Name: implantation of osmotic pumps and induction of stress to establish a symptomatic, pharmacological mouse model for dyt/park-atp1a3 dystonia
Uploaded: 2020-09-12T15:00:00
Duration: 10 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation of Osmotic Pumps and Induction of Stress to Establish a Symptomatic, Pharmacological Mouse Model for DYT/PARK-ATP1A3 Dystonia at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل من قبل وزارة التعليم والبحوث الاتحادية (BMBF DysTract إلى C.W.I.) والمركز متعدد التخصصات للبحوث السريرية (IZKF) في جامعة فورتسبورغ (Z2-CSP3 إلى L.R.). يشكر المؤلفون لويزا فريك، وكيالي روهم، وفيرونيكا سنغر، وهايكه مينزيل، وعلى مساعدتهم التقنية، وكذلك هيلغا برونر على رعاية الحيوانات.

<ol>
	<li>DeAndrade, M. P., Yokoi, F., van Groen, T., Lingrel, J. B., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Atp1a3+mutant+mice+as+a+model+of+rapid-onset+dystonia+with+parkinsonism.">Characterization of Atp1a3 mutant mice as a model of rapid-onset dystonia with parkinsonism.</a> Behavioural Brain Research. 216 (2), 659-665 (2011).</li><li>Dang, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+characterization+of+Dyt1+DeltaGAG+knock-in+mouse+as+a+model+for+early-onset+dystonia.">Generation and characterization of Dyt1 DeltaGAG knock-in mouse as a model for early-onset dystonia.</a> Experimental Neurology. 196 (2), 452-463 (2005).</li><li>Kreiner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+mechanisms+in+genetic+models+of+neurodegeneration:+are+the+mice+better+than+humans.">Compensatory mechanisms in genetic models of neurodegeneration: are the mice better than humans.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9, 56 (2015).</li><li>Albanese, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenomenology+and+classification+of+dystonia:+a+consensus+update.">Phenomenology and classification of dystonia: a consensus update.</a> Movement Disorders. 28 (7), 863-873 (2013).</li><li>Marsden, C. D., Obeso, J. A., Zarranz, J. J., Lang, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomical+basis+of+symptomatic+hemidystonia.">The anatomical basis of symptomatic hemidystonia.</a> Brain. 108, 463-483 (1985).</li><li>Carbon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+sensorimotor+network+activity+in+DYT1+dystonia:+a+functional+imaging+study.">Increased sensorimotor network activity in DYT1 dystonia: a functional imaging study.</a> Brain. 133, 690-700 (2010).</li><li>Carbon, M., Su, S., Dhawan, V., Raymond, D., Bressman, S., Eidelberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+metabolism+in+primary+torsion+dystonia:+effects+of+penetrance+and+genotype.">Regional metabolism in primary torsion dystonia: effects of penetrance and genotype.</a> Neurology. 62 (8), 1384-1390 (2004).</li><li>de Carvalho Aguiar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+Na+/K++-ATPase+alpha3+gene+ATP1A3+are+associated+with+rapid-onset+dystonia+parkinsonism.">Mutations in the Na+/K+ -ATPase alpha3 gene ATP1A3 are associated with rapid-onset dystonia parkinsonism.</a> Neuron. 43 (2), 169-175 (2004).</li><li>Brashear, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phenotypic+spectrum+of+rapid-onset+dystonia-parkinsonism+(RDP)+and+mutations+in+the+ATP1A3+gene.">The phenotypic spectrum of rapid-onset dystonia-parkinsonism (RDP) and mutations in the ATP1A3 gene.</a> Brain. 130 (3), 828-835 (2007).</li><li>Barbano, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+triggers+and+non-motor+findings+in+a+family+with+rapid-onset+dystonia-parkinsonism.">New triggers and non-motor findings in a family with rapid-onset dystonia-parkinsonism.</a> Parkinsonism &amp; Related Disorders. 18 (6), 737-741 (2012).</li><li>Isaksen, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia-induced+dystonia+and+abnormal+cerebellar+activity+in+a+mouse+model+with+a+single+disease-mutation+in+the+sodium-potassium+pump.">Hypothermia-induced dystonia and abnormal cerebellar activity in a mouse model with a single disease-mutation in the sodium-potassium pump.</a> PLOS Genetics. 13 (5), 1006763 (2017).</li><li>Sugimoto, H., Ikeda, K., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygous+mice+deficient+in+Atp1a3+exhibit+motor+deficits+by+chronic+restraint+stress.">Heterozygous mice deficient in Atp1a3 exhibit motor deficits by chronic restraint stress.</a> Behavioural Brain Research. 272, 100-110 (2014).</li><li>Calderon, D. P., Fremont, R., Kraenzlin, F., Khodakhah, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+substrates+of+rapid-onset+Dystonia-Parkinsonism.">The neural substrates of rapid-onset Dystonia-Parkinsonism.</a> Nature Neuroscience. 14 (3), 357-365 (2011).</li><li>Cutsforth-Gregory, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repetitive+exercise+dystonia:+A+difficult+to+treat+hazard+of+runner+and+non-runner+athletes.">Repetitive exercise dystonia: A difficult to treat hazard of runner and non-runner athletes.</a> Parkinsonism &amp; Related Disorders. 27, 74-80 (2016).</li><li>Pizoli, C. E., Jinnah, H. A., Billingsley, M. L., Hess, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+Cerebellar+Signaling+Induces+Dystonia+in+Mice.">Abnormal Cerebellar Signaling Induces Dystonia in Mice.</a> The Journal of Neuroscience. 22 (17), 7825-7833 (2002).</li><li>Jinnah, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+channel+agonists+and+dystonia+in+the+mouse.">Calcium channel agonists and dystonia in the mouse.</a> Movement Disorders. 15 (3), 542-551 (2000).</li><li>Rauschenberger, L., Knorr, S., Al-Zuraiqi, Y., Tovote, P., Volkmann, J., Ip, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Striatal+dopaminergic+dysregulation+and+dystonia-like+movements+induced+by+sensorimotor+stress+in+a+pharmacological+mouse+model+of+rapid-onset+dystonia-parkinsonism.">Striatal dopaminergic dysregulation and dystonia-like movements induced by sensorimotor stress in a pharmacological mouse model of rapid-onset dystonia-parkinsonism.</a> Experimental Neurology. 323, 113109 (2020).</li><li>Fernagut, P. O., Diguet, E., Bioulac, B., Tison, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MPTP+potentiates+3-nitropropionic+acid-induced+striatal+damage+in+mice:+reference+to+striatonigral+degeneration.">MPTP potentiates 3-nitropropionic acid-induced striatal damage in mice: reference to striatonigral degeneration.</a> Experimental Neurology. 185 (1), 47-62 (2004).</li><li>Guyenet, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+composite+phenotype+scoring+system+for+evaluating+mouse+models+of+cerebellar+ataxia.">A simple composite phenotype scoring system for evaluating mouse models of cerebellar ataxia.</a> Journal of Visualized Experiments. 39, 1787 (2010).</li><li>Ip, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tor1a+/-+mice+develop+dystonia-like+movements+via+a+striatal+dopaminergic+dysregulation+triggered+by+peripheral+nerve+injury.">Tor1a+/- mice develop dystonia-like movements via a striatal dopaminergic dysregulation triggered by peripheral nerve injury.</a> Acta Neuropathologica Communications. 4, 108 (2016).</li></ol>

