Name: incremental temperature changes for maximal breeding and spawning in astyanax mexicanus
Uploaded: 2021-02-14T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus at JoVE.com

نشكر ديفيد مارتاسيان، ديدري هيسر، إيمي باركهورست، كريغ فوت، وماندي نغ على المساهمات القيمة في مختبر جيفري A. mexicanus مرفق الثقافة. ويدعم البحث في مختبر جيفري حاليا من قبل المعاهد القومية للصحة منحة EY024941.

وقد تمت الموافقة على هذا الإجراء من قبل المبادئ التوجيهية المؤسسية لرعاية الحيوان من جامعة ميريلاند، كوليدج بارك (حاليا IACUC 469 #R-NOV-18-59؛ المشروع 1241065-1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61708/61708fig1.jpg"> الشكل 1 - الأرقام 1- الأرقام 1 التقويمات خلال أسبوع التكاث...

<ol>
	<li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavefish+as+a+model+system+in+evolutionary+developmental+biology.">Cavefish as a model system in evolutionary developmental biology.</a> Developmental Biology. 231, 1-12 (2001).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+model+systems+in+evo-devo:+cavefish+and+mechanisms+of+microevolution.">Emerging model systems in evo-devo: cavefish and mechanisms of microevolution.</a> Evolution &amp; Development. 10, 265-272 (2008).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+development+in+the+cavefish+Astyanax.">Evolution and development in the cavefish Astyanax.</a> Current Topics in Developmental Biology. 86, 191-221 (2009).</li><li>Protas, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cavefish+reveals+molecular+convergence+in+the+evolution+of+albinism.">Genetic analysis of cavefish reveals molecular convergence in the evolution of albinism.</a> Nature Genetics. 38, 107-111 (2006).</li><li>Protas, M., Conrad, M., Gross, J. B., Tabin, C. J., Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regressive+evolution+in+the+Mexican+cave+tetra,+Astyanax+mexicanus.">Regressive evolution in the Mexican cave tetra, Astyanax mexicanus.</a> Current Biology. 17, 452-454 (2007).</li><li>O'Quin, K. E., Yoshizawa, M., Doshi, P., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+genetic+analysis+of+retinal+degeneration+in+the+blind+cavefish.">Quantitative genetic analysis of retinal degeneration in the blind cavefish.</a> PLoS ONE. 8 (2), 57281 (2013).</li><li>Yoshizawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+genetic+architecture+underlies+the+emergence+of+sleep+loss+and+prey-seeking+behavior+in+the+Mexican+cavefish.">Distinct genetic architecture underlies the emergence of sleep loss and prey-seeking behavior in the Mexican cavefish.</a> BMC Biology. 13, 15 (2015).</li><li>Elliot, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Astyanax+caves+of+Mexico.+Cavefishes+of+Tamaulipas,+San+Luis+Potosi,+and+Guerrero.">The Astyanax caves of Mexico. Cavefishes of Tamaulipas, San Luis Potosi, and Guerrero.</a> Association for Mexican Cave Studies Bulletin. 26, 1 (2018).</li><li>Luo, S., Wu, B., Xiong, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+total+hardness+and+calcium:magnesium+ratio+of+water+during+early+stages+of+rare+minnows+(Gobiocypris+rarus).">Effects of total hardness and calcium:magnesium ratio of water during early stages of rare minnows (Gobiocypris rarus).</a> Comparative Medicine. 66, 181-187 (2016).</li><li>Balasch, J. C., Tort, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netting+the+stress+responses+in+fish.">Netting the stress responses in fish.</a> Frontiers in Endocrinology. 10, 62 (2019).</li><li>Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Determining the sex of adult Astyanax mexicanus. , (2008).</li><li>Paschos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+clocks,+feeding+time,+and+metabolic+homeostasis.">Circadian clocks, feeding time, and metabolic homeostasis.