Name: in vitro evaluation of oncogenic transformation in human mammary epithelial cells
Uploaded: 2020-09-24T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells at JoVE.com

AG laboratuvarı İspanya Nükleer Güvenlik Konseyi tarafından finanse edilmektedir. T.A. ve A.G. Generalitat de Catalunya (2017-SGR-503) tarafından tanınan bir araştırma grubunun üyeleridir. MT Bilimsel Vakfı Asociación Española Contra el Cáncer [AECC-INVES19022TERR] tarafından finanse edilen bir sözleşme tutar. G.F. sözleşmesi Cellex Vakfı'nın hibesi ile finanse edilmektedir.

Aşağıdaki deneylerde kullanılan insan örnekleri clínica Pilar Sant Jordi 'de (Barselona) standart prosedür onayı altında yapılan mammoplastilerden elde edilmiştir. Aksi belirtilmedikçe tüm işlemler Sınıf II Biyolojik Güvenlik Kabini'nde gerçekleştirilir.
1. İnsan meme epitel hücrelerinin in vitro kültür ve büyüme eğrisi arsa birikimi
<ol><li>
Meme primer epitel hücrelerinin in vitro kültürü (BPEP): hücre geçişi NOT: BPEC türetme ...

<ol>
	<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Stampfer, M. R., Yaswen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+models+of+human+mammary+epithelial+cell+transformation.">Culture models of human mammary epithelial cell transformation.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 5 (4), 365-378 (2000).</li><li>Schinzel, A. C., Hahn, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncogenic+transformation+and+experimental+models+of+human+cancer.">Oncogenic transformation and experimental models of human cancer.</a> Frontiers in Bioscience : A Journal and Virtual Library. 13 (13), 71 (2008).</li><li>Balani, S., Nguyen, L. V., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+process+of+human+tumorigenesis.">Modeling the process of human tumorigenesis.</a> Nature Communications. 8 (1), 15422 (2017).</li><li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2018:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).</li><li>Ince, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+of+different+human+breast+epithelial+cell+types+leads+to+distinct+tumor+phenotypes.">Transformation of different human breast epithelial cell types leads to distinct tumor phenotypes.</a> Cancer Cell. 12 (2), 160-170 (2007).</li><li>Repull&#233;s, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+malignant+transformation+of+preneoplastic+and+normal+breast+primary+epithelial+cells.">Radiation-induced malignant transformation of preneoplastic and normal breast primary epithelial cells.</a> Molecular Cancer Research. , 1-13 (2019).</li><li>Weigelt, B., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+the+microenvironmental+influences+on+the+normal+mammary+gland+and+breast+cancer.">Unraveling the microenvironmental influences on the normal mammary gland and breast cancer.</a> Seminars in Cancer Biology. 18 (5), 311-321 (2008).</li><li>Paoli, P., Giannoni, E., Chiarugi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoikis+molecular+pathways+and+its+role+in+cancer+progression.">Anoikis molecular pathways and its role in cancer progression.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1833 (12), 3481-3498 (2013).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30 (3), 256-268 (2003).</li><li>Borowicz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+soft+agar+colony+formation+assay.">The soft agar colony formation assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), (2014).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Brocher, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BioVoxxel+Image+Processing+and+Analysis+Toolbox.">The BioVoxxel Image Processing and Analysis Toolbox.</a> European BioImage Analysis Symposium. 8 (2), 67112 (2015).</li><li>Torquato, S., Truskett, T. M., Debenedetti, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+random+close+packing+of+spheres+well+defined.">Is random close packing of spheres well defined.</a> Physical Review Letters. 84 (10), 2064-2067 (2000).</li><li>LaBarge, M. A., Garbe, J. C., Stampfer, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+of+human+reduction+mammoplasty+and+mastectomy+tissues+for+cell+culture.">Processing of human reduction mammoplasty and mastectomy tissues for cell culture.</a> Journal of Visualized Experiments. (71), (2013).</li><li>Zubeldia-Plazaola, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids+promote+transition+of+ductal+carcinoma+in+situ+to+invasive+ductal+carcinoma+by+inducing+myoepithelial+cell+apoptosis.">Glucocorticoids promote transition of ductal carcinoma in situ to invasive ductal carcinoma by inducing myoepithelial cell apoptosis.</a> Breast Cancer Research. 20 (1), 65 (2018).</li></ol>

Bu makalede açıklanan deneysel protokoller in vitro kültür hücrelerinin onkojenik dönüşümünü değerlendirmek için yararlı araçlar sağlar. Her teknik dönüşüm sürecinin belirli yönlerini değerlendirir ve bu nedenle tek bir analizden sonuç çıkarken özel dikkat edilmelidir. Büyüme eğrileri birikme başka amaçlar için hücreleri biriktirme zaman zaten mevcut bilgi gerektiren bir yaklaşımdır. Bu, bu tekniği diğer hücre çoğalma tahlillerine göre daha ucuz ve daha kolay uygulanmasını sa?...

