Name: lipidico injection protocol for serial crystallography measurements at the australian synchrotron
Uploaded: 2020-09-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lipidico Injection Protocol for Serial Crystallography Measurements at the Australian Synchrotron at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af Australian Research Council Centre of Excellence in Advanced Molecular Imaging (CE140100011) (http://www.imagingcoe.org/). Denne forskning blev udført dels ved hjælp af MX2 beamline på den australske Synchrotron, en del af ANSTO, og gjort brug af den australske Cancer Research Foundation (ACRF) detektor.

1. Fremstilling af krystaller i et højkøst medie ved hjælp af glassprøjter
<ol><li>Krystalopløsningen centrifugeres forsigtigt (~1.000 x g, ~10 min ved 22 °C) for at danne en blød krystalpellet og fjerne den overskydende buffer. Dette vil resultere i en høj koncentration af krystaller i pellet, som kan bruges til dataindsamling. BEMÆRK: For at forhindre fortynding af det tyktflydende medie øges krystalkoncentrationen på dette trin. Optimer forholdet mellem tyktflydende medier og krystalvolumen fo...

<ol>
	<li>Boutet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+protein+structure+determination+by+serial+femtosecond+crystallography.">High-resolution protein structure determination by serial femtosecond crystallography.</a> Science. 337 (6092), 362-364 (2012).</li><li>Spence, J. C. H., Weierstall, U., Chapman, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+lasers+for+structural+and+dynamic+biology.">X-ray lasers for structural and dynamic biology.</a> Reports on Progress in Physics. 75 (10), 102601 (2012).</li><li>Aquila, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+protein+nanocrystallography+using+an+X-ray+free-electron+laser.">Time-resolved protein nanocrystallography using an X-ray free-electron laser.</a> Optics Express. 20 (3), 2706-2716 (2012).</li><li>Schlichting, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+femtosecond+crystallography:+the+first+five+years.">Serial femtosecond crystallography: the first five years.</a> International Union of Crystallography. 2, 246-255 (2015).</li><li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nylon+mesh-based+sample+holder+for+fixed-target+serial+femtosecond+crystallography.">Nylon mesh-based sample holder for fixed-target serial femtosecond crystallography.</a> Scientific Reports. 9, 6971 (2019).</li><li>Martin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluctuation+X-ray+diffraction+reveals+three-dimensional+nanostructure+and+disorder+in+self-assembled+lipid+phases.">Fluctuation X-ray diffraction reveals three-dimensional nanostructure and disorder in self-assembled lipid phases.</a> Communications Materials. 1 (1), 1-8 (2020).</li><li>Roedig, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-speed+fixed-target+serial+virus+crystallography.">High-speed fixed-target serial virus crystallography.</a> Nature Methods. 14 (8), 805 (2017).</li><li>Chapman, H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+X-ray+protein+nanocrystallography.">Femtosecond X-ray protein nanocrystallography.</a> Nature. 470 (7332), 73-81 (2011).</li><li>Weierstall, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidic+cubic+phase+injector+facilitates+membrane+protein+serial+femtosecond+crystallography.">Lipidic cubic phase injector facilitates membrane protein serial femtosecond crystallography.</a> Nature Communications. 5, 3309 (2014).</li><li>Weierstall, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+sample+delivery+techniques+for+serial+femtosecond+crystallography.">Liquid sample delivery techniques for serial femtosecond crystallography.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 369 (1647), 20130337 (2014).</li><li>Gati, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+structure+of+granulin+determined+from+native+nanocrystalline+granulovirus+using+an+X-ray+free-electron+laser.">Atomic structure of granulin determined from native nanocrystalline granulovirus using an X-ray free-electron laser.