Name: in vivo crispr/cas9 screening to simultaneously evaluate gene function in mouse skin and oral cavity
Uploaded: 2020-11-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo CRISPR/Cas9 Screening to Simultaneously Evaluate Gene Function in Mouse Skin and Oral Cavity at JoVE.com

وقد دعم هذا العمل منحة مشروع من المعهد الكندي للبحوث الصحية (CIHR 365252) ومؤسسة كريمبيل وجولة التميز البحثي لصندوق أونتاريو للبحوث الجولة 8 (RE08-065). سامباث كومار لوغاناثان هو الحاصل على زمالة الجمعية الكندية للسرطان (BC-F-16#31919).

تمت الموافقة على هذا البروتوكول وتنفيذه وفقا لIACUC من جامعة تورنتو.
1. تصميم واستنساخ مكتبات CRISPR المجمعة
<ol><li>حدد 4-5 sgRNAs استهداف جينات الماوس ذات الفائدة من الموارد مثل مصمم SgRNA معهد واسع (https://portals.broadinstitute.org/gpp/public/analysis-tools/sgrna-design) أو خادم CHOPCHOP (https://chopchop.cbu.uib.no). حدد عددا متساويا ?...

<ol>
	<li>Beronja, S., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-mediated+gene+function+analysis+in+skin.">RNAi-mediated gene function analysis in skin.</a> Methods in Molecular Biology. 961, 351-361 (2013).</li><li>Beronja, S., Livshits, G., Williams, S., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+functional+dissection+of+genetic+networks+via+tissue-specific+transduction+and+RNAi+in+mouse+embryos.">Rapid functional dissection of genetic networks via tissue-specific transduction and RNAi in mouse embryos.</a> Nature Medicine. 16, 821-827 (2010).</li><li>Shalem, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+screening+in+human+cells.">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells.</a> Science. 343, 84-87 (2014).</li><li>Beronja, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+screens+in+mice+identify+physiological+regulators+of+oncogenic+growth.">RNAi screens in mice identify physiological regulators of oncogenic growth.</a> Nature. 501, 185-190 (2013).</li><li>Loganathan, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rare+driver+mutations+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinomas+converge+on+NOTCH+signaling.">Rare driver mutations in head and neck squamous cell carcinomas converge on NOTCH signaling.</a> Science. 367, 1264-1269 (2020).</li><li>Leemans, C. R., Snijders, P. J. F., Brakenhoff, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+landscape+of+head+and+neck+cancer.">The molecular landscape of head and neck cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 18, 269-282 (2018).</li><li>Green, A. C., Olsen, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutaneous+squamous+cell+carcinoma:+an+epidemiological+review.">Cutaneous squamous cell carcinoma: an epidemiological review.</a> British Journal of Dermatology. 177, 373-381 (2017).</li><li>Campbell, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pathway+network,+and+immunologic+features+distinguishing+squamous+carcinomas.">pathway network, and immunologic features distinguishing squamous carcinomas.</a> Cell Reports. 23, 194-212 (2018).</li><li>Sanjana, N. E., Shalem, O., Zhang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+vectors+and+genome-wide+libraries+for+CRISPR+screening.">Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening.</a> Nature Methods. 11, 783-784 (2014).</li><li>Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+lentiviral+vector+titration+methods.">Comparison of lentiviral vector titration methods.</a> BMC Biotechnology. 6, 34 (2006).</li><li>Schramek, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+in+vivo+RNAi+screen+unveils+myosin+IIa+as+a+tumor+suppressor+of+squamous+cell+carcinomas.">Direct in vivo RNAi screen unveils myosin IIa as a tumor suppressor of squamous cell carcinomas.</a> Science. 343, 309-313 (2014).</li><li>Platt, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas9+knockin+mice+for+genome+editing+and+cancer+modeling.">CRISPR-Cas9 knockin mice for genome editing and cancer modeling.</a> Cell. 159, 440-455 (2014).</li><li>Langmead, B., Trapnell, C., Pop, M., Salzberg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrafast+and+memory-efficient+alignment+of+short+DNA+sequences+to+the+human+genome.">Ultrafast and memory-efficient alignment of short DNA sequences to the human genome.</a> Genome Biology. 10, 25 (2009).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAGeCK+enables+robust+identification+of+essential+genes+from+genome-scale+CRISPR/Cas9+knockout+screens.">MAGeCK enables robust identification of essential genes from genome-scale CRISPR/Cas9 knockout screens.</a> Genome Biology. 15, 554 (2014).</li><li>Winters, I. P., Murray, C. W., Winslow, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+quantitative+and+multiplexed+in+vivo+functional+cancer+genomics.">Towards quantitative and multiplexed in vivo functional cancer genomics.</a> Nature Reviews Genetics. 19, 741-755 (2018).</li><li>Rogers, Z. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+in+vivo+fitness+landscape+of+lung+adenocarcinoma+tumor+suppression+in+mice.">Mapping the in vivo fitness landscape of lung adenocarcinoma tumor suppression in mice.</a> Nature Genetics. 50, 483-486 (2018).</li><li>Chow, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+direct+in+vivo+CRISPR+screen+identifies+functional+suppressors+in+glioblastoma.">AAV-mediated direct in vivo CRISPR screen identifies functional suppressors in glioblastoma.</a> Nature Neuroscience. 20, 1329-1341 (2017).</li><li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+a+functional+cancer+genome+atlas+of+tumor+suppressors+in+mouse+liver+using+AAV-CRISPR&#8211;mediated+direct+in+vivo+screening.">Mapping a functional cancer genome atlas of tumor suppressors in mouse liver using AAV-CRISPR&#8211;mediated direct in vivo screening.</a> Science Advances. 4, 5508 (2018).</li><li>Chan, K., Tong, A. H. Y., Brown, K. R., Mero, P., Moffat, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pooled+CRISPR-based+genetic+screens+in+mammalian+cells.">Pooled CRISPR-based genetic screens in mammalian cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (151), e59780 (2019).</li><li>Hart, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+CRISPR+screens+reveal+fitness+genes+and+genotype-specific+cancer+liabilities.">High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities.</a> Cell. 163, 1515-1526 (2015).</li></ol>

