Name: subretinal transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in a feline large animal model
Uploaded: 2021-08-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי NEI Fast-Track SBIR grant R44-EY027654-01A1 ומענק SBIR 3 R44 EY 027654 - 02 S1 (I.O.N., Lineage Cell Therapeutics; ד"ר פיטרסן-ג'ונס הוא co-PI). המחברים רוצים להודות לגב' ג'ניס קרובין (MSU RATTS) על עזרתה בהרדמה ובטיפול כללי בבעלי החיים שנכללו במחקר זה, כמו גם על עזרתה בהכנה / עיקור של מכשירים כירורגיים. המחברים רוצים להודות לד"ר פייג' וינקלר על העזרה בקבלת האורגנואידים והצבתם במדיה ביום שלפני ההשתלה ועל העזרה ביום ההשתלה. המחברים אסירי תודה גם למר רנדי גרצ'ר (LCTX) על משלוח חרוץ של אורגנואידים ברשתית, הרכבת השולח והורדת רשומות טמפרטורה ומתח G לאחר כל משלוח. עבודה זו בוצעה בזמן שהסופר איגור נסונקין הועסק על ידי Biotime (כיום Lineage).

ההליכים נערכו בהתאם להצהרת האגודה לחקר הראייה והעיניים (ARVO) לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה. הם אושרו גם על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת מישיגן. במחקר זה נעשה שימוש בחתולי בר וחתולי CrxRdy/+ ממושבת חתולים שהוחזקה באוניברסיטת מישיגן. בעלי החיי...

השתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC (אורגנואידים ברשתית) בחלל התת-רשתית היא גישה ניסיונית מבטיחה להשבת הראייה למחלות ניווניות של הרשתית בשלב מאוחר הנגרמות על ידי מוות של תאי PR (עיוורון עמוק או סופני). הגישה המוצגת מתבססת על טיפול ניסיוני מוקדם יותר שפותח ונבדק בהצלחה המבוסס על השתלה תת-רשתית של פי...