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (9), 2247-2252 (2017).</li><li>Nam, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+delivery+media+for+serial+crystallography.">Sample delivery media for serial crystallography.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (5), 1094 (2019).</li><li>Batyuk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+phasing+of+x-ray+free-electron+laser+data+for+a+G+protein-coupled+receptor.">Native phasing of x-ray free-electron laser data for a G protein-coupled receptor.</a> Science Advances. 2 (9), 1600292 (2016).</li><li>Kern, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+intermediates+of+Kok's+photosynthetic+water+oxidation+clock.">Structures of the intermediates of Kok's photosynthetic water oxidation clock.</a> Nature. 563 (7731), 421 (2018).</li><li>Suga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+oxyl/oxo+mechanism+for+oxygen-oxygen+coupling+in+PSII+revealed+by+an+x-ray+free-electron+laser.">An oxyl/oxo mechanism for oxygen-oxygen coupling in PSII revealed by an x-ray free-electron laser.</a> Science. 366 (6463), 334-338 (2019).</li><li>Tenboer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+serial+crystallography+captures+high-resolution+intermediates+of+photoactive+yellow+protein.">Time-resolved serial crystallography captures high-resolution intermediates of photoactive yellow protein.</a> Science. 346 (6214), 1242-1246 (2014).</li><li>Pande, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+structural+dynamics+drives+the+trans/cis+isomerization+in+photoactive+yellow+protein.">Femtosecond structural dynamics drives the trans/cis isomerization in photoactive yellow protein.</a> Science. 352 (6286), 725-729 (2016).</li><li>Ishigami, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Snapshot+of+an+oxygen+intermediate+in+the+catalytic+reaction+of+cytochrome+c+oxidase.">Snapshot of an oxygen intermediate in the catalytic reaction of cytochrome c oxidase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (9), 3572-3577 (2019).</li><li>Nango, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+three-dimensional+movie+of+structural+changes+in+bacteriorhodopsin.">A three-dimensional movie of structural changes in bacteriorhodopsin.</a> Science. 354 (6319), 1552-1557 (2016).</li><li>Nogly, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidic+cubic+phase+serial+millisecond+crystallography+using+synchrotron+radiation.">Lipidic cubic phase serial millisecond crystallography using synchrotron radiation.</a> International Union of Crystallography. 2, 168-176 (2015).</li><li>Nogly, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+isomerization+in+bacteriorhodopsin+captured+by+a+femtosecond+x-ray+laser.">Retinal isomerization in bacteriorhodopsin captured by a femtosecond x-ray laser.</a> Science. 361 (6398), (2018).</li><li>Martin-Garcia, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+millisecond+crystallography+of+membrane+and+soluble+protein+microcrystals+using+synchrotron+radiation.">Serial millisecond crystallography of membrane and soluble protein microcrystals using synchrotron radiation.</a> International Union of Crystallography. 4, 439-454 (2017).</li><li>Berntsen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+serial+millisecond+crystallography+instrument+at+the+Australian+Synchrotron+incorporating+the+"Lipidico"+injector.">The serial millisecond crystallography instrument at the Australian Synchrotron incorporating the "Lipidico" injector.</a> Review of Scientific Instruments. 90 (8), 085110 (2019).</li><li>Botha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Room-temperature+serial+crystallography+at+synchrotron+X-ray+sources+using+slowly+flowing+free-standing+high-viscosity+microstreams.">Room-temperature serial crystallography at synchrotron X-ray sources using slowly flowing free-standing high-viscosity microstreams.</a> Acta Crystallographica Section D-Structural Biology. 71, 387-397 (2015).