Neoplazm gelişimi için birden fazla ardışık olay gereklidir. 2011 yılında Hanahan ve Weinberg dönüştürülmüş hücrelerin büyümesini, hayatta kalmalarını ve yayılmasını sağlayan 10 yeteneği tanımladı: sözde "Kanser Damgaları"1. Burada açıklanan metodoloji, tümör hücrelerinin ayırt edici özelliklerinden bazılarına odaklanarak in vitro hücresel dönüşümü değerlendirmek için üç farklı araç derlemektedir. Bu teknikler hücre çoğalma oranını, 3Boyutlu kültüredildiğinde hücrelerin davranışlarını ve ankraj bağımsızlığı olan koloniler oluşturma kapasitelerini değerlendirir.
Hücre modelleri in in vitro hipotezi test etmek için çok önemlidir. Farklı yaklaşımlar kanser çalışması için hücresel dönüşüm deneysel modeller oluşturmak için geliştirilmiştir2,3,4. Meme kanseri dünya çapında kadınlar arasında en sık görülen kanser olduğundan ve kadınlar arasında kanser ölümlerinin yaklaşık% 15 sorumludur5, meme epitel hücrelerinin uygun hücresel modeller sağlayan daha fazla araştırma için son derece önemlidir. Bu makalede, biz meme primer epitel hücreleri deneysel bir model kullanarak hücresel dönüşümü değerlendirmek için üç teknik potansiyelini resimli var (BPEPs) dönüşüm başlangıçta İnce ve meslektaşları tarafından açıklanan 20076 ve daha sonra bizimlaboratuvardauygulanan 7 . Bu deneysel model üç hedefli genin (SV40 Large T ve küçük t antijenleri burada Ttag, hTERTve HRASolarak anılacaktır) olmayan bpecs genomuna sıralı değişiklik dayanmaktadır. Ayrıca, BPEP'ler türev için kullanılan yöntem, meme bezi fizyolojik özelliklerinin bazılarını koruyan heterojen bir hücre kültürü ile sonuçlanan, luminal veya miyoepitelyal belirteçleri ile meme epitel hücrelerinin bakım yanadır.
Meme bezinde, süt üretiminden sorumlu olan luminal meme epitel hücreleri lümenin yakınında bulunurken, miyoepitelyal hücreler luminal hücrelerin etrafına atılır ve sütü nisine meme ucuna götüren kasılma hareketlerine dikkat eder. Bu hücre soyu arasında uygun organizasyonun kaybedilmesi, 3D hücre kültürlerinde farklı soy belirteçlerinin immünororesan saptanması sonrasında in vitro olarak değerlendirilebilen tümöral transformasyon8'in bir özelliğidir. Tümörhücrelerinin bir diğer önemli özelliği diğer hücrelere bağlanmadan ve hücre dışı matriks1'ebağlanmadan büyüme kapasiteleridir. Sağlıklı hücreler süspansiyon içinde büyümeye zorlandığında, anoikis \u2012 gibi mekanizmalar hücre dışı matris \u2012 ayrılmasına yanıt olarak indüklenen hücre ölümü türü9aktive edilir . Hücre ölümü kaçırma kanserin ayırt edici özelliklerinden biridir ve böylece, dönüştürülmüş hücreler anoikis inaktive ve çapa bağımsız bir şekilde hayatta yeteneğine sahiptir. Bu kapasite, yumuşak agar kullanılarak ankrajdan bağımsız bir teşp ile in vitro olarak değerlendirilebilir. Ayrıca, tümöral dokuların doğal bir özelliği, sadece süspansiyon tahlillerinde değil, aynı zamanda tek katmanlı yapışık kültürlerin büyüme hızını izleyerek, zaman içinde hücre sayısının artışını ölçerek in vitro koşullarda kolayca izlenebilen sürekli proliferatif sinyalizasyon kapasitesidir.
Tümörijenik potansiyeli test etmek için en iyi model murine modellerinde tümör hücrelerinin aşılanması ve yerinde tümör gelişiminin değerlendirilmesi olmasına rağmen, deneysel işlemlerde kullanılan hayvan sayısını mümkün olduğunca en aza indirmek önemlidir. Bu nedenle, in vitro dönüşümü değerlendirmek için uygun testlere sahip olmak en önemli önceliktir. Burada, hücresel dönüşüm modelleri ile çalışan laboratuvarların çoğunda kolayca uygulanabilen kısmen ve tamamen dönüştürülmüş meme epitel hücrelerinin tümörijenik potansiyelini değerlendirmek için bir dizi araç salıyoruz.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 ml Serological Pipettes</td>
			<td>Labclinics</td>
			<td>PLC91001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml Eppendorfs</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>3451</td>
			<td>Dark eppendorfs are preferred for MTT long-term storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#956;l Pipette tips w/o filter</td>
			<td>Biologix</td>
			<td>20-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 ml glass bottle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>With cap, autoclavable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#956;l Pipette tips w/ filter</td>
			<td>Labclinics</td>
			<td>LAB1000ULFNL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#956;l Pipette tips w/o filter</td>
			<td>Biologix</td>
			<td>20-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>525-0400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml Serological Pipettes</td>
			<td>Labclinics</td>
			<td>PLC91002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#956;l Pipette tips w/ filter</td>
			<td>Labclinics</td>
			<td>FTR200-96</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Serological Pipettes</td>
			<td>Labclinics</td>
			<td>PLC91005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Conical Tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>525-0304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>PanReac AppliChem</td>
			<td>211007</td>
			<td>Used for 3D structure fixation prior to immunofluorescent labelling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1296</td>
			<td>Used for anchorage assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Claudin 4 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>15104, RRID:AB_301650</td>
			<td>Working dilution 1:100, host: rabbit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Cytokeratin 14 [RCK107] antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>9220, RRID:AB_307087</td>
			<td>Working dilution 1:100, host: mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse Cyanine Cy3 antibody</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch Inc.</td>