מיליוני אנשים ברחבי העולם מושפעים מניוון רשתית (RD) עם ליקוי ראייה או עיוורון כתוצאה מכך הקשורים לאובדן קולטני האור קולטי האור (PRs). ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD) הוא גורם עיקרי לעיוורון הנובע משילוב של גורמי סיכון גנטיים וגורמים סביבתיים / אורח חיים. בנוסף, מעל 200 גנים ואתרים נמצאו כגורמים ל- RD תורשתי (IRD)1. רטיניטיס פיגמנטוזה (RP), ה-IRD הנפוץ ביותר, הוא הטרוגני מבחינה גנטית עם יותר מ-3,000 מוטציות גנטיות בכ-70 גנים המדווחים 2,3,4. Leber Congenital Amaurosis (LCA), הגורם לעיוורון בילדות הוא גם הטרוגני גנטית 5,6. טיפול בהגדלת גנים פותח ונמצא בניסויים קליניים לטיפול במספר קטן של IRDs 3,7. עם זאת, יש לפתח טיפול נפרד לטיפול בכל צורה גנטית נפרדת של IRD ובכך לטפל רק בתת-קבוצה קטנה של חולים. יתר על כן, הגדלת גנים מסתמכת על נוכחות של אוכלוסייה של פוטורצפטורים הניתנים להצלה ולכן אינה ישימה לניוון מתקדם.
יש, אם כן, צורך קליני דחוף ועדיין לא מסופק בפיתוח טיפולים המטפלים ומטפלים ב- RDs מתקדמים ובעיוורון עמוק עד סופני. במהלך 2 העשורים האחרונים שתלים נוירו-תותבים פותחו ונבדקו במודלים גדולים של בעלי חיים, כגון החתול, לפני השימוש האנושי 8,9,10,11,12,13,14. כמו כן, ב-20 השנים האחרונות פותחו טיפולים בתחליפי רשתית באמצעות יריעות רשתית עוברית או אפילו בוגרת של יונקים שהושתלו באופן תת-רשתי 15,16,17,18,19,20,21,22 ואף נבדקו בהצלחה בחולי RD 23,24,25. שתי הגישות משתמשות ברעיון של החדרת חיישנים חדשים (פוטודיודות סיליקון פוטו-וולטאיות במקרה של התקנים נוירו-תותבים26,27, ופוטורצפטורים בריאים ללא מוטציות המאורגנים ביריעות, במקרה של השתלת יריעות רשתית) לרשתית עם PRs מנוונים. מחקרים אחרונים חקרו את השימוש בגישות מבוססות תאי גזע כגון השתלת תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) שמקורם באבות רשתית28,29, hPSC-photoreceptors 30 ואורגנואידים hPSC-רשתית31,32,33. אורגנואידים ברשתית מאפשרים היווצרות רקמת רשתית בצלוחית וגזירה של יריעות קולטי אור עם אלפי PRs נטולי מוטציות, הדומים לשכבת קולטי האור ברשתית העובר האנושית המתפתחת 34,35,36,37,38,39,40 . השתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC (אורגנואידים) בחלל התת-רשתית של חולים עם תנאי RD היא אחת הגישות החדשות והמבטיחות לטיפול תאי ניסיוני, הננקטת על ידי מספר צוותים 31,32,41,42. בהשוואה להשתלת תרחיף התא (של פוטורצפטורים צעירים או אבות רשתית), יריעות מושתלות של פוטורצפטורים עובריים הוכחו כמביאות לשיפור בראייה בניסויים קליניים23,24.
הפרוטוקול המוצג כאן מתאר, בפירוט, הליך השתלה למסירה תת-רשתית של אורגנואידים רשתית שלמים (במקום שולי אורגנואיד33,41) כדרך טובה יותר להציג יריעות רשתית שלמות עם PRs, כדי להגדיל את הישרדות השתל ולשפר את שימור היריעה. למרות שהליכים להחדרת חתיכה שטוחה של רשתית אנושית וגם מדבקות RPE פותחו 43,44,45, השתלת שתלים תלת ממדיים גדולים יותר לא נחקרה. אורגנואידים ברשתית שמקורם בתאי גזע מספקים מקור בלתי נדלה של יריעות קולטי אור לפיתוח טכנולוגיות שיקום ראייה, חופשיים ממגבלות אתיות, ונחשבים למקור מצוין של רקמת רשתית אנושית לטיפולים המתמקדים בטיפול ב- RD מתקדם ובעיוורון סופני46. פיתוח שיטות כירורגיות להשתלה תת-רשתית מדויקת של אורגנואידים ברשתית עם פגיעה מינימלית בנישת הרשתית המארחת (רשתית עצבית, אפיתל פיגמנט רשתית וכלי דם רשתית וכורואידיים) הוא אחד הצעדים הקריטיים לקידום טיפול כזה לקראת יישומים קליניים31,32. מודלים גדולים של בעלי חיים כגון חתולים, כלבים, חזירים וקופים הוכיחו את עצמם כמודלים טובים לחקר שיטות מסירה כירורגיות, כמו גם כדי להדגים את הבטיחות של יריעות רקמה מושתלות (תאי אפיתל פיגמנט ברשתית (RPE) ולחקור את השימוש באורגנואידים 41,44,45,47,48,49,50 . לעין החיה הגדולה יש גודל גלובוס דומה לאדם, כמו גם אנטומיה דומה כולל נוכחות של אזור בעל צפיפות פוטורצפטור גבוהה, כולל מדוכים (האזור centralis), הדומה למקולה האנושית 6,51,52.
בכתב יד זה מתוארת טכניקה להשתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC (אורגנואידים) בחלל התת-רשתי של מודלים של חיות גדולות של חתולים (הן חתולי בר והן חתולי CrxRdy/+), אשר יחד עם תוצאות יעילות מבטיחות32,53 בונה בסיס לפיתוח נוסף של טיפול ניסיוני כזה לקראת יישומים קליניים לטיפול במצבי RD.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore syringe filter with PES membrane</td>
			<td>Cameo</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23G subretinal injector with extendable 41 G cannula</td>
			<td>DORC</td>
			<td>1270.EXT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 &#181;L hamilton gas tight luer lock syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Silk suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>707G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0/7-0 polyglactin suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J570G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acepromazine maleate 500mg/5mL (Aceproject)</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine 0.3 mg/mL</td>
			<td>Par Pharmaceutical</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cSLO + SD-OCT</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td>Spectralis HRA+ OCT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclosporine</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone 2mg/mL (Azium)</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycyline 25mg/5mL</td>
			<td>Cipla</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatal Plus solution (pentobarnital solution)</td>
			<td>Vortech</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin 20mg/2mL</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary (Thin-Wall Single-Barrel Standard Borosilicate (Schott Duran) Glass Tubing</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW150-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylprednisolone actetate 40 mg/mL</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT medium (Tissue-Tek O.C.T. Compound)</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympic Vac-Pac Size 23</td>
			<td>Natus</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16% solution</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15719</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine Hydrochloride 10% Ophthalmic Solution</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prednisolone 15mg/5mL</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propofol 5000mg/50mL (10 mg/mL) (PropoFlo28)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RetCam II video fundus camera</td>
			<td>Clarity Medical Systems</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triamcinolone 400mg/10 mL (Kenalog-40)</td>
			<td>Bristol -Myers Squibb Company</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 1% ophthalmic solution</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NA</td>
			<td>can be found by various suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrectomy 23G port</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>Accurus systems</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrectomy machine</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>Accurus systems</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitreo-retinal vertical 80&#176; scissors with squeeze handle</td>
			<td>Frimen</td>
			<td>FT170206T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subretinal transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in a feline large animal model