</li><li>DePonte, D. P., Nass, K., Stellato, F., Liang, M., Chapman, H. N., Tschentscher, T., Cocco, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+injection+for+pulsed+X-ray+sources.">Sample injection for pulsed X-ray sources.</a> Advances in X-Ray Free-Electron Lasers: Radiation Schemes, X-Ray Optics, and Instrumentation: Proceedings of Society of Photo-Optical Instrumentation Engineers. , 8078 (2011).</li><li>Park, S. Y., Nam, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+delivery+using+viscous+media,+a+syringe+andasyringe+pump+for+serial+crystallography.">Sample delivery using viscous media, a syringe andasyringe pump for serial crystallography.</a> Journal of Synchrotron Radiation. 26, 1815-1819 (2019).</li><li>Shimazu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-viscosity+sample-injection+device+for+serial+femtosecond+crystallography+at+atmospheric+pressure.">High-viscosity sample-injection device for serial femtosecond crystallography at atmospheric pressure.</a> Journal of Applied Crystallography. 52, 1280-1288 (2019).</li><li>Kovacsova, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscous+hydrophilic+injection+matrices+for+serial+crystallography.">Viscous hydrophilic injection matrices for serial crystallography.</a> International Union of Crystallography. 4, 400-410 (2017).</li><li>Darmanin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+crystal+screening+and+characterization+for+serial+femtosecond+nanocrystallography.">Protein crystal screening and characterization for serial femtosecond nanocrystallography.</a> Scientific Reports. 6, 25345 (2016).</li><li>Conrad, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+inert+crystal+delivery+medium+for+serial+femtosecond+crystallography.">A novel inert crystal delivery medium for serial femtosecond crystallography.</a> International Union of Crystallography. 2, 421-430 (2015).</li><li>Sugahara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grease+matrix+as+a+versatile+carrier+of+proteins+for+serial+crystallography.">Grease matrix as a versatile carrier of proteins for serial crystallography.</a> Nature Methods. 12 (1), 61-63 (2015).</li><li>Sugahara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oil-free+hyaluronic+acid+matrix+for+serial+femtosecond+crystallography.">Oil-free hyaluronic acid matrix for serial femtosecond crystallography.</a> Scientific Reports. 6, 24484 (2016).</li><li>Fromme, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+femtosecond+crystallography+of+soluble+proteins+in+lipidic+cubic+phase.">Serial femtosecond crystallography of soluble proteins in lipidic cubic phase.</a> International Union of Crystallography. 2, 545-551 (2015).</li><li>Ishchenko, A., Cherezov, V., Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Delivery+of+Protein+Microcrystals+in+Lipidic+Cubic+Phase+for+Serial+Femtosecond+Crystallography.">Preparation and Delivery of Protein Microcrystals in Lipidic Cubic Phase for Serial Femtosecond Crystallography.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54463 (2016).</li><li>Liu, W., Ishchenko, A., Cherezov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+microcrystals+in+lipidic+cubic+phase+for+serial+femtosecond+crystallography.">Preparation of microcrystals in lipidic cubic phase for serial femtosecond crystallography.</a> Nature Protocols. 9 (9), 2123-2134 (2014).</li><li>Hadian-Jazi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+peak-finding+algorithm+based+on+robust+statistical+analysis+in+serial+crystallography.">A peak-finding algorithm based on robust statistical analysis in serial crystallography.</a> Journal of Applied Crystallography. 50, 1705-1715 (2017).</li><li>Kong, F. W., Yuan, L., Zheng, Y. F., Chen, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+Liquid+Handling+for+Life+Science:+A+critical+review+of+the+current+state+of+the+art.">Automatic Liquid Handling for Life Science: A critical review of the current state of the art.</a> Journal of Laboratory Automation. 17 (3), 169-185 (2012).</li></ol>

