Name: lipidico injection protocol for serial crystallography measurements at the australian synchrotron
Uploaded: 2020-09-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lipidico Injection Protocol for Serial Crystallography Measurements at the Australian Synchrotron at JoVE.com

この研究は、オーストラリア研究評議会先端分子イメージング優秀センター(CE140100011)(http://www.imagingcoe.org/)によって支援されました。この研究は、ANSTOの一部であるオーストラリアのシンクロトロンでMX2ビームラインを使用して部分的に行われ、オーストラリア癌研究財団(ACRF)検出器を利用しました。

ガラス注射器を用いた高粘性媒体中の結晶の調製
<ol><li>結晶液を静かに遠心分離し(〜1,000xg、22°Cで〜10分)軟質結晶ペレットを形成し、余分な緩衝液を除去する。 これにより、ペレット中の結晶が高濃度になり、データ収集に使用できます。 注:粘性媒体の希釈を防止するために、このステップで結晶濃度を増加させます。各サンプルの結晶体積に対する粘性媒体の比率を最適化し?...

<ol>
	<li>Boutet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+protein+structure+determination+by+serial+femtosecond+crystallography.">High-resolution protein structure determination by serial femtosecond crystallography.</a> Science. 337 (6092), 362-364 (2012).</li><li>Spence, J. C. H., Weierstall, U., Chapman, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+lasers+for+structural+and+dynamic+biology.">X-ray lasers for structural and dynamic biology.</a> Reports on Progress in Physics. 75 (10), 102601 (2012).</li><li>Aquila, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+protein+nanocrystallography+using+an+X-ray+free-electron+laser.">Time-resolved protein nanocrystallography using an X-ray free-electron laser.</a> Optics Express. 20 (3), 2706-2716 (2012).</li><li>Schlichting, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+femtosecond+crystallography:+the+first+five+years.">Serial femtosecond crystallography: the first five years.</a> International Union of Crystallography. 2, 246-255 (2015).</li><li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nylon+mesh-based+sample+holder+for+fixed-target+serial+femtosecond+crystallography.">Nylon mesh-based sample holder for fixed-target serial femtosecond crystallography.</a> Scientific Reports. 9, 6971 (2019).</li><li>Martin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluctuation+X-ray+diffraction+reveals+three-dimensional+nanostructure+and+disorder+in+self-assembled+lipid+phases.">Fluctuation X-ray diffraction reveals three-dimensional nanostructure and disorder in self-assembled lipid phases.</a> Communications Materials. 1 (1), 1-8 (2020).</li><li>Roedig, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-speed+fixed-target+serial+virus+crystallography.">High-speed fixed-target serial virus crystallography.</a> Nature Methods. 14 (8), 805 (2017).</li><li>Chapman, H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+X-ray+protein+nanocrystallography.">Femtosecond X-ray protein nanocrystallography.</a> Nature. 470 (7332), 73-81 (2011).</li><li>Weierstall, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidic+cubic+phase+injector+facilitates+membrane+protein+serial+femtosecond+crystallography.">Lipidic cubic phase injector facilitates membrane protein serial femtosecond crystallography.</a> Nature Communications. 5, 3309 (2014).</li><li>Weierstall, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+sample+delivery+techniques+for+serial+femtosecond+crystallography.">Liquid sample delivery techniques for serial femtosecond crystallography.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 369 (1647), 20130337 (2014).</li><li>Gati, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+structure+of+granulin+determined+from+native+nanocrystalline+granulovirus+using+an+X-ray+free-electron+laser.">Atomic structure of granulin determined from native nanocrystalline granulovirus using an X-ray free-electron laser.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (9), 2247-2252 (2017).</li><li>Nam, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+delivery+media+for+serial+crystallography.">Sample delivery media for serial crystallography.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (5), 1094 (2019).