Name: implantation of osmotic pumps and induction of stress to establish a symptomatic, pharmacological mouse model for dyt/park-atp1a3 dystonia
Uploaded: 2020-09-12T15:00:00
Duration: 10 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation of Osmotic Pumps and Induction of Stress to Establish a Symptomatic, Pharmacological Mouse Model for DYT/PARK-ATP1A3 Dystonia at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי משרד החינוך והמחקר הפדרלי (BMBF DysTract ל-C.W.I. ) ועל ידי המרכז הבינתחומי למחקר קליני (IZKF) באוניברסיטת וירצבורג (Z2-CSP3 ל-L.R.). המחברים מודים ללואיזה פריס, קאלי רוהם, ורוניקה סנגר והיקה מנזל ועל עזרתם הטכנית, כמו גם על הלגה ברונר לטיפול בבעלי חיים.

<ol>
	<li>DeAndrade, M. P., Yokoi, F., van Groen, T., Lingrel, J. B., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Atp1a3+mutant+mice+as+a+model+of+rapid-onset+dystonia+with+parkinsonism.">Characterization of Atp1a3 mutant mice as a model of rapid-onset dystonia with parkinsonism.</a> Behavioural Brain Research. 216 (2), 659-665 (2011).</li><li>Dang, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+characterization+of+Dyt1+DeltaGAG+knock-in+mouse+as+a+model+for+early-onset+dystonia.">Generation and characterization of Dyt1 DeltaGAG knock-in mouse as a model for early-onset dystonia.</a> Experimental Neurology. 196 (2), 452-463 (2005).</li><li>Kreiner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+mechanisms+in+genetic+models+of+neurodegeneration:+are+the+mice+better+than+humans.">Compensatory mechanisms in genetic models of neurodegeneration: are the mice better than humans.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9, 56 (2015).</li><li>Albanese, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenomenology+and+classification+of+dystonia:+a+consensus+update.">Phenomenology and classification of dystonia: a consensus update.</a> Movement Disorders. 28 (7), 863-873 (2013).</li><li>Marsden, C. D., Obeso, J. A., Zarranz, J. J., Lang, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomical+basis+of+symptomatic+hemidystonia.">The anatomical basis of symptomatic hemidystonia.</a> Brain. 108, 463-483 (1985).</li><li>Carbon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+sensorimotor+network+activity+in+DYT1+dystonia:+a+functional+imaging+study.">Increased sensorimotor network activity in DYT1 dystonia: a functional imaging study.</a> Brain. 133, 690-700 (2010).</li><li>Carbon, M., Su, S., Dhawan, V., Raymond, D., Bressman, S., Eidelberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+metabolism+in+primary+torsion+dystonia:+effects+of+penetrance+and+genotype.">Regional metabolism in primary torsion dystonia: effects of penetrance and genotype.</a> Neurology. 62 (8), 1384-1390 (2004).</li><li>de Carvalho Aguiar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+Na+/K++-ATPase+alpha3+gene+ATP1A3+are+associated+with+rapid-onset+dystonia+parkinsonism.">Mutations in the Na+/K+ -ATPase alpha3 gene ATP1A3 are associated with rapid-onset dystonia parkinsonism.</a> Neuron. 43 (2), 169-175 (2004).</li><li>Brashear, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phenotypic+spectrum+of+rapid-onset+dystonia-parkinsonism+(RDP)+and+mutations+in+the+ATP1A3+gene.">The phenotypic spectrum of rapid-onset dystonia-parkinsonism (RDP) and mutations in the ATP1A3 gene.</a> Brain. 130 (3), 828-835 (2007).</li><li>Barbano, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+triggers+and+non-motor+findings+in+a+family+with+rapid-onset+dystonia-parkinsonism.">New triggers and non-motor findings in a family with rapid-onset dystonia-parkinsonism.</a> Parkinsonism &amp; Related Disorders. 18 (6), 737-741 (2012).</li><li>Isaksen, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia-induced+dystonia+and+abnormal+cerebellar+activity+in+a+mouse+model+with+a+single+disease-mutation+in+the+sodium-potassium+pump.">Hypothermia-induced dystonia and abnormal cerebellar activity in a mouse model with a single disease-mutation in the sodium-potassium pump.</a> PLOS Genetics. 13 (5), 1006763 (2017).</li><li>Sugimoto, H., Ikeda, K., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygous+mice+deficient+in+Atp1a3+exhibit+motor+deficits+by+chronic+restraint+stress.">Heterozygous mice deficient in Atp1a3 exhibit motor deficits by chronic restraint stress.</a> Behavioural Brain Research. 272, 100-110 (2014).</li><li>Calderon, D. P., Fremont, R., Kraenzlin, F., Khodakhah, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+substrates+of+rapid-onset+Dystonia-Parkinsonism.">The neural substrates of rapid-onset Dystonia-Parkinsonism.</a> Nature Neuroscience. 14 (3), 357-365 (2011).</li><li>Cutsforth-Gregory, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repetitive+exercise+dystonia:+A+difficult+to+treat+hazard+of+runner+and+non-runner+athletes.">Repetitive exercise dystonia: A difficult to treat hazard of runner and non-runner athletes.</a> Parkinsonism &amp; Related Disorders. 27, 74-80 (2016).</li><li>Pizoli, C. E., Jinnah, H. A., Billingsley, M. L., Hess, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+Cerebellar+Signaling+Induces+Dystonia+in+Mice.">Abnormal Cerebellar Signaling Induces Dystonia in Mice.</a> The Journal of Neuroscience. 22 (17), 7825-7833 (2002).</li><li>Jinnah, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+channel+agonists+and+dystonia+in+the+mouse.">Calcium channel agonists and dystonia in the mouse.</a> Movement Disorders. 15 (3), 542-551 (2000).</li><li>Rauschenberger, L., Knorr, S., Al-Zuraiqi, Y., Tovote, P., Volkmann, J., Ip, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Striatal+dopaminergic+dysregulation+and+dystonia-like+movements+induced+by+sensorimotor+stress+in+a+pharmacological+mouse+model+of+rapid-onset+dystonia-parkinsonism.">Striatal dopaminergic dysregulation and dystonia-like movements induced by sensorimotor stress in a pharmacological mouse model of rapid-onset dystonia-parkinsonism.</a> Experimental Neurology. 323, 113109 (2020).</li><li>Fernagut, P. O., Diguet, E., Bioulac, B., Tison, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MPTP+potentiates+3-nitropropionic+acid-induced+striatal+damage+in+mice:+reference+to+striatonigral+degeneration.">MPTP potentiates 3-nitropropionic acid-induced striatal damage in mice: reference to striatonigral degeneration.</a> Experimental Neurology. 185 (1), 47-62 (2004).</li><li>Guyenet, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+composite+phenotype+scoring+system+for+evaluating+mouse+models+of+cerebellar+ataxia.">A simple composite phenotype scoring system for evaluating mouse models of cerebellar ataxia.</a> Journal of Visualized Experiments. 39, 1787 (2010).</li><li>Ip, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tor1a+/-+mice+develop+dystonia-like+movements+via+a+striatal+dopaminergic+dysregulation+triggered+by+peripheral+nerve+injury.">Tor1a+/- mice develop dystonia-like movements via a striatal dopaminergic dysregulation triggered by peripheral nerve injury.</a> Acta Neuropathologica Communications. 4, 108 (2016).</li></ol>

