Name: incremental temperature changes for maximal breeding and spawning in astyanax mexicanus
Uploaded: 2021-02-14T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus at JoVE.com

Jeffery laboratuvarı A. mexicanus kültür tesisine değerli katkılarından dolayı David Martasian, Diedre Heyser, Amy Parkhurst, Craig Foote ve Mandy Ng'ye teşekkür ederiz. Jeffery laboratuvarındaki araştırma şu anda NIH hibe EY024941 tarafından desteklenmektedir.

Bu prosedür Maryland Üniversitesi, College Park Kurumsal Hayvan Bakımı yönergeleri tarafından onaylanmıştır (Şu anda IACUC 469 #R-NOV-18-59; Proje 1241065-1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61708/61708fig1.jpg"> Şekil 1. Bir üreme haftası ve üreme dışı bir hafta boyunca takvimler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61708/61708fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir ...

<ol>
	<li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavefish+as+a+model+system+in+evolutionary+developmental+biology.">Cavefish as a model system in evolutionary developmental biology.</a> Developmental Biology. 231, 1-12 (2001).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+model+systems+in+evo-devo:+cavefish+and+mechanisms+of+microevolution.">Emerging model systems in evo-devo: cavefish and mechanisms of microevolution.</a> Evolution &amp; Development. 10, 265-272 (2008).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+development+in+the+cavefish+Astyanax.">Evolution and development in the cavefish Astyanax.</a> Current Topics in Developmental Biology. 86, 191-221 (2009).</li><li>Protas, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cavefish+reveals+molecular+convergence+in+the+evolution+of+albinism.">Genetic analysis of cavefish reveals molecular convergence in the evolution of albinism.</a> Nature Genetics. 38, 107-111 (2006).</li><li>Protas, M., Conrad, M., Gross, J. B., Tabin, C. J., Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regressive+evolution+in+the+Mexican+cave+tetra,+Astyanax+mexicanus.">Regressive evolution in the Mexican cave tetra, Astyanax mexicanus.</a> Current Biology. 17, 452-454 (2007).</li><li>O'Quin, K. E., Yoshizawa, M., Doshi, P., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+genetic+analysis+of+retinal+degeneration+in+the+blind+cavefish.">Quantitative genetic analysis of retinal degeneration in the blind cavefish.</a> PLoS ONE. 8 (2), 57281 (2013).</li><li>Yoshizawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+genetic+architecture+underlies+the+emergence+of+sleep+loss+and+prey-seeking+behavior+in+the+Mexican+cavefish.">Distinct genetic architecture underlies the emergence of sleep loss and prey-seeking behavior in the Mexican cavefish.</a> BMC Biology. 13, 15 (2015).</li><li>Elliot, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Astyanax+caves+of+Mexico.+Cavefishes+of+Tamaulipas,+San+Luis+Potosi,+and+Guerrero.">The Astyanax caves of Mexico. Cavefishes of Tamaulipas, San Luis Potosi, and Guerrero.</a> Association for Mexican Cave Studies Bulletin. 26, 1 (2018).</li><li>Luo, S., Wu, B., Xiong, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+total+hardness+and+calcium:magnesium+ratio+of+water+during+early+stages+of+rare+minnows+(Gobiocypris+rarus).">Effects of total hardness and calcium:magnesium ratio of water during early stages of rare minnows (Gobiocypris rarus).</a> Comparative Medicine. 66, 181-187 (2016).</li><li>Balasch, J. C., Tort, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netting+the+stress+responses+in+fish.">Netting the stress responses in fish.</a> Frontiers in Endocrinology. 10, 62 (2019).</li><li>Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Determining the sex of adult Astyanax mexicanus. , (2008).</li><li>Paschos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+clocks,+feeding+time,+and+metabolic+homeostasis.">Circadian clocks, feeding time, and metabolic homeostasis.</a> Frontiers in Pharmacology. 6, 112 (2015).</li><li>Scheiermann, C., Kunisaki, Y., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+control+of+the+immune+system.">Circadian control of the immune system.</a> Nature Reviews Immunology. 13, 190-198 (2013).</li><li>Williams, M. B., Watts, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+basis+and+future+directions+of+zebrafish+nutrigenomics.">Current basis and future directions of zebrafish nutrigenomics.</a> Genes &amp; Nutrition. 14, 34 (2009).</li><li>Harper, C., Wolf, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+effects+of+the+stress+response+in+fish.">Morphologic effects of the stress response in fish.</a> ILAR Journal. 50, 387-396 (2009).</li><li>Neubauer, P., Andersen, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+performance+in+fish+is+explained+by+an+interplay+between+physiology,+behavior+and+ecology.">Thermal performance in fish is explained by an interplay between physiology, behavior and ecology.</a> Conservation Physiology. 7 (1), 025 (2019).</li><li>Hinaux, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+staging+table+for+Astyanax+mexicanus.">Developmental staging table for Astyanax mexicanus.</a> Zebrafish. 8 (4), (2011).</li><li>Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> In vitro fertilization of Astyanax mexicanus. , (2008).</li><li>Simon, V., Hyacinthe, C., R&#233;taux, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+behavior+in+the+blind+Mexican+cavefish+and+its+river-dwelling+conspecific.">Breeding behavior in the blind Mexican cavefish and its river-dwelling conspecific.</a> PLoS One. 14 (2), 0212591 (2019).</li><li>Harvey, B. J., Carolsfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Breeding+in+Tropical+Fish+Culture.">Induced Breeding in Tropical Fish Culture.</a> International Development Research Centre. , (1993).</li><li>Ma, L., Parkhurst, A., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+a+lens+survival+pathway+including+sox2+and+aA-crystallin+in+the+evolution+of+cavefish+eye+degeneration.">The role of a lens survival pathway including sox2 and aA-crystallin in the evolution of cavefish eye degeneration.</a> EvoDevo. 5, 28 (2014).</li><li>Krishnan, J., Rohner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavefish+and+the+basis+for+eye+loss.">Cavefish and the basis for eye loss.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 5 (372), 20150487 (2017).</li><li>Biland&#382;ija, H., Abraham, L., Ma, L., Renner, K., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+changes+controlled+by+catecholaminergic+systems+explain+recurrent+loss+of+pigmentation+in+cavefish.">Behavioral changes controlled by catecholaminergic systems explain recurrent loss of pigmentation in cavefish.</a> Proceedings of the Royal Society. 285, (2018).</li><li>Ma, L., Jeffery, W. R., Essner, J. J., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+editing+using+TALENs+in+blind+Mexican+cavefish.">Genome editing using TALENs in blind Mexican cavefish.</a> PLoS ONE. 1093, 0119370 (2015).</li><li>Klaassen, H., Wang, Y., Adamski, K., Rohner, N., Kowalko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+mutagenesis+confirms+the+role+of+oca2+in+melanin+pigmentation+in+Astyanax+mexicanus.">CRISPR mutagenesis confirms the role of oca2 in melanin pigmentation in Astyanax mexicanus.</a> Developmental Biology. 441, 313-318 (2018).</li></ol>

