Name: incremental temperature changes for maximal breeding and spawning in astyanax mexicanus
Uploaded: 2021-02-14T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus at JoVE.com

데이비드 마르타시안, 디드레 헤이저, 에이미 파크허스트, 크레이그 푸트, 맨디 응에게 제프리 연구소 A. 멕시코 문화 시설에 귀중한 공헌을 해 주셔서 감사합니다. 제프리 연구소의 연구는 현재 NIH 보조금 EY024941에 의해 지원됩니다.

이 절차는 메릴랜드 대학, 대학 공원의 기관 동물 관리 지침에 의해 승인되었습니다 (현재 IACUC 469 #R-NOV-18-59; 프로젝트 1241065-1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61708/61708fig1.jpg"> 그림 1. 번식 주간과 비 번식 주간 달력. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61708/61708fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 ?...

<ol>
	<li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavefish+as+a+model+system+in+evolutionary+developmental+biology.">Cavefish as a model system in evolutionary developmental biology.</a> Developmental Biology. 231, 1-12 (2001).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+model+systems+in+evo-devo:+cavefish+and+mechanisms+of+microevolution.">Emerging model systems in evo-devo: cavefish and mechanisms of microevolution.</a> Evolution &amp; Development. 10, 265-272 (2008).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+development+in+the+cavefish+Astyanax.">Evolution and development in the cavefish Astyanax.</a> Current Topics in Developmental Biology. 86, 191-221 (2009).</li><li>Protas, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cavefish+reveals+molecular+convergence+in+the+evolution+of+albinism.">Genetic analysis of cavefish reveals molecular convergence in the evolution of albinism.</a> Nature Genetics. 38, 107-111 (2006).</li><li>Protas, M., Conrad, M., Gross, J. B., Tabin, C. J., Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regressive+evolution+in+the+Mexican+cave+tetra,+Astyanax+mexicanus.">Regressive evolution in the Mexican cave tetra, Astyanax mexicanus.</a> Current Biology. 17, 452-454 (2007).</li><li>O'Quin, K. E., Yoshizawa, M., Doshi, P., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+genetic+analysis+of+retinal+degeneration+in+the+blind+cavefish.">Quantitative genetic analysis of retinal degeneration in the blind cavefish.</a> PLoS ONE. 8 (2), 57281 (2013).</li><li>Yoshizawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+genetic+architecture+underlies+the+emergence+of+sleep+loss+and+prey-seeking+behavior+in+the+Mexican+cavefish.">Distinct genetic architecture underlies the emergence of sleep loss and prey-seeking behavior in the Mexican cavefish.</a> BMC Biology. 13, 15 (2015).</li><li>Elliot, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Astyanax+caves+of+Mexico.+Cavefishes+of+Tamaulipas,+San+Luis+Potosi,+and+Guerrero.">The Astyanax caves of Mexico. Cavefishes of Tamaulipas, San Luis Potosi, and Guerrero.</a> Association for Mexican Cave Studies Bulletin. 26, 1 (2018).</li><li>Luo, S., Wu, B., Xiong, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+total+hardness+and+calcium:magnesium+ratio+of+water+during+early+stages+of+rare+minnows+(Gobiocypris+rarus).">Effects of total hardness and calcium:magnesium ratio of water during early stages of rare minnows (Gobiocypris rarus).</a> Comparative Medicine. 66, 181-187 (2016).</li><li>Balasch, J. C., Tort, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netting+the+stress+responses+in+fish.">Netting the stress responses in fish.</a> Frontiers in Endocrinology. 10, 62 (2019).</li><li>Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Determining the sex of adult Astyanax mexicanus. , (2008).