Name: incremental temperature changes for maximal breeding and spawning in astyanax mexicanus
Uploaded: 2021-02-14T12:30:00
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デビッド・マータシアン、ディードレ・ヘイザー、エイミー・パークハースト、クレイグ・フット、マンディ・ンのジェフリー研究所 A.メキシカン文化 施設への貴重な貢献に感謝します。ジェフリー研究所の研究は現在、NIH助成金EY024941によってサポートされています。

この手順は、メリーランド大学の施設動物ケアガイドラインによって承認されています, カレッジパーク (現在 IACUC 469 #R-NOV-18-59;プロジェクト 1241065-1)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61708/61708fig1.jpg"> 図 1.繁殖週と非繁殖週の間のカレンダー。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61708/61708fig1large.jpg" target="_blank">この図の?...

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	<li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavefish+as+a+model+system+in+evolutionary+developmental+biology.">Cavefish as a model system in evolutionary developmental biology.</a> Developmental Biology. 231, 1-12 (2001).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+model+systems+in+evo-devo:+cavefish+and+mechanisms+of+microevolution.">Emerging model systems in evo-devo: cavefish and mechanisms of microevolution.</a> Evolution &amp; Development. 10, 265-272 (2008).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+development+in+the+cavefish+Astyanax.">Evolution and development in the cavefish Astyanax.</a> Current Topics in Developmental Biology. 86, 191-221 (2009).</li><li>Protas, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cavefish+reveals+molecular+convergence+in+the+evolution+of+albinism.">Genetic analysis of cavefish reveals molecular convergence in the evolution of albinism.</a> Nature Genetics. 38, 107-111 (2006).</li><li>Protas, M., Conrad, M., Gross, J. B., Tabin, C. J., Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regressive+evolution+in+the+Mexican+cave+tetra,+Astyanax+mexicanus.">Regressive evolution in the Mexican cave tetra, Astyanax mexicanus.</a> Current Biology. 17, 452-454 (2007).</li><li>O'Quin, K. E., Yoshizawa, M., Doshi, P., Jeffery, W. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Astyanax+caves+of+Mexico.+Cavefishes+of+Tamaulipas,+San+Luis+Potosi,+and+Guerrero.">The Astyanax caves of Mexico. Cavefishes of Tamaulipas, San Luis Potosi, and Guerrero.</a> Association for Mexican Cave Studies Bulletin. 26, 1 (2018).</li><li>Luo, S., Wu, B., Xiong, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+total+hardness+and+calcium:magnesium+ratio+of+water+during+early+stages+of+rare+minnows+(Gobiocypris+rarus).">Effects of total hardness and calcium:magnesium ratio of water during early stages of rare minnows (Gobiocypris rarus).</a> Comparative Medicine. 66, 181-187 (2016).</li><li>Balasch, J. 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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+performance+in+fish+is+explained+by+an+interplay+between+physiology,+behavior+and+ecology.">Thermal performance in fish is explained by an interplay between physiology, behavior and ecology.</a> Conservation Physiology. 7 (1), 025 (2019).</li><li>Hinaux, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+staging+table+for+Astyanax+mexicanus.">Developmental staging table for Astyanax mexicanus.</a> Zebrafish. 8 (4), (2011).</li><li>Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> In vitro fertilization of Astyanax mexicanus. , (2008).</li><li>Simon, V., Hyacinthe, C., R&#233;taux, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+behavior+in+the+blind+Mexican+cavefish+and+its+river-dwelling+conspecific.">Breeding behavior in the blind Mexican cavefish and its river-dwelling conspecific.</a> PLoS One. 14 (2), 0212591 (2019).</li><li>Harvey, B. J., Carolsfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Breeding+in+Tropical+Fish+Culture.">Induced Breeding in Tropical Fish Culture.</a> International Development Research Centre. , (1993).</li><li>Ma, L., Parkhurst, A., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+a+lens+survival+pathway+including+sox2+and+aA-crystallin+in+the+evolution+of+cavefish+eye+degeneration.">The role of a lens survival pathway including sox2 and aA-crystallin in the evolution of cavefish eye degeneration.</a> EvoDevo. 5, 28 (2014).</li><li>Krishnan, J., Rohner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavefish+and+the+basis+for+eye+loss.">Cavefish and the basis for eye loss.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 5 (372), 20150487 (2017).</li><li>Biland&#382;ija, H., Abraham, L., Ma, L., Renner, K., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+changes+controlled+by+catecholaminergic+systems+explain+recurrent+loss+of+pigmentation+in+cavefish.">Behavioral changes controlled by catecholaminergic systems explain recurrent loss of pigmentation in cavefish.</a> Proceedings of the Royal Society. 285, (2018).</li><li>Ma, L., Jeffery, W. R., Essner, J. J., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+editing+using+TALENs+in+blind+Mexican+cavefish.">Genome editing using TALENs in blind Mexican cavefish.</a> PLoS ONE. 1093, 0119370 (2015).</li><li>Klaassen, H., Wang, Y., Adamski, K., Rohner, N., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+mutagenesis+confirms+the+role+of+oca2+in+melanin+pigmentation+in+Astyanax+mexicanus.">CRISPR mutagenesis confirms the role of oca2 in melanin pigmentation in Astyanax mexicanus.</a> Developmental Biology. 441, 313-318 (2018).</li></ol>