Der er udviklet en alternativ HVI, som er ideel til udførelse af SX-eksperimenter ved synkrotronkilder. Det har to vigtige fordele i forhold til eksisterende HVIs. For det første er det nemt at installere på beamline giver mulighed for hurtig skift mellem konventionelle krystallografi og SX, bare ~ 30 minutter er påkrævet for installation og justering på MX2. For det andet kan de prøvesprøjter, der bruges til at dyrke krystaller, bruges direkte som reservoirer til injektion, hvilket begrænser spild under prøveo...

Seriel krystallografi (SX) er en teknik, der oprindeligt blev udviklet i forbindelse med røntgenfri elektronlasere (XFELs)1,2,3,4. Selvom faste måltilgange kan bruges til SX5,6,7, anvendes injektorsystemer typisk til at levere krystaller i en kontinuerlig strøm til røntgenstrålen. Da SX kombinerer data fra et stort antal krystaller, undgår det behovet for krystaljustering under eksperimentet og gør det muligt at indsamle data ved stuetemperatur8,9. Ved hjælp af en passende injektor streames krystallerne en efter en ind i røntgeninteraktionsområdet, og de resulterende diffraktionsdata indsamles på en områdedetektor9,10. Til dato har SX haft succes med at løse en række proteinstrukturer1,11,12,13 inklusive krystaller for små til at måle ved hjælp af konventionel krystallografi. Det har også givet ny indsigt i tidsløst molekylær dynamik ved at udnytte XFEL's femtosekunds pulsvarighed. Ved at indlede pumpe-sonde reaktioner med optiske laserkilder, dybdegående undersøgelser er blevet udført på fotosystem II14,15, fotoaktiv gult protein16,17, cytochrom C oxidase18, samt bacteriorhodopsin19,20,21. Disse undersøgelser har undersøgt den elektronoverførselsdynamik, der opstår efter lysaktivering, hvilket viser det betydelige potentiale i seriel krystallografi til forståelse af tidsløste biologiske processer.
Udviklingen af seriel krystallografi bliver også mere og mere udbredt ved synkrotronkilder9,12,20,22,23,24. Synkrotronbaseret SX gør det muligt at måle et stort antal individuelle krystaller effektivt ved stuetemperatur ved hjælp af et passende injektorsystem. Denne tilgang er velegnet til mindre krystaller, og ud over at kræve en hurtig billedhastighedsdetektor til at indsamle dataene kræves der også en mikrofokuseret stråle. Sammenlignet med konventionel krystallografi involverer SX ikke montering og justering af individuelle krystaller i røntgenstrålen. Da data fra et stort antal individuelle krystaller flettes sammen, kan den strålingsdosis, som hver krystal har modtaget, reduceres betydeligt sammenlignet med konventionel krystallografi. Synkrotron SX kan også anvendes til undersøgelse af tidsløste reaktioner, selv ned til millisekundregimet, forudsat at en detektor med en tilstrækkelig høj billedhastighed er tilgængelig (f.eks. 100 Hz eller mere). Flere serielle krystallografi eksperimenter er blevet udført på synkrotronen ved hjælp af injektorer, der oprindeligt blev udviklet på XFEL kilder20,22,23. De to mest almindelige typer injektorer er Gas Dynamic Virtual Nozzle (GDVN)25 og High Viscous Injector (HVI)9,24,26,27,28. GDVN er ideel til injektion af lav viskositet, flydende prøver, men kræver høje strømningshastigheder for at opnå stabile vandløb, hvilket igen fører til høje prøveforbrugshastigheder. Derimod er HVI'er velegnede til prøver med høj viskositet, som gør det muligt at frembringe en stabil strøm ved meget lavere strømningshastigheder, hvilket fører til et meget lavere prøveforbrug. HVI-injektoren favoriserer derfor levering af prøver, hvor en tyktflydende bærer er at foretrække (f.eks. lipidbaseret for membranproteiner) og/eller store mængder prøve er ikke tilgængelige. SX-injektorer er generelt udfordrende at bruge og kræver omfattende træning for at fungere. De omfatter også lange prøveoverførselsprotokoller, da prøven skal indlæses i et specialiseret reservoir, har dette generelt en høj risiko forbundet med, at prøven går tabt enten i det "døde volumen" eller via lækager i forbindelserne. Det er derfor ønskeligt at optimere injektordesignet for at afbøde eventuelle tab, før prøven når røntgenstrålen.
For nylig blev de første SX-resultater offentliggjort ved hjælp af Lipidico23 med et lysozymmål ved hjælp af en Eiger 16M-detektor. Dette injektordesign begrænser prøvespildet ved at minimere antallet af trin, der er involveret i at gå fra indledende krystallisering til overførsel af krystaller til injektoren efterfulgt af levering af prøve til røntgenstrålen. Dette manuskript beskriver og demonstrerer prøveoverførselsproceduren fra prøveforberedelse, overgang til injektionsprocessen og endelig dataindsamling ved hjælp af det samme krystalliseringsbeholder. Injektorens funktion er også beskrevet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hen eggwhite lysozyme</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L6876</td>
			<td>Used to grow crystals for testing the injector and the crystals are transferred into silicon grease. https://www.sigmaaldrich.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High vacuum silicon grease</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>Z273554-1EA</td>
			<td>Used for testing of injector. https://www.sigmaaldrich.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injector needle (108 &#181;m ID)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>part No: 7803-05</td>
			<td>www.hamiltoncompany.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass gas-tight syringes, 100 &#181;l</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>part no: 7656-01</td>
			<td>Syringes used for sample injection. www.hamiltoncompany.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LCP syringe coupler</td>
			<td>Formulatrix</td>
			<td>209526</td>
			<td>Syringe coupler to mix the samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipidico injector</td>
			<td>La Trobe Univerity/ANSTO</td>
			<td></td>
			<td>This is a specific piece of equipment that can be accessed through La Trobe University / ANSTO Australian Synchrotron Facility</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lipidico injection protocol for serial crystallography measurements at the australian synchrotron