Astyanax mexicanus, sık sık yumurtlayan ve laboratuvarda kolayca yetiştirilebilen yeni bir biyolojik modeldir1,2. A. mexicanus mağara balıklarındaki evrimsel değişimlerin altında yatan gelişimsel mekanizmalarla ilgilendiğimiz için embriyo üretimi ve kullanımı araştırma hedeflerimiz için hayati önem taşımaktadır. Yetişkin bir balık stoğunun korunmasının birincil amacı, gelişim deneylerinde kullanılmak ve yetişkin ü...

Teleost Astyanax mexicanus, yüzeyde yaşayan (yüzey balığı) bir forma sahiptir ve birçok farklı kör mağarada yaşayan (mağara balığı)form 1,2. Mağara balıkları sürekli karanlıkta ve yiyecek sınırlamaları altında evrimleşmiştir, bu da yeni yapıcı ve gerileyen özelliklerin ortaya çıkmasına neden3. Yapıcı özellikler arasında tat tomurcukları ve çene büyüklüğündeki artışlar, yanal çizginin duyu organları ve yağ rezervleri bulunur. Regresif özellikler melanin pigmentasyonunun, gözlerin ve uyku, okul ve saldırganlık gibi davranışların kaybını veya azaltılmasını içerir. Astyanax sisteminin bir özelliği, yapıcı ve gerici evrim4,5,6,7ile ilişkili genomik bölgeleri belirlemek için nicel özellik loci (QTL) eşlemesinin kullanılmasına izin vererek iki form arasındaki tam doğurganlıktır. A. mexicanus, laboratuvarda sık sık yumurtlamaya indüklenebildiğinden, gelişimi incelemek için avantajlı bir sistem sunar. A. mexicanus embriyoları yarı saydamdır, zebra balıklarından biraz daha büyüktür, büyük miktarlarda üretilir ve yaklaşık 8-12 ay içinde cinsel olarak olgun yetişkinlere dönüşür. Maksimum yumurtlama kapasiteleri yaklaşık 5 yıldır. Bu protokol, tipik bir üreme haftasında bir A. mexicanus kültür tesisinde ihtiyaç duyulan iş akışını açıklar ve balık sistemi bakımı ve maksimum yumurtlama için sıcaklık kontrol rejiminin ayrıntılarını içerir.
A. mexicanus kireçtaşı platolarından (yüzey balıkları) kaynaklanan nehirlerde ve kireçtaşı mağaralarındaki havuzlarda (mağara balıkları) yaşayan tropikal bir balıktır8. Kireçtaşı sert su üretmek için çözünür ve A. mexicanus sert suda gelişir. Sert su koşullarına uyarlanmış balıklar bir dizi tuzlu durumu tolere edebilir, ancak genellikle belirli olanlarda ürer9. Yumurtlama davranışının indüksiyonu faktörlerin bir kombinasyonu ile gerçekleştirilir. Balıklar soğukkanlı olduklarından ve homeostazlarını korumak için çevrelerine güvendikleri için, metabolizmaları çevresel değişikliklere duyarlıdır ve stresörlere daha hızlı tepki verirler10. A. mexicanus, su akışı, pH, iletkenlik, ozmotik basınç, aydınlatma ve su sıcaklıklarının özenle düzenlenmiş koşulları altında su sistemlerinde kültürlenmelidir.
Jeffery laboratuvarında, balıklar iki akan su sisteminde tutulur: (1) cinsel olgunluluk öncesinde genç yetişkin balıklar için bir "bebek sistemi" ve (2) cinsel olarak olgun, üreme yetişkinleri için yetişkin (veya ana) bir sistem. "Bebek sistemi", akan su ile birlikte verilen 8 L ve 15 L tanklardan oluşur. "Bebek sistemi", larvalardan yetiştirilen yavru ve genç metamorfozize yavrular tarafından daha küçük (1-10 L) tanklarda tohumlanır ve bu tanklarda haftalık olarak su alışverişi yapılır. Larvalar, yavrular ve gençler son derece gıdaya bağımlıdır ve yüksek oranda hayatta kalma sağlamak için günde bir kez canlı yiyeceklerle (salamura karides) beslenmelidir. "Bebek sisteminden" genç gençler yaklaşık 1-1,5 yıl sonra yetişkin sistemine yerleştirilir. İlk başta, toz haline getirilmiş tetra pulları ile beslenirler ve daha