アスティアナックスメキシカンスは、頻繁に発生し、実験室1、2で容易に飼育することができる新しい生物学的モデルです。私たちは、A.メキシカン洞窟魚の進化的変化の根源となる発達メカニズムに興味を持っているので、胚の生産と使用は、私たちの研究目標に不可欠です。魚の成虫ストックを維持する主な目的は、発達実験や成?...

テレオスト・アスティアナックス・メキシカンスは、目の表面住居(表面魚)の形をしており、多くの異なる盲目の洞窟住居(洞窟魚)が1、2を形成しています。洞窟の魚は永遠の暗闇の中で進化し、食品の限界の下で、新しい建設的で回帰的な形質の出現をもたらしました 3.建設的な特徴は、味覚芽と顎のサイズの増加、横線の感覚器官、および脂肪の埋蔵量を含む。回帰的な特徴には、メラニンの色素沈着、目、睡眠、学校教育、攻撃性などの行動の喪失または減少が含まれます。アスティヤナックス系の属性は、2つの形態間の完全な生殖能力であり、定量的形質遺伝子座(QTL)マッピングを使用して、建設的かつ回帰的な進化4、5、6、7に関連するゲノム領域を決定することを可能にする。A. メキシカンスは、実験室で頻繁に産卵するように誘導することができるので、開発を研究するための有利なシステムを提供しています。A.メキシカンスの胚は半透明で、ゼブラフィッシュよりもわずかに大きく、大量に産生され、約8〜12ヶ月で性的に成熟した成人に発展する。最大産卵能力の期間は約5年です。このプロトコルは、典型的な繁殖週にA.メキシカンス培養施設で必要なワークフローを記述し、魚のシステムのメンテナンスの詳細と最大産卵のための温度制御体制が含まれています。
A. メキシカンス は、石灰岩の高原(表面魚)に由来する川に生息する熱帯魚で、石灰岩の洞窟(洞窟魚)8のプールに生息しています。石灰岩は溶解して硬水を生成し 、A.メキシカンは 硬水で繁栄します。硬水条件に適応した魚は、塩辛い条件の範囲を許容することができますが、一般的に特定のもの9で繁殖します。産卵行動の誘導は、因子の組み合わせによって達成される。魚は冷血で恒常性を維持するために環境に依存しているため、その代謝は環境変化に敏感であり、ストレッサー10に対してより迅速に反応する。 A. メキシカンは 、水流、pH、導電性、浸透圧、照明、水温の厳重に規制された条件下で水生系で培養する必要があります。
ジェフリー研究所では、魚は2つの流水システムで維持されています:(1)性的成熟前の若い成人魚のための「赤ちゃんシステム」と(2)性的に成熟した、繁殖大人のための大人(またはメイン)システム。「ベビーシステム」は、流水を供給する8Lと15Lタンクで構成されています。「ベビーシステム」は、幼虫から成長した稚魚と若い変態の少年が、毎週水を交換する小さな(1-10 L)タンクで播種します。幼虫、稚魚、および少年は非常に食物に依存しており、生存率が高いように、1日1回生きた食物(塩水エビ)を与えなければなりません。「赤ちゃんシステム」の若い少年は、約1〜1.5年後に成人システムに入れられます。最初は、粉砕されたテトラフレークを与えられ、さらなる成長の後、彼らは通常の成人給餌体制に移される。性的成熟度は女性の腹部容積によって評価され、および性を決定するための方法が11に記載されている。大人のシステムでは、水は24時間に3回42 Lタンクで自動的に交換されます。大人のシステムは目視点検および自動温度、pHおよび調査からの伝導率の読書によって毎日監視される。最適なpHは7.4前後で、6.8~7.5、ベース温度は72/73°F、理想的な導電率は600~800mSの範囲で、コントローラ画面に自動読み取り値が表示され、システム全体に分布する流量計で水圧の視覚的なチェックが読み取られます。水質に関する独立したチェックは、温度をテストし、測色試験を用いてpH、アンモニア、硝酸塩の水質パラメータを測定することによって毎週行われます。アンモニアおよび硝酸塩レベルは、有益な細菌(例えば、ヌタフィンサイクル)をシステムに加えることによってゼロに近い状態に保たれます。室内照明は、14時間光と10時間の暗い期間に調整されたタイマーによって制御されます。上記の全体的な水質パラメータに加えて、次の考慮事項は、繁殖週に特別な注意が必要です。
最初の考慮事項は、魚(実験室の洞窟魚でさえ)が概日時計を設定するために光サイクルに依存するので、光周期です。概日リズムは、繁殖や摂食から免疫系の健康12、13に至るまですべてに影響を与えることができ、最大の健康上の利点のために一貫している必要があります。魚は14時間光と10時間の暗い光周期で流水システムで維持されます。表面魚は一般的に、システムが暗くなってから1時間後に産卵を開始し、この期間中に導入された光は産卵を妨げ、終了する可能性があります。盲目の洞窟魚の産卵は光によってあまり邪魔されない。表面魚の産卵と比較して、洞窟魚の産卵は遅れ、通常はシステムが暗くなってから4〜5時間後に始まる。
第二の考慮事項は栄養です。成魚は通常、1日1回テトラフレークの食事を与えられています。産卵前に、魚は余分な量のテトラフレークやその他の食べ物を補ったタンパク質が豊富な食事を与えられる:卵黄フレークと時折生きているカリフォルニアの黒虫(Lumbriculus variegatus)は、前の産卵サイクル中の卵生産によるタンパク質損失を補う。繁殖週には、魚は1日2回、朝に1回、午後/夕方に再び餌を与えられる。魚は1日に1回だけ餌を与えるが、食物の単一の非常に大きな部分で、これは栄養失調を引き起こす可能性がありますので、避けるべきです 14.
3つ目の考慮事項はスペースです。スペース要件は、成人の平均体重に加えて、魚が学校教育行動や攻撃的な行動を持っているかどうかなどの行動上の考慮事項に基づいています。オーバーまたは混雑不足のタンクは、攻撃性の高まりと一定のストレスを引き起こし、魚はタンク仲間からの怪我に対して脆弱になり、産卵15に参加するのを嫌がる可能性があります。私たちは通常、42 Lタンクあたり10〜20匹の魚を収容します。
