Name: live imaging of chemokine receptors in zebrafish neutrophils during wound responses
Uploaded: 2020-12-04T13:30:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Chemokine Receptors in Zebrafish Neutrophils During Wound Responses at JoVE.com

हम Confocal माइक्रोस्कोपी के साथ मदद के लिए क्रिस्टीन होल्ट और बिल हैरिस को धन्यवाद देते हैं। हम फ्लोरोसेंट टाइमर बैकबोन निर्माणों के लिए डैरेन गिल्मर और टॉल 2-लिज़ बैकबोन वेक्टर के लिए अन्ना हटेनलोचर को धन्यवाद देते हैं। हम Tg (mpx: GFP) i114 लाइन के लिए स्टीव रेनशॉ को धन्यवाद देते हैं। इस काम को MRC (MR/L019523/1), Wellcome Trust [204845/Z/16/Z] द्वारा समर्थित किया गया था; आइजैक न्यूटन ट्रस्ट [12.21 (ए)i] और एक आइजैक न्यूटन ट्रस्ट अनुदान 19.23 (एन)। सी.C एक एमआरसी डीटीपी छात्र द्वारा समर्थित था और आंशिक रूप से वेलकम ट्रस्ट [204845 / जेड / 16 / जेड] द्वारा; आइजैक न्यूटन ट्रस्ट [12.21 (ए)i] अनुदान। एचडब्ल्यू को एमआरसी डीटीपी स्टूडेंटशिप द्वारा समर्थित किया गया था। एचपी को वेलकम ट्रस्ट पीएचडी अनुदान (105391 / जेड / 14 / जेड) द्वारा और आंशिक रूप से वेलकम ट्रस्ट [204845 / जेड / 16 / जेड] द्वारा समर्थित किया गया था; आइजैक न्यूटन ट्रस्ट [12.21 (ए)i] अनुदान और एमआरसी (एमआर / एल019523 / 1)।

