이 없습니다. 세포 교체는 신경 퇴행성 조건에 대한 유망한 치료 전략으로 나타납니다. 현재까지, 신경 줄기 세포(NSC)는 태아 조직, 인간 배아 세포(ES) 또는 유도된 다능성 줄기 세포(iPSC)로부터 성공적으로 생성되었다. 변분화 과정은 다능성 줄기 세포의 생성으로 이어지는 새로운 인간 GPI 연결 당단백질의 활성화에 의해 시작되었다. 이러한 혈액 유래 만능 줄기 세포 (BD-PSC)는 밝은 필드와 면역 형광 현미경 검사법에 의해 나타난 바와 같이 신경 표현형을 가진 세포로 시험관내에서 분화한다. 전자 현미경 검사를 통해 이러한 세포의 초구조적 분석은 그들의 원시 구조뿐만 아니라 뉴런 형 형태와 세포 극성 특성을 확인합니다.

결과는 이 새로운 GM 자유로운 방법이 인간 게놈에 직접 행동하지 않고 그들의 가장 원시적인 상태로 혈액 전구 세포를 되돌릴 수 있다는 증거를 제공합니다.
앞서 우리는 이전에 GPI 연결 단백질 특정 항체 교차 연결이 PLCγ/IP3K/Akt/mTOR/PTEN 강화 조절을 통해 WNT, NOTCH 및 C-Kit와 같은 고도의 발달 관련 유전자의 개시를 보여주었으며, 따라서 HSC의 세대와2세대,2세대, ...

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GM-Free Generation of Blood-Derived Neuronal Cells

우리는 유전자 변형되지 않은 (GM 무료) 방법을 제시하여 재프로그래밍 된 말초 혈액 세포에서 신경 표현형을 가진 세포를 얻습니다. 새로운 인간 GPI 연결 단백질에 연결 된 신호 경로의 활성화 인간의 다능 한 줄기 세포를 얻기 위한 효율적인 GM 무료 방법을 밝혀.

혈액 유래 신경 세포의 GM 무료 생성

Many human&#160;neurological disorders are caused by degeneration of neurons and glial cells in the brain. Due to limitations in pharmacological and other ...