</a> Frontiers in Pharmacology. 6, 112 (2015).</li><li>Scheiermann, C., Kunisaki, Y., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+control+of+the+immune+system.">Circadian control of the immune system.</a> Nature Reviews Immunology. 13, 190-198 (2013).</li><li>Williams, M. B., Watts, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+basis+and+future+directions+of+zebrafish+nutrigenomics.">Current basis and future directions of zebrafish nutrigenomics.</a> Genes &amp; Nutrition. 14, 34 (2009).</li><li>Harper, C., Wolf, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+effects+of+the+stress+response+in+fish.">Morphologic effects of the stress response in fish.</a> ILAR Journal. 50, 387-396 (2009).</li><li>Neubauer, P., Andersen, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+performance+in+fish+is+explained+by+an+interplay+between+physiology,+behavior+and+ecology.">Thermal performance in fish is explained by an interplay between physiology, behavior and ecology.</a> Conservation Physiology. 7 (1), 025 (2019).</li><li>Hinaux, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+staging+table+for+Astyanax+mexicanus.">Developmental staging table for Astyanax mexicanus.</a> Zebrafish. 8 (4), (2011).</li><li>Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> In vitro fertilization of Astyanax mexicanus. , (2008).</li><li>Simon, V., Hyacinthe, C., R&#233;taux, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+behavior+in+the+blind+Mexican+cavefish+and+its+river-dwelling+conspecific.">Breeding behavior in the blind Mexican cavefish and its river-dwelling conspecific.</a> PLoS One. 14 (2), 0212591 (2019).</li><li>Harvey, B. J., Carolsfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Breeding+in+Tropical+Fish+Culture.">Induced Breeding in Tropical Fish Culture.</a> International Development Research Centre. , (1993).</li><li>Ma, L., Parkhurst, A., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+a+lens+survival+pathway+including+sox2+and+aA-crystallin+in+the+evolution+of+cavefish+eye+degeneration.">The role of a lens survival pathway including sox2 and aA-crystallin in the evolution of cavefish eye degeneration.</a> EvoDevo. 5, 28 (2014).</li><li>Krishnan, J., Rohner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavefish+and+the+basis+for+eye+loss.">Cavefish and the basis for eye loss.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 5 (372), 20150487 (2017).</li><li>Biland&#382;ija, H., Abraham, L., Ma, L., Renner, K., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+changes+controlled+by+catecholaminergic+systems+explain+recurrent+loss+of+pigmentation+in+cavefish.">Behavioral changes controlled by catecholaminergic systems explain recurrent loss of pigmentation in cavefish.</a> Proceedings of the Royal Society. 285, (2018).</li><li>Ma, L., Jeffery, W. R., Essner, J. J., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+editing+using+TALENs+in+blind+Mexican+cavefish.">Genome editing using TALENs in blind Mexican cavefish.</a> PLoS ONE. 1093, 0119370 (2015).</li><li>Klaassen, H., Wang, Y., Adamski, K., Rohner, N., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+mutagenesis+confirms+the+role+of+oca2+in+melanin+pigmentation+in+Astyanax+mexicanus.">CRISPR mutagenesis confirms the role of oca2 in melanin pigmentation in Astyanax mexicanus.</a> Developmental Biology. 441, 313-318 (2018).</li></ol>

Astyanax mexicanus هو نموذج بيولوجي جديد يولد بشكل متكرر ويمكن تربيته بسهولة في المختبر1،2. ولأننا مهتمون بالآليات التنموية التي تكمن وراء التغيرات التطورية في أسماك كهف أ. المكسيكية، فإن إنتاج واستخدام الأجنة أمر حيوي لأهدافنا البحثية. والغرض الرئيسي من ...

