Name: subretinal transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in a feline large animal model
Uploaded: 2021-08-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model at JoVE.com

تم تمويل هذا العمل من قبل منحة NEI Fast-track SBIR R44-EY027654-01A1 ومنحة SBIR 3 R44 EY 027654 - 02 S1 (I.O.N. ، علاجات خلايا النسب ؛ الدكتور بيترسن جونز هو باحث رئيسي مشارك). يود المؤلفون أن يشكروا السيدة جانيس كيروبين (MSU RATTS) على مساعدتها في التخدير والرعاية العامة للحيوانات المدرجة في هذه الدراسة بالإضافة إلى المساعدة في الإعداد الجراحي وإعداد / تعقيم الأدوات. يود المؤلفون أن يشكروا الدكتورة بايج وينكلر على المساعدة في تلقي المواد العضوية ووضعها في وسائل الإعلام في اليوم السابق للزرع وللمساعدة في يوم الزرع. كما يعرب المؤلفون عن امتنانهم للسيد راندي غارشار (LCTX) لشحنه الدؤوب لعضويات شبكية العين ، وتجميع الشاحن ، وتنزيل سجلات درجة الحرارة والإجهاد G بعد كل شحنة. تم تنفيذ هذا العمل بينما كان المؤلف إيغور ناسونكين يعمل لدى Biotime (الآن Lineage).

تم إجراء الإجراءات وفقا لبيان جمعية أبحاث الرؤية وطب العيون (ARVO) لاستخدام الحيوانات في أبحاث العيون والرؤية. كما تمت الموافقة عليها من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية بجامعة ولاية ميشيغان. تم استخدام القطط من النوع البري و CrxRdy / + من مستعمرة من القطط التي تم الاحت...

يعد زرع أنسجة الشبكية المشتقة من hPSC (عضويات الشبكية) في الفضاء تحت الشبكية نهجا تجريبيا واعدا لاستعادة الرؤية للأمراض التنكسية الشبكية في المرحلة المتأخرة الناجمة عن موت خلايا العلاقات العامة (العمى العميق أو النهائي). يعتمد النهج المقدم على علاج تجريبي تم تطويره واختباره بنجاح في وقت سا?...