<ol>
	<li>Rot, A., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+innate+and+adaptive+host+defense:+basic+chemokinese+grammar+for+immune+cells.">Chemokines in innate and adaptive host defense: basic chemokinese grammar for immune cells.</a> Annual Review of Immunology. 22, 891-928 (2004).</li><li>Cotton, M., Claing, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G+protein-coupled+receptors+stimulation+and+the+control+of+cell+migration.">G protein-coupled receptors stimulation and the control of cell migration.</a> Cellular Signalling. 21 (7), 1045-1053 (2009).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+regulation+of+neutrophil+migration+by+mitogen-activated+protein+kinases.">Bidirectional regulation of neutrophil migration by mitogen-activated protein kinases.</a> Nature Immunology. 13 (5), 457-464 (2012).</li><li>Wen, X., Jin, T., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+G+Protein-coupled+Receptor-mediated+Chemotaxis+and+its+Signaling+Events+in+Neutrophil-like+HL60+Cells.">Imaging G Protein-coupled Receptor-mediated Chemotaxis and its Signaling Events in Neutrophil-like HL60 Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54511 (2016).</li><li>Arnon, T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GRK2-dependent+S1PR1+desensitization+is+required+for+lymphocytes+to+overcome+their+attraction+to+blood.">GRK2-dependent S1PR1 desensitization is required for lymphocytes to overcome their attraction to blood.</a> Science. 333 (6051), 1898-1903 (2011).</li><li>Jung, H., Mithal, D. S., Park, J. E., Miller, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+CCR2+Activation+in+the+Bone+Marrow+Niche+Mobilizes+Monocytes+by+Desensitizing+CXCR4.">Localized CCR2 Activation in the Bone Marrow Niche Mobilizes Monocytes by Desensitizing CXCR4.</a> PloS One. 10 (6), 0128387 (2015).</li><li>Kwan, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Tol2kit:+a+multisite+gateway-based+construction+kit+for+Tol2+transposon+transgenesis+constructs.">The Tol2kit: a multisite gateway-based construction kit for Tol2 transposon transgenesis constructs.</a> Developmental Dynamics: An Official Publication of the American Association of Anatomists. 236 (11), 3088-3099 (2007).</li><li>Don&#224;, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directional+tissue+migration+through+a+self-generated+chemokine+gradient.">Directional tissue migration through a self-generated chemokine gradient.</a> Nature. 503 (7475), 285-289 (2013).</li><li>Venkiteswaran, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+dynamics+of+an+endogenous,+self-generated+signaling+gradient+across+a+migrating+tissue.">Generation and dynamics of an endogenous, self-generated signaling gradient across a migrating tissue.</a> Cell. 155 (3), 674-687 (2013).</li><li>Minina, S., Reichman-Fried, M., Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+receptor+internalization,+signaling+level,+and+precise+arrival+at+the+target+in+guided+cell+migration.">Control of receptor internalization, signaling level, and precise arrival at the target in guided cell migration.</a> Current Biology. 17 (13), 1164-1172 (2007).</li><li>Yoo, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+microtubules+in+neutrophil+polarity+and+migration+in+live+zebrafish.">The role of microtubules in neutrophil polarity and migration in live zebrafish.</a> Journal of Cell Science. 125, 5702-5710 (2012).</li><li>Yoo, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+protrusion+and+polarity+by+PI3K+during+neutrophil+motility+in+live+zebrafish.">Differential regulation of protrusion and polarity by PI3K during neutrophil motility in live zebrafish.</a> Developmental Cell. 18 (2), 226-236 (2010).</li><li>Buchan, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+zebrafish+line+for+in+vivo+visualisation+of+neutrophil+myeloperoxidase.">A transgenic zebrafish line for in vivo visualisation of neutrophil myeloperoxidase.</a> PLoS One. 14 (4), 0215592 (2019).</li><li>Coombs, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+receptor+trafficking+coordinates+neutrophil+clustering+and+dispersal+at+wounds+in+zebrafish.">Chemokine receptor trafficking coordinates neutrophil clustering and dispersal at wounds in zebrafish.</a> Nature Communications. 10 (1), 5166 (2019).</li><li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish.">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC Developmental Biology. 7, 42 (2007).</li><li>Renshaw, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation.">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108 (13), 3976-3978 (2006).</li><li>Khmelinskii, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tandem+fluorescent+protein+timers+for+in+vivo+analysis+of+protein+dynamics.">Tandem fluorescent protein timers for in vivo analysis of protein dynamics.</a> Nature Biotechnology. 30 (7), 708-714 (2012).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Brachydanio rerio). , (2007).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> Journal of Visualized Experiments. (25), 1115 (2009).</li><li>Detrich, H. W., Zon, L. I., Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish: Genetics, Genomics and Informatics. , (2004).</li><li>Le Guyader, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+unconventional+behavior+of+neutrophils+in+developing+zebrafish.">Origins and unconventional behavior of neutrophils in developing zebrafish.</a> Blood. 111 (1), 132-141 (2008).</li><li>Chan, T. F., Vese, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+contours+without+edges.">Active contours without edges.</a> IEEE Transactions on Image Processing. 10 (2), 266-277 (2001).</li><li>Haralick, R. M., Shanmugam, K., Dinstein, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Textural+features+for+image+Classification.">Textural features for image Classification.</a> IEEE Transactions on Systems, Man, and Cybernetics. SMC-3 (6), 610-621 (1973).</li><li>Deng, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+bacterial+infection+induces+systemic+activation+of+neutrophils+through+Cxcr2+signaling+in+zebrafish.">Localized bacterial infection induces systemic activation of neutrophils through Cxcr2 signaling in zebrafish.</a> Journal of Leukocyte Biology. 93 (5), 761-769 (2013).</li><li>Torraca, V., Mostowy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+infection:+From+pathogenesis+to+cell+biology.">Zebrafish infection: From pathogenesis to cell biology.</a> Trends in Cell Biology. 28 (2), 143-156 (2018).</li><li>Feng, Y., Santoriello, C., Mione, M., Hurlstone, A., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+innate+immune+cell+sensing+of+transformed+cells+in+zebrafish+larvae:+parallels+between+tumor+initiation+and+wound+inflammation.">Live imaging of innate immune cell sensing of transformed cells in zebrafish larvae: parallels between tumor initiation and wound inflammation.</a> PLoS Biology. 8 (12), 1000562 (2010).</li><li>Poplimont, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+swarming+in+damaged+tissue+is+orchestrated+by+connexins+and+cooperative+calcium+alarm+signals.">Neutrophil swarming in damaged tissue is orchestrated by connexins and cooperative calcium alarm signals.</a> Current Biology. 30 (14), 2761-2776.e7 (2020).</li><li>Cornet, C., Di Donato, V., Terriente, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+Zebrafish+and+CRISPR/Cas9:+Toward+a+more+efficient+drug+discovery+pipeline.">Combining Zebrafish and CRISPR/Cas9: Toward a more efficient drug discovery pipeline.</a> Frontiers in Pharmacology. 9, 703 (2018).</li><li>Kienle, K., L&#228;mmermann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+swarming:+an+essential+process+of+the+neutrophil+tissue+response.">Neutrophil swarming: an essential process of the neutrophil tissue response.</a> Immunological Reviews. 273 (1), 76-93 (2016).</li><li>Lisse, T. S., Brochu, E. A., Rieger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capturing+tissue+repair+in+zebrafish+larvae+with+time-lapse+brightfield+stereomicroscopy.">Capturing tissue repair in zebrafish larvae with time-lapse brightfield stereomicroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), e52654 (2015).</li></ol>