לסופרים אין מה לחשוף.

מודל זה של העכבר הפרמקולוגי DYT/PARK-ATP1A3 מאפשר ניתוח מפורט של שינויים מבניים ונוירוכימיים תוך-מוחיים המושרה אך ורק על ידי עיכוב משאבת יון נתרן-אשלגן בגנגליה ובמשבר הקטן, כמו גם שינויים הקשורים לחשיפה ללחץ. במקרה של עכברים, מקסימום של שתי משאבות אוסמוטיות ניתן להשתיל תת עורית. אנו מציגים בכאן שיטה המפרטת משלוח תרופות כרוניות למבני מוח מרובים על ידי יישום נוולה כפולה המחוברת למתאם bifurcation בנוסף למנולה אחת. מתודולוגיה זו יכולה לשמש עבור כל יישום הדורש מבני מוח מרובים להיות סוטה בו זמנית וכרונית.
אנו מציגים מודל עכבר של הפרעת תנועה נדירה, שבה חולים מפתחים תסמינים קבועים לאחר חשיפה ללחץ. אינטראקציה גנטית-סביבתית זו משוערת עדיין אינה מובנת היטב, אך עשויה לייצג את אחת הפתוכינות המרכזיות בפיתוח DYT/PARK-ATP1A3. בעבר פורסמו שיטות שונות לחשיפת עכברים ללחץ וכוללות מכות רגליים חשמליות, ריסון, סביבה קרה אוחמה וחשיפה לריחות שונים 11,12,,13. במאמץ לחשוף עכברים לגורם מתח מתון עם ערך תרגום, אנו מתארים בכאן את סובייקטיביות חוזרת של עכברים משימות מוטוריות מאתגרות. למבחן הקוטב, בעלי חיים סוטה ouabain גילה הגזמה בלתי רצונית של הגפיים הקדמיות וגפיים אחוריות. תנועות אלה היו דומות מאוד לתנועות כמו דיסטוניה שנצפו במהלך הקלטת וידאו של 4 דקות של בעלי החיים, כמו גם את מבחן השעיית הזנב. היישום של מתח מתון בצורה של משימות מוטוריות מאתגרות עשוי להוכיח שימושי במודלים אחרים של עכבר מראה סימפטומים מוטוריים או ניוון עצבי, שבו אינטראקציות גנים-סביבתיים להשפיע באופן מסיבי על מידת התקדמות המחלה.
יש חוסר כללי של משימות התנהגותיות מוגדרות מראש, כמו גם סולמות דירוג כדי לסווג תנועות ותנונות חריגות בעכברים. רוב המשימות המוטוריות הזמינות חושפות חריגות לא ספציפיות, כגון אבזם אחורי, שהיא תופעה ידועה במודלים רבים של עכברים של הפרעות תנועה עם ניווןעצבי 18,19. עבור האפיון הנכון של פנוטיפ, עם זאת יש צורך לנתח אם מודל העכבר מסכם את התכונות הבולטות של המחלה. בזאת, אנו מציגים את הגירסה שונה של סולם דירוג dystonia בשימוש בעבר להערכת נכות מוטורית במודלים עכבר dystonia15,16. בנוסף פיתחנו מערכת ניקוד מבוססת משקיפים למבחן מתלי הזנב, אשר הוקמה באופן דומה לס scales הדירוג הקליני של סטיטוניה אנושית. שני סולמות הדירוג מראים ציון גבוה משמעותית בעכברים סוטה, הדגיש בהשוואה ouabain סוטה, בעלי חיים לא לחוץ, כמו גם בעלי חיים סוטה רכב. החסרונות של כל מערכת ניקוד מבוססת משקיפים הם ההכשרה הנדרשת של raters כדי להבטיח ניקוד עקבי כדי להפחית את השונות הצופה, כמו גם את הסכנה של הטיה אפשרית של rater אם לא עיוור באופן מלא לקבוצה ניתח. עם זאת, מערכות ניקוד מבוססות משקיפים עדיין מציגות שיטה נגישה לאפיון פנוטיפ וניתן להתאים אותה למודל העכבר שנותח, כפי שנעשה בפרויקט הנוכחי להערכת תנועות כמו דיסטוניה. כדי להבטיח ניקוד עקבי בקרב מדרגים שונים, יש להפוך את סרטוני ההדרכה לזמינים. כדי להפחית כל הטיה פוטנציאלית, מומלץ כי raters שונים ציון אותם קטעי וידאו, כי הציונים בודדים הם בממוצע. שתי מערכות הניקוד המוזכרות בעבודה זו רשומות את הנוכחות של תנועות דמויות סטיטוניה בבעלי חיים. מאזני הדירוג ניתן להתאים על פי הדרישות הספציפיות בתוך פרויקט, כפי שנעשה בעבר על ידי IP ואח ', שם רק האחוריים הובקעו עבור תנועות כמו סטיטוניה במודל עכבר עבור dystonia 1 (DYT-TOR1A)20. ניתן להשלים את מאזני הדירוג על ידי מערכות ניקוד אחרות שפורסמו בעבר, מתוך הערכה למשל את מידת בריידיקינטיה מכרסמים כפי שנעשה עם ציון נכות הקטר על ידי קלדרון ואח '13.