fazla büyümeden sonra normal yetişkin beslenme rejimine aktarılırlar. Cinsel olgunluk kadınlarda karın hacmi ile değerlendirilebilir ve cinsiyet belirleme yöntemleritanımlanmıştır 11. Yetişkin sisteminde, su 24 saatlik periyotta 3 kez 42 L tankta otomatik olarak değiştirilir. Yetişkin sistemi her gün görsel muayene ve problardan gelen otomatik sıcaklık, pH ve iletkenlik okumaları ile izlenir. Optimum pH yaklaşık 7,4'tür ve 6,8-7,5 arasında değişebilir, sistemin taban sıcaklığı 72/73 °F ve ideal iletkenlik 600-800 mS arasında değişir. Su kalitesi üzerinde bağımsız kontroller, renk ölçümü testi kullanılarak pH, amonyak ve nitrat için sıcaklık ve ölçüm suyu kalite parametrelerinin ölçülmesi ile haftalık olarak yapılır. Amonyak ve nitrat seviyeleri, sisteme yararlı bakteriler (örneğin Nutafin Döngüsü) eklenerek sıfıra yakın veya sıfıra yakın tutulur. Oda aydınlatması, 14 saatlik ışığa ve 10 saatlik karanlık periyotlara göre ayarlanmış bir zamanlayıcı ile kontrol edilir. Yukarıda belirtilen genel su kalitesi parametrelerine ek olarak, aşağıdaki hususların bir üreme haftasında özel dikkat edilmesi gerekir.
Balıklar (laboratuvardaki mağara balıkları bile) sirkadiyen saatlerini ayarlamak için ışık döngülerine bağlı olduğundan, ilk dikkat edilmesi gereken fotoperiyoddur. Sirkadiyen ritimler üreme ve beslenmeden bağışıklık sistemi sağlığına kadar her şeyi etkileyebilir12,13 ve maksimum sağlık yararları için tutarlı olmalıdır. Balıklar 14 saatlik ışık ve 10 saatlik karanlık fotoperiyod üzerinde akan su sisteminde tutulur. Yüzey balıkları genellikle sistem karardıktan bir saat sonra yumurtlamaya başlar ve bu süre zarfında tanıtılan ışık yumurtlamaya müdahale edebilir ve sonlandırabilir. Kör mağara balıklarının yumurtlaması ışıktan daha az rahatsızdır. Yüzey balıklarının yumurtlamasıyla karşılaştırıldığında, mağara balıklarının yumurtlaması gecikir, genellikle sistem karardıktan dört ila beş saat sonra başlar.
İkinci husus beslenmedir. Yetişkin balıklar normalde günde bir kez tetra gevreği diyeti ile beslenir. Yumurtlamadan önce, balıklar ekstra miktarlarda tetra gevreği ve diğer yiyeceklerle desteklenmiş protein bakımından zengin bir diyetle beslenir: yumurta sarısı gevreği ve bazen yaşayan Kaliforniya kara kurtları (Lumbriculus variegatus) önceki yumurtlama döngüsü sırasında yumurta üretimi nedeniyle protein kaybını telafi etmek için. Üreme haftasında, balıklar günde iki kez, sabah bir kez ve öğleden sonra / akşam tekrar beslenir. Günde sadece bir kez beslenen balıklar, ancak yiyeceklerin çok büyük bir kısmı ile kaçınılmalıdır, çünkü bu yetersiz beslenmeye neden olabilir14.
Üçüncü husus uzaydır. Alan gereksinimleri, bir yetişkinin ortalama vücut kütlesinin yanı sıra balıkların okul davranışına veya agresif davranışlara sahip olup olmadığı gibi davranışsal hususlara dayanmaktadır. Aşırı veya az kalabalık tanklar, artan saldırganlık ve sürekli strese yol açabilir, balıkları tank arkadaşlarının yaralanmasına karşı savunmasız hale getirir ve yumurtlamaya katılmak için isteksiz15. Genellikle 42 L tank başına 10-20 balık barındırıyoruz.