وteleost Astyanax mexicanus لديه العينين سطح المسكن (سطح السمك) شكل والعديد من مختلف أعمى كهف المسكن (كهف الأسماك) أشكال1،2. تطورت أسماك الكهوف في ظلام دائم وتحت قيود الغذاء ، مما أدى إلى ظهور سمات بناءة وتراجعية جديدة3. وتشمل الصفات البناءة زيادات في براعم الذوق وحجم الفك، والأعضاء الحسية للخط الجانبي، واحتياطيات الدهون. وتشمل الصفات التراجعية فقدان أو الحد من تصبغ الميلانين، والعينين، والسلوكيات، مثل النوم، والتعليم، والعدوان. سمة من سمات نظام Astyanax هي الخصوبة الكاملة بين الشكلين ، مما يسمح باستخدام رسم خرائط سمة كمية لتحديد المنطقة الجينومية المرتبطة بالتطور البناء والتراجعي4و5و6و7. A. mexicanus يقدم نظاما مفيدا لدراسة التنمية لأنه يمكن حث على تفريخ في كثير من الأحيان في المختبر. أجنة A. mexicanus شفافة ، أكبر قليلا من تلك التي من حمار وحشي ، تنتج بكميات كبيرة ، وتتطور إلى البالغين الناضجين جنسيا في حوالي 8-12 شهرا. فترة طاقة التفريخ القصوى حوالي 5 سنوات. يصف هذا البروتوكول سير العمل المطلوب في منشأة زراعة مكسيكية خلال أسبوع تربية نموذجي ويتضمن تفاصيل صيانة نظام الأسماك ونظام التحكم في درجة الحرارة للتفريخ الأقصى.
أ. المكسيكية هي سمكة استوائية تعيش في الأنهار التي تنشأ في الهضاب الجيرية (الأسماك السطحية) وفي برك في كهوف الحجر الجيري (أسماك الكهوف)8. يذوب الحجر الجيري لإنتاج المياه الصلبة، و A. mexicanus يزدهر في الماء الصلب. الأسماك تتكيف مع ظروف المياه الصلبة يمكن أن تتسامح مع مجموعة من الظروف المالحة، ولكن تولد عموما في تلك محددة9. يتم تحقيق تحريض سلوك التفريخ من خلال مجموعة من العوامل. لأن الأسماك بدم بارد وتعتمد على بيئتها للحفاظ على التوازن، والتمثيل الغذائي لها حساسة للتغيرات البيئية وأنها تتفاعل بسرعة أكبرللضغوطات 10. A. يجب أن تكون مثقفة المكسيكي في النظم المائية في ظل ظروف منظمة بعناية من تدفق المياه، درجة الحموضة، الموصلية، الضغط التناضحي، والإضاءة، ودرجات حرارة المياه.
في مختبر جيفري، يتم الحفاظ على الأسماك في نظامين للمياه الجارية: (1) "نظام الطفل" للأسماك البالغة الصغيرة قبل النضج الجنسي و (2) نظام الكبار (أو الرئيسي) للبالغين الناضجين جنسيا. ويتكون "نظام الأطفال" من خزانات 8 لتر و 15 لتر مزودة بالمياه الجارية. يتم زرع "نظام الطفل" عن طريق الزريعة والأحداث الشباب المتحولين الذين يزرعون من اليرقات في خزانات أصغر (1-10 لتر) ، حيث يتم تبادل المياه أسبوعيا. تعتمد اليرقات والقلي والأحداث بشكل كبير على الطعام ويجب إطعامهم طعاما حيا (جمبري ملحي) مرة واحدة في اليوم لضمان معدل عال من البقاء على قيد الحياة. ويوضع الأحداث الصغار من "نظام الأطفال" في نظام البالغين بعد حوالي سنة إلى 1.5 سنة. في البداية ، يتم إطعامهم رقائق رباعية المسحوق ، وبعد مزيد من النمو يتم نقلهم إلى نظام تغذية البالغين العادي. ويمكن تقييم النضج الجنسي من خلال حجم البطن في الإناث، وقد وصفت أساليب لتحديد الجنس11. في نظام البالغين، يتم تبادل المياه تلقائيا في 42 خزان لتر 3 مرات لكل 24 ساعة. يتم مراقبة نظام البالغين يوميا من خلال الفحص البصري ودرجة الحرارة التلقائية ودرجة الحموضة وقراءات التوصيلية من المسابير. درجة الحموضة المثلى حوالي 7.4 ويمكن أن تتراوح بين 6.8-7.5، ودرجة الحرارة الأساسية للنظام هو 72/73 درجة فهرنهايت، والموصلية المثالية تتراوح بين 600-800 متر. يتم