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

هذا DYT / PARK -ATP1A3 نموذج الماوس الدوائية يسمح للتحليل المفصل للتغيرات الهيكلية والعصبية الكيميائية intracerral الناجمة فقط عن تثبيط أيونات الصوديوم والبوتاسيوم في العقد القاعدية و المخيخ وكذلك التعديلات المتعلقة التعرض للإجهاد. في حالة الفئران ، يمكن زرع مضختين من التناضح تحت الجلد كحد أقصى. نحن هنا نقدم طريقة بالتفصيل تسليم المخدرات المزمنة لهياكل الدماغ متعددة من خلال تنفيذ قنية مزدوجة متصلة بمحول التشعب بالإضافة إلى قنية واحدة. ويمكن استخدام هذه المنهجية لأي تطبيق يتطلب تركيب هياكل متعددة للدماغ في آن واحد وبشكل مزمن.
نقدم نموذج فأر لاضطراب حركة نادرة، حيث يصاب المرضى بالأعراض الدائمة بعد التعرض للإجهاد. ولا يزال هذا التفاعل الجيني والبيئي المفترض غير مفهوم جيداً، ولكنه قد يمثل أحد الميكانيكا الباثومية الرئيسية في تطوير DYT/PARK-ATP1A3. وقد نشرت أساليب مختلفة من تعريض الفئران للإجهاد في الماضي وتشمل الصدمات القدم الكهربائية، وكبح، والبيئة الباردة أو الدافئة والتعرض لمختلف الروائح11،12،13. في محاولة لتعرض الفئران إلى عامل إجهاد خفيف ذو قيمة تحويلية ، فإننا هنا نصف الخضوع المتكرر للفئران للمهام الحركية الصعبة. بالنسبة لاختبار القطب، كشفت الحيوانات المُشبعة بالوعين عن فرط الإفراط في الأطراف الأمامية و hindlimbs. وكانت هذه الحركات مشابهة جدا للحركات التي تشبه خلل التوتر لوحظت خلال تسجيل الفيديو 4 دقائق من الحيوانات وكذلك اختبار تعليق الذيل. قد يكون تطبيق الإجهاد الخفيف في شكل مهام حركية صعبة مفيدًا في نماذج الماوس الأخرى التي تظهر الأعراض الحركية أو الانعجاب العصبي ، حيث تؤثر التفاعلات الجينية البيئية بشكل كبير على درجة تطور المرض.
هناك نقص عام في المهام السلوكية المحددة مسبقا، فضلا عن جداول التصنيف لتصنيف الحركات غير الطبيعية والمواقف في الفئران. معظم المهام الحركية المتاحة تكشف عن تشوهات غير محددة، مثل المشبك hindlimb، وهي ظاهرة معروفة في العديد من نماذج الماوس من اضطرابات الحركة مع تنكس عصبي18،19. من أجل توصيف مناسب للنمط الظاهري ، من الضروري تحليل ما إذا كان نموذج الماوس يلخص السمات البارزة للمرض. هنا، نقدم نسخة معدلة من مقياس تصنيف خلل التوتر المستخدمة سابقا لتقييم الإعاقة الحركية في نماذج الماوس خلل التوتر15،16. بالإضافة إلى ذلك قمنا بتطوير نظام تسجيل قائم على المراقبين لاختبار تعليق الذيل ، والذي تم إنشاؤه بشكل مماثل لموازين التصنيف السريري لخلل التوتر البشري. ويظهر كلا المقياسين تصنيف درجة أعلى بكثير في ouabain- مُزَدَّد الفئران، مقارنة مع الوعين المُلَكَّن، والحيوانات غير المجهدة، فضلاً عن الحيوانات المُلَكَّبة بالمركبات. وتتمثل عيوب أي نظام للتسجيل قائم على المراقبين في التدريب اللازم لمقيّبي التقييم لضمان اتساق التهديف والحد من تقلب المراقبين، فضلا عن خطر التحيز المحتمل للمصنّف إن لم يكن أعمى تماما عن المجموعة التي تم تحليلها. ومع ذلك، لا تزال أنظمة التسجيل القائمة على المراقبين تقدم طريقة سهلة المنال لتوصيف النمط الظاهري ويمكن تكييفها مع نموذج الفأرة المحلل، كما هو الحال في المشروع الحالي لتقييم الحركات الشبيهة بخلل التوتر. لضمان اتساق التسجيل بين مختلف المُقيّـّـن، ينبغي إتاحة مقاطع فيديو تدريبية. للحد من أي تحيز محتمل ، فمن المستحسن أن تقييم مختلفة تسجيل نفس مقاطع الفيديو ، وأن يتم متوسط الدرجات الفردية. كل من أنظمة التهديف المذكورة في هذا العمل سجل وجود حركات مثل خلل التوتر في الحيوانات. يمكن تكييف موازين التصنيف وفقًا لمتطلبات محددة داخل المشروع ، كما تم ذلك سابقًا من قبل Ip et al.، حيث تم تسجيل hindlimbs فقط للحركات الشبيهة بخلل التوتر في نموذج ماوس لخلل التوتر 1 (DYT-TOR1A)20. ويمكن استكمال موازين التصنيف من خلال أنظمة تسجيل أخرى منشورة سابقًا ، وتقييم درجة البطء في القوارض على سبيل المثال كما تم مع درجة الإعاقة في الحركة بواسطة Calderon et al.13.