Dördüncü husus sıcaklıktır. Yukarıda belirtildiği gibi, balıklar soğukkanlı hayvanlardır ve vücut sıcaklığını korumak için çevreye güvenirler. Sıcaklığın metabolik süreçler üzerinde doğrudan bir etkisi olduğundan, sıcaklıktaki değişiklikler balıklarda davranış değişikliklerini tetikleyebilir16. Bu üreme programı sıcaklıkta iki haftalık döngülerden oluşur: ilk hafta 78 ° F'ye bir sıcaklık artışı sağlar ve ertesi hafta 72 ° F statik sıcaklığı korur. İlk (üreme) hafta boyunca, her akşam tankların dibine plastik kenarlı üreme ağları yerleştirilir. Üreme ağları, tanklardaki balıklar ile yumurtlanan yumurtalar arasında bir bariyer görevi görer, aksi takdirde tüketilir. Sıcaklık hafta ortasına kadar günde 2 ° F ile maksimum 78 ° F'ye yükseltilir ve yumurtlama bu haftanın ilk 2-3 akşamındaki ışık döngüsüne göre indüklendi. Sıcaklık daha sonra haftanın kalan günlerinde 2 ° F artışla 72 ° F'ye düşürülür ve baz sıcaklık bir sonraki üreme haftasının başına kadar korunur. Üreme genellikle balık zamanının iyileşmesine izin vermek için ayda en fazla iki kez uyarılır.
Genel olarak, bu yöntem daha uzun bir süre boyunca en yüksek kaliteli embriyoların büyük miktarlarda yumurtlasını sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:874px;" width="875">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Blackworms</td>
			<td style="width:299px;">Eastern Aquatics, Lancaster, PA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Breeding Nets</td>
			<td style="width:299px;">Custom made</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Brine shrimp eggs</td>
			<td style="width:299px;">AquaCave Lake Forest, IL.</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Colorimetric test kit</td>
			<td style="width:299px;">Petco</td>
			<td style="width:161px;">SKU:11916</td>
			<td>API Freshwater pH Test Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Egg yolk flakes</td>
			<td style="width:299px;">Pentair, Minneapolis, MN</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Fingerbowls</td>
			<td style="width:299px;">Carolina Biological Supply</td>
			<td align="right" style="width:161px;">741004</td>
			<td>Culture dishes, 4.5 in, 250 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Hand held nets</td>
			<td style="width:299px;">Any Pet Store</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Incubator for embryos</td>
			<td style="width:299px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:161px;">51-029-321HPM</td>
			<td>405 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Instant Ocean sea salts</td>
			<td style="width:299px;">Spectrum Brands, Blacksburg, VA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Methylene Blue</td>
			<td style="width:299px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td style="width:161px;">M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Pasteur Pipettes</td>
			<td style="width:299px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:161px;">13-678-20</td>
			<td>5.75 in.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Net soaking solution</td>
			<td style="width:299px;">Any Pet Store</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Nutrafin Cycle</td>
			<td style="width:299px;">Amazon</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td>Bacterial boost</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Refrigerator for live feed</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Thermometer</td>
			<td style="width:299px;">Any source</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:248px;">Tetra Tropical Crisps</td>
			<td style="width:299px;">Spectrum Brands, Blacksburg, VA</td>
			<td style="width:161px;">None</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