4つ目の考慮事項は温度です。前述のように、魚は冷血動物であり、体温を維持するために環境に依存しています。温度は代謝過程に直接影響を及ぼすため、温度の変化は魚16の行動変化を引き起こす可能性がある。この繁殖プログラムは、温度の2週間のサイクルで構成されています:最初の週は78 °Fに温度スパイクを導入し、次の週は72 °Fの静電気温度を維持します。 最初の(繁殖)週の間に、プラスチック縁の繁殖網は毎晩タンクの底に置かれます。繁殖網は、タンク内の魚と産卵卵の間の障壁として機能し、そうでなければ消費されるであろう。気温は週の半ばまでに1日あたり2°F上昇して最大78°Fに上昇し、今週の最初の2〜3日の夜に光サイクルに従って産卵が誘発される。その後、週の残りの日に温度を72 °Fに2°Fずつ下げ、次の繁殖週の初めまでベース温度を維持します。繁殖は通常、魚の回復時間を可能にするために月に2回以下に刺激されます。
全体的に、この方法は、より長い期間にわたって最高品質の胚を大量に産出することを可能にする。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:874px;" width="875">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Blackworms</td>
			<td style="width:299px;">Eastern Aquatics, Lancaster, PA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Breeding Nets</td>
			<td style="width:299px;">Custom made</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Brine shrimp eggs</td>
			<td style="width:299px;">AquaCave Lake Forest, IL.</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Colorimetric test kit</td>
			<td style="width:299px;">Petco</td>
			<td style="width:161px;">SKU:11916</td>
			<td>API Freshwater pH Test Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Egg yolk flakes</td>
			<td style="width:299px;">Pentair, Minneapolis, MN</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Fingerbowls</td>
			<td style="width:299px;">Carolina Biological Supply</td>
			<td align="right" style="width:161px;">741004</td>
			<td>Culture dishes, 4.5 in, 250 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Hand held nets</td>
			<td style="width:299px;">Any Pet Store</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Incubator for embryos</td>
			<td style="width:299px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:161px;">51-029-321HPM</td>
			<td>405 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Instant Ocean sea salts</td>
			<td style="width:299px;">Spectrum Brands, Blacksburg, VA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Methylene Blue</td>
			<td style="width:299px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td style="width:161px;">M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Pasteur Pipettes</td>
			<td style="width:299px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:161px;">13-678-20</td>
			<td>5.75 in.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Net soaking solution</td>
			<td style="width:299px;">Any Pet Store</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Nutrafin Cycle</td>
			<td style="width:299px;">Amazon</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td>Bacterial boost</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Refrigerator for live feed</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Thermometer</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Tetra Tropical Crisps</td>
			<td style="width:299px;">Spectrum Brands, Blacksburg, VA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