مزايا تسليم المخدرات المستمر مباشرة إلى الدماغ عديدة. يمكن تجنب الحقن المتكرر والمتكرر ، الذي يمثل عامل إجهاد غير ضروري للحيوانات ، ويمكن تحقيق تركيز داخلي أكثر ثباتًا للدواء. هذا صحيح خاصة عندما تفشل الأدوية تدار بشكل نظامي لاختراق بسهولة حاجز الدم في الدماغ. وعلاوة على ذلك، تسليم الأدوية المزمنة عن طريق مضخات التناضح يسمح للتسليم المترجمة من ركائز التي لولا ذلك سيكون لها آثار جانبية على نطاق المنظومة. يمكن تسليم الأدوية بطريقة مستهدفة إلى هياكل الدماغ المطلوبة ، وبالتالي يمكن تتبع التأثير الناتج مباشرة. ويمكن استخدام هذا لمجموعة من التطبيقات، مثل دراسة الآثار العلاجية، فضلا عن دراسة الميكانيكا الباثومية. تم استخدام هذا التطبيق الأخير في المشروع هنا من أجل إنشاء نموذج الماوس الدوائية لخلل التوتر.
تحليل وفهم المتلازمات خلل التوتر، والتي تمثل ثالث أكثر اضطراب الحركة شيوعا، وقد تم محدودة بشدة من حقيقة أن نماذج الحيوانات الوراثية تفشل إلى حد كبير في إعادة إنتاج النمط الظاهري للمرض وجدت في الإنسان المريض وكذلك الفيزيولوجيا المرضية. لا تقتصر هذه المسألة على المتلازمات خلل التوتر، ولكن في الواقع تتعلق العديد من نماذج القوارض المعدلة وراثيا في مجال اضطرابات الحركة1,2. قد يكون السبب في عدم وجود نمط ظاهري في نماذج القوارض المعدلة وراثيا على آليات تعويضية فعالة للغاية3. في حالة خلل التوتر ، يتميز المرض بتقلصات العضلات اللاإرادية مما تسبب في حركات التواء ومواقف غير طبيعية4. وقد ساعدت دراسة الأسباب الثانوية (أي، إصابة الدماغ) من أعراض خلل التوتر، لتحديد الهياكل المشاركة في مظاهر هذه التشوهات الحركية، مثل العقد القاعدية5. وقد أظهرت دراسات التصوير الدماغ من أشكال وراثية من خلل التوتر تشوهات وظيفية في جميع مناطق الدماغ تقريبا المسؤولة عن التحكم في الحركة و الاندماج sensorimotor6,7. ومع ذلك ، لا تزال هناك حاجة إلى نماذج القوارض لتعميق فهم الاختلالات العصبية على مستوى الشبكة الجزيئية والكبيرة وكذلك لتطوير الخيارات العلاجية. هذا هو المكان الذي تقدم نماذج الماوس الدوائية إمكانية تكرار السمات السريرية والمرضية للمرض بطريقة أكثر دقة.
خلل التوتر السريع في الزحم الرعاش (DYT/PARK-ATP1A3؛ RDP; DYT12) هي واحدة من أشكال وراثية من خلل التوتر. وهو ناتج عن طفرات فقدان الوظائف في جين ATP1α3، الذي يقوم بترميز الوحدة الفرعية α3 لNa+/ K+-ATPase8. وعلاوة على ذلك، فمن المسلم به أن ناقلات الطفرات الجينية يمكن أن تكون خالية من الأعراض لسنوات قبل النامية الحادة خلل التوتر المستمر العام وباركنسونية بعد التعرض لحدث مجهد. في الواقع ، فإن penetrance من DYT / PARK - ATP1A3 غير مكتملة ومرهقة الأحداث التي تعمل على نطاق الزناد من الإفراط في المادية ودرجات الحرارة القصوى إلى الإفراط في استهلاك الكحول والالتهابات9،10. من أجل دراسة DYT/PARK-ATP1A3 والعثور على تدخلات علاجية محتملة، فقد حاول عدة مرات تقليد تطور المرض المعتمد على الإجهاد في نماذج القوارض. ومع ذلك ، وبصرف النظر عن واحد القائمة الوراثية DYT / PARK - ATP1A3 نموذج الماوس ، حيث كانت تسبب حركات عابرة غير طبيعية والتشنج مثل انخفاض حرارة الجسم ، وجميع النماذج الماوس الجينية المنشورة لDYT / بارك - ATP1A3 فشلت في إنتاج أعراض خلل التوتر1،11،12. كالديرون وآخرون أظهرت سابقا أن منع α3-subunit ثنائيا في العقد القاعدية والمخيخ عبر واباين جليكوسايد القلب في الفئران من النوع البرية النتائج في اضطراب مشية خفيفة13. أدى التعرض الإضافي لصدمات القدم الكهربائية في بيئة دافئة إلى نمط ظاهري مائل للحرارة وبطء، مما يدل على أن الضخ المزمن والمستهدف للوابين متبوعاً بالإجهاد يقلد بنجاح النمط الظاهري DYT/PARK-ATP1A3.
ومع ذلك ، فإن تعريض الحيوانات لصدمات القدم الكهربائية في بيئة دافئة من 38-40 درجة مئوية على مدى فترة ساعتين يحفز الألم والقلق في الحيوانات ، والتي تمثل عوامل مربكة ، خاصة لتقييم التغيرات في نظام الكاتيتشولامين المتعلقة بتطور خلل التوتر. وهكذا، نحن هنا وصف نوع مختلف من نموذج الإجهاد مع قيمة ترجمة عالية، والتي تتعلق مرة أخرى إلى حقيقة أن خفيفة إلى معتدلة ممارسة وصفت بأنها مشغلات في DYT/PARK-ATP1A3 المرضى9. وعلاوة على ذلك، ممارسة المتكررة هو الزناد المعروفة لخلل التوتر البؤري14. تعرضت الفئران مرارا وتكرارا لمهام حركية صعبة تتألف من ثلاثة ينحدر من قطب خشبي ("اختبار القطب") وثلاثة أشواط على جهاز Rotarod ("اختبار الأداء Rotarod"). تم استخدام وضع الحيوانات على الجزء العلوي من عمود خشبي 50 سم لإجبار الحيوانات على النزول ، تم استخدام جهاز Rotarod لإخضاع الفئران للنشاط القسري عن طريق وضعها على قضيب دوار.
توصيف النمط الظاهري المحرك لنموذج الماوس لخلل التوتر هو تحد خاص بسبب عدم وجود اختبارات محددة مسبقا ودرجات. ومع ذلك، فقد تم استخدام اختلاف واحد من تقييم الإعاقة الحركية مرارا وتكرارا على مدى السنوات الماضية من أجل تقييم شدة وتوزيع الحركات مثل خلل التوتر في القوارض13،15،16. نحن هنا تقديم نسخة معدلة من مقياس تصنيف خلل التوتر، والتي أثبتت فعاليتها في تقييم النمط الظاهري مثل خلل التوتر الحيواني عندما لوحظ على مدى فترة زمنية قدرها أربع دقائق. كطريقة ثانية لتقييم حركات مثل خلل التوتر، نقدم نظام تسجيل تم تطويره حديثًا لتقييم الحركات غير الطبيعية أثناء اختبار تعليق الذيل. وهو يسمح لتقييم وتيرة ومدة حركات مثل خلل التوتر والمواقف من الأطراف الأمامية، hindlimbs وكذلك الجذع.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% saline</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td></td>
			<td>PZN06178437</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alzet osmotic pumps</td>
			<td>Durect</td>
			<td>4317</td>
			<td>model 1002, &#64258;owrate 0.25 &#956;L/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anchor Screws</td>
			<td>AgnTho&#39;s</td>
			<td>MCS1x2</td>
			<td>2 mm long with a thread of 1mm O.D.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog Clamps</td>
			<td>Agntho&#39;s</td>
			<td>13-320-035</td>
			<td>straight, 3.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacain 0.25% Jenapharm</td>
			<td>mibe GmbH Arzneimittel</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula and Minipump Holder</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51636</td>
			<td>designed to hold 3.4 mm cannula heads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula Bifurcation</td>
			<td>Plastics One</td>
			<td>21Y</td>
			<td>custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula tubing</td>
			<td>Plastics One</td>
			<td>C312VT/PKG</td>
			<td>vinyl, 0.69 mm x 1.14 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5SF forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>fine forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye cream Bepanthen</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Anesthesia Mask for Stereotaxic, Mouse</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>56109M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardened fine scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Rotary Micromotor Kit</td>
			<td>Foredom</td>
			<td>K.1070-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane CP 1 mL/mL, 250 mL</td>
			<td>cp-pharma</td>
			<td>1214</td>
			<td>prescription needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane System Dr&#228;ger Vapor 19.3</td>
			<td>Dr. Wilfried M&#252;ller GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kallocryl A/C</td>
			<td>Speiko</td>
			<td>1615</td>
			<td>dental cement, liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kallocryl CPGM rot</td>
			<td>Speiko</td>
			<td>1692</td>
			<td>dental cement, red powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse and neonates adaptor</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td>51625</td>
			<td>adaptor for mice for a traditional U-frame</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle holder</td>
			<td>KLS Martin Group</td>
			<td>20-526-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Rupture Ear Bars and Rubber Tips f/ Mouse Stereotaxic</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td>51649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octenisept</td>
			<td>Sch&#252;lke</td>
			<td>118211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmotic Pump Connector Cannula for Mice, double</td>
			<td>Plastics One</td>
			<td>3280PD-3.0/SPC</td>
			<td>28 Gauge, length 4.0 mm, c/c distance 3.0 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmotic Pump Connector Cannula for Mice, single</td>
			<td>Plastics One</td>
			<td>3280PM/SPC</td>
			<td>28, Gauge, custom length 3.0 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ouabain octahydrate 250 mg</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>03125-250MG</td>
			<td>CAUTION: toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision balance</td>
			<td>Kern &#38; Sohn</td>
			<td>PFB 6000-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal Thermal Probe</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl 50 mg/mL, injectable</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>Carprofen, prescription needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Warmer X1 with Mouse Heating Pad</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53800M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RotaRod Advanced</td>
			<td>TSE Systems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>screw driver set</td>
			<td>Agntho&#39;s</td>
			<td>30090-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Burrs</td>
			<td>Agntho&#39;s</td>
			<td>HM71009</td>
			<td>0.9 mm &#216; burr</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Burrs</td>
			<td>Agntho&#39;s</td>
			<td>HM71014</td>
			<td>1.4 mm &#216; burr</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StereoDrive</td>
			<td>Neurostar</td>
			<td></td>
			<td>software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic instrument</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td></td>
			<td>custom made by Neurostar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic robot</td>
			<td>Neurostar</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>suture: coated vicryl, polyglatin 910</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>V797D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoMixer C</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>5382000015</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation of osmotic pumps and induction of stress to establish a symptomatic, pharmacological mouse model for dyt/park-atp1a3 dystonia