</li><li>Batyuk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+phasing+of+x-ray+free-electron+laser+data+for+a+G+protein-coupled+receptor.">Native phasing of x-ray free-electron laser data for a G protein-coupled receptor.</a> Science Advances. 2 (9), 1600292 (2016).</li><li>Kern, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+intermediates+of+Kok's+photosynthetic+water+oxidation+clock.">Structures of the intermediates of Kok's photosynthetic water oxidation clock.</a> Nature. 563 (7731), 421 (2018).</li><li>Suga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+oxyl/oxo+mechanism+for+oxygen-oxygen+coupling+in+PSII+revealed+by+an+x-ray+free-electron+laser.">An oxyl/oxo mechanism for oxygen-oxygen coupling in PSII revealed by an x-ray free-electron laser.</a> Science. 366 (6463), 334-338 (2019).</li><li>Tenboer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+serial+crystallography+captures+high-resolution+intermediates+of+photoactive+yellow+protein.">Time-resolved serial crystallography captures high-resolution intermediates of photoactive yellow protein.</a> Science. 346 (6214), 1242-1246 (2014).</li><li>Pande, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+structural+dynamics+drives+the+trans/cis+isomerization+in+photoactive+yellow+protein.">Femtosecond structural dynamics drives the trans/cis isomerization in photoactive yellow protein.</a> Science. 352 (6286), 725-729 (2016).</li><li>Ishigami, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Snapshot+of+an+oxygen+intermediate+in+the+catalytic+reaction+of+cytochrome+c+oxidase.">Snapshot of an oxygen intermediate in the catalytic reaction of cytochrome c oxidase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (9), 3572-3577 (2019).</li><li>Nango, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+three-dimensional+movie+of+structural+changes+in+bacteriorhodopsin.">A three-dimensional movie of structural changes in bacteriorhodopsin.</a> Science. 354 (6319), 1552-1557 (2016).</li><li>Nogly, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidic+cubic+phase+serial+millisecond+crystallography+using+synchrotron+radiation.">Lipidic cubic phase serial millisecond crystallography using synchrotron radiation.</a> International Union of Crystallography. 2, 168-176 (2015).</li><li>Nogly, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+isomerization+in+bacteriorhodopsin+captured+by+a+femtosecond+x-ray+laser.">Retinal isomerization in bacteriorhodopsin captured by a femtosecond x-ray laser.</a> Science. 361 (6398), (2018).</li><li>Martin-Garcia, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+millisecond+crystallography+of+membrane+and+soluble+protein+microcrystals+using+synchrotron+radiation.">Serial millisecond crystallography of membrane and soluble protein microcrystals using synchrotron radiation.</a> International Union of Crystallography. 4, 439-454 (2017).</li><li>Berntsen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+serial+millisecond+crystallography+instrument+at+the+Australian+Synchrotron+incorporating+the+"Lipidico"+injector.">The serial millisecond crystallography instrument at the Australian Synchrotron incorporating the "Lipidico" injector.</a> Review of Scientific Instruments. 90 (8), 085110 (2019).</li><li>Botha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Room-temperature+serial+crystallography+at+synchrotron+X-ray+sources+using+slowly+flowing+free-standing+high-viscosity+microstreams.">Room-temperature serial crystallography at synchrotron X-ray sources using slowly flowing free-standing high-viscosity microstreams.</a> Acta Crystallographica Section D-Structural Biology. 71, 387-397 (2015).</li><li>DePonte, D. P., Nass, K., Stellato, F., Liang, M., Chapman, H. N., Tschentscher, T., Cocco, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+injection+for+pulsed+X-ray+sources.">Sample injection for pulsed X-ray sources.