إجراء فحوصات مستقلة على جودة المياه أسبوعيا من خلال اختبار درجة الحرارة وقياس معايير جودة المياه لhh والأمونيا والنترات باستخدام اختبار colorimetric. يتم الاحتفاظ مستويات الأمونيا والنترات عند أو بالقرب من الصفر بإضافة البكتيريا المفيدة (مثل، دورة نوتافين) إلى النظام. يتم التحكم في إضاءة الغرفة بواسطة مؤقت يتم ضبطه على فترات ضوئية مدتها 14 ساعة و10 ساعات مظلمة. بالإضافة إلى معايير جودة المياه الشاملة المذكورة أعلاه، فإن الاعتبارات التالية تحتاج إلى اهتمام خاص خلال أسبوع التربية.
الاعتبار الأول هو photoperiod ، والأسماك (حتى الأسماك كهف في المختبر) تعتمد على دورات الضوء لضبط الساعة circadian بهم. يمكن أن تؤثر الإيقاعات الإيقاعية على كل شيء من التربية والتغذية إلى صحة الجهاز المناعي12و13 ويجب أن تكون متسقة لتحقيق أقصى قدر من الفوائد الصحية. يتم الحفاظ على الأسماك في نظام المياه الجارية على ضوء 14 ساعة و 10 ساعة ضوئية داكنة. تبدأ الأسماك السطحية بشكل عام في التفريخ بعد ساعة من سواد النظام ، ويمكن للضوء الذي تم إدخاله خلال هذه الفترة أن يتداخل مع التفريخ وينهيه. تفريخ أسماك الكهوف العمياء أقل إزعاجا من الضوء. وبالمقارنة مع تفريخ الأسماك السطحية، يتأخر تفريخ أسماك الكهوف، وعادة ما يبدأ بعد أربع إلى خمس ساعات من سواد النظام.
والاعتبار الثاني هو التغذية. وعادة ما تتغذى الأسماك البالغة اتباع نظام غذائي من رقائق رباعية مرة واحدة في اليوم. قبل التفريخ، يتم تغذية الأسماك بنظام غذائي غني بالبروتين تكمله كميات إضافية من رقائق رباعية وغيرها من المواد الغذائية: رقائق صفار البيض والديدان السوداء كاليفورنيا الذين يعيشون في بعض الأحيان(Lumbriculus variegatus)للتعويض عن فقدان البروتين بسبب إنتاج البيض خلال دورة التفريخ السابقة. خلال أسبوع التربية، يتم تغذية الأسماك مرتين في اليوم، مرة في الصباح ومرة أخرى في فترة ما بعد الظهر / المساء. وينبغي تجنب تغذية الأسماك مرة واحدة فقط في اليوم ولكن مع جزء واحد كبير جدا من الغذاء، لأن هذا يمكن أن يسبب سوء التغذية14.
الاعتبار الثالث هو الفضاء. وتستند متطلبات الفضاء على متوسط كتلة الجسم من الكبار، فضلا عن الاعتبارات السلوكية، مثل ما إذا كان الأسماك لديها سلوك التعليم أو السلوك العدواني. يمكن أن تؤدي الدبابات المفرطة أو الناقصة إلى زيادة العدوان والإجهاد المستمر ، مما يجعل الأسماك عرضة للإصابة من زملائها في الدبابات ومترددة في المشاركة في تفريخ15. نحن عادة منزل 10-20 الأسماك لكل خزان 42 لتر.
النظر الرابع هو درجة الحرارة. كما ذكر أعلاه، الأسماك بدم بارد وتعتمد على البيئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم. لأن درجة الحرارة لها تأثير مباشر على عمليات التمثيل الغذائي، يمكن أن تؤدي التغيرات في درجة الحرارة إلى تغييرات سلوكية في الأسماك16. يتكون برنامج التربية هذا من دورات لمدة أسبوعين في درجة الحرارة: الأسبوع الأول يدخل ارتفاع درجة الحرارة إلى 78 درجة فهرنهايت ، ويحافظ الأسبوع التالي على درجة حرارة ثابتة تبلغ 72 درجة فهرنهايت. خلال الأسبوع الأول (التربية) ، يتم وضع شبكات التربية ذات الحواف البلاستيكية في الجزء السفلي من الخزانات كل مساء. وتستخدم شباك التربية كحاجز بين الأسماك الموجودة في الخزانات والبيض المفرخ، الذي كان سيستهلك لولا ذلك. يتم رفع درجة الحرارة بمقدار درجتين فهرنهايت في اليوم إلى 78 درجة فهرنهايت كحد أقصى بحلول منتصف الأسبوع ، ويتم تحريض التفريخ وفقا لدورة الضوء في أول 2-3 أمسيات من هذا الأسبوع. ثم يتم تخفيض درجة الحرارة بمقدار درجتين فهرنهايت إلى 72 درجة فهرنهايت خلال الأيام المتبقية من الأسبوع، ويتم الحفاظ على درجة الحرارة الأساسية حتى بداية أسبوع التكاثر التالي. وعادة ما يتم تحفيز تربية ما لا يزيد عن مرتين في الشهر للسماح للأسماك الوقت لاسترداد.