تواجه نماذج الماوس المعدلة وراثياً قيوداً، خاصة عند دراسة اضطرابات الحركة، حيث لا تقدم معظم نماذج القوارض المعدلة وراثياً المتاحة نمطاً ظاهرياً محركياً يشبه الجوانب السريرية للمرض البشري. تسمح نماذج الماوس الدوائية بإجراء دراسة أكثر مباشرة للالكوام وتأثيرها على النمط الظاهري السلوكي. مضخات التناضح المتصلة cannulas الدماغ فتح إمكانية إنشاء نماذج الماوس الدوائية عن طريق تسليم المخدرات المحلية والمزمنة. لاضطراب الحركة الوراثية من خلل التوتر السريع الظهور- باركنسونية، والطفرة فقدان وظيفة في الوحدة الفرعية α3 من Na+/ K+-ATPase يمكن محاكاة من قبل حصار محدد للغاية عن طريق ouabain جليكوسايد. من أجل منع محليا α3-subunit في ganglia القاعدية والمخبل المخيخ، والتي هي اثنين من هياكل الدماغ يعتقد أن تشارك بشكل كبير في التسبب في خلل التوتر السريع بداية باركنسونيا، كانولا ثنائية هو زرع stereotaxically في المخطط ويتم إدخال cannula واحد إضافي في المخيخ. ترتبط الكانولاات عبر أنابيب الفينيل إلى مضختين نُمويتين ، يتم زرعهما تحت الجلد على ظهر الحيوانات وتسمحان بتوصيل الوابين بشكل مزمن ودقيق. نموذج الماوس الدوائية لخلل التوتر السريع الظهور-باركنسونيا يحمل ميزة إضافية من تلخيص الميزات السريرية والمرضية من ناقلات الطفرات أعراض وأعراض. تماما مثل ناقلات الطفرات من مرض باركنسونيونيا سريع الظهور، الفئران أوابين pertoned تطوير حركات مثل خلل التوتر فقط بعد التعرض إضافية للإجهاد. نحن نبرهن على نموذج الإجهاد المعتدل وإدخال اثنين من أنظمة التهديف المعدلة لتقييم النمط الظاهري المحرك.