وقد تم استخدام تحرير الجينوم CRISPR/Cas9 على نطاق واسع في المختبر وفي الدراسات الحية للتحقيق في وظائف الجينات والعمليات الخلوية. معظم الدراسات في الجسم الحي الاستفادة كريسبر / Cas9 الجينات تحرير الخلايا المطعمة في نموذج حيواني (allograft أو xenograft). في حين أن هذا هو أداة قوية لدراسة علم الوراثة السرطان ...

أحد التحديات التي تواجه أبحاث السرطان في حقبة ما بعد الجينوم هو استخراج الكمية الهائلة من بيانات الجينوم للطفرات الجينية السببية وتحديد العقد في شبكة الجينات التي يمكن استهدافها علاجيا. وفي حين ساعدت التحليلات المعلوماتية الحيوية كثيرا على تحقيق هذه الأهداف، فإن إنشاء نماذج فعالة في المختبر وفي الجسم الحي شرط أساسي لفك شفرة تعقيد النظم البيولوجية وحالات الأمراض وتمكين تطوير الأدوية. في حين تم استخدام نماذج الماوس المعدلة وراثيا التقليدية على نطاق واسع في دراسات علم الوراثة سرطان الجسم الحي، وطبيعتها التكلفة والوقت والعمالة الكثيفة حظرت إلى حد كبير التحليل المنهجي لمئات من جينات السرطان المفترضة التي كشفها الجينوم الحديث. للتغلب على هذا الاختناق، قمنا بالجمع بين منهجية حقن الموجات فوق الصوتية1،2 مع CRISPR/Cas9 (متفاوتة بانتظام قصيرة Palindromic يكرر) تكنولوجيا تحرير الجينات3 للحث في وقت واحد ودراسة فقدان وظيفة الطفرات من مئات الجينات في الجلد وتجويف الفم من فأر واحد.
تستخدم المنهجية الموصوفة هنا الحقن الموجهة بالموجات فوق الصوتية للفيروسات العدسية المهندسة في تجويف السلى من أجنة الفئران الحية في اليوم الجنيني E9.5. تنقل الشحنة العدسية التي تحتوي على مكونات CRISPR/Cas9 ectoderm السطحي أحادي الطبقات ، والذي يؤدي لاحقا إلى ظهارة الجلد وتجويف الفم. يتكون الجلد من البشرة الخارجية، يليه غشاء الطابق السفلي والأدمة. البشرة هي ظهارة طبقية تتكون من طبقة داخلية وباسية ، تحافظ على ملامسة غشاء الطابق السفلي ولها قدرة على التكاثر والخلايا الجذعية. الطبقة القاعدية يؤدي إلى طبقات متمايزة أعلاه مثل طبقات القرنية الشوكية والحبيبية وطبقات الطبقة2،4. تظهر دراسات تتبع النسب أن هذه الطريقة المباشرة في vivo CRISPR/Cas9 تتلاعب وراثيا بالخلايا الجذعية المقيمة في الأنسجة داخل الطبقة القاعدية التي تستمر طوال مرحلة البلوغ. كما يمكن titrated lentivirus إلى تحويل ectoderm سطح E9.5 في كثافة كلونال، ويمكن استخدام هذه الطريقة لتوليد الفئران الفسيفساء التي تؤوي الآلاف من الجينات المنفصلة خروج المغلوب استنساخ. ويمكن بعد ذلك الجيل التالي من التسلسل يمكن استخدامها لتحليل تأثير CRISPR / Cas9 بوساطة الاستئصال الجيني داخل تلك المستنسخات بطريقة متعددة5.
استخدمنا مؤخرا هذه الطريقة لتقييم وظيفة 484 الجينات التي تظهر الطفرات المتكررة في سرطان الخلايا الحرشفية الرأس والرقبة البشرية (HNSCC)5. HNSCC هو سرطان مدمر مع ارتفاع معدل الوفيات من 40-50٪ وهو السرطان6 الأكثر شيوعا في جميع أنحاء العالم6. ينشأ HNSCC في بطانات المخاطية في مجرى الهواء العلوي أو تجويف الفم وترتبط باستهلاك التبغ والكحول أو عدوى فيروس الورم الحليمي البشري (HPV). سرطان الخلايا الحرشفية الجلدية (SCC) هي أورام الجلد وتمثل ثاني أكثر أنواع السرطان شيوعا في البشر7. SCC الجلدية وHNSCC هي هي هي نفسها من الناحية النسيجية والجزيئية جدا، مع نسبة عالية من الحالات التي تظهر التغيير في TP53، PIK3CA، NOTCH1، وHRAS8. في حين لا يوجد سوى عدد قليل من الجينات تحور على تردد عال، وهناك مئات الجينات وجدت تحور في التردد المنخفض (< 5٪)، وهي ظاهرة يشار إليها عادة باسم التوزيع ذيل طويل. وبما أن غالبية الجينات ذات الذيل الطويل تفتقر إلى التحقق البيولوجي أو السريري ، استخدمنا هذا في تقنية فحص VIVO CRISPR لنمذجة فقدان وظيفة هذه الجينات في الفئران المعرضة للورم مع طفرات حساسة في p53 أو Pik3ca أو Hras وحددنا العديد من جينات مثبط الورم الجديدة التي تتعاون مع p53 أو Pik3ca أو Hras لتحريك تطور الورم5.
هنا، ونحن نصف بروتوكول مفصل لتوليد متعددة الأضلاع sgRNA lentiviral CRISPR مكتبات SgRNA وأداء CRISPR / Cas9 الجينات خروج المغلوب شاشات في ectoderm سطح الماوس. وتجدر الإشارة إلى أنه يمكن تكييف هذه المنهجية لدمج تقنيات التلاعب الجيني الأخرى مثل تنشيط CRISPR (CRISPRa) و CRISPR تعطيل (CRISPRi) أو تعديلها لاستهداف أنظمة الأعضاء الأخرى في الماوس لدراسة الوظائف الجينية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45 micron filter</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2HVU02RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12k or 92k oligo chip</td>