היתרונות של משלוח סמים רציף ישירות לתוך המוח הם רבים. זריקות חוזרות ונשנות ותכופות, המייצגות גורם מתח מיותר לבעלי חיים, ניתן להימנע וריכוז תוך-מוחי קבוע יותר של התרופה ניתן להשיג. זה תקף במיוחד כאשר תרופות המנוהלות באופן שיטתי להיכשל לחדור בקלות את מחסום מוח הדם. יתר על כן, משלוח תרופות כרוניות באמצעות משאבות אוסמוטי מאפשר משלוח מקומי של מצעים שאחרת היו תופעות לוואי כלל מערכתית. התרופות ניתן להעביר באופן ממוקד למבני המוח הרצויים, ההשפעה וכתוצאה מכך ניתן לעקוב ישירות. זה יכול להיות מנוצל עבור מערך של יישומים, כגון המחקר של השפעות טיפוליות, כמו גם את המחקר של פתוכיכניזם. יישום זה האחרון שימש בפרויקט בזאת על מנת ליצור מודל עכבר תרופתי עבור dystonia.
הניתוח וההבנה של תסמונות דסטוניות, המייצגות את הפרעת התנועה השלישית הנפוצה ביותר, הוגבלו במידה רבה על ידי העובדה כי מודלים גנטיים של בעלי חיים להיכשל במידה רבה לשחזר את פנוטיפ המחלה נמצא אדם חולה, כמו גם את הפתופיזיולוגיה. בעיה זו אינה מוגבלת תסמונות סטיסטון, אבל למעשה נוגע מודלים רבים של מכרסמים טרנסגניים בתחום הפרעות תנועה1,,2. הסיבה להיעדר פנוטיפ במודלים מכרסמים טרנסגנית עשויה להתבסס על מנגנוני פיצוי יעילים מאוד3. במקרה של סטיטוניה, המחלה מאופיינת התכווצויות שרירים לא רצוניות הגורמות לתנועות פיתול ותתנוחה חריגה4. המחקר של סיבות משניות (כלומר, פגיעה מוחית) של סימפטומים סטיבוליים, עזר לזהות את המבנים המעורבים בביטוי של חריגות מוטוריות אלה, כגון גנגליה בסיס5. מחקרי הדמיה מוחית של צורות תורשתיות של דסטוניה הראו חריגות תפקודיות כמעט בכל אזורי המוח האחראים על שליטה מוטורית ושילוב sensorimotor6,7. עם זאת, מודלים מכרסמים עדיין נדרשים כדי להעמיק את ההבנה של תפקוד עצבי ברמת רשת מולקולרית בקנה מידה גדול, כמו גם לפיתוח אפשרויות טיפוליות. זה המקום שבו מודלים עכברים פרמקולוגיים מציעים את האפשרות לשכפל את התכונות הקליניות והפתולוגיות של מחלה באופן מדויק יותר.
דיסטוניה-פרקינסון מהירה (DYT/PARK-ATP1A3; RDP; DYT12) היא אחת הצורות התורשתיות של דסטוניה. היא נגרמת על ידי מוטציות אובדן תפקוד בגן ATP1α3, אשר מקודד עבור α3-subunit של Na+/ K+-ATPase8. יתר על כן, הוא מוכר כי נשאים מוטציה גנטית יכול להיות ללא סימפטומים במשך שנים לפני פיתוח חריף של סטיטוניה כללית מתמיד פרקינסון לאחר חשיפה לאירוע מלחיץ. אכן, ההתפכחות של DYT / PARK-ATP1A3 הוא אירועים לא שלמים ומלחיצים הפועלים כטווח טריגר בין לחץ יתר פיזי וטמפרטורות קיצוניות לצריכת יתר של אלכוהול וזיהומים9,,10. על מנת ללמוד DYT / PARK-ATP1A3 ולמצוא התערבויות טיפוליות פוטנציאליות, זה כבר ניסה פעמים רבות לחקות את התפתחות המחלה תלוית מתח במודלים מכרסמים. עם זאת, מלבד אחד גנטי קיים DYT / פארק-ATP1A3 מודל העכבר, שבו תנועות חריגות ארעיות כמו עוויתות היו מושרה על ידי היפותרמיה, כל מודלים העכבר הגנטי שפורסמו עבור DYT / פארק-ATP1A3 לא הצליחו לייצרסימפטומים סימפטומים סימפטומים סימפטומים סימפטומים 1,,11,12. קלדרון ואח ' הוכיח בעבר כי חסימת α3-subunit דו-צדדי בגרגליה בסיס המוח הקטן באמצעות ouabain גליקוסייד הלב בעכברים מסוג פראי גורמת הפרעה הליכהקלה 13. החשיפה הנוספת לזעזועים ברגליים חשמליות בסביבה חמה הובילה לפנוטיפ דיסטוניק ובריידיקינטי, ובכך הוכיחה כי התזת אוובין כרונית וממועדת ולאחריה מתח מחקה בהצלחה את הפנוטיפ DYT/PARK-ATP1A3.
עם זאת, חשיפת בעלי חיים לזעזועים ברגליים חשמליות בסביבה חמה של 38-40 °C על פני שעתיים של תקופה גורם כאב וחרדה בבעלי חיים, המייצגים גורמים מבלבלים, במיוחד להערכת שינויים במערכת catecholamine הקשורים להתפתחות של דסטוניה. לכן, אנו מתארים בזאת סוג אחר של פרדיגמת מתח עם ערך תרגום גבוה, אשר מתייחס בחזרה לעובדה כי פעילות גופנית קלה עד מתונה תוארו כגורמים בחולים DYT/PARK-ATP1A39. יתר על כן, פעילות גופנית חוזרת היא טריגר ידוע עבור דיסטוניה מוקד14. עכברים היו נתונים שוב ושוב משימות מוטוריות מאתגרות המורכבות משלושה צאצאים של מוט עץ ("מבחן מוט") ושלוש ריצות על שולחן רוטארוד ("מבחן ביצועים Rotarod"). מיקום בעלי חיים על גבי מוט עץ 50 ס"מ שימש כדי לאלץ את בעלי החיים לרדת, מערכת Rotarod הועסק לחשוף עכברים לפעילות כפויה על ידי הצבתם על מוט מסתובב.
האפיון של פנוטיפ המנוע של מודל עכבר עבור dystonia הוא מאתגר במיוחד בשל היעדר בדיקות מוגדרות מראש ציונים. עם זאת, וריאציה אחת של הערכת נכות מוטורית שימשה שוב ושוב בשנים האחרונות על מנת להעריך את חומרת והפצה של תנועות כמו dystonia מכרסמים13,15,16. אנו מציגים בזאת גרסה שונה של סולם הדירוג dystonia, אשר הוכיח להיות יעיל בהערכת פנוטיפ כמו סטיטוניה של בעלי חיים כאשר נצפה על פני פרק זמן של ארבע דקות. כשיטה שנייה להערכת תנועות כמו דם, אנו מציגים מערכת ניקוד חדשה שפותחה להערכת תנועות חריגות במהלך בדיקת השעיית זנב. זה מאפשר הערכה של התדירות ומשך של תנועות כמו סטיטוניה ותקורות של הגפיים הקדמיות, הגפיים האחוריות, כמו גם תא המטען.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% saline</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td></td>
			<td>PZN06178437</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alzet osmotic pumps</td>
			<td>Durect</td>
			<td>4317</td>
			<td>model 1002, &#64258;owrate 0.25 &#956;L/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anchor Screws</td>
			<td>AgnTho&#39;s</td>
			<td>MCS1x2</td>
			<td>2 mm long with a thread of 1mm O.D.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog Clamps</td>
			<td>Agntho&#39;s</td>
			<td>13-320-035</td>
			<td>straight, 3.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacain 0.25% Jenapharm</td>
			<td>mibe GmbH Arzneimittel</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula and Minipump Holder</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51636</td>
			<td>designed to hold 3.4 mm cannula heads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula Bifurcation</td>
			<td>Plastics One</td>
			<td>21Y</td>
			<td>custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula tubing</td>
			<td>Plastics One</td>
			<td>C312VT/PKG</td>
			<td>vinyl, 0.69 mm x 1.14 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5SF forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>fine forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye cream Bepanthen</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Anesthesia Mask for Stereotaxic, Mouse</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>56109M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardened fine scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Rotary Micromotor Kit</td>
			<td>Foredom</td>
			<td>K.1070-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane CP 1 mL/mL, 250 mL</td>
			<td>cp-pharma</td>
			<td>1214</td>
			<td>prescription needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane System Dr&#228;ger Vapor 19.3</td>
			<td>Dr. Wilfried M&#252;ller GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kallocryl A/C</td>
			<td>Speiko</td>
			<td>1615</td>
			<td>dental cement, liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kallocryl CPGM rot</td>
			<td>Speiko</td>
			<td>1692</td>
			<td>dental cement, red powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse and neonates adaptor</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td>51625</td>
			<td>adaptor for mice for a traditional U-frame</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle holder</td>
			<td>KLS Martin Group</td>
			<td>20-526-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Rupture Ear Bars and Rubber Tips f/ Mouse Stereotaxic</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td>51649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octenisept</td>
			<td>Sch&#252;lke</td>
			<td>118211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmotic Pump Connector Cannula for Mice, double</td>
			<td>Plastics One</td>
			<td>3280PD-3.0/SPC</td>
			<td>28 Gauge, length 4.0 mm, c/c distance 3.0 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmotic Pump Connector Cannula for Mice, single</td>
			<td>Plastics One</td>
			<td>3280PM/SPC</td>
			<td>28, Gauge, custom length 3.0 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ouabain octahydrate 250 mg</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>03125-250MG</td>
			<td>CAUTION: toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision balance</td>
			<td>Kern &#38; Sohn</td>
			<td>PFB 6000-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal Thermal Probe</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl 50 mg/mL, injectable</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>Carprofen, prescription needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Warmer X1 with Mouse Heating Pad</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53800M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RotaRod Advanced</td>
			<td>TSE Systems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>screw driver set</td>
			<td>Agntho&#39;s</td>
			<td>30090-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Burrs</td>
			<td>Agntho&#39;s</td>
			<td>HM71009</td>
			<td>0.9 mm &#216; burr</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Burrs</td>
			<td>Agntho&#39;s</td>
			<td>HM71014</td>
			<td>1.4 mm &#216; burr</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StereoDrive</td>
			<td>Neurostar</td>
			<td></td>
			<td>software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic instrument</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td></td>
			<td>custom made by Neurostar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic robot</td>
			<td>Neurostar</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>suture: coated vicryl, polyglatin 910</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>V797D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoMixer C</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>5382000015</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation of osmotic pumps and induction of stress to establish a symptomatic, pharmacological mouse model for dyt/park-atp1a3 dystonia