</a> Advances in X-Ray Free-Electron Lasers: Radiation Schemes, X-Ray Optics, and Instrumentation: Proceedings of Society of Photo-Optical Instrumentation Engineers. , 8078 (2011).</li><li>Park, S. Y., Nam, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+delivery+using+viscous+media,+a+syringe+andasyringe+pump+for+serial+crystallography.">Sample delivery using viscous media, a syringe andasyringe pump for serial crystallography.</a> Journal of Synchrotron Radiation. 26, 1815-1819 (2019).</li><li>Shimazu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-viscosity+sample-injection+device+for+serial+femtosecond+crystallography+at+atmospheric+pressure.">High-viscosity sample-injection device for serial femtosecond crystallography at atmospheric pressure.</a> Journal of Applied Crystallography. 52, 1280-1288 (2019).</li><li>Kovacsova, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscous+hydrophilic+injection+matrices+for+serial+crystallography.">Viscous hydrophilic injection matrices for serial crystallography.</a> International Union of Crystallography. 4, 400-410 (2017).</li><li>Darmanin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+crystal+screening+and+characterization+for+serial+femtosecond+nanocrystallography.">Protein crystal screening and characterization for serial femtosecond nanocrystallography.</a> Scientific Reports. 6, 25345 (2016).</li><li>Conrad, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+inert+crystal+delivery+medium+for+serial+femtosecond+crystallography.">A novel inert crystal delivery medium for serial femtosecond crystallography.</a> International Union of Crystallography. 2, 421-430 (2015).</li><li>Sugahara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grease+matrix+as+a+versatile+carrier+of+proteins+for+serial+crystallography.">Grease matrix as a versatile carrier of proteins for serial crystallography.</a> Nature Methods. 12 (1), 61-63 (2015).</li><li>Sugahara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oil-free+hyaluronic+acid+matrix+for+serial+femtosecond+crystallography.">Oil-free hyaluronic acid matrix for serial femtosecond crystallography.</a> Scientific Reports. 6, 24484 (2016).</li><li>Fromme, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+femtosecond+crystallography+of+soluble+proteins+in+lipidic+cubic+phase.">Serial femtosecond crystallography of soluble proteins in lipidic cubic phase.</a> International Union of Crystallography. 2, 545-551 (2015).</li><li>Ishchenko, A., Cherezov, V., Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Delivery+of+Protein+Microcrystals+in+Lipidic+Cubic+Phase+for+Serial+Femtosecond+Crystallography.">Preparation and Delivery of Protein Microcrystals in Lipidic Cubic Phase for Serial Femtosecond Crystallography.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54463 (2016).</li><li>Liu, W., Ishchenko, A., Cherezov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+microcrystals+in+lipidic+cubic+phase+for+serial+femtosecond+crystallography.">Preparation of microcrystals in lipidic cubic phase for serial femtosecond crystallography.</a> Nature Protocols. 9 (9), 2123-2134 (2014).</li><li>Hadian-Jazi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+peak-finding+algorithm+based+on+robust+statistical+analysis+in+serial+crystallography.">A peak-finding algorithm based on robust statistical analysis in serial crystallography.</a> Journal of Applied Crystallography. 50, 1705-1715 (2017).</li><li>Kong, F. W., Yuan, L., Zheng, Y. F., Chen, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+Liquid+Handling+for+Life+Science:+A+critical+review+of+the+current+state+of+the+art.">Automatic Liquid Handling for Life Science: A critical review of the current state of the art.</a> Journal of Laboratory Automation. 17 (3), 169-185 (2012).</li></ol>