</li><li>Paschos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+clocks,+feeding+time,+and+metabolic+homeostasis.">Circadian clocks, feeding time, and metabolic homeostasis.</a> Frontiers in Pharmacology. 6, 112 (2015).</li><li>Scheiermann, C., Kunisaki, Y., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+control+of+the+immune+system.">Circadian control of the immune system.</a> Nature Reviews Immunology. 13, 190-198 (2013).</li><li>Williams, M. B., Watts, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+basis+and+future+directions+of+zebrafish+nutrigenomics.">Current basis and future directions of zebrafish nutrigenomics.</a> Genes &amp; Nutrition. 14, 34 (2009).</li><li>Harper, C., Wolf, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+effects+of+the+stress+response+in+fish.">Morphologic effects of the stress response in fish.</a> ILAR Journal. 50, 387-396 (2009).</li><li>Neubauer, P., Andersen, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+performance+in+fish+is+explained+by+an+interplay+between+physiology,+behavior+and+ecology.">Thermal performance in fish is explained by an interplay between physiology, behavior and ecology.</a> Conservation Physiology. 7 (1), 025 (2019).</li><li>Hinaux, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+staging+table+for+Astyanax+mexicanus.">Developmental staging table for Astyanax mexicanus.</a> Zebrafish. 8 (4), (2011).</li><li>Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> In vitro fertilization of Astyanax mexicanus. , (2008).</li><li>Simon, V., Hyacinthe, C., R&#233;taux, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+behavior+in+the+blind+Mexican+cavefish+and+its+river-dwelling+conspecific.">Breeding behavior in the blind Mexican cavefish and its river-dwelling conspecific.</a> PLoS One. 14 (2), 0212591 (2019).</li><li>Harvey, B. J., Carolsfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Breeding+in+Tropical+Fish+Culture.">Induced Breeding in Tropical Fish Culture.</a> International Development Research Centre. , (1993).</li><li>Ma, L., Parkhurst, A., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+a+lens+survival+pathway+including+sox2+and+aA-crystallin+in+the+evolution+of+cavefish+eye+degeneration.">The role of a lens survival pathway including sox2 and aA-crystallin in the evolution of cavefish eye degeneration.</a> EvoDevo. 5, 28 (2014).</li><li>Krishnan, J., Rohner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavefish+and+the+basis+for+eye+loss.">Cavefish and the basis for eye loss.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 5 (372), 20150487 (2017).</li><li>Biland&#382;ija, H., Abraham, L., Ma, L., Renner, K., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+changes+controlled+by+catecholaminergic+systems+explain+recurrent+loss+of+pigmentation+in+cavefish.">Behavioral changes controlled by catecholaminergic systems explain recurrent loss of pigmentation in cavefish.</a> Proceedings of the Royal Society. 285, (2018).</li><li>Ma, L., Jeffery, W. R., Essner, J. J., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+editing+using+TALENs+in+blind+Mexican+cavefish.">Genome editing using TALENs in blind Mexican cavefish.</a> PLoS ONE. 1093, 0119370 (2015).</li><li>Klaassen, H., Wang, Y., Adamski, K., Rohner, N., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+mutagenesis+confirms+the+role+of+oca2+in+melanin+pigmentation+in+Astyanax+mexicanus.">CRISPR mutagenesis confirms the role of oca2 in melanin pigmentation in Astyanax mexicanus.</a> Developmental Biology. 441, 313-318 (2018).</li></ol>