وعموما، تسمح هذه الطريقة بتكاثر كميات كبيرة من الأجنة عالية الجودة على مدى فترة زمنية أطول.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:874px;" width="875">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Blackworms</td>
			<td style="width:299px;">Eastern Aquatics, Lancaster, PA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Breeding Nets</td>
			<td style="width:299px;">Custom made</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Brine shrimp eggs</td>
			<td style="width:299px;">AquaCave Lake Forest, IL.</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Colorimetric test kit</td>
			<td style="width:299px;">Petco</td>
			<td style="width:161px;">SKU:11916</td>
			<td>API Freshwater pH Test Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Egg yolk flakes</td>
			<td style="width:299px;">Pentair, Minneapolis, MN</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Fingerbowls</td>
			<td style="width:299px;">Carolina Biological Supply</td>
			<td align="right" style="width:161px;">741004</td>
			<td>Culture dishes, 4.5 in, 250 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Hand held nets</td>
			<td style="width:299px;">Any Pet Store</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Incubator for embryos</td>
			<td style="width:299px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:161px;">51-029-321HPM</td>
			<td>405 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Instant Ocean sea salts</td>
			<td style="width:299px;">Spectrum Brands, Blacksburg, VA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Methylene Blue</td>
			<td style="width:299px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td style="width:161px;">M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Pasteur Pipettes</td>
			<td style="width:299px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:161px;">13-678-20</td>
			<td>5.75 in.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Net soaking solution</td>
			<td style="width:299px;">Any Pet Store</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Nutrafin Cycle</td>
			<td style="width:299px;">Amazon</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td>Bacterial boost</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Refrigerator for live feed</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Thermometer</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Tetra Tropical Crisps</td>
			<td style="width:299px;">Spectrum Brands, Blacksburg, VA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