シンクロトロン源でSX実験を行うのに理想的な代替HVIが開発されました。既存の HVI に対して 2 つの重要な利点があります。まず、従来の結晶学とSXの間で迅速な切り替えを可能にするビームラインに設置することが容易であり、MX2の設置とアライメントには30分程度必要です。第二に、結晶を成長させるために使用されるサンプルシリンジは、直接注入のための貯蔵所として使用することが?...

シリアル結晶学(SX)は、X線自由電子レーザー(XFELs)1、2、3、4の文脈で最初に開発された技術です。固定ターゲットアプローチはSX5、6、7に使用できますが、通常、インジェクターシステムはX線ビームに連続した流れの結晶を送達するために使用されます。SXは多数の結晶からのデータを組み合わせることから、実験中に結晶のアライメントを必要としないため、室温8,9でデータを収集できます。適切なインジェクターの助けを借りて、結晶はX線相互作用領域に一つずつ流され、得られた回折データは領域検出器9、10上で収集される。現在までに、SXは、従来の結晶学を用いて測定するには小さすぎる結晶を含む多くのタンパク質構造1、11、12、13の解法に成功しています。また、XFELのフェムト秒パルス持続時間を利用することで、時間分解分子動力学に関する新たな洞察を提供しました。光レーザー光源を用いてポンププローブ反応を起こして、光システムII14,15,光活性黄色タンパク質16,17,シトクロムCオキシダーゼ18,ならびにバクテリオロドプシン19,20,21に関する詳細な研究が行われている。これらの研究は、時間分解された生物学的プロセスを理解するための連続結晶学の有意な可能性を示す光活性化後に起こる電子移動ダイナミクスを調査した。
シンクロトロン源9,12,20,23,24では逐次結晶学の開発も普及しつつある。シンクロトロンベースのSXにより、適切なインジェクターシステムを使用して、多数の個々の結晶を室温で効率的に測定することができます。このアプローチは、それゆえ、より小さい結晶に適しており、データを収集するために高速なフレームレート検出器を必要とすることに加えて、マイクロ焦点を当てたビームも必要とされる。従来の結晶学と比較して、SXはX線ビーム中の個々の結晶の取り付けおよび位置合わせを伴わない。多数の個々の結晶からのデータがマージされるため、各結晶によって受け取られる放射線量は、従来の結晶学に比べて大幅に低減することができる。シンクロトロンSXはまた、ミリ秒のレジームまで、十分に高いフレームレートを有する検出器を提供する時間分解反応の研究に適用することができる(例えば、100Hz以上)。XFELソース20,22,23で最初に開発されたインジェクターを用いてシンクロトロンでいくつかの連続結晶学実験が行われている。インジェクタの 2 つの最も一般的なタイプは、ガスダイナミックバーチャルノズル (GDVN)25と高粘性インジェクター (HVI)9、24 、26、27、28です。GDVNは低粘度、液体サンプルを注入するのに理想的であるが、安定した流れを達成するために高い流量を必要とし、その結果、高いサンプル消費率を導く。対照的に、HVIは、はるかに低い流量で安定した流れを生成することを可能にする高粘度サンプルに適しており、サンプル消費量がはるかに低くなります。したがって、HVIインジェクタは、粘性キャリアが好ましい(例えば、膜タンパク質の脂質ベース)および/または大量のサンプルが利用できないサンプルの送達を好む。SXインジェクターは一般的に使用が困難であり、操作するために広範なトレーニングが必要です。また、サンプルを特殊な貯蔵所にロードする必要があるため、サンプル転送プロトコルは長く、これは一般的に「死んだボリューム」または接続の漏出によって失われるサンプルのリスクが高くなります。したがって、X線ビームに到達する前に、あらゆる損失を軽減するためにインジェクタ設計を最適化することが望ましい。
最近、最初のSX結果は、アイガー16M検出器を用いてリソザイム標的を有するリピディコ23を用いて発表された。このインジェクター設計は、初期結晶化からインジェクターへの結晶の伝達に移り、その後にサンプルをX線ビームに送達するステップの数を最小限に抑えることによって、サンプルの浪費を制限します。この原稿は、サンプル調製から始まり、注入プロセスに移り、そして最後に同じ結晶化容器を用いてデータ収集するサンプル移送手順を説明し、デモンストレーションする。インジェクタの動作についても説明する。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hen eggwhite lysozyme</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L6876</td>
			<td>Used to grow crystals for testing the injector and the crystals are transferred into silicon grease. https://www.sigmaaldrich.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High vacuum silicon grease</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>Z273554-1EA</td>
			<td>Used for testing of injector. https://www.sigmaaldrich.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injector needle (108 &#181;m ID)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>part No: 7803-05</td>
			<td>www.hamiltoncompany.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass gas-tight syringes, 100 &#181;l</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>part no: 7656-01</td>
			<td>Syringes used for sample injection. www.hamiltoncompany.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LCP syringe coupler</td>
			<td>Formulatrix</td>
			<td>209526</td>
			<td>Syringe coupler to mix the samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipidico injector</td>
			<td>La Trobe Univerity/ANSTO</td>
			<td></td>
			<td>This is a specific piece of equipment that can be accessed through La Trobe University / ANSTO Australian Synchrotron Facility</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lipidico injection protocol for serial crystallography measurements at the australian synchrotron

