Name: gm-free generation of blood-derived neuronal cells
Uploaded: 2021-02-13T13:00:00
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Dedicado a la memoria del Dr. Rainer Saffrich.
Los autores están especialmente agradecidos a José Manuel García-Verdugo y Vicente Herranz-Pérez por realizar experimentos y análisis em en el Laboratorio de Neurobiología Comparada, Instituto Cavanilles de Biodiversidad y Biología Evolutiva, Universidad de Valencia, CIBERNED, Valencia, España, que fue apoyado por la financiación de la investigación de la Beca Prometeo para grupos de investigación de excelencia PROMETEO/2019/075. El resto de este trabajo fue apoyado por ACA CELL Biotech GmbH Heidelberg, Alemania.

Se obtuvieron aprobaciones éticas al realizar los experimentos.
1. Aislamiento de células mononucleares de sangre periférica humana (PBMNCs)
<ol><li>Asegúrese de que todos los donantes firmaron el consentimiento informado antes de la extracción de sangre de conformidad con las directrices institucionales.</li>
	<li>Tome 30 mL de sangre de donantes sanos por personal médico capacitado de acuerdo con el protocolo estándar.</li>
	<li>Aísle los PBMNCs por medios de gradiente de densidad....

<ol>
	<li>Peng, J., Zeng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+in+Regenerative+Medicine:+Neurodegenerative+Diseases.">The Role of Induced Pluripotent Stem Cells in Regenerative Medicine: Neurodegenerative Diseases.</a> Stem Cell Research and Therapy. 2 (4), 32 (2011).</li><li>Sorells, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hippocampal+neurogenesis+drops+sharply+in+children+to+undetectable+levels+in+adults.">Human hippocampal neurogenesis drops sharply in children to undetectable levels in adults.</a> Nature. 555 (7696), 377-381 (2018).</li><li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+Stem+Cell+Lines+Derived+from+Human+Blastocysts.">Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts.</a> Science. 282 (5391), 1145-1147 (1998).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+From+Adult+Human+Fibroblast+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells From Adult Human Fibroblast by Defined Factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li><li>Liu, G. -. H., Yi, F., Suzuki, K., Qu, J., Izpisua Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+neural+stem+cells:+a+new+tool+for+studying+neural+development+and+neurological+disorders.">Induced neural stem cells: a new tool for studying neural development and neurological disorders.</a> Cell Research. 22 (7), 1087-1091 (2012).</li><li>Becker-Koji&#263;, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+by+ACA+Induces+Pluripotency+in+Human+Blood+Progenitor+Cells.">Activation by ACA Induces Pluripotency in Human Blood Progenitor Cells.</a> Cell Technologies in Biology and Medicine. 2, 85-101 (2013).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocytochemistry:+Human+Neural+Stem+Cells.">Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. , e267 (2007).</li><li>Becker-Koji&#263;, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+glycoprotein+ACA+is+upstream+regulator+of+human+heamtopoiesis.">A novel glycoprotein ACA is upstream regulator of human heamtopoiesis.</a> Cell Technologies in Biology and Medicine. 2, 69-84 (2013).</li><li>Li, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurochemical+Regulation+of+the+Expression+and+Function+of+Glial+Fibrillary+Acidic+Protein+in+Astrocytes.">Neurochemical Regulation of the Expression and Function of Glial Fibrillary Acidic Protein in Astrocytes.</a> Glial. 68 (5), 878-897 (2020).</li><li>Melkov&#225;, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+Functions+of+Microtubule+Associated+Proteins+Tau+and+MAP2c:+Similarities+and+Differences.">Structure and Functions of Microtubule Associated Proteins Tau and MAP2c: Similarities and Differences.</a> Biomolecules. 9 (3), 105 (2019).</li><li>Menezes, J. R., Luskin, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+neuron-specific+tubulin+defines+a+novel+population+in+the+proliferative+layers+of+the+developing+telencephalon.">Expression of neuron-specific tubulin defines a novel population in the proliferative layers of the developing telencephalon.</a> Journal of Neuroscience. 14 (9), 5399-5416 (1994).</li><li>Bernal, A., Arranz, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nestin-expressing+progenitor+cells:+function,+identity+and+therapeutic+implications.">Nestin-expressing progenitor cells: function, identity and therapeutic implications.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 75 (12), 2177-2195 (2018).</li></ol>

El método no-GM de reprogramación de células humanas descritas en este trabajo se basa en la activación de membrana a núcleo de la maquinaria de señalización detrás de la glicoproteína de membrana humana ligada a GPI que inicia el proceso de desdiferenciación que conduce a la generación ex vivo y la expansión de pscs autorrenuevas obtenidos de sangre periférica humana no manipulada. Estas células cuando se cultivan en medios apropiados son capaces de re-diferenciación en células pertenecientes a ...