			<td>Customarray Inc. (Genscript)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 cm cell culture plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293FT</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>R70007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293NT</td>
			<td>Systems Biosciences</td>
			<td>LV900A-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alkaline phosphatase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0290L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1760-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP</td>
			<td>NEB</td>
			<td>9804S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BsmBI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0580L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromic gut suture</td>
			<td>Covidien</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep sequencing (Next-Seq or Hi-Seq)</td>
			<td>Illumina</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA-cleanup kit</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>D4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAesy Blood and Tissue DNA extraction kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endura electrocompetent cells</td>
			<td>Lucigen</td>
			<td>60242-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillaries</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>3-000-203-G/X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Speed Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>MLS-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar</td>
			<td>Wisent Technologies</td>
			<td>800-011-LG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>P97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-prep plasmid Kit</td>
			<td>Frogga Bio</td>
			<td>PDH300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse oxygen anaesthesia system</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II micromanipulator</td>
			<td>Drummond</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBuffer 3.1 (Buffer for BsmBI)</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0580L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle sharpener</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>BV-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligo cleanup kit</td>
			<td>Zymo research</td>
			<td>D4060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAGE purified illumina sequencing primer</td>
			<td>IDT DNA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEI (polyethyleneimine)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>408727-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permoplast modeling clay</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petridish with central opening</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMD2.G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>psPAX2</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q5 Polymerase 2x Master mix</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0494L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit Fluorometric Quantification</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q33327</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semicircular Silicone plug</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone membrane</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0202L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-centrifuge tubes</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>344058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo2000 ultrasound system</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo crispr/cas9 screening to simultaneously evaluate gene function in mouse skin and oral cavity