아스티아나엑스멕시카누스는 자주 생성되어 실험실1,2에서쉽게 사육할 수 있는 새로운 생물학적 모델이다. 우리는 A. 멕시코 동굴 물고기의 진화적 변화를 뒷받침하는 발달 메커니즘에 관심이 있기 때문에 배아의 생산과 사용은 연구 목표에 매우 중요합니다. 물고기의 성인 재고를 유지하는 주요 목적은 발달 실험에 사용 및 성인 사육 주?...

텔레OST Astyanax 멕시코는 눈 표면 주거 (표면 물고기) 형태와 많은 다른 블라인드 동굴 주거 (동굴 물고기) 형성1,2. 동굴 물고기는 영원한 어둠과 음식 의 한계에서 진화, 새로운 건설적이고 회귀 특성의 출현의결과로 3. 건설적인 특성에는 미각과 턱 크기, 측면 선의 감각 기관 및 지방 매장량이 포함됩니다. 회귀적 특성에는 멜라닌 색소 침착, 눈 및 수면, 학교 및 침략과 같은 행동의 손실 또는 감소를 포함합니다. Astyanax 시스템의 특성은 두 가지 형태 사이의 완전한 다산이며, 건설적이고 회귀적인 진화4,5,6,7과관련된 게놈 영역(들)을 결정하기 위해 정량적 특성 궤적 로시(QTL) 매핑을 사용할 수 있게 한다. A. 멕시코는 실험실에서 자주 생성하도록 유도 될 수 있기 때문에 개발을 연구하는 유리한 시스템을 제공합니다. A. 멕시코인의 배아는 반투명하며, 제브라피쉬보다 약간 더 크고, 대량으로 생산되며, 약 8-12개월 동안 성적으로 성숙한 성인으로 발전합니다. 최대 산란 용량의 그들의 기간은 약 5 년입니다. 이 프로토콜은 일반적인 번식 주간 동안 A. 멕시코 문화 시설에서 필요한 워크플로우를 설명하고 물고기 시스템 유지 보수 및 최대 산란을위한 온도 제어 체제의 세부 사항을 포함합니다.
A. 멕시코는 석회암 고원 (표면 물고기)과 석회암 동굴 (동굴 물고기)의 수영장에서 유래 한 강에 사는 열대 물고기입니다8. 석회암은 용해되어 딱딱한 물을 생산하며, A. 멕시코는 단단한 물속에서 번성합니다. 경수 조건에 적응된 물고기는 다양한 짠 조건을 견딜 수 있지만 일반적으로 특정 조건에서 번식합니다9. 산란 동작의 유도는 요인의 조합에 의해 수행됩니다. 물고기는 냉혈하고 항상성을 유지하기 위해 환경에 의존하기 때문에, 그들의 신진 대사는 환경 변화에 민감하고 스트레스10에더 빨리 반응한다. A. 멕시코는 물 흐름, pH, 전도도, 삼투압, 조명 및 수온의 신중하게 규제 된 조건하에서 수중 시스템에서 배양되어야합니다.
제프리 연구소에서 생선은 성성숙 이전에 젊은 성인 생선을 위한 "아기 시스템"과 (2) 성적으로 성숙하고 번식하는 성인을 위한 성인(또는 메인) 시스템이라는 두 개의 흐르는 물 시스템에서 유지됩니다. "베이비 시스템"은 흐르는 물과 함께 제공되는 8 L 및 15 L 탱크로 구성됩니다. "아기 시스템"은 매주 물을 교환하는 작은 (1-10 L) 탱크에서 애벌레에서 자란 튀김과 젊은 변신 청소년에 의해 시드됩니다. 애벌레, 튀김 및 청소년은 매우 음식에 의존하며 높은 생존율을 보장하기 위해 하루에 한 번 살아있는 음식 (소금물 새우)을 먹여야합니다. "아기 시스템"에서 젊은 청소년은 약 1-1.5 년 후 성인 시스템에 배치됩니다. 처음에, 그들은 분쇄 테트라 플레이크를 공급하고, 추가 성장 후 그들은 일반 성인 먹이 정권으로 전송됩니다. 성적 성숙도는 여성의 복부 부피에 의해 평가될 수 있으며, 성관계를 결정하는 방법은11을설명하였습니다. 성인 시스템에서는 24시간 동안 42L 탱크에서 자동으로 물을 교환합니다. 성인 시스템은 프로브의 육안 검사 및 자동 온도, pH 및 전도도 판독값으로 매일 모니터링됩니다. 최적 pH는 약 7.4이며 6.8-7.5 사이의 범위, 시스템의 기본 온도는 72/73 °F이며, 600-800 mS 사이의 이상적인 전도도 범위. 자동 판독은 컨트롤러 화면에 표시되며, 수압의 육안 검사는 시스템 전체에 분포된 유량계에서 판독된다. 수질에 대한 독립적인 점검은 색상을 측정하여 pH, 암모니아 및 질산염에 대한 온도를 테스트하고 수질 파라미터를 측정하여 매주 이루어집니다. 암모니아와 질산염 수준은 시스템에 유익한 박테리아 (예를 들면, Nutafin 주기)를 추가하여 0에 가깝게 유지됩니다. 실내 조명은 14시간 조명과 10시간 어두운 시간대로 조정된 타이머에 의해 제어됩니다. 위에서 언급한 전체 수질 매개 변수 외에도 다음 고려 사항은 번식 주간에 특별한 주의가 필요합니다.
첫 번째 고려 사항은 물고기 (실험실의 동굴 물고기조차도)가 circadian 시계를 설정하는 빛 주기에 따라 달라지므로 포토 기간입니다. Circadian 리듬은 번식과 먹이에서 면역 체계 건강12,13에 이르기까지 모든 것에 영향을 미칠 수 있으며 최대의 건강 상의 이점을 위해 일관성이 있어야합니다. 물고기는 14시간 빛과 10시간 어두운 광도에 흐르는 물 시스템에서 유지됩니다. 표면 물고기는 일반적으로 시스템이 어두워진 후 한 시간 후에 산란하기 시작하고,이 기간 동안 도입 된 빛은 산란을 방해하고 종료 할 수 있습니다. 맹목적인 동굴 물고기의 산란은 빛에 의해 덜 방해된다. 표면 물고기 산란에 비해, 동굴 물고기 산란은 일반적으로 시스템이 어두워진 후 4 ~ 5 시간 시작, 지연된다.
두 번째 고려 사항은 영양입니다. 성인 생선은 일반적으로 하루에 한 번 테트라 플레이크의 다이어트를 공급한다. 산란하기 전에, 생선은 테트라 플레이크와 다른 음식의 여분의 양으로 보충 단백질이 풍부한 다이어트를 공급한다 : 계란 노른자 플레이크와 때때로 살아 캘리포니아 흑벌레(Lumbriculus variegatus)이전 산란 주기 동안 계란 생산으로 인한 단백질 손실을 보상하기 위해. 번식 주간에는 하루에 두 번, 아침에 한 번, 오후/저녁에 다시 먹이를 주게 됩니다. 하루에 한 번만 먹이를 주는 물고기이지만 영양실조14를유발할 수 있으므로 매우 많은 양의 음식을 피해야 합니다.
세 번째 고려 사항은 공간입니다. 공간 요구 사항은 물고기가 학교 행동이나 공격적인 행동을 가지고 있는지 여부와 같은 행동 고려 사항뿐만 아니라 성인의 평균 신체 질량을 기반으로합니다. 오버 또는 언더 크라우드 탱크는 고조 된 침략과 지속적인 스트레스로 이어질 수 있습니다, 물고기는 탱크 동료에서 부상에 취약하고 산란에 참여하는 것을꺼려15. 우리는 일반적으로 42 L 탱크 당 10-20 물고기를 수용합니다.
