Name: in vivo crispr/cas9 screening to simultaneously evaluate gene function in mouse skin and oral cavity
Uploaded: 2020-11-02T13:00:00
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Ces travaux ont été appuyés par une subvention de projet de l’Institut canadien de recherche en santé (IRSC 365252), de la Fondation Krembil et de la ronde d’excellence en recherche du Fonds de recherche de l’Ontario 8e ronde (RE08-065). Sampath Kumar Loganathan est récipiendaire d’une bourse de la Société canadienne du cancer (BC-F-16#31919).

Ce protocole a été approuvé et exécuté conformément à l’IACUC de l’Université de Toronto.
1. Conception et clonage de bibliothèques CRISPR en commun
<ol><li>Sélectionnez 4-5 sgARN ciblant les gènes de souris d’intérêt à partir de ressources telles que le concepteur sgRNA broad institute (https://portals.broadinstitute.org/gpp/public/analysis-tools/sgrna-design) ou chopchop serveur (https://chopchop.cbu.uib.no). Sélectionnez un nombre égal d’ARN sgRNA non ciblés à pa...

<ol>
	<li>Beronja, S., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-mediated+gene+function+analysis+in+skin.">RNAi-mediated gene function analysis in skin.</a> Methods in Molecular Biology. 961, 351-361 (2013).</li><li>Beronja, S., Livshits, G., Williams, S., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+functional+dissection+of+genetic+networks+via+tissue-specific+transduction+and+RNAi+in+mouse+embryos.">Rapid functional dissection of genetic networks via tissue-specific transduction and RNAi in mouse embryos.</a> Nature Medicine. 16, 821-827 (2010).</li><li>Shalem, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+screening+in+human+cells.">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells.</a> Science. 343, 84-87 (2014).</li><li>Beronja, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+screens+in+mice+identify+physiological+regulators+of+oncogenic+growth.">RNAi screens in mice identify physiological regulators of oncogenic growth.</a> Nature. 501, 185-190 (2013).</li><li>Loganathan, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rare+driver+mutations+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinomas+converge+on+NOTCH+signaling.">Rare driver mutations in head and neck squamous cell carcinomas converge on NOTCH signaling.</a> Science. 367, 1264-1269 (2020).</li><li>Leemans, C. R., Snijders, P. J. F., Brakenhoff, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+landscape+of+head+and+neck+cancer.">The molecular landscape of head and neck cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 18, 269-282 (2018).</li><li>Green, A. C., Olsen, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutaneous+squamous+cell+carcinoma:+an+epidemiological+review.">Cutaneous squamous cell carcinoma: an epidemiological review.</a> British Journal of Dermatology. 177, 373-381 (2017).</li><li>Campbell, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pathway+network,+and+immunologic+features+distinguishing+squamous+carcinomas.">pathway network, and immunologic features distinguishing squamous carcinomas.</a> Cell Reports. 23, 194-212 (2018).</li><li>Sanjana, N. E., Shalem, O., Zhang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+vectors+and+genome-wide+libraries+for+CRISPR+screening.">Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening.</a> Nature Methods. 11, 783-784 (2014).</li><li>Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+lentiviral+vector+titration+methods.">Comparison of lentiviral vector titration methods.</a> BMC Biotechnology. 6, 34 (2006).</li><li>Schramek, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+in+vivo+RNAi+screen+unveils+myosin+IIa+as+a+tumor+suppressor+of+squamous+cell+carcinomas.">Direct in vivo RNAi screen unveils myosin IIa as a tumor suppressor of squamous cell carcinomas.</a> Science. 343, 309-313 (2014).</li><li>Platt, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas9+knockin+mice+for+genome+editing+and+cancer+modeling.">CRISPR-Cas9 knockin mice for genome editing and cancer modeling.</a> Cell. 159, 440-455 (2014).</li><li>Langmead, B., Trapnell, C., Pop, M., Salzberg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrafast+and+memory-efficient+alignment+of+short+DNA+sequences+to+the+human+genome.">Ultrafast and memory-efficient alignment of short DNA sequences to the human genome.</a> Genome Biology. 10, 25 (2009).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAGeCK+enables+robust+identification+of+essential+genes+from+genome-scale+CRISPR/Cas9+knockout+screens.">MAGeCK enables robust identification of essential genes from genome-scale CRISPR/Cas9 knockout screens.</a> Genome Biology. 15, 554 (2014).</li><li>Winters, I. P., Murray, C. W., Winslow, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+quantitative+and+multiplexed+in+vivo+functional+cancer+genomics.">Towards quantitative and multiplexed in vivo functional cancer genomics.</a> Nature Reviews Genetics. 19, 741-755 (2018).</li><li>Rogers, Z. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+in+vivo+fitness+landscape+of+lung+adenocarcinoma+tumor+suppression+in+mice.">Mapping the in vivo fitness landscape of lung adenocarcinoma tumor suppression in mice.</a> Nature Genetics. 50, 483-486 (2018).</li><li>Chow, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+direct+in+vivo+CRISPR+screen+identifies+functional+suppressors+in+glioblastoma.">AAV-mediated direct in vivo CRISPR screen identifies functional suppressors in glioblastoma.</a> Nature Neuroscience. 20, 1329-1341 (2017).</li><li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+a+functional+cancer+genome+atlas+of+tumor+suppressors+in+mouse+liver+using+AAV-CRISPR&#8211;mediated+direct+in+vivo+screening.">Mapping a functional cancer genome atlas of tumor suppressors in mouse liver using AAV-CRISPR&#8211;mediated direct in vivo screening.</a> Science Advances. 4, 5508 (2018).</li><li>Chan, K., Tong, A. H. Y., Brown, K. R., Mero, P., Moffat, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pooled+CRISPR-based+genetic+screens+in+mammalian+cells.">Pooled CRISPR-based genetic screens in mammalian cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (151), e59780 (2019).</li><li>Hart, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+CRISPR+screens+reveal+fitness+genes+and+genotype-specific+cancer+liabilities.">High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities.</a> Cell. 163, 1515-1526 (2015).</li></ol>