מודלים מהונדסים גנטית העכבר להתמודד עם מגבלות, במיוחד כאשר לומדים הפרעות תנועה, שבו רוב המודלים מכרסמים טרנסגנים זמינים אינם מציגים פנוטיפ מוטורי הדומה להיבטים הקליניים של המחלה האנושית. מודלים פרמקולוגיים של עכברים מאפשרים מחקר ישיר יותר של הפתומכניזם והשפעתם על הפנוטיפ ההתנהגותי. משאבות אוסמוטיות המחוברות לתנומות במוח פותחות את האפשרות ליצירת מודלים של עכברים פרמקולוגיים באמצעות אספקת תרופות מקומית וכרונית. עבור הפרעת תנועה תורשתית של דיסטוניה-פרקינסון התחלה מהירה, מוטציה אובדן של פונקציה בα3-subunit של Na+/ K+-ATPase יכול להיות מדומה על ידי מצור ספציפי מאוד באמצעות ouabain גליקוסייד. על מנת לחסום באופן מקומי את α3-subunit בגרגליה בזל המוח הקטן, שהם שני מבני המוח האמין להיות מעורב במידה רבה פתוגנזה של דיאלציה-פרקינסון התחלה מהירה, נולה דו-צדדית מושתל באופן סטריאוטוני לתוך סטריאטום ו cannula יחיד נוסף הוא הציג לתוך המוח הקטן. הקניול מחוברים באמצעות צינורות ויניל לשתי משאבות אוסמוטיות, המושתלות באופן תת עורי על גב בעלי החיים ומאפשרות מסירה כרונית ומדויקת של אובאין. מודל העכבר הפרמקולוגי עבור פקיונות-פרקינסון התחלה מהירה נושא את היתרון הנוסף של סיכום התכונות הקליניות והפתולוגיות של נשאי מוטציה אסימפטומטית וסימפטומטית. בדיוק כמו נשאי מוטציה של פרקינסון דיסטוניה בשלב מהיר, העכברים עם ouabain חדורים לפתח תנועות כמו דיסטוניה רק לאחר חשיפה נוספת ללחץ. אנו מפגינים פרדיגמה קלה של לחץ ומציגים שתי מערכות ניקוד מותאמות להערכת פנוטיפ מוטורי.