El desarrollo de métodos básicos y preclínicos de investigación con células madre fomenta la aplicación clínica de terapias basadas en células madre para enfermedades neurológicas. Tal terapia potencial depende críticamente del método para la generación de células neuronales humanas que conducen a la recuperación funcional1.
Las células madre neurales (NSCs) se auto-renuevan y se diferencian en nuevas neuronas a lo largo de la vida en un proceso llamado neurogénesis adulta. Sólo las áreas cerebrales muy restringidas albergan NSCs competentes para generar neuronas recién nacidas en la edad adulta. Tales NSCs pueden dar lugar a las neuronas maduras, que están implicadas en el aprendizaje y la memoria, substituyendo así las neuronas perdidas o dañadas. Desafortunadamente, estos NSCs están presentes en cantidades restringidas y esta neurogénesis limitada disminuye rápidamente durante el desarrollo juvenil2. Por lo tanto, otras fuentes de células neurales deben considerarse en un objetivo de terapia celular.
Las enfermedades neurológicas degenerativas son difíciles de curar usando acercamientos farmacológicos estándar. Las nuevas estrategias terapéuticas para abrazar muchos desordenes neurológicos inmédicos se basan en terapias del reemplazo de la célula del tejido enfermo y dañado. El trasplante de NSC podría reemplazar las células dañadas y proporcionar efectos beneficiosos. Otras fuentes para el reemplazo de células neuronales incluyen las células madre embrionarias humanas (ESC), que se derivan de la masa celular interna de los blastocistos de mamíferos3,así como los iPSCs4,que tienen una amplia capacidad de autorre renovación como los CES y son capaces de diferenciarse en varios linajes celulares. Los NSC también pueden generarse mediante reprogramación directa de fibroblastos humanos evitando el estado pluripotente5.
La terapia de reemplazo celular sigue siendo un problema desafiante. Aunque esc, fetal, o iPS puede ser una fuente para la generación de células neuronales para el tratamiento de muchas enfermedades neurológicas incurables, el reemplazo de células de SCs adultos autólogos de tejidos dañados es una mejor alternativa que elude las preocupaciones inmunológicas, éticas y de seguridad.
La activación de la proteína humana ligada al GPI mediante reticulación de anticuerpos a través de la fosforilación de PLCγ/PI3K/Akt/mTor/PTEN inicia una desdiferenciación de las células progenitoras sanguíneas y la generación de células madre pluripotentes derivadas de la sangre (BD-PSCs)6. Estas células se diferencian in vitro hacia las células neuronales según lo confirmado por medio de brightfield, inmunofluorescencia y análisis de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
En este trabajo se describe la generación libre de GM de BD-PSCs y su exitosa re-diferenciación en células con fenotipo neuronal.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Albumin Fraction V</td>
			<td>Roth</td>
			<td>T8444.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP Cy3 conjugate</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB3402C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MAP2 Alexa Fluor 555</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB3418A5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Nestin Alexa Fluor 488</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB5326A4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Tuj1 Alexa Fluor 488</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>560381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AO/PI Cell Viability kit</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>872045</td>
			<td>Biozym discontinued. The product produced by Logos Biosystems.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid 2-phosphate sequimagnes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Serum free 50x</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>11530536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic FGF solution</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>10647225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biocoll</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>L6115-BC</td>
			<td>density gradient media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA Frac V 7.5%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15260037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-045-801</td>
			<td>nano-sized magnetic beads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting slides Luna</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>872010</td>
			<td>Biozym discontinued. The product produced by Logos Biosystems.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber Slides Lab-Tek</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10234121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-MEM/F12</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>FG4815-BC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durcupan</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>44610</td>
			<td>epoxy resin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>S0115/1030B</td>
			<td>Discontinued. Available under: TMS-013-B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GDNF recombinant human</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>10679963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMax 100x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050038</td>
			<td>L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5882-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium cell</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3149-50KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human BDNF</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>11588836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscove (IMDM)</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>FG0465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin mouse</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>10267092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15326-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna FL Automated Cell Counter</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>872040</td>
			<td>Biozym discontinued. The product produced by Logos Biosystems.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Buffer</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA 100x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniMACS Trenns&#228;ulen</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Morada digital camera</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiplatte Nunclon 4 wells</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10507591</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 Supplement 100x</td>
			<td>Fisher Scientific (Gibco)</td>
			<td>11520536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10888022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS sterile</td>
			<td>Roth</td>
			<td>9143.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-ornithine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4957-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Glue-3 Loctite</td>
			<td>Henkel</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM FEI Technai G2 Spirit</td>
			<td>FEI Europe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracut UC-6</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate C</td>
			<td>EMS</td>
			<td>22400</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