מצבים ניווניים ברשתית (RD) הקשורים לאובדן קולטני אור כגון ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD), רטיניטיס פיגמנטוזה (RP) ואמאורוזיס מולד Leber (LCA) גורמים לאובדן ראייה מתקדם ומתיש. יש צורך בלתי מסופק בטיפולים שיכולים לשחזר את הראייה לאחר פוטורצפטורים אבדו. השתלת רקמת רשתית (אורגנואידים) שמקורה בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) בחלל התת-רשתית של עין עם RD מתקדם מביאה יריעות רקמת רשתית עם אלפי פוטורצפטורים בריאים ללא מוטציות ויש לה פוטנציאל לטפל ברוב/כל המחלות המסנוורות הקשורות לניוון קולטני אור עם פרוטוקול מאושר אחד. השתלת רקמת רשתית עוברית בחלל התת-רשתית של מודלים של בעלי חיים ואנשים עם RD מתקדם פותחה בהצלחה אך אינה יכולה לשמש כטיפול שגרתי בשל חששות אתיים ואספקת רקמות מוגבלת. מודלים של ניוון רשתית תורשתי בעין גדולה (IRD) הם בעלי ערך לפיתוח טיפולים לשיקום ראייה תוך שימוש בגישות כירורגיות מתקדמות להשתלת תאים/רקמות רשתית בחלל התת-רשתית. הדמיון בגודל כדור הארץ, ובפיזור קולטני האור (למשל, נוכחות של אזור מרכזי דמוי מקולה) והזמינות של מודלי IRD המסכמים מקרוב IRD אנושי יאפשרו תרגום מהיר של טיפול מבטיח למרפאה. מוצגת כאן טכניקה כירורגית של השתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC בחלל התת-רשתית של מודל בעל חיים גדול, המאפשרת הערכה של גישה מבטיחה זו במודלים של בעלי חיים.

הליך זה מאפשר השתלה מוצלחת וניתנת לשחזור של אורגנואידים ברשתית שמקורם ב-hPSC בחלל התת-רשתית של מודל של בעלי חיים גדולים (שהודגם כאן באמצעות 2 דוגמאות: חתולי בר עם פוטורצפטורים בריאים (PRs) וחתולי CrxRdy/+ עם PRs ורשתית מנוונים). באמצעות השלבים המצוינים באיור 1, הכינו ו?...

Watch this Scientific Journal Video about Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model at JoVE.com

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

מוצגת כאן טכניקה כירורגית להשתלת רקמת רשתית שמקורה בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) בחלל התת-רשתית של מודל בעל חיים גדול.