incremental temperature changes for maximal breeding and spawning in astyanax mexicanus

Meksika tetrası, Astyanax mexicanus, gelişim ve evrim çalışmaları için gelişmekte olan bir model sistemidir. Bu türdeki göz yüzeyi (yüzey balıkları) ve kör mağara (mağara balıkları) morflarının varlığı, morfolojik ve davranışsal evrimin altında kalan mekanizmaları sorgulamak için bir fırsat sunun. Mağara balıkları yeni yapıcı ve gerici özellikler geliştirmişler. Yapıcı değişiklikler arasında tat tomurcukları ve çenelerdeki artışlar, yanal çizgi duyu organları ve vücut yağları bulunur. Gerileyen değişiklikler arasında gözlerin kaybı veya azalması yer almaktadır. melanin pigmentasyonu, okul davranışı, saldırganlık ve uyku. Bu değişiklikleri deneysel olarak sorgulamak için, çok sayıda yumurtlanmış embriyo elde etmek çok önemlidir. Orijinal A. mexicanus yüzey balıkları ve mağara balıkları 1990'larda Teksas ve Meksika'da toplandığından beri, torunları Jeffery laboratuvarında iki ayda bir çok sayıda embriyo yetiştirmeleri ve doğurmaları için rutin olarak uyarıldı. Üreme gıda bolluğu ve kalitesi, açık-karanlık döngüler ve sıcaklık tarafından kontrol edilmesine rağmen, artımlı sıcaklık değişikliklerinin maksimum yumurtlamayı teşvik etmede önemli bir rol oynadığını bulduk. Bir üreme haftasının ilk üç gününde sıcaklığın 72 ° F'den 78 ° F'ye kademeli olarak artması, maksimum sayıda yüksek kaliteli embriyo ile art arda iki-üç yumurtlama günü sağlar ve ardından yumurtlama haftasının son üç gününde sıcaklığın kademeli olarak 78 ° F'den 72 ° F'ye düşmesi takip edilir. Bu videoda gösterilen prosedürler, artımlı sıcaklık uyarılmış yumurtlama için bir laboratuvar üreme haftasından önce ve sırasında iş akışını özetler.

Genellikle San Luis Potosi'deki Nacimiento del Rio Choy'da toplanan yüzey balıklarının torunlarını yetiştirir ve yumurtlarız. Meksika (Rio Choy yüzey balığı) ve San Solomon Springs Balmorhea Eyalet Parkı, Teksas (Teksas yüzey balıkları) ve Cueva de El Pachón (Pachón mağara balığı) Tamaulipas, Meksika'da türetilen mağara balıkları ve San Luis Potosi'deki Cueva de los Sabinos (Los Sabinos mağara balığı) ve Sotano de la Tinaja (Tinaja mağara balığı) Meksika.
Bir ...