وقد لعبت نماذج الماوس المعدلة وراثيا دورا أساسيا في تقييم وظيفة الجينات، ونمذجة الأمراض البشرية، والعمل كنموذج قبل السريرية لتقييم السبل العلاجية. ومع ذلك ، فإن طبيعتها كثيفة الوقت والعمالة والتكلفة تحد من فائدتها للتحليل المنهجي لوظيفة الجينات. وتتغلب التطورات الأخيرة في تكنولوجيات تحرير الجينوم على هذه القيود وتسمح بالجيل السريع من الاضطرابات الجينية المحددة مباشرة داخل أجهزة فأرة محددة بطريقة متعددة السرعة. هنا ، نصف طريقة CRISPR / Cas9 المستندة إلى (تكرارات Palindromic القصيرة المتشابكة بانتظام) لتوليد الآلاف من استنساخ الجينات خارج داخل ظهارة الجلد وتجويف الفئران عن طريق الفم ، وتقديم بروتوكول يفصل الخطوات اللازمة لإجراء فحص مباشر في vivo   CRISPR لجينات مثبط الورم. يمكن تطبيق هذا النهج على أجهزة أخرى أو تقنيات CRISPR/Cas9 الأخرى مثل تنشيط CRISPR أو تعطيل CRISPR لدراسة الوظيفة البيولوجية للجينات أثناء التوازن النسيجي أو في بيئات المرض المختلفة.

الشكل 1A يظهر تصميم oligonucleotides لتعدد عدة مكتبات CRISPR مخصصة بطريقة فعالة من حيث التكلفة في رقاقة أوليغو 12k أو 92k واحد. بمجرد اختيار sgRNAs (اللون الأزرق المرمز) ، تم تصميم oligonucleotides مع مواقع تقييد (BsmBI اللون البرتقالي) وأزواج التمهيدي PCR محددة للمكتبة (مرمزة باللون الأخضر). يمكن تصميم ا...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo CRISPR/Cas9 Screening to Simultaneously Evaluate Gene Function in Mouse Skin and Oral Cavity at JoVE.com

In Vivo CRISPR/Cas9 Screening to Simultaneously Evaluate Gene Function in Mouse Skin and Oral Cavity

هنا نصف منهجية فحص سريعة ومباشرة في vivo CRISPR/Cas9 باستخدام الحقن العدسية الجنينية الموجهة بالموجات فوق الصوتية لتقييم وظائف العديد من الجينات في الجلد وتجويف الفم للفئران ذات القدرة المناعية في وقت واحد.