네 번째 고려 사항은 온도입니다. 위에서 언급 했듯이, 물고기는 냉혈한 동물이며 체온을 유지하기 위해 환경에 의존합니다. 온도는 신진 대사 과정에 직접적인 영향을 미치기 때문에 온도의 변화는 물고기16의행동 변화를 유발할 수 있습니다. 이 번식 프로그램은 온도에서 2 주 주기로 구성되어 있습니다 : 첫 주에는 78 °F의 온도 스파이크를 도입하고 다음 주에는 72 ° F의 정적 온도를 유지합니다. 첫 번째 (번식) 주 동안, 플라스틱 가장자리 사육 그물은 매일 저녁 탱크의 바닥에 배치됩니다. 번식 그물은 탱크의 물고기와 산란 된 계란 사이의 장벽 역할을하며, 그렇지 않으면 소비 될 것입니다. 기온은 주중반까지 하루 2°F에서 최대 78°F까지 상승하며, 이번 주 첫 2-3저녁에 광사이클에 따라 산란이 유도된다. 그 후 남은 주 동안 온도가 2°F 증분하여 72°F로 낮아지고, 기초 온도는 다음 번식주의 시작까지 유지된다. 번식은 일반적으로 물고기 시간이 회복 할 수 있도록 한 달에 두 번 이상 자극되지 않습니다.
전반적으로, 이 방법은 더 긴 기간 동안 최고 품질의 배아의 대량의 산란을 허용합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:874px;" width="875">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Blackworms</td>
			<td style="width:299px;">Eastern Aquatics, Lancaster, PA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Breeding Nets</td>
			<td style="width:299px;">Custom made</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Brine shrimp eggs</td>
			<td style="width:299px;">AquaCave Lake Forest, IL.</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Colorimetric test kit</td>
			<td style="width:299px;">Petco</td>
			<td style="width:161px;">SKU:11916</td>
			<td>API Freshwater pH Test Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Egg yolk flakes</td>
			<td style="width:299px;">Pentair, Minneapolis, MN</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Fingerbowls</td>
			<td style="width:299px;">Carolina Biological Supply</td>
			<td align="right" style="width:161px;">741004</td>
			<td>Culture dishes, 4.5 in, 250 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Hand held nets</td>
			<td style="width:299px;">Any Pet Store</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Incubator for embryos</td>
			<td style="width:299px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:161px;">51-029-321HPM</td>
			<td>405 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Instant Ocean sea salts</td>
			<td style="width:299px;">Spectrum Brands, Blacksburg, VA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Methylene Blue</td>
			<td style="width:299px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td style="width:161px;">M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Pasteur Pipettes</td>
			<td style="width:299px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:161px;">13-678-20</td>
			<td>5.75 in.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Net soaking solution</td>
			<td style="width:299px;">Any Pet Store</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Nutrafin Cycle</td>
			<td style="width:299px;">Amazon</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td>Bacterial boost</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Refrigerator for live feed</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Thermometer</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Tetra Tropical Crisps</td>
			<td style="width:299px;">Spectrum Brands, Blacksburg, VA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