L’édition du génome CRISPR/Cas9 a été largement utilisée dans des études in vitro et in vivo pour étudier les fonctions génétiques et les processus cellulaires. La plupart des études in vivo utilisent des cellules éditées par le gène CRISPR/Cas9 greffées dans un modèle animal (allogreffe ou xénogreffe). Bien qu’il s’agit d’un outil puissant pour étudier la génétique du cancer et les fonctions cellulaires, il manque encore le microenvironnement des tissus indigènes et pourrait provoquer des ble...

L’un des défis de la recherche sur le cancer à l’ère postgénomique est d’extraire la grande quantité de données génomiques pour les mutations génétiques causales et d’identifier les nœuds du réseau génétique qui peuvent être ciblés thérapeutiquement. Alors que les analyses bioinformatiques ont énormément contribué à atteindre ces objectifs, l’établissement de modèles in vitro et in vivo efficaces est une condition préalable pour déchiffrer la complexité des systèmes biologiques et des états de la maladie et pour permettre le développement de médicaments. Alors que les modèles conventionnels de souris transgéniques ont été largement utilisés pour les études génétiques in vivo sur le cancer, leur nature à forte intensité de coût, de temps et de main-d’œuvre a largement interdit l’analyse systématique des centaines de gènes du cancer putatifs démêlés par la génomique moderne. Pour surmonter ce goulot d’étranglement, nous avons combiné une méthodologie d’injection in utero guidée par ultrasonsprécédemment établie 1,2 avec une technologie d’édition de gènes CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)3 pour induire et étudier simultanément des mutations de perte de fonction de centaines de gènes dans la peau et la cavité buccale d’une seule souris.
La méthodologie décrite ici utilise des injections guidées par ultrasons de lentivirus modifiés dans la cavité amniotique des embryons vivants de souris au jour embryonnaire E9.5. La cargaison lentivirale contenant des composants CRISPR/Cas9 transduisent l’ectoderm de surface à une seule couche, ce qui donne plus tard naissance à l’épithélium de la peau et de la cavité buccale. La peau est composée d’un épiderme externe, suivi d’une membrane et d’un derme du sous-sol. Epidermis est un épithélium stratifié composé d’une couche interne basale, qui maintient le contact avec la membrane du sous-sol et a une capacité proliférative et de cellules souches. La couche basale donne lieu aux couches différenciées ci-dessus telles que les couches de cornée épineuses, granulaires et stratiques2,4. Les études de traçage de lignée ment montrent que cette méthode directe in vivo CRISPR/Cas9 manipule génétiquement les cellules souches résidentes des tissus dans la couche basale qui persistent tout au long de l’âge adulte. Comme le lentivirus peut être titré pour transduire l’ectoderme de surface E9.5 à la densité clonale, cette méthode peut être utilisée pour générer des souris mosaïques hébergeant des milliers de clones discrets knock-out gène. Le séquençage de prochaine génération peut ensuite être utilisé pour analyser l’effet de l’ablation des gènes crispr/cas9 dans ces clones d’une manière multiplexée5.
Nous avons récemment utilisé cette méthode pour évaluer la fonction de 484 gènes qui montrent des mutations récurrentes dans le carcinome épilemous de tête et de cou humain (HNSCC)5. HNSCC est un cancer dévastateur avec un taux de mortalité élevé de 40-50% et il estle 6ème cancer le plus commun dansle monde entier 6. Le HNSCC se présente dans les muqueux des voies respiratoires supérieures ou de la cavité buccale et est associé à la consommation de tabac et d’alcool ou à l’infection par le virus du papillome humain (VPH). Le carcinome cutané de cellules squamous (CSC) sont des tumeurs de peau et représentent le deuxième cancer le plus commun chez l’homme7. Le CSC cutané et le HNSCC sont histologiquement et moléculairement très semblables, avec un pourcentage élevé de cas présentant l’altération dans TP53, PIK3CA, NOTCH1, et HRAS8. Bien qu’il n’y ait qu’une poignée de gènes mutés à haute fréquence, il existe des centaines de gènes trouvés mutés à basse fréquence (et 5 %), un phénomène communément appelé la distribution à longue queue. Comme la majorité des gènes à longue queue n’ont pas de validation biologique ou clinique, nous avons utilisé cette technologie de dépistage IN vivo CRISPR pour modéliser la perte de fonction de ces gènes chez les souris sujettes aux tumeurs avec des mutations sensibilisantes dans p53, Pik3ca ou Hras et identifié plusieurs nouveaux gènes suppresseurs de tumeur qui coopèrent avec p53, Pik3ca ou Hras pour déclencher le développementtumoral 5.
Ici, nous décrivons un protocole détaillé pour générer des bibliothèques de sgRNA lentiviral CRISPR sgRNA multiplexed et effectuer crispr/cas9 gène knock-out écrans dans l’ectoderm surface de la souris. Il convient de noter que cette méthodologie peut être adaptée pour intégrer d’autres technologies de manipulation génétique telles que l’activation CRISPR (CRISPRa) et l’inactivation CRISPR (CRISPRi) ou modifiée pour cibler d’autres systèmes organiques chez la souris pour étudier les fonctions génétiques.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45 micron filter</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2HVU02RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12k or 92k oligo chip</td>