incremental temperature changes for maximal breeding and spawning in astyanax mexicanus

メキシコのテトラ、 アスティアナックス・メキシカンスは、開発と進化の研究のための新興モデルシステムです。この種における目の表面(表面魚)と盲目の洞窟(洞窟魚)のモーフの存在は、形態学的および行動進化の根底にあるメカニズムを尋問する機会を提供する。洞窟の魚は、新しい建設的で回帰的な形質を進化させてきた。建設的な変化には、味覚芽と顎、横線感覚器官、体脂肪の増加が含まれる。回帰的な変化には、目の喪失または減少が含まれる。メラニン色素沈着,学校教育行動,攻撃性,睡眠これらの変化を実験的に尋問するには、大量の産卵胚を得ることが重要である。元の A.メキシカンス 表面魚と洞窟魚が1990年代にテキサス州とメキシコで収集されて以来、その子孫はジェフリー研究所で毎月2回多くの胚を繁殖させ、産卵するように日常的に刺激されてきました。繁殖は食物の豊富さと品質、明暗サイクル、温度によって制御されていますが、増分温度変化が最大産卵を刺激する上で重要な役割を果たしていることが分かっています。繁殖週の最初の3日間の温度が72°Fから78 °Fに徐々に上昇すると、2〜3回連続で産卵日が最大の高品質胚を提供し、その後、産卵週の最後の3日間に78°Fから72°Fに徐々に温度が低下します。このビデオに示す手順は、増分温度刺激産卵のための実験室の繁殖週の前および間のワークフローを概説する。

私たちは一般的に、サンルイスポトシのナシミエント・デル・リオ・チョイでもともと収集された表面魚の子孫を繁殖させ、産卵します。 メキシコ(リオチョイ表面魚)とサンソロモンスプリングスのバルモラ州立公園、テキサス州(テキサス州表面魚)、メキシコのタマウリパス州のクエバ・デ・エル・パチョン(パチョン洞窟魚)、クエバ・デ・ロス・サビノス(ロス・サビノス洞窟魚)とソタノ?...

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Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus

この記事では、発達および進化研究の新たなモデルであるメキシコの四元 アスティアナックス・メキシカンスで最大産卵を刺激するための、インクリメンタル温度体制の基本的な実験室条件とプロトコルを概説する。

アスティアナックスメキシカンスにおける最大繁殖と産卵の昇温温度変化

The Mexican tetra, Astyanax mexicanus, is an emerging model system for studies in development and evolution. The existence of eyed surface (surface fish) ...