프로토콜의 중요성은 핵 신호에 막에 의존하고 유도 된 만능 줄기 세포의 경우처럼 게놈에 직접 영향을 미치지 않습니다. 혈액 유래 만능 줄기 세포의 비 기질성 특성은 기술의 주요 장점이며, 다양한 재생 의학 분야에서 안전한 임상 적용에 적합합니다. 이 절차를 시연하는 것은 프로젝트 리더인 앤-카트린 쇼트 박사와 실험실의 실험실 조수인 옥사나 그리나크레입니다.PBMC를 분리하려면 PBS로 희석된 1대 1 혈액 25밀리리터를 밀도 그라데이션 미디어 10밀리리터에 추가하고 혼합물을 30분 동안 300배 G로 원심분리합니다. 파이펫팅을 통해 플라즈마와 밀도 그라데이션 미디어 사이의 인터페이스 레이어를 분리합니다. 멸균 PBS와 원심분리기 5밀리리터로 10분 간 300회 G로 세척합니다.절차를 두 번 반복한 후, 카운팅 챔버를 사용하여 셀 수를 계산합니다. 15 밀리리터 튜브에 6 x 10을 추가한 다음, 1%BSA로 PBS의 세포에 인간 GPI 연결 막 단백질 특이적 항체를 추가하고 섭씨 37도에서 30분 동안 배양함으로써 항체 교차 연결을 수행합니다. 교차 연결 후, 10 %의 FBS로 보충 이스코브의 수정 된 덜벡코의 매체로 인큐베이션 매체를 교체합니다.15 밀리리터 폴리스티렌 튜브에서 세포를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%로 흔들어주지 않고 인큐베이터에 넣음으로써 세포를 성장시십시오. 다섯 번째 날에는 이스코브 의 중간 크기의 1~2밀리리터를 15밀리리터 튜브에 10%의 FBS로 보충합니다. 계수 챔버를 가진 배양된 세포를 계산합니다.그런 다음 약 5 x 10x6세포의 세포 현탁액을 10분 동안 300배 G로 분리하고 멸균 파스퇴르 파이펫으로 생성된 슈퍼네티트를 흡인시한다. 0.5%BSA 와 2 밀리몰러 EDTAp7.2의 사전 냉각 된 PBS의 90 마이크로 리터에서 세포 펠릿을 다시 중단. 그런 다음 80 마이크로리터 CD-45 양성 나노 크기의 마그네틱 구슬을 세포 현탁액에 넣고 15분 동안 얼음에 배양합니다.세포를 세척하려면 PBS 버퍼와 원심분리기 2밀리리터를 10분 동안 300배 G로 추가합니다. PBS 버퍼의 500 마이크로 리터에서 세포를 다시 중단합니다. 미리 냉각된 PBS 버퍼 500마이크로리터로 컬럼을 세척하고 자기장에 놓습니다.셀 서스펜션을 기둥에 놓고 PBS 버퍼 500 마이크로리터로 두 번 세척합니다. 1%BSA로 보충된 Iscove의 매체에서 세포를 수집하고 카운팅 챔버에 있는 세포를 계산합니다. 유리 커버립을 4웰 플레이트에 넣고 희석된 폴리 L-올니틴과 이중 증류수로 코팅합니다.1시간 동안 섭씨 37도에서 커버립을 배양한 후 이중 증류수로 씻어내라. 라미닌 밀리리터당 0.5~2밀리그램을 천천히 해동하고 커버립 상단에 넣습니다. 2 시간 동안 섭씨 37도에서 배양 한 다음 파이프팅으로 과도한 라미닌을 제거하고 배양 요리에 뉴런 매체 N2를 추가하십시오.배양 BD 유래 CD-45 네거티브 셀은 라미닌 오르니틴 코팅 유리 커버커버에 N2 배지에서 2일 동안 37도에서 이산화탄소를 5%의 이산화탄소로 커버하여 새로 BD 생성 된 세포의 뉴런 분화를 개시한다. 다음으로, 신경 분화 배지에 있는 배양 세포는 16일 동안 섭씨 37도 및 이산화탄소 5%에서 인큐베이터에 판을 놓습니다. 멸균물 75밀리리터와 파라포름알데히드 4그램으로 고정물을 준비합니다.용액이 지워질 때까지 교반할 때 필요에 따라 수산화 나트륨 10을 추가합니다. 용액에 자당 혼합물을 넣고 6개의 일반 염산으로 pH 7.4에 적신니다. 멸균물로 100밀리리터에 볼륨을 가져와보세요.세포 배양에서 미디어를 제거한 후, 15분 동안 예온 고정물로 배양한 다음 고정을 버리고 세포를 각각 5분 동안 세 번 세척합니다. 즉시 새로 만든 0.3 % Triton-X 솔루션을 추가하고 5 분 동안 세포를 과미화합니다. PBS로 세 번 세척하고 PBS및 5 %BSA의 차단 솔루션을 추가합니다.로커 플레이트의 실온에서 셀을 1시간 동안 차단합니다. 1%BSA PBS에서 항체의 적절한 희석을 준비하고 실온에서 1.5 시간 동안 로커 플레이트에 항체로 세포를 배양한다. PBS로 셀을 세 번 씻고 세척당 5분간 세척합니다.세포를 DAPI로 배양하고 현미경으로 시각화를 위한 장착 매체로 커버립을 장착합니다. BD 분화 세포의 형태학적 측면은 1일, 5일, 10일에 연구되었으며, 활성화된 배양에서 비활성화 된 세포의 점진적인 실종 추세와 꾸준히 증가하는 새로운 집단을 보여 주어. BD 분화 세포는 작고 ESC와 유사한 응축 된 크로마틴을 가진 더 적은 세포기관과 큰 핵을 가진 미성숙 한 성립 세포의 특성을 보였다.세포는 30 일 동안 라미닌 코팅 문화 접시에서 배양 한 후 신경 재분화를 위해 연구되었다. 4 일 일찍, 긴 분기 구조를 가진 첫번째 신경 같이 세포는 검출될 수 있었습니다. 대부분의 작은 구형 세포는 더 큰 길쭉한 모양으로 분기된 세포로 발전하여 신경 혈통으로 분화하는 활성 과정을 암시합니다.세포의 세포 체와 과정은 미분화 세포보다 더 높은 복잡성을 보였으며, 거친 풍요의 망상과 액틴 필라멘트의 번들의 고밀도를 제시했습니다. 분화 미디어에서 성장하는 세포는 세포 체와 관련된 세포 간 접촉을 자주 확립했으며, 다른 세포는 중성염과 같은 방식으로 세포 프로세스를 포함했습니다. 특정 항체를 사용하여 수행된 면역화학 분석은 BD 분화 세포가 GFAP 성상세포를 포함하여 각종 신경 계보를 향해 재분화할 수 있다는 것을 확인했습니다.이 기술은 3개의 세균 층의 세포로 재분화할 수 있는 자가성 비 성원 세포를 생성할 수 있게 해, 재생 의학 연구에서 새로운 기회를 열어.

Research

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연구

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