			<td>Customarray Inc. (Genscript)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 cm cell culture plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293FT</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>R70007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293NT</td>
			<td>Systems Biosciences</td>
			<td>LV900A-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alkaline phosphatase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0290L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1760-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP</td>
			<td>NEB</td>
			<td>9804S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BsmBI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0580L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromic gut suture</td>
			<td>Covidien</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep sequencing (Next-Seq or Hi-Seq)</td>
			<td>Illumina</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA-cleanup kit</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>D4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAesy Blood and Tissue DNA extraction kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endura electrocompetent cells</td>
			<td>Lucigen</td>
			<td>60242-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillaries</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>3-000-203-G/X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Speed Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>MLS-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar</td>
			<td>Wisent Technologies</td>
			<td>800-011-LG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>P97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-prep plasmid Kit</td>
			<td>Frogga Bio</td>
			<td>PDH300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse oxygen anaesthesia system</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II micromanipulator</td>
			<td>Drummond</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBuffer 3.1 (Buffer for BsmBI)</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0580L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle sharpener</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>BV-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligo cleanup kit</td>
			<td>Zymo research</td>
			<td>D4060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAGE purified illumina sequencing primer</td>
			<td>IDT DNA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEI (polyethyleneimine)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>408727-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permoplast modeling clay</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petridish with central opening</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMD2.G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>psPAX2</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q5 Polymerase 2x Master mix</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0494L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit Fluorometric Quantification</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q33327</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semicircular Silicone plug</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone membrane</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0202L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-centrifuge tubes</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>344058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo2000 ultrasound system</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo crispr/cas9 screening to simultaneously evaluate gene function in mouse skin and oral cavity

Les modèles de souris génétiquement modifiés (GEMM) ont joué un rôle déterminant dans l’évaluation de la fonction génétique, la modélisation des maladies humaines et le modèle préclinique d’évaluation des avenues thérapeutiques. Cependant, leur nature de temps, de travail et de coût-intensive limite leur utilité pour l’analyse systématique de la fonction de gène. Les progrès récents des technologies d’édition du génome surmontent ces limitations et permettent la génération rapide de perturbations génétiques spécifiques directement dans des organes de souris spécifiques d’une manière multiplexée et rapide. Ici, nous décrivons une méthode basée sur CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) pour générer des milliers de clones knock-out génétiques dans l’épithélium de la peau et de la cavité buccale des souris, et fournir un protocole détaillant les étapes nécessaires pour effectuer un écran CRISPR in vivo direct   pour les gènes suppresseurs de tumeurs. Cette approche peut être appliquée à d’autres organes ou à d’autres technologies CRISPR/Cas9 telles que CRISPR-activation ou CRISPR-inactivation pour étudier la fonction biologique des gènes pendant l’homéostasie tissulaire ou dans divers contextes de maladies.