incremental temperature changes for maximal breeding and spawning in astyanax mexicanus

رباعية المكسيكية, Astyanax mexicanus, هو نظام نموذج الناشئة للدراسات في التنمية والتطور. وجود سطح العينين (الأسماك السطحية) وكهف أعمى (أسماك الكهوف) يتحول في هذا النوع يمثل فرصة لاستجواب الآليات الكامنة وراء التطور المورفولوجي والسلوكي. وقد تطورت أسماك الكهوف سمات بناءة وتراجعية جديدة. وتشمل التغييرات البناءة زيادات في براعم الذوق والفكين، والأعضاء الحسية الجانبية الخط، والدهون في الجسم. وتشمل التغييرات التراجعية فقدان العينين أو تقليلها. تصبغ الميلانين، والسلوك المدرسي، والعدوان، والنوم. لاستجواب هذه التغييرات تجريبيا، من المهم الحصول على أعداد كبيرة من الأجنة التي ولدت. منذ أن تم جمع الأسماك السطحية الأصلية A. mexicanus وأسماك الكهوف في تكساس والمكسيك في التسعينيات ، تم تحفيز أحفادهم بشكل روتيني على تربية وتفريخ أعداد كبيرة من الأجنة كل شهرين في مختبر جيفري. على الرغم من أن يتم التحكم في التربية من خلال وفرة الغذاء والجودة، ودورات ضوء الظلام، ودرجة الحرارة، وجدنا أن التغيرات في درجة الحرارة الإضافية تلعب دورا رئيسيا في تحفيز التفريخ القصوى. وتوفر الزيادة التدريجية في درجة الحرارة من 72 درجة فهرنهايت إلى 78 درجة فهرنهايت في الأيام الثلاثة الأولى من أسبوع التكاثر يومين إلى ثلاثة أيام تفريخ متتالية مع أعداد قصوى من الأجنة عالية الجودة، ثم يتبع ذلك انخفاض تدريجي في درجة الحرارة من 78 درجة فهرنهايت إلى 72 درجة فهرنهايت خلال الأيام الثلاثة الأخيرة من أسبوع التفريخ. الإجراءات المبينة في هذا الفيديو تحدد سير العمل قبل وأثناء أسبوع تربية المختبر لدرجة الحرارة الإضافية حفز تفريخ.