gm-free generation of blood-derived neuronal cells

Muchos trastornos neurológicos humanos son causados por la degeneración de las neuronas y las células gliales en el cerebro. Debido a las limitaciones en las estrategias farmacológicas y otras estrategias terapéuticas, actualmente no hay cura disponible para el cerebro lesionado o enfermo. El reemplazo celular aparece como una estrategia terapéutica prometedora para las condiciones neurodegenerativas. Hasta el día de hoy, las células madre neurales (NSC) se han generado con éxito a partir de tejidos fetales, células embrionarias humanas (CE) o células madre pluripotentes inducidas (iPSC). Un proceso de desdiferenciación se inició por la activación de la nueva glicoproteína humana ligada a GPI, que conduce a la generación de células madre pluripotentes. Estas células madres pluripotentes sangre-derivadas (BD-PSCs) diferencian in vitro en las células con un fenotipo de los nervios según lo mostrado por microscopia del brightfield y de la inmunofluorescencia. El análisis ultraestructural de estas células por medio de microscopía electrónica confirma su estructura primitiva así como neuronal-como morfología y características subcelulares.

Los resultados proporcionan evidencia de que este nuevo método libre de GM es capaz de revertir las células progenitoras sanguíneas a su estado más primitivo sin actuar directamente sobre el genoma humano.
Hemos demostrado previamente que la reticulación de anticuerpos específicos de proteínas ligadas a GPI se inicia a través de PLCγ/IP3K/Akt/mTOR/PTEN regulación al alza de genes altamente conservados y relevantes para el desarrollo como WNT, NOTCH y C-Kit, iniciando así un...

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GM-Free Generation of Blood-Derived Neuronal Cells

Presentamos un método genético modificado-libre (GM-libre) para obtener las células con un fenotipo neuronal de glóbulos periféricos reprogramados. La activación de una vía de señalización vinculada a la nueva proteína humana ligada a GPI revela un método eficiente libre de GM para la obtención de células madre pluripotentes humanas.

Generación Libre De Gm De Células Neuronales Derivadas De La Sangre

Many human&#160;neurological disorders are caused by degeneration of neurons and glial cells in the brain. Due to limitations in pharmacological and other ...