השתלה תת-רשתית של רקמת רשתית שמקורה בתאי גזע עובריים אנושיים במודל של בעלי חיים גדולים אצל חתולים

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...

הפרוטוקול הנוכחי מראה בפירוט העברה תת-רשתית של אורגנואידים ברשתית כולה במודל של בעלי חיים גדולים, במטרה לפתח גישות טיפול תאי לניוון הרשתית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת משלוח של אורגנואידים ישירות לרקמת המטרה, הרשתית. הטכניקה נועדה לטפל במצבים ניווניים רשתית מסנוורים מתקדמים, כגון ניוון מקולרי הקשור לגיל, רטיניטיס פיגמנטוזה או אמאורוזיס מולד לבר.מי שידגים את ההליך יהיה ד"ר פיטרסון ג'ונס. להשתלה תת-רשתית של האורגנואידים, השתמש במספריים של סטיבנס טנוטומיה כדי לבצע קנטומיה צידית של 0.5 עד 1 ס"מ בחתול מורדם בן ארבעה חודשים בצום לילה, והכנס ספקולום עפעפיים בגודל מתאים לתוך החתך כדי לשמור על העפעפיים פתוחים עם עוזר כירורגי המשקה באופן קבוע את הקרנית עם BSS לאורך כל ההליך. השתמש 0.5 Castroviejo מלקחיים קשירת הקרנית ו hemostat יתוש קטן לתפוס בעדינות את הלחמית bulbar ליד הלימבוס.הניחו שני תפרי משי 6-0 בלחמית הסמוכה ללימבוס בתנוחות 4 ו-8 כדי להחזיק את העין במבט ראשוני ולמשוך את העפעף השלישי. מהדקים את קצות התפרים עם המוסטטים קטנים של יתושים כדי לעזור למניפולציה שלהם, ומניחים תפר נוסף במצב השעה 12 בלימבוס חלקית דרך עובי הלימבוס, תוך הקפדה שלא לחדור לעין. קשרו באופן רופף את התפר, חתכו את הקצה קצר, והניחו תפר שהייה בלחמית הסמוכה ללימבוס במצב השעה 4 כדי להחזיק את העין ואת המבט הראשוני.שיקפו את לחמית הבולבר בין השעה 10 ל -2, והשתמשו במספריים טנוטומיים כדי לחתוך את הלחמית שניים עד שלושה מילימטרים מהלימבוס. ערערו את הלחמית ונקו את הקפסולה של טנון כדי לחשוף את לובן העין באתרי נמל הוויטרקטומיה של השעה שתיים ועשר במרחק של שלושה עד חמישה מילימטרים מהלימבוס. השתמש קליפרים כדי לזהות את האתרים עבור סקלרוטומיה, הימנעות כלי הדם העיקריים שיכולים להיות בולטים אצל החתול.תכנון אזור של שלושה מילימטרים ביציאת המכשיר בשעה 10 עבור מנתח ימני, מקום מראש 6-0 או 7-0 תפרים בתבנית פוליגלקטין צולב ללא קשירה באתרי הסקלרוטומיות המוצעות. ברגע שהתפרים נמצאים במקומם, בקש מהעוזר לתפוס את התפרים של השעה 12 כדי לעזור לשמור על כדור הארץ במקומו, והשתמש במלקחיים Castroviejo בקוטר 0.12 מ"מ כדי להחזיק את הרקמה ליד אתר הסקלרוטומיה. משתמש בטרוקאר כדי להציג יציאת ויטרקטומיה של 23 מד דרך לובן העין הן במצב 2 והן בשעה 10 בזווית לכיוון עצב הראייה כדי למנוע מגע עם העדשה, והשתמש במלקחיים קשירה כדי לדחוף בעדינות את יציאת ההשקיה כדי לקבוע אם ניתן לדמיין את הקצוות בתוך הזגוגית.בקש מהעוזר להניח עדשת ויטרקטומיה מגדילה להשקיה על הקרנית כדי לאפשר הדמיה של החלק האחורי של העין, וחותך בדיקה ויטרקטומיה של 23 מד דרך יציאת המכשיר לביצוע ויטרקטומיה חלקית של הליבה. לאחר מכן, להציג את המחט של מזרק מיליליטר אחד המכיל מיליליטר אחד של פתרון triamcinolone לתוך יציאת המכשיר להזריק 250 עד 500 מיקרוליטר של השעיית גביש. לאחר מתן התמיסה, יש לקדם את בדיקת ויטרקטומיה דרך יציאת המכשיר כדי לסגור את ראש עצב הראייה כאשר היציאה פונה הרחק מפני השטח של הרשתית.