تم تعديل الشكل 4 من اوشينبرغر وآخرون17. لتحليل البيانات لكل مقياس تصنيف خلل التوتر (A) واختبار تعليق ذيل (B) ، احسب مجموع النقاط لكل نقطة زمنية لكل. يجب رسم متوسط كل نقطة زمنية وكل مجموعة على رسم بياني مناسب. وينبغي دراسة توزيع القيم وتطبيق الاختبار الإحصائي المناسب لتحديد الأهمية. مع عدد كاف من الحيوانات، يمكن الكشف عن النمط الظاهري المحرك سواء مع مقياس تصنيف خلل التوتر وكذلك مع تقييم الحركات غير الطبيعية في اختبار تعليق الذيل. ويتجلى النمط الظاهري مثل خلل التوتر من خلال درجة المحرك أعلى بكثير في كل من التقييمات في مجموعة الأوابين المُشدّمة، وشدد بالمقارنة مع الفئران غير المجهدة التي تم غرسها في الوابين، وكذلك الفئران المسيطرة.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61635/61635fig1v2.jpg"> الشكل 1: الخطوات الجراحية الرئيسية لزرع القنية والتناضح. أ) بالنسبة للإحداثيات المشار إليها، يجب حفر الثقوب ثنائياً من أجل القنيّة المزدوجة المخصصة للعنجة القاعدية وللقنية المفردة الموضوعة عند خط الوسط في المخيخ. يتم عرض مضختين من الزى التناضح على كل جانب من الحيوان. (B) تظهر الصورة قنية مزروعة، واحدة في المخيخ، ثابتة مع أسمنت الأسنان. يجب ربط القنية المزدوجة للعنجة القاعدية بمحول التشعبات وملءها مسبقًا بالوبين قبل الزرع. (C) صورة الإجراء النهائي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61635/61635fig1v2large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61635/61635fig02.jpg"> الشكل 2: تقييم الحركات الشبيهة بخلل التوتر مع مقياس تصنيف خلل التوتر. خلال 4 دقائق فيديو، وسجلت حركات مثل خلل التوتر على أساس توزيع الجسم والمدة. تم تصنيف فرط التوسّع اللاإرادي للأطراف الأمامية ، أو موقف واسع أو فرط التوسّع في hindlimbs وكذلك الحدباء على أنه خلل التوتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61635/61635fig02large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61635/61635fig03.jpg"> الشكل 3: تقييم الحركات الشبيهة بخلل التوتر أثناء اختبار تعليق الذيل. نظام التهديف المطورة حديثا للحركات غير طبيعية خلال اختبار تعليق ذيل 2 دقيقة يقيم حركات مثل خلل التوتر في الأطراف الأمامية، hindlimbs والجذع من 0-8 نقاط في المجموع. للأطراف الأمامية، وفرط التمدد وعبور الأطراف الأمامية، فضلا عن انثناء منشط نحو الجذع مؤهلة مثل خلل التوتر. ل hindlimbs تم تسجيل فرط الاستعداد غير الطوعي وكذلك التراجع مع التمديد على خط الوسط كما خلل التوتر مثل. تم تسجيل تشويه truncal أكثر من 80 ٪ من الوقت المسجل مع نقطة واحدة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61635/61635fig03large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61635/61635fig04.jpg"> الشكل 4: الرسوم البيانية التمثيلية لمقياس تصنيف خلل التوتر واختبار تعليق الذيل. (A) يصور الرسم البياني مقياس تصنيف خلل التوتر للفئران المجهدة NaCl (الخط الأسود المنقط) والفئران غير المجهدة (خط برتقالي منقط) والفئران المُجهدة (الخط الأزرق الداكن). لكل نقطة زمنية، يتم إظهار متوسط القيم ± الخطأ القياسي للـ (SEM). (B) الرسم البياني يظهر تقييم الحركات غير الطبيعية خلال اختبار تعليق ذيل 2 دقيقة للفئران NaCl- perfused، وشدد (خط أسود منقط)، ووابين مُنقط، والفئران غير المجهدة (خط برتقالي منقط) و ouabain-perfused، وشدد الفئران (خط أزرق داكن). تم إجراء التحليل الإحصائي لمقياس تصنيف خلل التوتر واختبار تعليق الذيل باستخدام اختبار مان ويتني ذو الذيلين. بونفرروني هولم التصحيح (§) من قيم ف أظهرت فرقا كبيرا لفترة المراقبة من 72 ساعة. الأزرق الداكن * يشير إلى اختلافات كبيرة بين الفئران الم PERED، وشدد ووابين مُلَكّد، الفئران غير المجهدة، والأسود * تشير إلى اختلافات كبيرة بين NaCl-perfused، وشدد الفئران ووابين، وشدد الفئران وكذلك بين NaCl- perfused، وشدد الفئران و ouabain الم per eded، غير وشدد الفئران. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61635/61635fig04large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Implantation of Osmotic Pumps and Induction of Stress to Establish a Symptomatic, Pharmacological Mouse Model for DYT/PARK-ATP1A3 Dystonia at JoVE.com