लेखकों ने कोई हितों के टकराव की घोषणा नहीं की

ल्यूकोसाइट माइग्रेशन प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के लिए सर्वोपरि महत्व का है। प्रतिरक्षा कोशिकाएं प्रोटोटाइपिक प्रवासी कोशिकाएं हैं, जो ऊतकों और रक्त वाहिकाओं को पार करने में उल्लेखनीय रूप से सक्षम हैं और सूक्ष्मजीवों या महत्व के अन्य मेजबान कोशिकाओं की ओर दिशात्मक रूप से स्थानांतरित करने के लिए रासायनिक मार्गदर्शन संकेतों की एक श्रृंखला को संवेदी करती हैं। सही मार्गदर्शन chemoattractants की मान्यता पर निर्भर करता है, जिनमें से केमोकिन्स सबसे प्रमुख श्रेणी1 का प्रतिनिधित्व करते हैं। केमोकाइन्स को अत्यधिक विशिष्ट सात-ट्रांसमेम्ब्रेन जी प्रोटीन युग्मित रिसेप्टर्स द्वारा पहचाना जाता है। केमोकाइन बाइंडिंग पर, केमोकाइन रिसेप्टर्स संरचना को बदलते हैं जिससे संबंधित ट्राइमेरिक जी प्रोटीन के सक्रियण और कार्यात्मक सिग्नलिंग सबयूनिट्स में उनके पृथक्करण होते हैं जो साइटोस्केलेटल परिवर्तनों को बढ़ावा देते हैं और माइग्रेशन1 को निर्देशित करते हैं। दूसरे, केमोकाइन रिसेप्टर्स फॉस्फोराइलेटेड होते हैं, और यह संशोधन आकर्षित करने के लिए असंवेदनशीलता की ओर जाता है, जिसके बाद तेजी से पुन: संवेदीकरण / रीसाइक्लिंग या इंट्रासेल्युलर गिरावट और सेल सतह2 से नीचे-विनियमन किया जा सकता है। ये रिसेप्टर गतिशीलता कोशिकाओं द्वारा प्राप्त सिग्नलिंग की अवधि और खुराक को प्रभावित करती है, लेकिन वे ल्यूकोसाइट माइग्रेशन व्यवहार को कैसे प्रभावित करते हैं, विवो में स्पष्ट करना मुश्किल है।
पारंपरिक स्तनधारी प्रणालियों में लाइव ल्यूकोसाइट्स में रिसेप्टर गतिशीलता को ट्रैक करना कई चुनौतियों का सामना करना पड़ता है। लाइव अध्ययन के लिए, फ्लोरोसेंट प्रोटीन के साथ रिसेप्टर संलयन को कोशिकाओं में व्यक्त किया जाना चाहिए। यह प्राथमिक ल्यूकोसाइट्स में चुनौतीपूर्ण है, विशेष रूप से न्यूट्रोफिल में, और अब तक के अध्ययनों ने केमोकाइन रिसेप्टर्स 3,4 को व्यक्त करने के लिए सरोगेट न्यूट्रोफिल सेल लाइनों का उपयोग किया है। ट्रांसजेनिक माउस मॉडल की पीढ़ी, जिसमें ल्यूकोसाइट्स सूचनात्मक तस्करीदोषों 5,6 के साथ एक फ्लोरोसेंट रिसेप्टर या उत्परिवर्ती रिसेप्टर्स व्यक्त करते हैं, समय और संसाधनों के काफी निवेश पर जोर देता है। यहां तक कि इन उदाहरणों में, जीवित जानवर में इमेजिंग रिसेप्टर गतिशीलता के लिए इमेजिंग रिज़ॉल्यूशन और कंट्रास्ट सीमित हो सकता है और अध्ययनों ने निश्चित ऊतक अनुभागों5 पर इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का उपयोग किया है। इन तकनीकी चुनौतियों को देखते हुए, कैसे chemoattractant रिसेप्टर्स गतिशीलता एक जीवित ऊतक सेटिंग में सेल व्यवहार को प्रभावित करने की हमारी समझ वर्तमान में सीमित है।
यहां हम ज़ेबराफ़िश न्यूट्रोफिल में रिसेप्टर तस्करी की निगरानी करने के लिए एक पद्धति प्रदान करते हैं। ज़ेबराफ़िश आनुवंशिक रूप से असभ्य हैं, चूहों की तरह, लेकिन ट्रांसजेनेसिस कुशल ट्रांसपोसन सिस्टम और प्रत्यक्ष युग्मनज हेरफेर7 के उपयोग के माध्यम से अपेक्षाकृत अधिक सीधा है। पारदर्शी लार्वा आदर्श रूप से इमेजिंग के लिए उपयुक्त है। केमोकाइन रिसेप्टर गतिशीलता को प्राथमिक रोगाणु कोशिकाओं और पार्श्व रेखा आदिम में फ्लोरोसेंट रिपोर्टर 8,9,10 के साथ संबंधित संलयन की अभिव्यक्ति द्वारा कल्पना की गई है। ज़ेबराफ़िश लार्वा परिपक्व न्यूट्रोफिल से सुसज्जित होते हैं जिनमें स्तनधारी न्यूट्रोफिल के संबंध में अत्यधिक संरक्षित आनुवंशिक और सेलुलर गुण होते हैं। साइटोस्केलेटल गतिशीलता और ध्रुवीयता नियामकों जैसे उपकोशिकीय सिग्नलिंग गतिशीलता को इन कोशिकाओं में संबंधित ट्रांसजेनिक लाइनों11,12,13 की पीढ़ी द्वारा कल्पना की गई है। हाल ही में, हमने ऊतक क्षति14 के लिए भड़काऊ प्रतिक्रियाओं के दौरान न्यूट्रोफिल में केमोकाइन रिसेप्टर गतिशीलता की कल्पना और कार्यात्मक रूप से विश्लेषण किया। यहां, हम न्यूट्रोफिल में केमोकाइन सिग्नलिंग के लिए ट्रांसजेनिक रिपोर्टर लाइनों की पीढ़ी का वर्णन करते हैं, लाइव इमेजिंग के लिए भ्रूण की तैयारी, न्यूट्रोफिल सिग्नलिंग का अध्ययन करने के लिए एक घाव परख और छवियों के अधिग्रहण और विश्लेषण के लिए प्रोटोकॉल। हम उम्मीदवार लिगेंड के लिए केमोकाइन रिसेप्टर प्रतिक्रियाओं का परीक्षण करने के लिए एक साइड-प्रोटोकॉल भी प्रदान करते हैं, जो कि अज्ञात रिसेप्टर्स में लिगैंड मान्यता पैटर्न स्थापित