השתמשו בוואקום גבוה כדי לנתק את הפנים הוויטריאליות מהרשתית, הכניסו את המזרק דרך יציאת המכשיר לכיוון משטח הרשתית ומשכו את קצה הצינורית. לחץ בעדינות על קצה משטח הרשתית ובקש מהעוזר לתת דחיפה מהירה קלה על בוכנה המזרק כדי להתחיל את היפרדות הרשתית, הפחתת לחץ ההזרקה כדי לאפשר עלייה איטית של היפרדות הרשתית עד להשגת הגודל הרצוי. השתמש בצינורית 41 מד של המזרק כדי להגדיל מעט את הניתוק עד שניתן להכניס מספריים ברשתית, והסר את היציאה הסקלרלית של השעה 10.לאחר מכן השתמש בסכין חריץ ישרה בקוטר 2.850 מ"מ המכוונת לעצב הראייה כדי להימנע מלגעת בעדשה כדי להגדיל את סקלרוטומיה באתר זה. הפוך את רטינוטומיה על bleb הרחק לעצב הראייה כדי למנוע פגיעה סיבי עצב הרשתית שמקורם באזור המושתל, ולהימנע חיתוך כלי דם רשתית גדולים כדי להפחית את הסיכון לדימום. כדי להשתיל את האורגנואידים, הכנס נימי זכוכית עמוסים באורגנואידים דרך סקלרוטומיה מוגדלת לכיוון אתר הרטינוטומיה, והשתמש בקצה הנימים כדי לפתוח מעט את הרטינוטומיה כדי לאפשר גישה לפתח הבלם התת רשתית.בקש מהעוזר ללחוץ שוב באיטיות על הבוכנה של המזרק כדי להזריק את האורגנואידים לתוך הבוכנה התת-רשתית. BSS צריך להמשיך אורגנואידים, האיברים, ולשטוף את רטינוטומיה פתוח. כאשר כל האורגנואידים סופקו, השאירו את נימי הזכוכית במקומם למשך מספר שניות לפני שתוציאו לאט את הנימים מהעין, תוך הקפדה על שחרור פתאומי של נוזלים.לאחר הסרת הנימים, סגור את הסקלרוטומיה באמצעות התפר שהונח מראש בתבנית צליבה. בקש מהעוזר להסיר את יציאת העירוי, ולקשור במהירות את תפר הסקלרוטומיה ולסגור את הצפק עם התפרים פוליגלקטין בתבנית רציפה פשוטה. סגור את הקנטוטומיה הצידית עם תפר פוליגלקטין 6-0 ותפרי עור הספרה שמונה לביצוע הקנטוס הצידי והשתמש בתפרי עור פשוטים קטועים כדי לסגור את שאר הפצע.לאחר מכן יש לתת את הסטרואידים המתאימים לאחר הניתוח ואת קוקטייל האנטיביוטיקה. ניתן לאשר העמסת אורגנואיד רשתית פלוריפוטנטית של תאי גזע אנושיים בתוך צינורית הזכוכית של מכשיר ההזרקה ובמהלך הניתוח על ידי הדמיה ישירה. נוכחות האורגנואידים בתוך החלל התת-רשתית יכולה להיות מאושרת לאחר הניתוח על ידי בדיקה אופתלמית והדמיית פונדוס.לפני המתת חסד, סריקה קונפוקלית לייזר אופטלמוסקופיה ותחום ספקטרלי הדמיית טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית ניתן לבצע גם כדי להעריך את המיקום של אורגנואידים. טכניקות אלה יכולות לשמש כדי להדגים את ההתמדה של אורגנואידים ברשתית בחלל התת-רשתית בין הרשתית העצבית לבין אפיתל פיגמנט הרשתית של העין המקבלת. ניתן להשתמש בניתוחים היסטולוגיים ואימונוהיסטוכימיים כדי להמחיש את הישרדותם של הגרפים הקסנוגניים בתוך החלל התת-רשתי של עין גדולה בחיה מדוכאת חיסון.רק אלה המיומנים בניתוחי זגוגית, כגון רופאי עיניים וטרינריים מיומנים או מנתחי זגוגית המכירים את ההבדלים בין המינים בעין החתול לעומת עין האדם צריכים לבצע הליך זה. הטכניקה המוצגת בסרטון זה צריכה להיות ישימה למודלים אחרים של בעלי חיים גדולים המשמשים לתרגום טכניקות כירורגיות זגוגיות למרפאות.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