Implantation of Osmotic Pumps and Induction of Stress to Establish a Symptomatic, Pharmacological Mouse Model for DYT/PARK-ATP1A3 Dystonia

نحن نقدم بروتوكولا لتوليد DYT الدوائية / بارك ATP1A3 نموذج الماوس خلل التوتر عن طريق زرع cannulas في العقد القاعدية والمخيخ متصلة مضخات التناضح. نحن وصف التعريفي من حركات مثل خلل التوتر عن طريق تطبيق التحدي الحركي وتوصيف النمط الظاهري عبر أنظمة التهديف السلوكية.

زرع مضخات التناضح والحث على الإجهاد لإنشاء أعراض, نموذج الماوس الدوائية لDYT/PARK-ATP1A3 خلل التوتر

Genetically modified mouse models face limitations, especially when studying movement disorders, where most of the available transgenic rodent models do ...

الهدف العام لهذا البروتوكول هو وصف الإجراءات التي ينطوي عليها إنشاء أعراض, نموذج الماوس الدوائية للDYT/PARK-ATP1A3 خلل التوتر باستخدام cannulas الدماغ في مضخات التناضح وحفز الإجهاد عن طريق المهام الحركية الصعبة. هذه الطريقة تفاصيل كيفية إنشاء نموذج الماوس الدوائية باستخدام تسليم المخدرات المزمنة عن طريق مضخات تناضحة إلى cannulas الدماغ متعددة وكيفية الحث على النمط الظاهري عن طريق المهام الحركية الصعبة. كما يوفر نموذج الإجهاد الحركي المعتدل رؤى حول دور التفاعلات الجينية والبيئية في اضطرابات الحركة، ويمكن تطبيقه على نماذج القوارض الأخرى.أجريت التجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية الوطنية والمؤسسية المعمول بها لرعاية الحيوانات واستخدامها. تبدأ من خلال إعداد مضخات التناضح في بيئة معقمة. أولا، ملء حقنة ملليلتر واحد مع 27 قنية تعبئة قياس مع محلول ouabain مصفى معقمة أو حل السيارة.عقد مضخة التناضح في وضع تستقيم، إدراج كانولا على طول الطريق في المضخة وملء الخزان ببطء حتى يظهر حل الزائدة على القمة. بعد ذلك، أدخل مشرف التدفق في المضخة. اخلع بعناية شفة بيضاء من تدفق مشرف مع مقص وربط قطعة من أنابيب الفينيل إلى وسيط تدفق.غمر كل مضخة في أنابيب Eppendorf مليئة في منتصف الطريق مع محلول ملحي ووضعها في ثيرموسيل 37 درجة من أجل ضمان أن معدل الضخ يصل إلى حالة ثابتة قبل بدء الجراحة. بعد تخدير الحيوان بعمق وفقًا للبروتوكولات المعتمدة ، ضع الحيوان في إطار مجسم وإصلاح الرأس باستخدام نصائح مطاطية أو قضبان الأذن غير الممزقة. بعد التطهير الشامل للمنطقة الجراحية ، استخدم مشرطًا لوضع شق في أعلى الرأس واستخدام المقص لمواصلة الشق وصولاً إلى أطرافه.فضح الجمجمة بمساعدة المشابك البلدغ ومسح periosteum مع قضيب القطن معقمة. محاذاة إما قلم أو غيض من قنينة ملطخة بالحبر الأسود مع bregma واستخدام الإحداثيات المناسبة للاحتفال نقاط الدخول الثلاث لقنيات الدماغ على الجمجمة. المقبل، بعناية حفر الثقوب لالقنية مزدوجة المعينة لال ganglia القاعدية وقنية واحدة مخصصة لخيخة المخيخ.حفر حفرة رابعة لملغي صغير بين المخطط والمخيخ. هذا المسمار في نهاية المطاف أن تكون جزءا لا يتجزأ من الاسمنت الأسنان وتوفير عقد إضافية لقنية. من أجل إنشاء جيب صغير للمضخة التناضحة على كل جانب من الحيوانات مرة أخرى، واستخدام ملقط الأنسجة لفصل طبقات الأنسجة تحت الجلد.تقدم ملقط نحو ساق واحدة الخلفية وفتح ملقط قليلا من أجل توسيع الجيب تحت الجلد. كرر نفس الإجراء للجانب الآخر، أولا إزالة ملقط من شق ثم دفعها بلطف نحو الساق الخلفية الثانية. مع مساعدة من ملقط، أدخل بعناية المضخات والقسطرة المتصلة في كل جيب تحت الجلد.وينبغي أن تسمح الجيب مضخة لشريحة بسهولة في. باستخدام حامل مضخة صغيرة، إدخال كانية ونسمة واحدة مع طول مخصص من 3.0 ملليمتر في حفرة حفرت في خط الوسط من المخيخ. فصل رئيس كانولا بعناية وإصلاح كانولا وكذلك المسمار الصغيرة مع الاسمنت الأسنان، مع الحرص على عدم تغطية قطعة ربط لأنابيب مضخة التناضح.تأكد من أن الأسمنت طبيب الأسنان المحيطة cannula قد جفت تماما قبل الاستمرار في عملية جراحية. قبل إدخال القنية المزدوجة في الثقوب التي تم حفرها ثنائيًا فوق العقدة القاعدية ، نعلق قطعتين طويلتين من أنابيب الفينيل 0.5 سنتيمترًا إلى قطعتي ربط القنب المزدوجتين. قم بتوصيل أنابيب الفينيل بمحول تشعب وملء نظام الأنابيب بالكامل بعناية مع محلول أوابيين معقمة.