نحن عموما تولد وتفرخ أحفاد الأسماك السطحية التي تم جمعها أصلا في Nacimiento ديل ريو تشوي في سان لويس بوتوسي، المكسيك (أسماك سطح ريو تشوي) وسان سولومون سبرينغز في حديقة ولاية بالمورهيا، تكساس (أسماك سطح تكساس) وأسماك الكهوف المستمدة من كويفا دي إل باشون (أسماك كهف باشون) في تاماوليباس، المكسيك، و...

Watch this Scientific Journal Video about Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus at JoVE.com

Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus

تحدد هذه المقالة الشروط المختبرية الأساسية والبروتوكولات لنظام درجة الحرارة التدريجي لتحفيز التفريخ الأقصى في رباعية Astyanax المكسيكيةالمكسيكية ، وهو نموذج ناشئ للدراسات التنموية والتطورية.

تغييرات درجة الحرارة الإضافية لتكاثر القصوى والتفريخ في أستياناكس المكسيكي

The Mexican tetra, Astyanax mexicanus, is an emerging model system for studies in development and evolution. The existence of eyed surface (surface fish) ...

لذا بما أن (أستياناكس مكسيكاس) سمكة صغيرة وهي أصلية في شمال شرق المكسيك وجنوب تكساس. الشيء المهم في ذلك هو أنه موجود في شكلين.شكل واحد هو سمكة مسكنة سطحية لها عيون كبيرة وتصبغ ، والشكل الآخر هو سمكة تعيش في كهف فقدت عينيها وفقدت تصبغها. ما زالوا قادرين على التفريخ، والتهجين مع بعضهم البعض، بحيث يمكن استخدامها في تحليل وراثي إلى الأمام لدراسة علم الوراثة والتنمية. كما أن لديها أجنة كبيرة شفافة، ويمكن استخدامها لدراسة البيولوجيا التنموية المقارنة.لذلك تم استخدامها لسنوات عديدة حتى الآن كنظام لفهم تطور التنمية. قبل عدة أيام من الرغبة في التفريخ ، نبدأ في إطعام الأسماك بشكل أفضل. كما نقوم بزيادة درجة الحرارة بشكل تدريجي بحيث أنه في غضون الوقت الذي نريدها أن تفرخ فيه ، ستخضع بعد ذلك لحوالي يومين أو ثلاثة أيام من التفريخ المفرط ، مما ينتج أعدادا كبيرة من الأجنة المخصبة التي تتطور بشكل جيد وخلال مراحل اليرقات للبالغين.بعد إطعام الأسماك في الساعة 10:00 صباحا.m مع قليل من رقائق تترا، تحقق من الحاضنة التي سيتم استخدامها لإيواء أوعية الأصابع من الأجنة النامية وتغيير الماء إذا لزم الأمر. تحقق من مستوى المياه في جميع الخزانات وأضف مياه النظام إلى أي خزانات منخفضة.ثم تعيين الحاضنة إلى 23 درجة مئوية على الأقل 30 دقيقة بعد التغذية الأولى، وإطعام الأسماك في خزانات التربية مع قليل من رقائق صفار البيض، ومجموعات دودة سوداء كافية للسماح لكل سمكة في الخزان تستهلك حوالي خمس إلى 10 ديدان أو كليهما. بعد ساعة واحدة على الأقل من التغذية الثانية، فرك خزانات التربية حسب الضرورة وإعداد شبكات التربية بعناية دون التدخل في إمدادات الهواء دبابة. في صباح اليوم التالي، قم بإزالة شباك التربية من قيعان خزانات نظام البالغين بين الساعة 9:00 و10:00 صباحا.m.واستخدام خرطوم تعلق على لشطف بلطف الأجنة في شبكة المحمولة. عكس الشبكة في وعاء إصبع من مياه النظام النظيف ونقل حوالي 100 جنين لكل وعاء إصبع إلى 200 ملليلتر من مياه النظام النظيفة تكملها 0.00003٪ الميثيلين الأزرق. مرحلة الأجنة تحت المجهر الخفيف لتقدير وقت الإخصاب وفقا للجدول الزمني للتنمية A-mexicanas.بعد الانطلاق، ضع أوعية الإصبع في حاضنة لمدة خمسة إلى سبعة أيام وأطعم الثقافات بالروبيان المالح الحي. لكل دبابة أسقطت الأجنة، سجل التاريخ ورقم الخزان وسجل عدد ونوعية الأجنة التي تم إسقاطها. سجل متوسط وقت التفريخ وفقا لجدول التدريج وسجل درجة حرارة النظام في الوقت الذي ولدت فيه الأسماك.مراقبة أوعية أصابع الأجنة على مدار اليوم، باستخدام ماصة المراعي لإزالة أي أجنة وحطام ميت أو مشوه، مثل الطعام أو البراز غير المأكول، وتغيير الماء الأزرق عند الضرورة. في الساعة 1:00 بعد الظهر.m تغذية الأسماك في خزانات التربية كما هو موضح وتعيين درجة حرارة المياه إلى 24 درجة مئوية.ثم إزالة أي فائض من المواد الغذائية والحطام من الخزانات وفرك الخزانات قبل إعادة تعيين الشباك. في يومي الأربعاء والخميس، كرر جمع الأجنة وتقييمها كما هو موضح ليوم الثلاثاء. إطعام الأسماك وتعيين المياه إلى درجة الحرارة المناسبة.تحقق من الأجنة في الحاضنة واستبدل ماء وعاء الإصبع بماء النظام المعالج الأزرق الميثيلين الطازج. ثم تنظيف خزانات التربية حسب الحاجة وإعادة تعيين الشباك. يوم الجمعة، بعد إطعام الأسماك، تعيين درجة حرارة المياه إلى 23 درجة مئوية والتحقق من الأجنة في الحاضنة.يومي السبت والأحد، إطعام الأسماك. في هذا الرقم، تظهر بيانات التربية من يوليو 2017 حتى مارس 2020 لأسماك ريو تشوي وتكساس السطحية وسمك كهف لوس سابينوس وتينها وباخون. تم تحليل البيانات حسب أسبوع التكاثر ومتوسط عدد الأجنة التي يتم جمعها يوميا خلال أسبوع تربية واحد.وتشير البيانات إلى أن التربية كانت مستمرة على مدار العام في أسماك ريو تشوي وتكساس سيرفس وفي سمك كهف باشون. وكانت كمية ونوعية معظم أسماك ريو تشوي السطحية بين منخفضة وعالية، في حين أن كمية ونوعية معظم الأسماك السطحية في تكساس وسمك كهف باشون كانت بين منخفضة ومتوسطة. ولم يكن حدوث التفريخ مستمرا في أسماك كهف تيناجا أو لوس سابينوس، حيث كان التفريخ منخفضا أو غير موجود خلال أواخر الصيف إلى الخريف في هذه الأسماك.على الرغم من أن أدنى مستويات التفريخ سجلت لأسماك كهف لوس سابينوس، كانت نوعية الأجنة هي الأفضل. وعموما، أظهرت هذه الأسماك السطحية كمية ونوعية تفريخ أفضل من سمك الكهف. باستخدام هذا النظام، يمكننا تفريخ المئات، في الواقع الآلاف من البيض كل شهرين، ويتم استخدام هذه البويضات بعد ذلك، ثم يتم استخدام هذه الأجنة لأغراض مختلفة كثيرة.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