איור 4 שונה מרושנברגר ואח'17. לניתוח נתונים הן של סולם הדירוג של סטיטוניה(A)והן של בדיקת מתליהזנב( B ), חשב את הציון הכולל עבור כל נקודת זמן עבור כל בעל חיים. יש להתוות את הצבע של כל נקודת זמן וכל קבוצה בגרף מתאים. יש לחקור את התפלגות הערכים ויש להחיל את הבדיקה הסטטיסטית המתאימה כדי לקבוע משמעות. עם מספר מספיק של בעלי חיים, פנוטיפ מוטורי ניתן לזהות הן עם סולם דירוג dystonia, כמו גם עם הערכה של תנועות חריגות במבחן מתלה זנב. הפנוטיפ כמו דיסטוניה מדגים על ידי הציון המוטורי גבוה באופן משמעותי בשתי ההערכות בקבוצה ouabain סוטה, הדגיש בהשוואה לעכברים ouabain, לא לחוץ, כמו גם עכברי הבקרה.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61635/61635fig1v2.jpg"> איור 1: השלבים הכירורגיים העיקריים להשתלת נוולה ומשאבת אוסמוטי. (א)עבור הקואורדינטות שצוינו, יש לקדוח חורים דו-צדדיים עבור הנולה הכפולה המיועדת לגרנליה הבזלית ולצינולה היחידה הממוקמת בקו האמצע של המוח הקטן. שתי המשאבות האוסמוטיות הבנויות במלואן מוצגות בכל צד של החיה. (ב)התמונה מראה נולית מושתלת, יחיד לתוך המוח הקטן, קבוע עם מלט שיניים. הנולה הכפולה של הגנגליה הבזלית צריכה להיות מחוברת למאמת הדו-פורציה ולהתמלא מראש באובאין לפני ההשתלה. תמונהשלההליך המוגמר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61635/61635fig1v2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61635/61635fig02.jpg"> איור 2: הערכת תנועות כמו סטיטוניה עם סולם דירוג סטיטוניה. במהלך וידאו 4 דקות, תנועות כמו dystonia קיבלו ציון בהתבסס על התפלגות הגוף ומשך. לחץ יתר לא רצוני של הגפיים הקדמיות, עמדה רחבה או יתר לחץ דם של אחוריים, כמו גם kyphosis דורגו כמו דיסטוניה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61635/61635fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61635/61635fig03.jpg"> איור 3: הערכת תנועות כמו דם במהלך בדיקת השעיית זנב. מערכת הניקוד החדשה שפותחה עבור תנועות חריגות במהלך מבחן מתלה זנב 2 דקות מעריך תנועות כמו סטיטוניה בגפיים הקדמיות, הגפיים האחוריות ותא המטען מ 0-8 נקודות בסך הכל. עבור הגפיים הקדמיות, יתר לחץ דם וחוצה את הגפיים הקדמיות, כמו גם כיפוף טוניק לכיוון תא המטען מוסמך כמו סטיטוניה. עבור האחוריים הארכת יתר לא רצונית, כמו גם נסיגה עם הארכה מעל קו האמצע הובקע כמו דיסטוניה. עיוות של יותר מ-80% מהזמן שהוקלט הובקע בנקודה אחת. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61635/61635fig03large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61635/61635fig04.jpg"> איור 4: גרפים מייצגים של סולם דירוג ההסטוניה ומבחן השעיית הזנב. (א)הגרף מתאר את סולם הדירוג של דיסטוניה עבור עכברים מנוטרפים ב-NaCl (קו שחור מנוקד), עכברים מנוקבים, לא לחוצים (קו כתום מנוקד) ועכברים סתומים ולחוץ (קו כחול כהה). עבור כל נקודת זמן, מוצגים ערכי ממוצע ± שגיאה סטנדרטית של ממוצע (SEM). (ב)הדיאגרמה מציגה את ההערכה של תנועות חריגות במהלך בדיקת מתלים זנב של 2 דקות עבור עכברים מנוטרלים, הדגיש NaCl (קו שחור מנוקד), עכברים מנוקבים, לא לחוץ (קו כתום מנוקד) ועכברים מנוקבים, לחוץ (קו כחול כהה). ניתוח סטטיסטי נעשה עבור סולם הדירוג של סטטיסטיקה ומבחן השעיית הזנב באמצעות מבחן מאן-וויטני הדו-זנב. תיקון Bonferroni-Holm (§) של ערכי p הראה הבדל משמעותי עבור התקופה התצפיתית של 72 שעות. כחול כהה * מציין הבדלים משמעותיים בין עכברים מנומנם, עכברים לחוצים ועכברים מנומנם, לא לחוץ, שחור * לציין הבדלים משמעותיים בין עכברים מנוטרלים NaCl, עכברים הדגיש ועכברים ouabain,לחוץ, כמו גם בין NaCl-perfused, עכברים לחוצים ועכברים סוטה ouabain, לא לחוץ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61635/61635fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Implantation of Osmotic Pumps and Induction of Stress to Establish a Symptomatic, Pharmacological Mouse Model for DYT/PARK-ATP1A3 Dystonia at JoVE.com