करने की कोशिश करते समय उपयोगी होता है। इन तकनीकों का उपयोग आगे आनुवंशिक जोड़तोड़ के साथ संयोजन में किया जा सकता है, जैसे कि अंतर्जात केमोकाइन अभिव्यक्ति का निषेध या परिवर्तित लिगैंड-प्रेरित तस्करी के साथ उत्परिवर्ती रिसेप्टर्स की पीढ़ी, यह पूछताछ करने के लिए कि विशिष्ट सिग्नलिंग गतिशीलता विवो में ल्यूकोसाइट व्यवहार को कैसे प्रभावित करती है। फ्लोरोसेंटली टैग किए गए केमोकाइन रिसेप्टर्स को व्यक्त करने वाली ट्रांसजेनिक लाइनों का उपयोग अंतर्जात केमोकाइन ग्रेडिएंट के लिए रिपोर्टर के रूप में भी किया जा सकता है, जो अन्यथा प्रत्यक्ष एंटीबॉडी धुंधला द्वारा पता लगाना मुश्किल है। वर्णित पद्धति अन्य इम्यूनो-सिग्नलिंग रिसेप्टर्स के लिए पत्रकारों की पीढ़ी का विस्तार करने के लिए गुंजाइश प्रदान करती है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-phenyl-2-thiourea</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7629-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50mL CellStar Centrifuge Tube</td>
			<td>Grenier Bio-One Limited</td>
			<td>210270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clark capillary glass</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>30-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cleanline Thin Bleach</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
			<td>CLE0301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dri Block heater</td>
			<td>Techne</td>
			<td>FDB02AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>National Institutes of Health, Bethesda, MD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps, Jewelers Dumont No. 5</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom microwell dishes</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pasteur pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11795098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen Ambion mMESSAGE mMACHINE SP6 Transcription Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10391175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting point agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stand</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>GJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>The MathWorks, Inc., Natick, MA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9140-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection system</td>
			<td>Parker</td>
			<td>Picospritzer III</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microloader pipette tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5242956003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>M-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>Flaming/Brown P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide</td>
			<td>Thermo-Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerkinElmer Spinning Disk UltraVIEW ERS, Olympus IX81 spinnng disk confocal microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish (120mm)</td>
			<td>Grenier Bio-One Limited</td>
			<td>632180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0290-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(A) Tailing Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small paintbrush</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectral Applied Research LMM5 laser module</td>
			<td></td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scalpel Blade No. 23</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>233-5528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine MS222</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity software</td>
			<td></td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yokogawa CSU10 spinning disc confocal scanner</td>
			<td>Yokogawa</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging of chemokine receptors in zebrafish neutrophils during wound responses