بعد ذلك، كرر نفس الخطوات كما هو موضح سابقا لقنية واحدة ونهاية عن طريق تحديد قنية مزدوجة مع أسمنت الأسنان. قم بتوصيل القسطرة من المضخات التناضحة إلى محول التشعب بالإضافة إلى قنية واحدة على التوالي. كلا مضخات لديها معدل تدفق متساو لذلك يجب الحرص على ربط مضخة التناضح مع حل مركزة مزدوجة لمحول التشعب لضمان أن نفس التركيز يصل إلى كل من العقد القاعدية و المخيخ.أغلق الشق على الجزء الخلفي من الحيوانات مع غرز قدر الإمكان دون الإفراط في الجلد. حقن تحت الجلد المالحة المعقمة، والتي ينبغي أن يكون درجة حرارة الجسم لتجنب الجفاف. إزالة الحيوان من إطار stereotactic وضعه في قفص الانتعاش.من أجل الحث على حركات تشبه خلل التوتر ، يجب أن تتعرض الفئران التي تم تطعيمها ouabain إلى المهام الحركية الصعبة كنموذج إجهاد معتدل بعد أربع ساعات من الجراحة وبشكل متكرر كل 24 ساعة بعد ذلك. وهذا لا يشمل توصيف السلوك للحيوانات. نُظهر هنا مثال مُندمج في السيارة، يتم وضعه على عمود خشبي خشن طوله 50 سنتيمترًا، ويواجه الأنفه لأسفل.توفير ما يكفي من الفراش في قاعدة القطب في حالة السقوط. بالنسبة للفئران التي تم تطعيمها في الوابين، يجب أن تبدأ الحيوانات في تقديم الأعراض الأولى مثل براديكينيزيا بعد أربع ساعات من الجراحة. ومع ذلك، بعد 24 ساعة من الجراحة، يجب أن تشاهد فرط الإفراط اللاإرادي للأطراف الأمامية أو الخلفية كعلامة على حركات تشبه خلل التوتر أثناء النسب.يجب أن تنزل الفئران القطب ثلاث مرات ، والسماح لمدة دقيقتين على الأقل من الانتعاش بين كل هبوط. ولا يحتاج وقت الهبوط إلى القياس. وينبغي أن يتبع اختبار القطب من قبل مهمة محرك الثاني، وذلك باستخدام قضيب الدورية.كما فعلت لاختبار أداء Rotarod، يتم وضع الفئران ouabain والمركبات من مجموعات الإجهاد على قضيب الدورية. لا يحتاج زمن الوقوع إلى القياس. كما هو الحال بالنسبة للاختبار السابق ، يجب وضع الفئران على قضيب الدورية ثلاث مرات ، مما يسمح دقيقتين من الانتعاش في الفترة الفاصلة بين أشواط.يمكن استخدام مقياس تصنيف خلل التوتر المعدل لتقييم تردد وشدة وتوزيع الجسم للحركات الشبيهة بخلل التوتر للفئران. يجب وضع الحيوانات في صندوق بلاستيكي أو خشبي ويجب تسجيل الحركات لفترة زمنية مدتها أربع دقائق. يجب أن يكون عاملي التقييم أعمى عن تعيين المجموعة.الحركات أو المواقف التي تعتبر مثل خلل التوتر هي فرط الإفراط في الأطراف الأمامية، موقف واسع، أو فرط اتساع الأطراف الخلفية، وكذلك الحدب. إذا تأثر جزء واحد فقط من الجسم، ينبغي اعتبار خلل التوتر البؤري. إذا تأثر الجذع واثنين على الأقل من أجزاء الجسم الأخرى، يجب أن يعتبر خلل التوتر معممة.نظام تسجيل ثان تم تطويره حديثًا من صفر إلى ثماني نقاط ، يقيم وجود وشدة الحركات الشبيهة بخلل التوتر أثناء اختبار تعليق الذيل. للاختبار، عقد الماوس من قبل الذيل بالقرب من قاعدته لمدة دقيقتين. من المستحسن تسجيل اختبار تعليق الذيل وتعيين درجة للتحليل اللاحق لللقطات.يتم تسجيل الأطراف الأمامية من صفر إلى أربع نقاط. يتم تسجيل التراجع المتكرر أو المستمر منشط واحد من كلا الأطراف الأمامية، فضلا عن فرط الإفراط جنبا إلى جنب مع عبور الأطراف الأمامية كما خلل التوتر مثل. يتم تسجيل حركات تشبه خلل التوتر في الأطراف الخلفية ، مما يعني التراجع والانقباض ، بالإضافة إلى فرط الإفراط المستمر ، من صفر إلى ثلاث نقاط.يتم تسجيل تشويه truncal الحالية أكثر من 80٪ من الوقت المسجل مع نقطة إضافية. المشبك في الأطراف الخلفية هو علامة غير محددة للضعف الحركي ولا ينبغي أن يسجل. يوضح هذا الرسم البياني نتائج مقياس تصنيف خلل التوتر.الفئران وشدد ouabain perfused تقدم حركات أكثر بكثير مثل خلل التوتر على مدى فترة المراقبة من 72 ساعة من مجموعة الوابين غير الإجهاد perabain، فضلا عن السيارة. هذه الصورة تصور النتائج من اختبار تعليق الذيل ويظهر نتيجة مماثلة لمقياس تصنيف خلل التوتر. لاحظ أن نتائج المتوسط من مجموع نقاط كل لكل نقطة زمنية.بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية زرع قنية الدماغ متعددة بشكل مجسم وكيفية زرع مضخات التناضح تحت الجلد. الميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي أنه يمكن تجنب الحقن المتكررة والمجهدة وأن الركيزة مثل الوبين ، والتي لولا ذلك يمكن أن يكون لها آثار جانبية على نطاق المنظومة يمكن تسليمها مباشرة إلى هياكل محددة في الدماغ.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Nicotine Induced Calcium Signaling and Neurotransmitter Release Along Ventral Hippocampal Axons