Implantation of Osmotic Pumps and Induction of Stress to Establish a Symptomatic, Pharmacological Mouse Model for DYT/PARK-ATP1A3 Dystonia

אנו מספקים פרוטוקול ליצירת מודל עכבר DYT/PARK-ATP1A3 תרופתי Dystonia באמצעות השתלת כנולות לתוך גנגליה בסיסת ומזכרת המחוברים למשאבות אוסמוטיות. אנו מתארים אינדוקציה של תנועות כמו dystonia באמצעות יישום של אתגר מוטורי ואפיון הפנוטיפ באמצעות מערכות ניקוד התנהגותי.

השתלה של משאבות אוסמוטיות אינדוקציה של מתח כדי להקים סימפטומטי, מודל עכבר פרמקולוגי עבור DYT / פארק-ATP1A3 Dystonia

Genetically modified mouse models face limitations, especially when studying movement disorders, where most of the available transgenic rodent models do ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לתאר את ההליכים המעורבים בהקמת מודל עכבר סימפטומטי, תרופתי עבור דיסטוניה DYT / PARK-ATP1A3 באמצעות cannulas המוח במשאבות osmotic ועל ידי גרימת מתח באמצעות משימות מוטוריות מאתגרות. שיטה זו מפרטת כיצד להקים מודל עכבר תרופתי באמצעות אספקת תרופות כרונית באמצעות משאבות אוסמוטיות לתרפסות מוח מרובות וכיצד לגרום לפנוטיפ באמצעות משימות מוטוריות מאתגרות. פרדיגמת הלחץ המוטורי המתון מספקת גם תובנות על תפקידן של אינטראקציות גנים-סביבתיות בהפרעות תנועה, ו ניתן ליישם אותן על מודלים אחרים של מכרסמים.ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות הלאומיות והמוסדיות הרלוונטיות לטיפול בבעלי חיים ולשימוש בהם. התחל על ידי הכנת משאבות osmotic בסביבה סטרילית. ראשית, למלא מזרק מיליליטר אחד עם 27 מד מילוי cannula עם פתרון ouabain מסונן סטרילי או פתרון רכב.החזק את המשאבה osmotic במצב זקוף, להכניס את cannula כל הדרך לתוך המשאבה לאט למלא את המאגר עד פתרון עודף מופיע על גבי. לאחר מכן, הכנס את מנחה הזרימה למשאבה. בזהירות להוריד את אוגן לבן של מנחה הזרימה עם מספריים ולחבר חתיכת צינורות ויניל מנחה הזרימה.טביעה כל משאבה לתוך צינורות Eppendorf מלא באמצע הדרך עם תמיסת מלח ולשים אותם לתוך תרמוסיקלר 37 מעלות על מנת להבטיח כי קצב השאיבה מגיע למצב יציב לפני תחילת הניתוח. לאחר שהחיה נמצאת בהרדדמה עמוקה על פי פרוטוקולים שאושרו, מניחים את החיה במסגרת סטראוטקטית ומתקן את הראש באמצעות קצות גומי או פסי אוזניים שאינם קרועים. לאחר חיטוי יסודי של האזור הכירורגי, השתמש באזמל כדי למקם חתך בחלק העליון של הראש ולהשתמש במספריים כדי להמשיך את החתך עד לגפיים הקדמיות.חשוף את הגולגולת בעזרת מהדקי בולדוג ולנגב את periosteum עם מוליך כותנה סטרילית. ליישר עט או קצה של cannular מוכתם בדיו שחור עם bregma ולהשתמש בקואורדינטות המתאימות כדי לסמן את שלוש נקודות הכניסה עבור cannulas המוח על הגולגולת. לאחר מכן, לקדוח בזהירות את החורים עבור cannular כפול המיועדים גנגליה הבסיסית ואת cannula יחיד המיועד המוח הקטן.לקדוח חור רביעי עבור בורג קטן בין הסטריאטום והקטנת. בורג זה בסופו של דבר יהיה מוטבע מלט שיניים ולספק אחיזה נוספת עבור cannulas. על מנת ליצור כיס קטן עבור המשאבה osmotic בכל צד של בעלי החיים בחזרה, להשתמש מלקחיים רקמה להפריד את שכבות רקמה תת עורית.לקדם את המדפים לכיוון רגל אחורית אחת ולפתוח את המדפים מעט על מנת להרחיב את הכיס התת עורי. חזור על אותו הליך עבור הצד השני, תחילה להסיר את המדפים מן החתך ולאחר מכן דוחף אותם בעדינות לכיוון הרגל האחורית השנייה. בעזרת ממטרים, הכנס בזהירות את המשאבות ואת הקטטר המחובר לכל כיס תת עורי.הכיס אמור לאפשר למשאבה להחליק פנימה בקלות. באמצעות מחזיק משאבה מיני, להציג cannula osmotic יחיד עם אורך מותאם אישית של 3.0 מילימטרים לתוך החור שנקדח באמצע קו המוח הקטן. נתק את ראש הצינורית בזהירות ותקן את הצינורית, כמו גם את הבורג הקטן עם מלט דנטלי, דואג לא לכסות את החלק המחבר עבור צינורות של המשאבה osmotic.ודא כי מלט רופא השיניים המקיף את cannula התייבש באופן מלא לפני שתמשיך עם הניתוח. לפני החדרת הצינורית הכפולה לתוך החורים שנקדחו דו-צדדית מעל הגחמות הבסיסיות, חבר שתי חתיכות ארוכות של צינורות ויניל באורך 0.5 ס"מ לשתי החלקים המחברים של הצינורית הכפולה. חבר את צינורות ויניל עם מתאם bifurcation בזהירות מראש את המערכת צינורות כולו עם פתרון ouabain סטרילי או רכב.