Watch this Scientific Journal Video about Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus at JoVE.com

Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus

Bu makale, gelişimsel ve evrimsel çalışmalar için ortaya çıkan bir model olan Meksika tetra Astyanax mexicanus'tamaksimum yumurtlamayı teşvik etmek için artımlı bir sıcaklık rejimi için temel laboratuvar koşullarını ve protokollerini özetlemektedir.

Astyanax mexicanus'ta Maksimal Üreme ve Yumurtlama için Artımlı Sıcaklık Değişiklikleri

The Mexican tetra, Astyanax mexicanus, is an emerging model system for studies in development and evolution. The existence of eyed surface (surface fish) ...

Yani Astyanax mexicanas küçük bir balık olduğu için. Kuzeydoğu Meksika ve Güney Teksas'a özgüdür. Bununla ilgili önemli olan iki şekilde var olmasıdır.Formlardan biri büyük gözlere ve pigmentasyona sahip yüzeyde yaşayan bir balık, diğer form ise gözlerini kaybetmiş ve pigmentasyonunu kaybetmiş mağarada yaşayan bir balıktır. Hala yumurtlama, birbirleriyle melezleme yeteneğine sahiptirler, böylece genetik ve gelişimi incelemek için ileri genetik analizde kullanılabilirler. Ayrıca şeffaf olan büyük embriyolara sahiptir ve karşılaştırmalı gelişim biyolojisi çalışmak için kullanılabilirler.Bu yüzden uzun yıllardır gelişimin evrimini anlamak için bir sistem olarak kullanılıyorlar. Yumurtlama istenmeden birkaç gün önce, balıkları daha iyi beslemeye başlarız. Ayrıca sıcaklığı artarak arttırırız, böylece yumurtlamalarını istediğimiz süre içinde, yaklaşık iki veya üç günlük aşırı yumurtlama geçirirler ve iyi gelişen çok sayıda döllenmiş embriyo üretirler ve larva aşamalarından yetişkinlere.Balıkları.m saat 10:00'da bir tutam Tetra gevreği ile besledikten sonra, gelişmekte olan embriyoların parmak kaselerini barındırmak için kullanılacak inkübatöre bakın ve gerekirse suyu değiştirin. Tüm rezervuarlardaki su seviyesini kontrol edin ve düşük olan rezervuarlara sistem suyu ekleyin.Daha sonra inkübörü 23 santigrat dereceye ayarlayın İlk beslemeden en az 30 dakika sonra, üreme tanklarındaki balıkları bir tutam yumurta sarısı gevreği, tanktaki her balığın yaklaşık beş ila 10 solucan veya her ikisini de tüketmesine izin vermek için yeterli siyah solucan kümesi ile besleyin. İkinci beslemeden en az bir saat sonra, üreme tanklarını gerektiği gibi ovalayın ve tank hava kaynağına müdahale etmeden üreme ağlarını dikkatlice kurun. Ertesi sabah, üreme ağlarını yetişkin sistem tanklarının altlarından 9:00-10:00 saatleri arasında çıkarın.m.ve embriyoları hafifçe bir el ağına durulamak için bağlı hortumu kullanın. Ağı bir parmak kabı temiz sistem suyuna çevirin ve parmak kasesi başına yaklaşık 100 embriyoyu 0.00003% metilen mavisi ile desteklenmiş 200 mililitre temiz sistem suyuna aktarın. A-mexicanas gelişim takvimine göre döllenme zamanını tahmin etmek için embriyoları hafif bir mikroskop altında düzenleyin.Sahneledikten sonra, parmak kaselerini beş ila yedi gün boyunca bir inkübatöre yerleştirin ve kültürleri canlı salamura karidesle besleyin. Embriyoları düşüren her tank için, tarih ve tank sayısını kaydedin ve düşen embriyoların sayısını ve kalitesini kaydedin. Evreleme tablosuna göre ortalama yumurtlama süresini kaydedin ve balığın yumurtlama zamanında sistemin sıcaklığını kaydedin.Gün boyunca embriyoların parmak kaselerini izleyin, ölü veya deforme olmuş embriyoları ve yenmemiş yiyecekler veya dışkı gibi kalıntıları çıkarmak için bir mera pipeti kullanarak ve gerektiğinde mavi suyu değiştirerek izleyin. Saat 13:00'te.m. gösterildiği gibi üreme tanklarındaki balıkları besleyin ve su sıcaklığını 24 santigrat dereceye ayarlayın.Daha sonra tanklardaki fazla yiyecek ve döküntüleri çıkarın ve ağları sıfırlamadan önce tankları ovalayın. Çarşamba ve Perşembe günü, salı günü için gösterildiği gibi embriyo toplama ve değerlendirmesini tekrarlayın. Balıkları besleyin ve suyu uygun sıcaklığa ayarlayın.İnkübatördeki embriyoları kontrol edin ve parmak kase suyunu taze metilen mavisi arıtmalı sistem suyu ile değiştirin. Daha sonra üreme tanklarını gerektiği gibi temizleyin ve ağları sıfırlayın. Cuma günü, balıkları besledikten sonra, su sıcaklığını 23 santigrat dereceye ayarlayın ve inkübatördeki embriyoları kontrol edin.Cumartesi ve pazar günü balıkları besleyin. Bu şekilde, Rio Choy ve Texas Surface Fish ve Los Sabinos, Tinaha ve Pachon mağara balıkları için Temmuz 2017'den Mart 2020'ye kadar üreme verileri gösterilmiştir. Veriler üreme haftası ve tek bir üreme haftasında günde toplanan ortalama embriyo sayısı ile analiz edildi.Veriler, Rio Choy ve Texas Surface balıklarında ve Pachon mağara balıklarında üremenin yıl boyunca sürekli olduğunu göstermektedir. Çoğu Rio Choy yüzey balığının miktarı ve kalitesi düşük ve yüksek arasında, çoğu Teksas yüzey balığının ve Pachon mağara balığının miktarı ve kalitesi düşük ve orta arasındaydı. Yumurtlama oluşumu Tinaja veya Los Sabinos mağara balıklarında sürekli değildi, yumurtlama bu balıklarda yaz sonundan sonbahara kadar düşük veya yok.Los Sabinos mağara balıkları için en düşük yumurtlama seviyeleri kaydedilmiş olsa da, embriyoların kalitesi en iyisiydi. Genel olarak, bu yüzey balığı mağara balıklarına göre daha iyi bir yumurtlama miktarı ve kalitesi sergiledi. Bu sistemi kullanarak, iki ayda bir yüzlerce, aslında binlerce yumurta yumurtlayabiliriz ve bu yumurtalar daha sonra kullanılır, bu embriyolar daha sonra birçok farklı amaç için kullanılır.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Incremental Temperature Changes for Maximal Breeding and Spawning in Astyanax mexicanus