incremental temperature changes for maximal breeding and spawning in astyanax mexicanus

멕시코 테트라, Astyanax 멕시코,개발 및 진화 연구를위한 새로운 모델 시스템입니다. 이 종에서 눈 표면 (표면 물고기)과 맹목적인 동굴 (동굴 물고기)의 존재는 형태학적 및 행동 진화의 기본 메커니즘을 심문 할 수있는 기회를 제공합니다. 동굴 물고기는 새로운 건설적이고 회귀적 특성을 진화했다. 건설적인 변화는 미각과 턱의 증가, 측면 선 감각 기관 및 체지방을 포함합니다. 회귀 적 변화는 눈의 손실 또는 감소를 포함한다. 멜라닌 색소 침착, 학교 행동, 침략, 수면. 이러한 변화를 실험적으로 심문하려면 많은 수의 산란 된 배아를 얻는 것이 중요합니다. 1990년대에 텍사스와 멕시코에서 원래 A. 멕시코 어류와 동굴 물고기가 수집된 이후, 그들의 후손들은 제프리 실험실에서 격월에 많은 배아를 번식하고 생성하기 위해 정기적으로 자극을 받았습니다. 사육은 음식의 풍요로움과 품질, 밝은 어두운 주기 및 온도에 의해 제어되지만, 우리는 증분 온도 변화가 최대 산란을 자극하는 데 중요한 역할을한다는 것을 발견했습니다. 사육 주 첫 3일 동안 72°F에서 78°F로 의 온도가 점진적으로 증가하면 고품질 배아의 최대 수로 2-3일 연속 산란일을 제공하며, 그 다음에산란 주간의 마지막 3일 동안 78°F에서 72°F로 점진적으로 온도가 감소합니다. 이 비디오에 표시된 절차는 증분 온도 자극 산란에 대한 실험실 사육 주 전과 동안 워크 플로우를 설명합니다.

우리는 일반적으로 산 루이스 포토시의 나키미엔토 델 리오 초이에서 원래 수집 된 표면 물고기의 후손을 번식하고 산란합니다. 멕시코(리오 초이 표면 물고기)와 텍사스 주 발모헤아 주립공원의 샌 솔로몬 스프링스와 멕시코 타마울리파스, 쿠에바 데 로스 사비노스(로스 사비노스 동굴 물고기) 및 소타노 데 라 티나야(티나야 동굴 물고기)에서 추출한 동굴 물고기 멕시코.
사...