La importancia del protocolo se basa en la señalización de membrana a núcleo y no afecta directamente al genoma, como es el caso de las células madre pluripotentes inducidas. La naturaleza no teratógena de las células madre pluripotentes derivadas de la sangre es la principal ventaja de la técnica, por lo que es adecuada para una aplicación clínica segura en diversos campos de la medicina regenerativa. Demostrando el procedimiento está la Dra. Anne-Kathrin Schott, líder del proyecto, y Oksana Greenacre, una asistente de laboratorio en mi laboratorio.Para aislar los PBMNCs, agregue 25 mililitros de sangre uno a uno diluida con PBS a 10 mililitros de medios de gradiente de densidad y centrifume la mezcla a 300 veces G durante 30 minutos. Aísle la capa de interfaz entre el plasma y el medio de gradiente de densidad mediante pipeteo. Lave las células aisladas con cinco mililitros de PBS estéril y centrífuga a 300 veces G durante 10 minutos.Después de repetir el procedimiento dos veces, cuente el número de celdas usando una cámara de conteo. Agregue 6 por 10 a las 6tas células mononucleares a un tubo de 15 mililitros, luego realice la reticulación de anticuerpos agregando anticuerpos específicos de la membrana ligada a GPI humana a las células en PBS con BSA al 1% e incubando durante 30 minutos a 37 grados Celsius. Después de la reticulación, reemplace el medio de incubación con el medio modificado de Dulbecco de Iscove complementado con 10% de FBS.Cultive las células en tubos de poliestireno de 15 mililitros colocándolas en una incubadora a 37 grados Centígrados y 5% de dióxido de carbono durante 8 a 10 días sin agitar. En el quinto día, agregue uno a dos mililitros adicionales del Medio de Iscove complementado con 10% de FBS a cada tubo de 15 mililitros. Cuente las células cultivadas con una cámara de conteo.A continuación, centrifugar la suspensión celular de aproximadamente 5 por 10 a las 6 ª células a 300 veces G durante 10 minutos y aspirar el sobrenadante resultante con una pipeta Pasteur estéril. Resuspend el pellet celular en 90 microlitros de PBS preenfriado de pH 7,2 con 0,5% BSA y dos EDTA milimolares. A continuación, agregue 80 microlitros CD-45 de perlas magnéticas de tamaño nanodimensionado positivo a la suspensión celular e incube en hielo durante 15 minutos.Para lavar las células, agregue dos mililitros de tampón de PBS y centrífuga a 300 veces G durante 10 minutos. Resuspend las células en 500 microlitros del almacenador intermediario de PBS. Lave la columna con 500 microlitros de tampón PBS preenfriado y colócalo en el campo magnético.Coloque la suspensión de la célula en la columna y lávela dos veces con 500 microlitros de tampón PBS. Recoger las células en el medio de Iscove complementado con 1%BSA y contar las células en la cámara de recuento. Coloque las tapas de vidrio en placas de cuatro pocillos y recubrirlas con una a cinco poli-L-ornitina diluida y agua destilada doble.Después de incubar los cubrebocas a 37 grados centígrados durante una hora, lávelos con agua destilada doble. Descongelar lentamente 0.5 a dos miligramos por mililitro de laminina y añadirlo a la parte superior de los cubrebocas. Incubarlos a 37 grados centígrados durante dos horas, luego eliminar el exceso de laminina por pipeteo y añadir el medio neuronal N2 a los platos de cultivo.Cultivo de células CD-45 negativas derivadas de BD en medio N2 en cubrebocas de vidrio recubiertos de ornitina de laminina durante dos días en una incubadora con dióxido de carbono al 5% a 37 grados centígrados para iniciar una diferenciación neuronal de las células recién generadas por BD. A continuación, cultivar células en medio de diferenciación neuronal y colocar las placas en una incubadora a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono durante 16 días. Preparar un fijador con 75 mililitros de agua estéril y cuatro gramos de paraformacionaldehído.Añadir 10 hidróxido de sodio normal según sea necesario con agitación hasta que la solución se despeje. Añadir la mezcla de sacarosa a la solución y valorarla a pH 7.4 con seis ácidos clorhídrico normales. Llevar el volumen a 100 mililitros con agua estéril.Después de eliminar el medio del cultivo celular, incubarlo con fijador de preguerra durante 15 minutos, luego deseche el fijador y lave las células tres veces durante cinco minutos cada una. Inmediatamente añadir una solución recién hecha al 0,3% Triton-X y permeabilizar las células durante cinco minutos. Lavar tres veces con PBS y añadir una solución de bloqueo de PBS y 5%BSA.Bloquee las celdas a temperatura ambiente en una placa basora durante una hora. Preparar una dilución adecuada de anticuerpos en PBS al 1%BSA e incubar las células con los anticuerpos en una placa basculante durante 1,5 horas a temperatura ambiente. Lave las células tres veces con PBS durante cinco minutos por lavado.Incubar las células con DAPI y montar las cubiertas con medios de montaje para su visualización en un microscopio. El aspecto morfológico de las células dedifferentiated de BD fue estudiado el los días uno, cinco, y 10, demostrando una tendencia de la desaparición gradual de células nonactivated y de una nueva población constantemente cada vez mayor de células en cultura activada. Las células dedifferentiated de BD eran pequeñas y demostraron las características de células agranulares no maduras con menos orgánulos y núcleos grandes con la cromatina condensada similar a ESCs.Las células fueron estudiadas para la re-diferenciación neura después de cultivar en platos laminón-revestidos de la cultura por 30 días. Ya en cuatro días, se pudieron detectar las primeras células similares a las neuronales con largas estructuras de ramificación. La mayoría de las células esféricas pequeñas se desarrollaron en células ramificadas con formas alargadas más grandes, lo que implica un proceso activo hacia la diferenciación a linajes neuronales.El cuerpo celular y los procesos de las células mostraron una mayor complejidad que las células indiferenciadas, presentando una alta densidad de retículo endoplásmico rugoso y haces de filamentos de actina. Las células que crecen en medios de diferenciación con frecuencia establecieron contactos de célula a célula que involucraban el cuerpo celular, mientras que otras involucraron procesos celulares de manera similar a la neurita. El análisis de inmunoquímica realizado usando los anticuerpos específicos confirmó que las células dedifferentiated de BD son capaces de la re-diferenciación hacia varios linajes neuronales, incluyendo astrocytes de GFAP.Esta técnica permite crear células autólogas no teratógenas capaces de re-diferenciación en células de las tres capas germinales, abriendo nuevas oportunidades en la investigación de la medicina regenerativa.

Research

JoVE Journal

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