En facilitet til udførelse af serielle krystallografi målinger er blevet udviklet på den australske synkrotron. Denne facilitet indeholder et formål bygget høj tyktflydende injektor, Lipidico, som en del af makromolekylær krystallografi (MX2) strålelinje til at måle et stort antal små krystaller ved stuetemperatur. Formålet med denne teknik er at gøre det muligt at dyrke/overføre krystaller til glassprøjter direkte i injektoren til indsamling af serielle krystallografidata. Fordelene ved denne injektor omfatter evnen til at reagere hurtigt på ændringer i strømningshastigheden uden afbrydelse af strømmen. Der findes flere begrænsninger for denne injektor med høj viskositet (HVI), som omfatter en begrænsning af de tilladte prøveviskositeter til >10 Pa.s. Streamstabilitet kan også potentielt være et problem afhængigt af prøvens specifikke egenskaber. En detaljeret protokol for, hvordan man opsætter prøver og betjener injektoren til serielle krystallografimålinger ved den australske synkrotron, præsenteres her. Metoden demonstrerer forberedelse af prøven, herunder overførsel af lysozymkrystaller til et højkøst medie (silikonefedt) og injektorens funktion til dataindsamling hos MX2.

Lipidico er en HVI bygget som et alternativt leveringssystem til brug på MX2 (Figur 1). Den er ideel til SX, hvor krystaller enten dyrkes i lipidisk kubisk fase eller overføres til et højt tyktflydende inert medie.
For at demonstrere injektorapplikationen blev silikonefedt blandet med lysozymkrystaller brugt til at indsamle SX-data ved MX2-strålelinjen ved den australske synkrotron. For at montere injektoren på MX2-strålelinjen fjernes den kryogene dyse og e...

Watch this Scientific Journal Video about Lipidico Injection Protocol for Serial Crystallography Measurements at the Australian Synchrotron at JoVE.com

Lipidico Injection Protocol for Serial Crystallography Measurements at the Australian Synchrotron

Målet med denne protokol er at demonstrere, hvordan man forbereder serielle krystallografiprøver til dataindsamling på en høj tyktflydende injektor, Lipidico, der for nylig blev bestilt på den australske synkrotron.

Lipidico-injektionsprotokol til seriel krystallografimålinger ved den australske synkrotron

A facility for performing serial crystallography measurements has been developed at the Australian synchrotron. This facility incorporates a purpose built ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy

Oprettelse Lim og Opløseligt Gradienter for Imaging Cell Migration med Fluorescence Microscopy

Cells can sense and migrate towards higher concentrations of adhesive cues such as the glycoproteins of the extracellular matrix and soluble cues such as ...

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

Forbedret metode til forberedelse af en menneskelig celle-baseret, Contact Model af blod-hjerne barrieren

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Brug Tomoauto: En protokol til High-throughput Automatiseret Cryo-elektron Tomography

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Synthesis of Hydrogels with Antifouling Properties As Membranes for Water Purification

Syntese af Hydrogeler med antitilsmudsningsegenskaber som membraner til vandrensning

Hydrogels have been widely utilized to enhance the surface hydrophilicity of membranes for water purification, increasing the antifouling properties and ...

Power Input Measurements in Stirred Bioreactors at Laboratory Scale

Power Input målinger i Stirred bioreaktorer på laboratoriet skala

The power input in stirred bioreactors is an important scaling-up parameter and can be measured through the torque that acts on the impeller shaft during ...

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

Retroductal nanopartikel injektion til Murine submandibulære kirtel

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

Automated Counterflow Centrifugal System for Small-Scale Cell Processing

Automatiseret Counterflow centrifugal system til småskala cellebehandling

Successful commercialization of gene and cell-based therapies requires manufacturing processes that are cost-effective and scalable. Buffer exchange and ...

Microfluidic Tools for Probing Fungal-Microbial Interactions at the Cellular Level

Mikrofluidiske værktøjer til sondering af svampe-mikrobielle interaktioner på celleniveau

Filamentous fungi are successful inhabitants of soil and play a major role in soil ecosystems, such as in the decomposition of organic and inorganic ...

Ceramic Omnidirectional Bioprinting in Cell-Laden Suspensions for the Generation of Bone Analogs

Keramisk omnidirektionel bioprint i cellebelastede suspensioner til generering af knogleanaloger

Structurally, bone tissue is an inorganic-organic composite containing metabolically active cells embedded within a hierarchical, highly mineralized ...

Experimental Quantification of Interactions Between Drug Delivery Systems and Cells In Vitro: A Guide for Preclinical Nanomedicine Evaluation

Experimental Quantification of Interactions Between Drug Delivery Systems and Cells In Vitro: A Guide for Preclinical Nanomedicine Evaluation

Eksperimentel kvantificering af interaktioner mellem lægemiddelleveringssystemer og celler in vitro: En vejledning til præklinisk nanomedicinsk evaluering