Watch this Scientific Journal Video about Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus at JoVE.com

Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus

이 기사에서는 발달 및 진화 연구를 위한 새로운 모델인 멕시코 테트라 Astyanax mexicanus에서최대 산란을 자극하기 위한 증분 온도 정권에 대한 기본 실험실 조건 및 프로토콜을 설명합니다.

아스티야낙스 멕시코인의 막시달 번식과 산란에 대한 증분 온도 변화

The Mexican tetra, Astyanax mexicanus, is an emerging model system for studies in development and evolution. The existence of eyed surface (surface fish) ...

그래서 Astyanax 멕시코는 작은 물고기입니다. 그것은 북동부 멕시코와 남부 텍사스에 원주민이다. 그것에 대해 중요한 것은 두 가지 형태로 존재한다는 것입니다.한 형태는 눈과 색소 침착이 큰 표면 주거 물고기이며, 다른 형태는 눈을 잃고 색소 침착을 잃은 동굴 주거 물고기입니다. 그들은 여전히 산란 할 수 있어, 서로 혼성화, 그래서 그들은 유전학 및 개발을 공부 하기 위해 앞으로 유전 분석에 사용할 수 있습니다. 또한 투명한 큰 배아가 있고, 비교 발달 생물학을 공부하는 데 사용될 수 있습니다.그래서 그들은 개발의 진화를 이해하는 시스템으로 지금 몇 년 동안 사용되었습니다. 산란이 필요하기 며칠 전에 우리는 물고기를 더 잘 먹이기 시작합니다. 우리는 또한 우리가 그(것)들이 산란하기를 원하는 시간 안에, 그(것)들이 성인에게 잘 발전하는 기름지게 한 태아의 다수를 생성하는 과도한 산란의 대략 2 3 일을 겪을 것이라는 점을 점차적으로 온도를 증가시다.10:00 a.m.에 물고기를 먹이 후 .m, 개발 배아의 손가락 그릇을 집에 사용 됩니다 인큐베이터를 확인 하 고 필요한 경우 물을 변경. 모든 저수지의 수위를 확인하고 낮은 실행 중인 모든 저수지에 시스템 물을 추가합니다.그런 다음 인큐베이터를 첫 번째 먹이후 적어도 30분 동안 섭씨 23도로 설정하고, 달걀 노른자 조각 한 꼬집으로 사육 탱크에서 물고기를 먹이고, 탱크의 각 물고기가 약 5~10마리의 벌레 또는 둘 다 소비할 수 있도록 충분한 검은 벌레 클러스터를 먹입니다. 두 번째 먹이 후 적어도 한 시간 후, 필요에 따라 사육 탱크를 스크럽하고 조심스럽게 탱크 공기 공급을 방해하지 않고 사육 그물을 설정합니다. 다음날 아침, 성인 시스템 탱크의 바닥에서 사육 그물을 제거 9:00 과 10:00 a.m.그리고 부드럽게 휴대용 그물에 배아를 헹구기 위해 부착 된 호스를 사용합니다. 그물을 깨끗한 시스템 물 손가락 그릇에 넣고 손가락 그릇 당 약 100 개의 배아를 0.00003 % 메틸렌 블루로 보충 한 깨끗한 시스템 물 200 밀리리터로 옮기습니다. A-mexicanas 발달 시간표에 따라 수정 시간을 추정하기 위하여 가벼운 현미경의 밑에 태아를 단계.준비 후, 5 ~7 일 동안 인큐베이터에 손가락 그릇을 배치하고 살아있는 소금물 새우와 문화를 공급합니다. 배아를 떨어뜨린 모든 탱크에 대해 날짜와 탱크 번호를 기록하고 배아의 수와 품질이 떨어졌습니다. 스테이징 테이블에 따라 생성되는 평균 시간을 기록하고 물고기가 생성된 당시 시스템의 온도를 기록합니다.하루 종일 배아의 손가락 그릇을 모니터링, 목초지 파이펫을 사용하여 어떤 죽은 또는 변형 된 배아와 파편을 제거, 이러한 먹지 않는 음식이나 대변등, 필요에 따라 푸른 물을 변경. 1:00 p.m..에서 볼 수 있는 사육 탱크에서 물고기를 먹이고 수온을 섭씨 24도로 설정합니다.그런 다음 탱크에서 과도한 음식과 파편을 제거하고 그물을 재설정하기 전에 탱크를 문질러. 수요일과 목요일에, 화요일에 입증된 바와 같이 배아 수집 및 평가를 반복합니다. 물고기를 먹이고 물을 적절한 온도로 설정합니다.인큐베이터의 배아를 확인하고 손가락 그릇 물을 신선한 메틸렌 블루 처리 시스템 물로 대체하십시오. 그런 다음 필요에 따라 번식 탱크를 청소하고 그물을 재설정합니다. 금요일에, 물고기를 먹이 후, 23섭씨로 수온을 설정하고 인큐베이터의 배아를 확인합니다.토요일과 일요일에는 물고기를 먹이. 이 그림에서는 2017년 7월부터 2020년 3월까지 리오 초이와 텍사스 표면 물고기, 로스 사비노스, 티나하, 파숑 동굴의 번식 데이터가 표시됩니다. 데이터는 사육 주와 단일 번식 주 동안 하루에 수집 된 배아의 평균 수에 의해 분석되었다.이 데이터는 리오 초이와 텍사스 표면 물고기와 파숑 동굴에서 일년 내내 번식이 지속되었다는 것을 나타냅니다. 대부분의 리오 초이 표면 물고기의 양과 품질은 낮고 높은 물고기였으며 대부분의 텍사스 표면 물고기와 파숑 동굴의 양과 품질은 낮음과 중간 크기사이였습니다. 산란의 발생은 티나야 또는 로스 사비노스 동굴 물고기에서 연속되지 않았으며, 이 물고기의 늦은 여름부터 가을까지 산란이 낮거나 존재하지 않는 물고기입니다.로스 사비노스 동굴 물고기에 대해 산란의 가장 낮은 수준이 기록되었지만, 배아의 질은 최고였습니다. 전반적으로, 이 표면 물고기는 동굴 물고기보다 더 나은 산란 수량과 품질을 나타냈다. 이 시스템을 사용하여, 우리는 수백, 실제로 달달마다 계란의 수천을 생성할 수 있고, 이 계란은 그 때 이용됩니다, 이 태아는 그 때 많은 다른 목적을 위해 이용됩니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