לאחר מכן, לחזור על אותם שלבים כפי שהוצג בעבר עבור cannula יחיד ולסיים על ידי תיקון cannula כפול עם מלט שיניים. חבר את הקטטרים של משאבות אוסמוטי מתאם bifurcation, כמו גם cannula יחיד בהתאמה. שתי המשאבות יש קצב זרימה שווה כדי להיזהר לחבר את המשאבה osmotic עם פתרון מרוכז כפול מתאם bifurcation כדי להבטיח כי אותו ריכוז מגיע הן את הגנגליה הבסיסית ואת המוח הקטן.סגור את החתך על גב בעלי החיים עם תפרים ככל האפשר מבלי לטרטר את העור. תת עורית להזריק מלוחים סטריליים, אשר צריך להיות טמפרטורת הגוף, כדי למנוע התייבשות. מוציאים את החיה מהמסגרת הסטראוטקטית ומ מניחים אותה בכלוב התאוששות.על מנת לגרום לתנועות כמו דיסטוניה, עכברים ouabain-perfused צריך להיות חשוף למשימות מוטוריות מאתגרות כמו פרדיגמת מתח קלה ארבע שעות לאחר הניתוח וחוזר על עצמו כל 24 שעות לאחר מכן. זה לא כולל אפיון התנהגותי של בעלי החיים. אנו מדגימים כאן את הדוגמה של בעל חיים מנוון רכב, אשר ממוקם על מוט עץ משטח מחוספס 50 ס"מ, האף פונה כלפי מטה.לספק מספיק מצעים בבסיס העמוד במקרה של נפילות. עבור עכברים ouabain-perfused, בעלי החיים צריכים להתחיל להציג סימפטומים ראשונים כמו bradykinesia ארבע שעות לאחר הניתוח. עם זאת, 24 שעות לאחר הניתוח, אתה צריך לראות יתר לחץ דם לא רצוני של הגפיים הקדמיות או האחוריות כסימן של תנועות כמו דיסטוניה במהלך הירידה.העכברים צריכים לרדת מהמוט שלוש פעמים, לאפשר לפחות שתי דקות של התאוששות בין כל ירידה. אין צורך למדוד את זמן הירידה. מבחן המוט צריך להיות מלווה במשימה מוטורית שנייה, באמצעות מוט מסתובב.כפי שנעשה עבור מבחן הביצועים Rotarod, ouabain ועכברים מנוקב רכב מקבוצות הלחץ ממוקמים על מוט מסתובב. ההשהיה ליפול לא צריכה להימדד. כפי שנעשה עבור הבדיקה הקודמת, עכברים צריכים להיות ממוקמים על מוט מסתובב שלוש פעמים, המאפשר שתי דקות של התאוששות בין ריצות.ניתן להשתמש בסולם דירוג הדיסטוניה שהשתנה כדי להעריך את התדירות, החומרה והתפלגות הגוף של תנועות עכברים דמויי דיסטוניה. בעלי החיים צריכים להיות ממוקמים בקופסת פלסטיק או עץ ויש להקליט תנועות לתקופת זמן של ארבע דקות. יש לעוור את המדרגים למשימה הקבוצתית.תנועות או יציבות הנחשבות כמו דיסטוניה הן יתר לחץ דם לא רצוני של הגפיים הקדמיות, עמדה רחבה, או יתר לחץ דם של גפיים אחוריות, כמו גם קיפוזיס. אם רק חלק גוף אחד מושפע, דיסטוניה צריכה להיחשב כמו מוקד. אם תא המטען ולפחות שני חלקי גוף אחרים מושפעים, יש לראות בדיסטוניה כהכללה.מערכת ניקוד שנייה שפותחה לאחרונה מאפס לשמונה נקודות, מעריכה את הנוכחות והחומרה של תנועות דמויי דיסטוניה במהלך בדיקת השעיית זנב. למבחן, להחזיק את העכבר על ידי הזנב ליד הבסיס שלה במשך שתי דקות. מומלץ להקליט את מבחן השעיית הזנב ולהקצות ציון לניתוח הבא של הצילומים.הגפיים הקדמיות מבקיעות מאפס לארבע נקודות. נסיגות טוניק חוזרות ונשנות או מתמשכות של אחת משתי הגפיים הקדמיות, כמו גם יתר לחץ דם בשילוב עם חציית הגפיים הקדמיות הם הבקיע כמו דיסטוניה. תנועות כמו דיסטוניה של הגפיים האחוריות, כלומר נסיגה והתכווכת, כמו גם יתר לחץ דם מתמשך, הם הבקיע מאפס לשלוש נקודות.עיוות truncal נוכח מעל 80% מהזמן המתועד הוא הבקיע עם נקודה נוספת. אבזם גפיים אחורי הוא סימן לא ספציפי לפגיעה מוטורית ואין להבקיע אותו. גרף זה מציג את התוצאות של סולם דירוג הדיסטוניה.העכברים הדגיש ouabain-perfused להציג באופן משמעותי יותר תנועות דמויי דיסטוניה על פני תקופה תצפיתית של 72 שעות מאשר הקבוצה שאינה מתח ouabain חדור, כמו גם את חיות הרכב. תמונה זו מתארת את התוצאות ממבחן המתלים של הזנב ומראה תוצאה דומה לסקאלה של דירוג דיסטוניה. שים לב כי התוצאות של הממוצע מן הציון הכולל של כל בעל חיים עבור כל נקודת זמן.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה כיצד להשתיל באופן סטריאוטיפי cannulas המוח מרובים וכיצד להשתיל תת עורית משאבות osmotic. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא כי זריקות חוזרות ומלחיצות ניתן להימנע כי מצע כמו ouabain, אשר אחרת היו תופעות לוואי כלל מערכתית ניתן להעביר ישירות למבני מוח ספציפיים.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Nicotine Induced Calcium Signaling and Neurotransmitter Release Along Ventral Hippocampal Axons