تحليل الزرد اليرقات الهيكل العظمي النزاهة العضلات مع ايفانز الأزرق صبغ

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Imaging of Cell Shape Alteration and Cell Movement in Drosophila Gastrulation Using DE-cadherin Reporter Transgenic Flies

Imaging of Cell Shape Alteration and Cell Movement in Drosophila Gastrulation Using DE-cadherin Reporter Transgenic Flies

التصوير من التعديلات خلية الشكل والحركة الخلية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; المعيدة عن طريق DE-كادهيرين مراسل الذباب المعدلة وراثيا

Gastrulation is the first set of morphologically dynamic events that occur during the embryonic development of multicellular animals such as Drosophila. ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

تقنية زرع الثدي الثديية الرواية جديدة لتصور الجيل سفينة من الخلايا الجذعية البطانية الأوعية الدموية

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

تصوير لايف من ماوس الثانوي باليت فيوجن

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

تشريح وتلطيخ إيممونوفلوريسسينت للفطر الجسم وعلم الخلايا العصبية في أدمغة البالغين melanogaster المورفولوجية

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

تطبيق [رني] والحرارة الناجمة عن صدمة "التعبير عامل النسخ" إلى "إعادة برمجة الخلايا الجرثومية" إلى الخلايا العصبية في C. ايليجانس

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells

تكوين الأعصاب باستخدام خلايا سرطان الجنين P19

The P19 cell line derived from a mouse embryo-derived teratocarcinoma has the ability to differentiate into the three germ layers. In the presence of ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

تصور بالعقدة ولوحة نوتوتشوردال في جاسترولاتينج الأجنة الماوس باستخدام الميكروسكوب الإلكتروني المسح وكله جبل الفلورة

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

إعداد الأنسجة وتلطيخ المناعة من أنسجة الفئران القحفية والعظام غير الصائق

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

ووليماونت في الموقع التهجين للأجنة أستياناكس

In recent years, a draft genome for the blind Mexican cavefish (Astyanax mexicanus) has been released, revealing the sequence identities for thousands of ...