에반스 블루 염료와 Zebrafish의 애벌레 골격 근육 무결성 분석

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

연구

발생학

Imaging of Cell Shape Alteration and Cell Movement in Drosophila Gastrulation Using DE-cadherin Reporter Transgenic Flies

Imaging of Cell Shape Alteration and Cell Movement in Drosophila Gastrulation Using DE-cadherin Reporter Transgenic Flies

셀 모양 변경 허가 및 세포 운동에서의 영상<em&gt; 초파리</em&gt; 낭배 사용 DE-cadherin의 기자 형질 전환의 파리

Gastrulation is the first set of morphologically dynamic events that occur during the embryonic development of multicellular animals such as Drosophila. ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

혈관 내피 줄기 세포의 혈관 생성을 시각화하기위한 유방 팻 패드 이식 기술

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Mouse Secondary Palate Fusion의 라이브 이미징

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

C. 선 충 에서 신경 세포를 세균 세포를 재 설 정할 RNAi 및 열 충격 유도 하는 전사 인자 식의 적용

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells

P19 배아 암종을 이용한 신경 발생

The P19 cell line derived from a mouse embryo-derived teratocarcinoma has the ability to differentiate into the three germ layers. In the presence of ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

노드 및 스캐닝 전자 현미경 검사 법, 면역 형광 산 전체를 사용 하 여 Gastrulating 마우스 배아에서 Notochordal 접시를 시각화

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

마우스 두개안면 조직 및 분해되지 않은 뼈의 조직 준비 및 면역 염색

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

Wholemount Astyanax 배아에 대 한 제자리 교 잡

In recent years, a draft genome for the blind Mexican cavefish (Astyanax mexicanus) has been released, revealing the sequence identities for thousands of ...