גזירת יעיל של אבות עצב נוירונים האדם מן האדם תאים pluripotent גזע עובריים עם אינדוקציה מולקולה קטנה

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, תרבות וניתוח של<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; רקמת רשתית עוברית

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice Retinal Pigment Epithelium

הזרקת גישת subretinal Limbal של ויראלי וקטורים לטיפול גנטי בעכברים הרשתית פיגמנט האפיתל

The eye is a small and enclosed organ which makes it an ideal target for gene therapy. Recently various strategies have been applied to gene therapy in ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

פיתוחו של פרוטוקול מעודן עבור השתלת Subretinal טרנס-scleral של תאי אפיתל הפיגמנט ברשתית האנושי בעיניים עכברוש

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

דגמי Zika בנגיף של ה בפיתוח המוח האנושי במבחנה באמצעות תאי גזע נגזר Organoids מוחי

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...

Method for High Speed Stretch Injury of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Neurons in a 96-well Format

שיטת עבור מהירות גבוהה מתיחה פציעתו של האדם המושרה נוירונים נגזר תאי גזע Pluripotent בתבנית 96-ובכן

Traumatic brain injury (TBI) is a major clinical challenge with high morbidity and mortality. Despite decades of pre-clinical research, no proven ...

Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Microglia in Immunocompetent Mice Brain via Non-Invasive Transnasal Route

השתלה של מיקרוגליה שמקורה בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם במוח עכברים מדוכאי חיסון דרך נתיב טרנסנסאלי לא פולשני

Microglia are the specialized population of macrophage-like cells of the brain. They play essential roles in both physiological and pathological brain ...

Transplantation of Human Stem Cell-Derived GABAergic Neurons into the Early Postnatal Mouse Hippocampus to Mitigate Neurodevelopmental Disorders

השתלת תאי עצב GABAergic שמקורם בתאי גזע אנושיים בהיפוקמפוס העכברים המוקדם לאחר הלידה כדי למתן הפרעות נוירו-התפתחותיות

A reduced number or dysfunction of inhibitory interneurons is a common contributor to neurodevelopmental disorders. Therefore, cell therapy using ...

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

תרביות אורגנוטיפיות של קליפת המוח האנושית הבוגרת כמודל Ex vivo להשתלה ואימות של תאי גזע אנושיים

Neurodegenerative disorders are common and heterogeneous in terms of their symptoms and cellular affectation, making their study complicated due to the ...

Culturing Human Midbrain Dopaminergic Neurons for Phenotypic Profiling

Phenotypic Profiling of Human Stem Cell-Derived Midbrain Dopaminergic Neurons

Generating Neuronal Phenotypic Profiles - A Protocol to Culture and Image Human Midbrain Dopaminergic Neurons (Video) | JoVE

פרופיל פנוטיפי של נוירונים דופמינרגיים שמקורם בתאי גזע אנושיים במוח התיכון

Parkinson&#39;s disease (PD) is linked to a range of cell biological processes that cause midbrain dopaminergic (mDA) neuron loss. Many current in vitro ...