La figure 1A montre la conception des oligonucléotides pour le multiplexage de plusieurs bibliothèques CRISPR personnalisées d’une manière rentable d’une seule puce oligo de 12 ou 92 k. Une fois que les sgARN (code couleur bleue) sont sélectionnés, les oligonucléotides sont conçus avec des sites de restriction (BsmBI de couleur orange) et des paires d’amorce PCR spécifiques à la bibliothèque (couleur verte codée). Plusieurs bibliothèques peuvent être conçues en utilisant...

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In Vivo CRISPR/Cas9 Screening to Simultaneously Evaluate Gene Function in Mouse Skin and Oral Cavity

Ici nous décrivons une méthodologie rapide et directe de criblage d’in vivo CRISPR/Cas9 utilisant des injections lentiviral embryonnaires ultrason-guidées dans utero pour évaluer simultanément des fonctions de plusieurs gènes dans la peau et la cavité buccale des souris immunocompétentes.

Dépistage in Vivo CRISPR/Cas9 pour évaluer simultanément la fonction génétique dans la peau de la souris et la cavité buccale

Genetically modified mouse models (GEMM) have been instrumental in assessing gene function, modeling human diseases, and serving as preclinical model to ...

Research

JoVE Journal

Genetics

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

Mapping QTL et édition CRISPR / Cas9 pour identifier un gène de résistance aux médicaments<em&gt; Toxoplasma gondii</em

Scientific knowledge is intrinsically linked to available technologies and methods. This article will present two methods that allowed for the ...

Recherche

Génétique

Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells

Génération indépendante et dépendante de la sélection de CRISPR / Cas9-Meded Knockouts dans les cellules de mammifères

The CRISPR/Cas9 genome engineering system has revolutionized biology by allowing for precise genome editing with little effort. Guided by a single guide ...

Primordial Germ Cell Transplantation for CRISPR/Cas9-based Leapfrogging in Xenopus

Primordial Germ Cell Transplantation for CRISPR/Cas9-based Leapfrogging in Xenopus

Transplantation de cellules germinales primordiales pour base CRISPR/Cas9 saute-mouton chez Xenopus

The creation of mutant lines by genome editing is accelerating genetic analysis in many organisms. CRISPR/Cas9 methods have been adapted for use in the ...

A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells

Une méthode Standard pour examiner la mutagénicité sur place en fonction de la Mutation ponctuelle de réparation catalysée par CRISPR/Cas9 et SsODN dans les cellules humaines

Combinatorial gene editing using CRISPR/Cas9 and single-stranded oligonucleotides is an effective strategy for the correction of single-base point ...

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection de protéine CRISPR/Cas9 dans des embryons de barbue de rivière, Ictalurus punctatus, pour Gene Editing

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

CRISPR/Cas9-mediated Targeted Integration In Vivo Using a Homology-mediated End Joining-based Strategy

CRISPR/Cas9-mediated Targeted Integration In Vivo Using a Homology-mediated End Joining-based Strategy

CRISPR/Cas9-médiation ciblée Integration In Vivo en utilisant une stratégie de base rejoindre fin médiée par homologie

As a promising genome editing platform, the CRISPR/Cas9 system has great potential for efficient genetic manipulation, especially for targeted integration ...

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Une Production efficace et généré par l’Identification de CRISPR/Cas9 les débouchures de gène dans le modèle système Danio rerio

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Highly Efficient Gene Disruption of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9

Perturbation de gène hautement efficace des cellules progénitrices hématopoïétiques murins et humains par CRISPR/Cas9

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CRISPR/Cas9 Gene Editing to Make Conditional Mutants of Human Malaria Parasite P. falciparum

CRISPR/Cas9 Gene Editing to Make Conditional Mutants of Human Malaria Parasite P. falciparum

CRISPR/Cas9 gène édition à faire conditionnel Mutants de Human Parasite du paludisme à P. falciparum

Malaria is a significant cause of morbidity and mortality worldwide. This disease, which primarily affects those living in tropical and subtropical ...

CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein-mediated Precise Gene Editing by Tube Electroporation

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