يتأثر ملايين الأشخاص حول العالم بتنكس الشبكية (RD) مع ضعف البصر الناتج أو العمى المرتبط بفقدان المستقبلات الضوئية المستشعرة للضوء (PRs). التنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) هو سبب رئيسي للعمى الناتج عن مجموعة من عوامل الخطر الوراثية والعوامل البيئية / نمط الحياة. بالإضافة إلى ذلك ، تم العثور على أكثر من 200 جين وموضع تسبب RD الموروث (IRD) 1. التهاب الشبكية الصباغي (RP) ، وهو IRD الأكثر شيوعا ، غير متجانس وراثيا مع أكثر من 3000 طفرة جينية في حوالي 70 جينا تم الإبلاغ عنها2،3،4. Leber Congenital Amaurosis (LCA) ، الذي يسبب العمى في مرحلة الطفولة هو أيضا غير متجانس وراثيا 5,6. تم تطوير علاج زيادة الجينات وهو في التجارب السريرية لعلاج عدد صغير من IRDs 3,7. ومع ذلك ، يجب تطوير علاج منفصل لعلاج كل شكل وراثي مميز من IRD وبالتالي علاج مجموعة فرعية صغيرة فقط من المرضى. علاوة على ذلك ، تعتمد زيادة الجينات على وجود مجموعة من المستقبلات الضوئية القابلة للإنقاذ ، وبالتالي فهي لا تنطبق على التنكس المتقدم.
لذلك ، هناك حاجة سريرية ملحة وغير ملباة بعد لتطوير علاجات تعالج وتعالج RDs المتقدمة والعمى العميق إلى النهائي. على مدى العقدين الماضيين ، تم تطوير الغرسات الاصطناعية العصبية واختبارها في نماذج حيوانية كبيرة ، مثل القط ، قبل الاستخدام البشري8،9،10،11،12،13،14. وبالمثل ، في السنوات ال 20 الماضية ، تم تطوير علاجات استبدال الشبكية باستخدام صفائح من شبكية العين الجنينية أو حتى الناضجة للثدييات المطعمة تحت الشبكية 15،16،17،18،19،20،21،22 وحتى تم اختبارها بنجاح في مرضى RD 23،24،25. يستخدم كلا النهجين فكرة إدخال مستشعرات جديدة (الثنائيات الضوئية السيليكونية الكهروضوئية في حالة الأجهزة العصبية التعويضية26،27 ، والمستقبلات الضوئية الصحية الخالية من الطفرات المنظمة في صفائح ، في حالة زرع صفائح الشبكية) في شبكية العين مع العلاقات العامة المتدهورة. بحثت الدراسات الحديثة في استخدام الأساليب القائمة على الخلايا الجذعية مثل زرع أسلاف الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSC)28،29 ، ومستقبلات hPSCالضوئية 30 ، وعضويات hPSC الشبكية31،32،33. تمكن عضويات الشبكية من تكوين أنسجة الشبكية في طبق واشتقاق صفائح مستقبلات الضوء مع الآلاف من العلاقات العامة الخالية من الطفرات ، والتي تشبه طبقة مستقبلات الضوء في شبكية العين الجنينية البشرية النامية34،35،36،37،38،39،40. يعد زرع أنسجة الشبكية المشتقة من hPSC (المواد العضوية) في الفضاء تحت الشبكية للمرضى الذين يعانون من حالات RD أحد أساليب العلاج بالخلايا البحثية الجديدة والواعدة ، والتي يتبعها عدد من الفرق 31،32،41،42. بالمقارنة مع زرع معلق الخلية (للمستقبلات الضوئية الشابة أو أسلاف الشبكية) ، ثبت أن الأوراق المزروعة من المستقبلات الضوئية الجنينية تؤدي إلى تحسينات في الرؤية في التجارب السريرية23،24.
يصف البروتوكول المقدم هنا ، بالتفصيل ، إجراء زرع لتوصيل الشبكية تحت الشبكية لعضويات الشبكية بأكملها (بدلا من الحافات العضوية33,41) كطريقة أفضل محتملة لإدخال صفائح شبكية سليمة مع العلاقات العامة ، لزيادة بقاء الكسب غير المشروع وتحسين الحفاظ على الورقة. على الرغم من أنه تم تطوير إجراءات إدخال قطعة مسطحة من شبكية العين البشرية وكذلك بقع RPE43،44،45 ، لم يتم التحقيق في زرع الطعوم ثلاثية الأبعاد الأكبر. توفر عضويات الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية مصدرا لا ينضب من صفائح المستقبلات الضوئية لتطوير تقنيات استعادة الرؤية ، وهي خالية من القيود الأخلاقية ، وتعتبر مصدرا ممتازا لأنسجة الشبكية البشرية للعلاجات التي تركز على علاج RD المتقدم والعمى النهائي46. يعد تطوير الأساليب الجراحية للزرع الدقيق تحت الشبكية لعضويات الشبكية مع الحد الأدنى من إصابة مكانة الشبكية المضيفة (الشبكية العصبية ، ظهارة الشبكية الصبغية والشبكية والأوعية الدموية المشيمية) إحدى الخطوات الحاسمة لتطوير هذا العلاج نحو التطبيقات السريرية31،32. أثبتت النماذج الحيوانية الكبيرة مثل القطط والكلاب والخنازير والقرود أنها نماذج جيدة للتحقيق في طرق التسليم الجراحي وكذلك لإثبات سلامة صفائح الأنسجة المزروعة (خلايا ظهارة الشبكية الصبغية (RPE)) والتحقيق في استخدام المواد العضوية41،44،45،47،48،49،50. عين الحيوان الكبيرة لها حجم كرة أرضية مشابه للإنسان بالإضافة إلى تشريح مشابه بما في ذلك وجود منطقة ذات كثافة عالية لمستقبلات الضوء ، بما في ذلك المخاريط (المنطقة المركزية) ، تشبه البقعة البشرية6،51،52.
في هذه المخطوطة ، تم وصف تقنية لزرع أنسجة الشبكية المشتقة من hPSC (المواد العضوية) في الفضاء تحت الشبكية لنماذج الحيوانات الكبيرة القطط (كل من القطط البرية و CrxRdy / + ) ، والتي ، جنبا إلى جنب مع نتائج الفعالية الواعدة32،53 يبني أساسا لمزيد من التطوير لمثل هذا العلاج البحثي نحو التطبيقات السريرية لعلاج حالات RD.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore syringe filter with PES membrane</td>
			<td>Cameo</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23G subretinal injector with extendable 41 G cannula</td>
			<td>DORC</td>
			<td>1270.EXT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 &#181;L hamilton gas tight luer lock syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Silk suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>707G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0/7-0 polyglactin suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J570G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acepromazine maleate 500mg/5mL (Aceproject)</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine 0.3 mg/mL</td>
			<td>Par Pharmaceutical</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cSLO + SD-OCT</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td>Spectralis HRA+ OCT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclosporine</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone 2mg/mL (Azium)</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycyline 25mg/5mL</td>
			<td>Cipla</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatal Plus solution (pentobarnital solution)</td>
			<td>Vortech</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin 20mg/2mL</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary (Thin-Wall Single-Barrel Standard Borosilicate (Schott Duran) Glass Tubing</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW150-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylprednisolone actetate 40 mg/mL</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT medium (Tissue-Tek O.C.T. Compound)</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympic Vac-Pac Size 23</td>
			<td>Natus</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16% solution</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15719</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine Hydrochloride 10% Ophthalmic Solution</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prednisolone 15mg/5mL</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propofol 5000mg/50mL (10 mg/mL) (PropoFlo28)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RetCam II video fundus camera</td>
			<td>Clarity Medical Systems</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triamcinolone 400mg/10 mL (Kenalog-40)</td>
			<td>Bristol -Myers Squibb Company</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 1% ophthalmic solution</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrectomy 23G port</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>Accurus systems</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrectomy machine</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>Accurus systems</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitreo-retinal vertical 80&#176; scissors with squeeze handle</td>
			<td>Frimen</td>
			<td>FT170206T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subretinal transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in a feline large animal model