オーストラリアのシンクロトロンで、連続結晶学測定を行う施設が開発されました。高粘性インジェクターであるリピコを組み込み、高分子結晶学(MX2)ビームラインの一部として、室温で多数の小結晶を測定します。この技術の目的は、結晶を成長/ガラス注射器に移し、連続結晶学データ収集用のインジェクターで直接使用できるようにすることです。このインジェクタの利点は、流れの中断なしに流量の変化に迅速に応答する能力を含む。この高粘度インジェクター (HVI) には、許容されるサンプル粘度の制限を含むいくつかの制限があります。ストリームの安定性は、サンプルの特定のプロパティによっては問題になる可能性もあります。オーストラリアのシンクロトロンでの連続結晶学測定用のサンプルの設定方法とインジェクターの操作方法の詳細なプロトコルを紹介します。この方法は、高粘性媒体へのリソチーム結晶の転写(シリコーングリース)、MX2でのデータ収集用インジェクターの動作を含むサンプルの調製を実証する。

Lipidico は、MX2 で使用する代替配信システムとして構築された HVI です (図 1)。これは、結晶が脂質立方相で成長するか、または高粘性不活性培地に移されるSXに最適です。
インジェクター用途を実証するために、リソチーム結晶と混合したシリコーングリースを使用して、オーストラリアのシンクロトロンのMX2ビームラインでSXデータを収集した。?...

Watch this Scientific Journal Video about Lipidico Injection Protocol for Serial Crystallography Measurements at the Australian Synchrotron at JoVE.com

Lipidico Injection Protocol for Serial Crystallography Measurements at the Australian Synchrotron

このプロトコルの目的は、最近オーストラリアのシンクロトロンで委託された高粘性インジェクター、Lipidicoでデータ収集のための連続結晶学サンプルを準備する方法を実証することです。

オーストラリアシンクロトロンにおける逐次結晶学測定用リピニコ注入プロトコル

A facility for performing serial crystallography measurements has been developed at the Australian synchrotron. This facility incorporates a purpose built ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy

蛍光顕微鏡を用いたイメージング細胞遊走用接着剤及び可溶性グラデーションを作成する

Cells can sense and migrate towards higher concentrations of adhesive cues such as the glycoproteins of the extracellular matrix and soluble cues such as ...

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

人間の細胞に基づく、血液脳関門の接触モデルの作製のための改善された方法

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Tomoautoの使用：ハイスループット自動クライオ電子断層撮影のためのプロトコル

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Synthesis of Hydrogels with Antifouling Properties As Membranes for Water Purification

水質浄化のための膜のような防汚特性を持つハイドロゲルの合成

Hydrogels have been widely utilized to enhance the surface hydrophilicity of membranes for water purification, increasing the antifouling properties and ...

Power Input Measurements in Stirred Bioreactors at Laboratory Scale

実験室規模で撹拌したバイオリアクターでのパワー入力測定

The power input in stirred bioreactors is an important scaling-up parameter and can be measured through the torque that acts on the impeller shaft during ...

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

マウス顎下腺への Retroductal ナノ粒子注入

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

Automated Counterflow Centrifugal System for Small-Scale Cell Processing

小規模セル処理のための自動カウンターフロー遠心システム

Successful commercialization of gene and cell-based therapies requires manufacturing processes that are cost-effective and scalable. Buffer exchange and ...

Microfluidic Tools for Probing Fungal-Microbial Interactions at the Cellular Level

細胞レベルで真菌 - 微生物相互作用をプロービングするためのマイクロ流体ツール

Filamentous fungi are successful inhabitants of soil and play a major role in soil ecosystems, such as in the decomposition of organic and inorganic ...

Ceramic Omnidirectional Bioprinting in Cell-Laden Suspensions for the Generation of Bone Analogs

骨類似体の生成のための細胞内懸濁液中のセラミック全方向性バイオプリンティング

Structurally, bone tissue is an inorganic-organic composite containing metabolically active cells embedded within a hierarchical, highly mineralized ...