रासायनिक gradients द्वारा ल्यूकोसाइट मार्गदर्शन प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के लिए आवश्यक है। न्यूट्रोफिल पहली कोशिकाएं हैं जिन्हें ऊतक क्षति की साइटों पर भर्ती किया जाता है जहां वे महत्वपूर्ण रोगाणुरोधी कार्यों को निष्पादित करते हैं। इन लोकी के लिए उनकी तस्करी कई भड़काऊ chemoattractants, केमोकिन्स सहित द्वारा orchestrated है। आणविक स्तर पर, chemoattractant सिग्नलिंग संबंधित रिसेप्टर्स के इंट्रासेल्युलर तस्करी द्वारा विनियमित किया जाता है। हालांकि, यह स्पष्ट नहीं है कि केमोकाइन रिसेप्टर्स में उपकोशिकीय परिवर्तन सेल और ऊतक स्तर पर ल्यूकोसाइट माइग्रेशन गतिशीलता को कैसे प्रभावित करते हैं। यहां हम ऊतक क्षति के लिए भड़काऊ प्रतिक्रियाओं के दौरान न्यूट्रोफिल में केमोकाइन रिसेप्टर गतिशीलता के लाइव इमेजिंग और मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक पद्धति का वर्णन करते हैं। इन उपकरणों से पता चला है कि ज़ेबराफ़िश न्यूट्रोफिल में विभेदक केमोकाइन रिसेप्टर तस्करी ऊतक क्षति के स्थलों पर न्यूट्रोफिल क्लस्टरिंग और फैलाव का समन्वय करती है। यह हमारी समझ के लिए निहितार्थ है कि कैसे भड़काऊ प्रतिक्रियाओं को आत्म-हल किया जाता है। वर्णित उपकरणों का उपयोग विभिन्न प्रकार की शारीरिक और पैथोलॉजिकल सेटिंग्स में न्यूट्रोफिल माइग्रेशन पैटर्न को समझने के लिए किया जा सकता है और कार्यप्रणाली को अन्य सिग्नलिंग रिसेप्टर्स तक बढ़ाया जा सकता है।