تتسبب الحالات التنكسية للشبكية (RD) المرتبطة بفقدان مستقبلات الضوء مثل التنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) والتهاب الشبكية الصباغي (RP) وداء ليبر الخلقي (LCA) في فقدان البصر التدريجي والمنهك. هناك حاجة غير ملباة للعلاجات التي يمكن أن تعيد الرؤية بمجرد فقدان المستقبلات الضوئية. إن زرع أنسجة الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSC) (المواد العضوية) في الفضاء تحت الشبكية للعين باستخدام RD المتقدم يجلب صفائح أنسجة الشبكية مع الآلاف من المستقبلات الضوئية الصحية الخالية من الطفرات ولديه القدرة على علاج معظم / جميع الأمراض المسببة للعمى المرتبطة بتنكس المستقبلات الضوئية ببروتوكول واحد معتمد. تم تطوير زرع أنسجة شبكية الجنين في الفضاء تحت الشبكية للنماذج الحيوانية والأشخاص الذين يعانون من RD المتقدم بنجاح ولكن لا يمكن استخدامه كعلاج روتيني بسبب المخاوف الأخلاقية ومحدودية إمدادات الأنسجة. تعتبر النماذج الحيوانية لتنكس الشبكية الموروث للعين الكبيرة (IRD) ذات قيمة لتطوير علاجات استعادة الرؤية باستخدام الأساليب الجراحية المتقدمة لزرع خلايا / أنسجة الشبكية في الفضاء تحت الشبكية. إن أوجه التشابه في حجم الكرة الأرضية ، وتوزيع المستقبلات الضوئية (على سبيل المثال ، وجود منطقة مركزية تشبه البقعة) وتوافر نماذج IRD التي تلخص عن كثب IRD البشري من شأنه أن يسهل الترجمة السريعة للعلاج الواعد إلى العيادة. تظهر هنا تقنية جراحية لزرع أنسجة شبكية مشتقة من hPSC في الفضاء تحت الشبكية لنموذج حيواني كبير يسمح بتقييم هذا النهج الواعد في النماذج الحيوانية.