הדמיה חיה של איתות הניקוטין מושרה סידן והשחרור הנוירוטרנסמיטר לאורך האקסונים בהיפוקמפוס הגחון

Sustained enhancement of axonal signaling and increased neurotransmitter release by the activation of pre-synaptic nicotinic acetylcholine receptors ...

Implantation of Miniosmotic Pumps and Delivery of Tract Tracers to Study Brain Reorganization in Pathophysiological Conditions

השרשה של Miniosmotic משאבות ומשלוח של קליעים נותבים בדרכי לחקר מוח בארגון מחדש תנאי pathophysiological

Pharmacological treatment in animal models of cerebral disease imposes the problem of repeated injection protocols that may induce stress in animals and ...

Measurement &amp; Analysis of the Temporal Discrimination Threshold Applied to Cervical Dystonia

Measurement & Analysis of the Temporal Discrimination Threshold Applied to Cervical Dystonia

מדידה &amp; ניתוח של הסף אפליה זמני המוחל פוקאלית צוואר הרחם

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being ...

Monitoring the Effect of Osmotic Stress on Secretory Vesicles and Exocytosis

ניטור השפעת Osmotic הלחץ על שלפוחית הפרשה, אקסוציטוזה

Amperometry recording of cells subjected to osmotic shock show that secretory cells respond to this physical stress by reducing the exocytosis activity ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

כריתת למינציה ואת חוט השדרה חלון השרשה בעכבר

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Autoradiography as a Simple and Powerful Method for Visualization and Characterization of Pharmacological Targets

Autoradiography כאל שיטה פשוטה ורבת -עוצמה עבור ויזואליזציה ואפיון של מטרות תרופתי

In vitro autoradiography aims to visualize the anatomical distribution of a protein of interest in tissue from experimental animals as well as humans. The ...

Chronic Implantation of Multiple Flexible Polymer Electrode Arrays

השרשה כרונית של מערכים גמישים אלקטרודה מרובים

Simultaneous recordings from large populations of individual neurons across distributed brain regions over months to years will enable new avenues of ...

Preparation of Peripheral Nerve Stimulation Electrodes for Chronic Implantation in Rats

הכנת אלקטרודות גירוי עצבי היקפי להשתלה כרונית בחולדות

Peripheral nerve cuff electrodes have long been used in the neurosciences and related fields for stimulation of, for example, vagus or sciatic nerves. ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Induction and Assessment of Levodopa-induced Dyskinesias in a Rat Model of Parkinson's Disease

אינדוקציה והערכה של דיסקינזיות הנגרמות על ידי לבודופה במודל חולדות של מחלת פרקינסון

Levodopa (L-DOPA) remains the gold-standard therapy used to treat Parkinson&#39;s disease (PD) motor symptoms. However, unwanted involuntary movements ...