تصوير لايف من النيكوتين المستحثة اشارة الكالسيوم وناقل عصبي الإصدار جنبا إلى جنب بطني الحصين المحاوير

Sustained enhancement of axonal signaling and increased neurotransmitter release by the activation of pre-synaptic nicotinic acetylcholine receptors ...

Implantation of Miniosmotic Pumps and Delivery of Tract Tracers to Study Brain Reorganization in Pathophysiological Conditions

زرع Miniosmotic مضخات والتسليم استشفاف المسالك لدراسة إعادة تنظيم الدماغ في حالة المرضية

Pharmacological treatment in animal models of cerebral disease imposes the problem of repeated injection protocols that may induce stress in animals and ...

Measurement &amp; Analysis of the Temporal Discrimination Threshold Applied to Cervical Dystonia

Measurement & Analysis of the Temporal Discrimination Threshold Applied to Cervical Dystonia

قياس وتحليل لعتبة التمييز الزمنية المطبقة على خلل عنق الرحم

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being ...

Monitoring the Effect of Osmotic Stress on Secretory Vesicles and Exocytosis

رصد أثر الإجهاد ناضح على الحويصلات الافرازية والرقابة

Amperometry recording of cells subjected to osmotic shock show that secretory cells respond to this physical stress by reducing the exocytosis activity ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

استئصال الصفيحة الفقرية وغرس نافذه الحبل الشوكي في الماوس

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Autoradiography as a Simple and Powerful Method for Visualization and Characterization of Pharmacological Targets

أوتوراديوجرافي كطريقة بسيطة وقوية للتصور وتوصيف الأهداف الدوائية

In vitro autoradiography aims to visualize the anatomical distribution of a protein of interest in tissue from experimental animals as well as humans. The ...

Chronic Implantation of Multiple Flexible Polymer Electrode Arrays

الزرع المزمن للصفائف متعددة البوليمرات المرنة

Simultaneous recordings from large populations of individual neurons across distributed brain regions over months to years will enable new avenues of ...

Preparation of Peripheral Nerve Stimulation Electrodes for Chronic Implantation in Rats

إعداد أقطاب تحفيز الأعصاب الطرفية للزرع المزمن في الفئران

Peripheral nerve cuff electrodes have long been used in the neurosciences and related fields for stimulation of, for example, vagus or sciatic nerves. ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Induction and Assessment of Levodopa-induced Dyskinesias in a Rat Model of Parkinson's Disease

تحريض وتقييم خلل الحركة الناجم عن ليفودوبا في نموذج الفئران لمرض باركنسون

Levodopa (L-DOPA) remains the gold-standard therapy used to treat Parkinson&#39;s disease (PD) motor symptoms. However, unwanted involuntary movements ...