يتيح هذا الإجراء الزرع الناجح والقابل للتكرار لعضويات الشبكية المشتقة من hPSC في الفضاء تحت الشبكية لنموذج عين كبير (موضح هنا باستخدام أمثلة 2: القطط من النوع البري مع مستقبلات ضوئية صحية (PRs) وقطط CrxRdy / + مع العلاقات العامة المتدهورة وشبكية العين). باستخدام الخطوات الموضحة في <s...

Watch this Scientific Journal Video about Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model at JoVE.com

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

تظهر هنا تقنية جراحية لزرع أنسجة شبكية مشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSC) في الفضاء تحت الشبكية لنموذج حيواني كبير.

زرع تحت الشبكية لأنسجة الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في نموذج حيواني كبير للقطط

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...

يظهر البروتوكول الحالي بالتفصيل التسليم تحت الشبكية لعضويات الشبكية بأكملها في نموذج حيواني كبير ، بهدف تطوير مناهج العلاج الخلوي لتنكس الشبكية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بتوصيل المواد العضوية مباشرة إلى الأنسجة المستهدفة ، شبكية العين. تهدف هذه التقنية إلى علاج الحالات التنكسية المتقدمة المسببة للعمى في الشبكية ، مثل التنكس البقعي المرتبط بالعمر ، أو التهاب الشبكية الصباغي ، أو داء الشبكية الخلقي.إظهار الإجراء سيكون الدكتور بيترسون جونز. لزرع المواد العضوية تحت الشبكية ، استخدم مقص Stevens Tenotomy Scissors لإجراء بضع الكانتوتومي الجانبي من 0.5 إلى 1 سم في قطة مخدرة تبلغ من العمر أربعة أشهر ، ووضع منظار جفن باراكير بحجم مناسب في الشق لإبقاء الجفون مفتوحة مع مساعد جراحي يروي القرنية بانتظام باستخدام BSS طوال العملية. استخدم 0.5 ملقط ربط القرنية Castroviejo ومرقئ صغير للبعوض للإمساك بلطف بالملتحمة البصلية بجوار الطرف.ضع غرزتين حريريتين 6-0 في الملتحمة المجاورة مباشرة للطرف في مواضع الساعتين 4 و 8 لإبقاء العين في النظرة الأولية وسحب الجفن الثالث. قم بتثبيت نهايات الغرز بمرقئ البعوض الصغير للمساعدة في التلاعب بها ، ووضع خياطة أخرى في موضع الساعة 12 عند الحافة جزئيا من خلال سمك الحافة ، مع الحرص على عدم اختراق العين. عقد الخيط بشكل فضفاض ، وقطع النهاية قصيرة ، ووضع خياطة البقاء في الملتحمة المجاورة مباشرة للطرف في وضع الساعة 4 لعقد العين والنظرة الأولية.تعكس الملتحمة البصلية بين الساعة 10 و 2 ، واستخدم مقص بضع الوتر لشق الملتحمة من 2 إلى 3 ملليمترات من الطرف. تقويض الملتحمة ومسح كبسولة تينون لكشف الصلبة في موقعي منفذ استئصال الزجاجية في الساعة الثانية والساعة 10 من ثلاثة إلى خمسة ملليمترات من الطرف. استخدم الفرجار لتحديد مواقع بضع التصلب ، وتجنب الأوعية الصلبة الرئيسية التي يمكن أن تكون بارزة في القط.التخطيط لمنطقة ثلاثة ملليمترات عند منفذ أداة الساعة 10 للجراح الأيمن ، قبل وضع 6-0 أو 7-0 خيوط نمط الصليبي polyglactin دون ربط في مواقع عمليات استئصال التصلب المقترحة. بمجرد وضع الغرز في مكانها ، اطلب من المساعد الإمساك بخيوط الساعة 12 للمساعدة في الحفاظ على الكرة الأرضية في مكانها ، واستخدم ملقط Castroviejo 0.12 ملم لتثبيت الأنسجة بجوار موقع بضع التصلب. يستخدم مبزل لإدخال منفذ استئصال الزجاجية بقياس 23 من خلال الصلبة في كل من مواضع الساعتين 2 و 10 بزاوية نحو العصب البصري لتجنب ملامسة العدسة ، واستخدام ملقط ربط لدفع منفذ الري برفق لتحديد ما إذا كان يمكن تصور الأطراف داخل الجسم الزجاجي.