في فحص Vivo CRISPR/Cas9 لتقييم وظيفة الجينات في وقت واحد في جلد الماوس وتجويف الفم

Genetically modified mouse models (GEMM) have been instrumental in assessing gene function, modeling human diseases, and serving as preclinical model to ...

Research

JoVE Journal

Genetics

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

كتل رسم الخرائط و كريسبر / Cas9 تحرير لتحديد الجينات المقاومة للمخدرات في<em&gt; التوكسوبلازما غونديي</em

Scientific knowledge is intrinsically linked to available technologies and methods. This article will present two methods that allowed for the ...

Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells

جيل يعتمد على الاختيار ومستقل من كريسبر / كاس 9 بوساطة جين نوكوتس في خلايا الثدييات

The CRISPR/Cas9 genome engineering system has revolutionized biology by allowing for precise genome editing with little effort. Guided by a single guide ...

Primordial Germ Cell Transplantation for CRISPR/Cas9-based Leapfrogging in Xenopus

Primordial Germ Cell Transplantation for CRISPR/Cas9-based Leapfrogging in Xenopus

زرع الخلايا البدائية كريسبر/Cas9-تعتمد قفزات واسعة في النمو

The creation of mutant lines by genome editing is accelerating genetic analysis in many organisms. CRISPR/Cas9 methods have been adapted for use in the ...

A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells

منهجية موحدة لدراسة المحدثة للطفرات في الموقع كدالة لإصلاح نقطة تحور تحفزها كريسبر/Cas9 وسودن في الخلايا البشرية

Combinatorial gene editing using CRISPR/Cas9 and single-stranded oligonucleotides is an effective strategy for the correction of single-base point ...

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection كريسبر/Cas9 البروتين في أجنة سمك السلور القناة، Ictalurus punctatus، لتحرير الجينات

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

CRISPR/Cas9-mediated Targeted Integration In Vivo Using a Homology-mediated End Joining-based Strategy

CRISPR/Cas9-mediated Targeted Integration In Vivo Using a Homology-mediated End Joining-based Strategy

كريسبر/Cas9-بوساطة التكامل المستهدفة في فيفو استخدام استراتيجية تستند إلى الانضمام إلى التماثل بوساطة نهاية

As a promising genome editing platform, the CRISPR/Cas9 system has great potential for efficient genetic manipulation, especially for targeted integration ...

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

كفاءة الإنتاج وتحديد كريسبر/Cas9-المنشأة الضربة القاضية الجينات في "النظام النموذجي" دانيو rerio

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Highly Efficient Gene Disruption of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9

تعطيل الجينات ذات كفاءة عالية من الخلايا السلف مورين والبشرية المكونة للدم قبل كريسبر/Cas9

Advances in the hematopoietic stem cell (HSCs) field have been aided by methods to genetically engineer primary progenitor cells as well as animal models. ...

CRISPR/Cas9 Gene Editing to Make Conditional Mutants of Human Malaria Parasite P. falciparum

CRISPR/Cas9 Gene Editing to Make Conditional Mutants of Human Malaria Parasite P. falciparum

"جعل طفرات مشروطة طفيل الملاريا البشرية" المنجلية "تحرير الجينات" كريسبر/Cas9

Malaria is a significant cause of morbidity and mortality worldwide. This disease, which primarily affects those living in tropical and subtropical ...

CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein-mediated Precise Gene Editing by Tube Electroporation

CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein بوساطة تحرير الجينات الدقيقة عن طريق أنبوب الكهربائي

Gene editing nucleases, represented by CRISPR-associated protein 9 (Cas9), are becoming mainstream tools in biomedical research. Successful delivery of ...