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Evans Blue Dye ile Zebra balığı Larva İskelet Kası Bütünlüğü Analizi

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Imaging of Cell Shape Alteration and Cell Movement in Drosophila Gastrulation Using DE-cadherin Reporter Transgenic Flies

Imaging of Cell Shape Alteration and Cell Movement in Drosophila Gastrulation Using DE-cadherin Reporter Transgenic Flies

Hücre Şekli Alteration ve Hücre Hareketi Görüntüleme<em&gt; Drosophila</em&gt; Gastrulasyon kullanarak DE-kaderin Muhabir Transgenik Sinekler

Gastrulation is the first set of morphologically dynamic events that occur during the embryonic development of multicellular animals such as Drosophila. ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Vasküler Endotelyal Kök Hücrelerin Damar Oluşumunu Görselleştirmek İçin Yeni Bir Göğüs Göğsü Transplantasyon Tekniği

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Fare İkincil Palin Füzyonunun Canlı Görüntüsü

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Uygulama için yeniden programlamak Germ hücreleri için C. elegans nöronlarda RNAi ve transkripsiyon faktörü ifade ısı şok bağlı

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells

Nörojenez P19 embriyonal karsinom hücrelerini kullanarak

The P19 cell line derived from a mouse embryo-derived teratocarcinoma has the ability to differentiate into the three germ layers. In the presence of ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Düğüm ve Notochordal plaka Gastrulating fare embriyo Tarama elektron mikroskobu ve bütün Dağı ayirt kullanarak görselleştirme

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

Fare Kraniyofacial dokularda ve Undecalcified kemik doku hazırlama ve Immünostasyon

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

İn Situ hibridizasyon Astyanax embriyo için Wholemount

In recent years, a draft genome for the blind Mexican cavefish (Astyanax mexicanus) has been released, revealing the sequence identities for thousands of ...