اطلب من المساعد وضع عدسة استئصال الزجاجية المكبرة للري من Machemer على القرنية للسماح بتصور الجزء الخلفي من العين ، وقاطع مسبار استئصال الزجاجية بقياس 23 من خلال منفذ الجهاز لإجراء استئصال الزجاجية الأساسية الجزئية. بعد ذلك ، أدخل إبرة حقنة ملليلتر واحدة تحتوي على ملليلتر واحد من محلول تريامسينولون في منفذ الأداة وحقن 250 إلى 500 ميكرولتر من التعليق البلوري. عندما يتم تسليم المحلول ، قم بدفع مسبار استئصال الزجاجية عبر منفذ الجهاز لإغلاق رأس العصب البصري مع توجيه المنفذ بعيدا عن سطح الشبكية.استخدم فراغا عاليا للمساعدة في فصل الوجه الزجاجي عن الشبكية ، وأدخل الحاقن من خلال منفذ الجهاز باتجاه سطح الشبكية ، وبثق طرف القنية. اضغط برفق على طرف سطح الشبكية واطلب من المساعد إعطاء دفعة سريعة طفيفة على مكبس المحقنة لبدء انفصال الشبكية ، مما يقلل من ضغط الحقن للسماح بزيادة بطيئة في انفصال الشبكية حتى يتم تحقيق الحجم المطلوب. استخدم قنية قياس 41 للحاقن لتكبير الانفصال قليلا حتى يمكن إدخال مقص الشبكية ، وإزالة منفذ الصلبة عند الساعة 10.ثم استخدم سكينا مستقيما بشق 2.850 ملم موجها نحو العصب البصري لتجنب لمس العدسة لتكبير بضع التصلب في هذا الموقع. اجعل بضع الشبكية على الفقاعة بعيدا عن العصب البصري لتجنب إتلاف الألياف العصبية الشبكية الناشئة من المنطقة المزروعة ، وتجنب قطع الأوعية الشبكية الرئيسية لتقليل خطر النزيف. لزرع المواد العضوية ، أدخل شعرية زجاجية محملة بالمواد العضوية من خلال بضع التصلب الموسع باتجاه موقع بضع الشبكية ، واستخدم طرف الشعيرات الدموية لفتح بضع الشبكية قليلا للسماح بالوصول إلى فتحة الفقاعة تحت الشبكية.اطلب من المساعد الضغط ببطء على مكبس الحاقن مرة أخرى لحقن المواد العضوية في الفقاعة تحت الشبكية. يجب أن تستمر BSS في المواد العضوية والأعضاء وفتح بضع الشبكية. عندما يتم تسليم جميع المواد العضوية ، اترك الشعيرات الدموية الزجاجية في مكانها لبضع ثوان قبل إزالة الشعيرات الدموية ببطء من العين ، مع الحرص على تجنب أي إطلاق مفاجئ للسوائل.عندما تتم إزالة الشعيرات الدموية ، أغلق بضع التصلب باستخدام الخيط الموضوعة مسبقا في نمط صليبي. اطلب من المساعد إزالة منفذ التسريب ، وربط خياطة بضع التصلب بسرعة وإغلاق الصفاق بخيوط polyglactin في نمط مستمر بسيط. أغلق بضع العظمة الجانبي بخياطة polyglactin 6-0 وخيوط الجلد الشكل الثامن لأداء canthus الجانبي واستخدم خيوط الجلد المتقطعة البسيطة لإغلاق بقية الجرح.ثم يتم تطبيق كوكتيل الستيرويد والمضادات الحيوية المناسب بعد الجراحة. يمكن تأكيد تحميل عضوي شبكية الشبكية المشتق من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات داخل القنية الزجاجية لجهاز الحقن وأثناء الجراحة عن طريق التصور المباشر. يمكن تأكيد وجود المواد العضوية داخل الفضاء تحت الشبكية بعد الجراحة عن طريق فحص العيون وتصوير قاع العين.قبل القتل الرحيم ، يمكن أيضا إجراء تنظير العين بالليزر للمسح البؤري والتصوير المقطعي للتماسك البصري في المجال الطيفي لتقييم موضع الكائنات العضوية. يمكن استخدام هذه التقنيات لإثبات استمرار عضويات الشبكية في الفضاء تحت الشبكية بين الشبكية العصبية وظهارة الشبكية الصبغية للعين المتلقية. يمكن استخدام التحليلات النسيجية والكيميائية المناعية لتوضيح بقاء الرسوم البيانية الغريبة داخل الفضاء تحت الشبكية لعين كبيرة في مثبط للمناعة.فقط أولئك المهرة في جراحة الشبكية والجسم الزجاجي ، مثل أطباء العيون البيطريين المدربين أو جراحي الشبكية والجسم الزجاجي المطلعين على اختلافات الأنواع في عين القط مقارنة بالعين البشرية يجب أن يقوموا بهذا الإجراء. يجب أن تكون التقنية المقدمة في هذا الفيديو قابلة للتطبيق على النماذج الحيوانية الكبيرة الأخرى المستخدمة لترجمة تقنيات جراحة الشبكية والجسم الزجاجي إلى العيادات.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