だから、アスティヤナックスメキシカーナは小さな魚です。メキシコ北東部とテキサス州南部の先住民族です。それについて重要なことは、それが2つの形で存在することです。一つの形態は、大きな目と色素沈着を持つ表面住居魚であり、もう一つの形態は、目を失い、色素沈着を失った洞窟に住む魚です。彼らはまだ産卵、お互いにハイブリダイズすることができるので、遺伝学と発達を研究するために前方遺伝子解析に使用することができます。また、透明な大きな胚を持ち、比較発生生物学の研究に使用できます。だから、彼らは開発の進化を理解するためのシステムとして長年使用されてきました。産卵が望まれる数日前に、私たちはより良い魚を養い始めます。また、産卵を望む時間内に約2〜3日の過剰産卵を受け、成人によく発達し、幼虫段階を通じて大量の受精胚を産生するように、温度を徐々に上昇させます。テトラフレークのピンチで10:00に魚を供給した後.m、胚を開発する指のボウルを収容し、必要に応じて水を変更するために使用されるインキュベーターをチェックしてください。すべての貯水池の水位を確認し、不足している任意の貯水池にシステム水を追加します。その後、インキュベーターを摂氏23度に設定する 最初の給餌の少なくとも30分後に、卵黄フレークのピンチで繁殖タンク内の魚を供給し、タンク内の各魚が約5〜10ワームまたは両方を消費するのに十分な黒いワームクラスターを供給します。2回目の給餌から少なくとも1時間後には、必要に応じて飼育タンクをスクラブし、タンクの空気供給を妨げることなく、慎重に繁殖網を設置します。翌朝、9:00と10:00の間に成体系タンクの底から繁殖網を取り除.m。に取り付けたホースを使用して、胚を手持ち型ネットにそっとすすります。きれいなシステムの水のフィンガーボウルにネットを反転し、0.00003%メチレンブルーで補われたきれいなシステム水の200ミリリットルに指ボウルあたり約100の胚を移します。A-メキシカンの発達時刻表に従って受精の時間を推定するために、光顕微鏡下で胚をステージします。ステージング後、指のボウルを5〜7日間保育器に入れ、生きている塩水エビで文化を養います。胚を落としたタンクごとに、日付とタンク番号を記録し、落とされた胚の数と品質を記録します。ステージングテーブルに従って産卵の平均時間を記録し、魚が産卵した時点のシステムの温度を記録します。一日を通して胚の指のボウルを監視し、牧草地のピペットを使用して、食べられない食べ物やフェールなどの死んだまたは変形した胚や破片を取り除き、必要に応じて青い水を変更します。1:00 p.m.で、実体を示すように飼育タンクで魚を養い、水温を摂氏24度に設定します。その後、タンクから余分な食べ物や破片を取り除き、ネットをリセットする前にタンクをスクラブします。水曜日と木曜日に、火曜日に示すように胚の収集と評価を繰り返します。魚に餌を与え、水を適切な温度に設定します。インキュベーターの胚を確認し、フィンガーボウルの水を新鮮なメチレンブルー処理システム水に置き換えます。その後、必要に応じて繁殖タンクを清掃し、ネットをリセットします。金曜日、魚に餌を与えた後、水温を摂氏23度に設定し、インキュベーターの胚をチェックします。土曜日と日曜日に、魚に餌を与えます。この図では、2017年7月から2020年3月までのリオチョイとテキサス表面魚、ロスサビノス、ティナハ、パション洞窟フィッシュの繁殖データが示されています。データは、繁殖週と1回の繁殖週に1日あたりに収集された胚の平均数によって分析された。データは、繁殖がリオチョイとテキサスサーフェス魚とパション洞窟魚で年間を通じて連続的だったことを示しています。ほとんどのリオチョイ表面魚の量と品質は低いと高い間でした, ほとんどのテキサス表面魚とパチョン洞窟魚の量と品質は、低と中の間にあった間.産卵の発生はティナジャやロスサビノス洞窟の魚では連続しておらず、これらの魚の晩夏から秋にかけて産卵は低いか存在しなかった。産卵の最も低いレベルは、ロスサビノス洞窟の魚のために記録されたが、, 胚の品質は最高でした.全体的に、この表面魚は洞窟魚よりも産卵量と質が良い。このシステムを使用すると、毎月数百個、実際には何千もの卵を産卵することができ、これらの卵が使用され、これらの胚は多くの異なる目的に使用されます。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

エバンスブルー色素でゼブラフィッシュ幼生骨格筋の整合性の分析

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Imaging of Cell Shape Alteration and Cell Movement in Drosophila Gastrulation Using DE-cadherin Reporter Transgenic Flies

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セル形状変化のイメージングと細胞運動で<em&gt;ショウジョウバエ</emDEカドヘリンレポータートランスジェニックハエを使用&gt;原腸陥入

Gastrulation is the first set of morphologically dynamic events that occur during the embryonic development of multicellular animals such as Drosophila. ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

血管内皮幹細胞の血管形成を視覚化するための新規乳腺脂肪移植技術

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

マウス二次口蓋融合のライブイメージング

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

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郭清ときのこ体の免疫蛍光染色と大人のショウジョウバエ脳光受容器ニューロン

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

線虫のニューロンに生殖細胞を再プログラムする RNAi と熱衝撃による転写因子の発現のアプリケーション

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells

P19胚癌細胞を用いて神経新生

The P19 cell line derived from a mouse embryo-derived teratocarcinoma has the ability to differentiate into the three germ layers. In the presence of ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

ノードと走査型電子顕微鏡と蛍光抗体法マウント全体を使用して Gastrulating のマウス胚における脊索板を可視化

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

マウス頭蓋組織および非除電骨の組織調製と免疫染色

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

In Situ ハイブリダイゼーションアステュアナクス胚の Wholemount

In recent years, a draft genome for the blind Mexican cavefish (Astyanax mexicanus) has been released, revealing the sequence identities for thousands of ...