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Chemokine Receptors in Zebrafish Neutrophils During Wound Responses at JoVE.com

Live Imaging of Chemokine Receptors in Zebrafish Neutrophils During Wound Responses

यहां हम जेब्राफ़िश न्यूट्रोफिल में chemoattractant रिसेप्टर गतिशीलता के लाइव इमेजिंग और मात्रात्मक विश्लेषण करने के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं

घाव प्रतिक्रियाओं के दौरान ज़ेबराफ़िश न्यूट्रोफिल में केमोकाइन रिसेप्टर्स की लाइव इमेजिंग

Leukocyte guidance by chemical gradients is essential for immune responses. Neutrophils are the first cells to be recruited to sites of tissue damage ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

ट्रांसजेनिक लीशमैनिया परजीवियों की एक लाइव होस्ट में vivo इमेजिंग में

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

माउस टी कोशिकाओं में टी सेल रिसेप्टर्स की रेट्रोवायरल transduction

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Zebrafish लार्वा में गैर इनवेसिव कैंडिडिआसिस फैलाया इमेजिंग

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

बैक्टीरियल विष प्रेरित लाइव सेल प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग प्रतिक्रियाएँ की विज़ुअलाइज़ेशन

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Real-time Imaging of Heterotypic Platelet-neutrophil Interactions on the Activated Endothelium During Vascular Inflammation and Thrombus Formation in Live Mice

संवहनी और लाइव चूहे में thrombus गठन सूजन के दौरान सक्रिय अन्तःस्तर पर heterotypic प्लेटलेट न्युट्रोफिल बातचीत की वास्तविक समय इमेजिंग

Interaction of activated platelets and leukocytes (mainly neutrophils) on the activated endothelium mediates thrombosis and vascular inflammation.1,2 ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया के साथ इंट्रानासाल उपनिवेशीकरण के दौरान भड़काऊ प्रतिक्रियाओं का लक्षण वर्णन

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

रीयल टाइम में anaesthetized चूहों पर intravital माइक्रोस्कोपी द्वारा Mesenteric रगों में न्यूट्रोफिल और monocytes इमेजिंग

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Measuring Physiological Responses of Drosophila Sensory Neurons to Lipid Pheromones Using Live Calcium Imaging

Measuring Physiological Responses of Drosophila Sensory Neurons to Lipid Pheromones Using Live Calcium Imaging

मापने की शारीरिक प्रतिक्रियाओं<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; लिपिड फेरोमोंस के लिए संवेदी न्यूरॉन्स लाइव कैल्शियम इमेजिंग का उपयोग

Unlike mammals, insects such as Drosophila have multiple taste organs. The chemosensory neurons on the legs, proboscis, wings and ovipositor of Drosophila ...

Live Imaging of Antifungal Activity by Human Primary Neutrophils and Monocytes in Response to A. fumigatus

Live Imaging of Antifungal Activity by Human Primary Neutrophils and Monocytes in Response to A. fumigatus

के जवाब में मानव प्राथमिक न्यूट्रोफिल और Monocytes द्वारा रोधी गतिविधि का लाइव इमेजिंग<em&gt; एक। fumigatus</em

Aspergillus fumigatus is an opportunistic fungal pathogen causing invasive infections in immunocompromised hosts with a high case-fatality rate. Research ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

अलगाव साल्मोनेला typhimurium-मैक्रोफेज से युक्त Phagosomes का

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...