كفاءة اشتقاق أسلاف الإنسان متعلق بالخلايا العصبية والخلايا العصبية من افرة القوة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية التعريفي مع جزيء صغير

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

تشريح والثقافة، وتحليل<em&gt; القيطم المورق</em&gt; الأنسجة الجنينية الشبكية

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice Retinal Pigment Epithelium

الحوفي-النهج تحت الشبكية حقن الفيروسية المتجهات للعلاج الجيني في الفئران الشبكية الظهارة الصبغية

The eye is a small and enclosed organ which makes it an ideal target for gene therapy. Recently various strategies have been applied to gene therapy in ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

وضع البروتوكول المكرر لزرع الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية البشرية ترانس-سكليرال سوبريتينال في عيون الفئران

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

نمذجة عدوى فيروس زكى من وضع الدماغ البشري في المختبر باستخدام الخلايا الجذعية المشتقة من أورجانويدس الدماغي

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...

Method for High Speed Stretch Injury of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Neurons in a 96-well Format

أسلوب لإصابة الإنسان تمتد عالية السرعة التي يسببها Pluripotent الخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا العصبية في شكل جيد 96

Traumatic brain injury (TBI) is a major clinical challenge with high morbidity and mortality. Despite decades of pre-clinical research, no proven ...

Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Microglia in Immunocompetent Mice Brain via Non-Invasive Transnasal Route

زرع الخلايا الدبقية الصغيرة المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان في دماغ الفئران المناعية عبر طريق الأنف غير الغازي

Microglia are the specialized population of macrophage-like cells of the brain. They play essential roles in both physiological and pathological brain ...

Transplantation of Human Stem Cell-Derived GABAergic Neurons into the Early Postnatal Mouse Hippocampus to Mitigate Neurodevelopmental Disorders

زرع الخلايا العصبية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية GABAergic في الحصين المبكر بعد الولادة للفأر للتخفيف من اضطرابات النمو العصبي

A reduced number or dysfunction of inhibitory interneurons is a common contributor to neurodevelopmental disorders. Therefore, cell therapy using ...

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

الثقافات العضوية للقشرة البشرية البالغة كنموذج خارج الجسم الحي لزراعة الخلايا الجذعية البشرية والتحقق من صحتها

Neurodegenerative disorders are common and heterogeneous in terms of their symptoms and cellular affectation, making their study complicated due to the ...

Culturing Human Midbrain Dopaminergic Neurons for Phenotypic Profiling

Phenotypic Profiling of Human Stem Cell-Derived Midbrain Dopaminergic Neurons

Generating Neuronal Phenotypic Profiles - A Protocol to Culture and Image Human Midbrain Dopaminergic Neurons (Video) | JoVE

التنميط الظاهري للخلايا العصبية الدوبامينية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية في الدماغ المتوسط

Parkinson&#39;s disease (PD) is linked to a range of cell biological processes that cause midbrain dopaminergic (mDA) neuron loss. Many current in vitro ...