			<td>115-165-146, RRID:AB_2338690</td>
			<td>Working dilution 1:500, host: goat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit Alexa Fluor 488 antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11034, RRID:AB_2576217</td>
			<td>Working dilution 1:500, host: goat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioVoxxel Toolbox</td>
			<td></td>
			<td>RRID:SCR_015825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture 24-well Plate</td>
			<td>Labclinics</td>
			<td>PLC30024</td>
			<td>Used for 3D cultures in Matrigel. Flat Bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture 6-well Plate</td>
			<td>Labclinics</td>
			<td>PLC30006</td>
			<td>Used for anchorage assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell incubator (37 &#186;C and 5 % CO2)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainers</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11587522</td>
			<td>Mesh size: 40 &#956;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellSense software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Used to image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin from Vibrio cholerae</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td>Used to supplement cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Biological Safety Cabinet</td>
			<td>Herasafe</td>
			<td>HAEREUS HS12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal inverted Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses</td>
			<td>Witeg Labortechnik GmbH</td>
			<td>4600122</td>
			<td>22 X 22 mm, thickness 0.13 - 0.17 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>S1810</td>
			<td>Used to inactivate trypsine action</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji software (ImageJ)</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td>RRID:SCR_002285</td>
			<td>Free download, no license needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur Pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11844782</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Serum</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>S2000</td>
			<td>Used for immunofluorescence of 3D structures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat-Resistant Gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for agar manipulation after autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heater bath (37 &#186;C)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to temper solutions prior to cell subculture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heater bath (42 &#186;C)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to keep agar warm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for Matrigel dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humid chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used for the incubation of antibodies during immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used during Matrigel manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice-box</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Optic Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Matrix</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>354234</td>
			<td>Store at -20 &#186;C and keep cold when in use. Referred to as basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>PanReac AppliChem</td>
			<td>131091</td>
			<td>Used for 3D structure fixation prior to immunofluorescent labelling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>p1000, p200 and p10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>RRID:SCR_016137</td>
			<td>Used to calculate population doubling and to obtain growth rate equation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliQ water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Referred to as ultrapure water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nail Polish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to seal samples after mounting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-999</td>
			<td>Used to cover antibody solution during incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS pH 7.4 (w/o calcium &#38; magnesium)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-056</td>
			<td>Sterile. Used for cell subculture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>Dilute in milliQ water. No sterility required. Used for immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Aid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria T25 flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353808</td>
			<td>Used for BPEC culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scepter Automated Cell Counter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>PHCC20060</td>
			<td>Alternatively, use an haemocytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to cut pipette tips and parafilm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filters 0.22 &#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td>Used to filter MTT solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (MTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2128</td>
			<td>Store at -20 &#186;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Used for immunofluorescence of 3D structures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA 10X</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>X0930</td>
			<td>Dilute in PBS to obtain 3X solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WIT-P-NC Culture Medium</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>00-0051</td>
			<td>Used for primary BPEC culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WIT-T Culture Medium</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>00-0047</td>
			<td>Used for transformed BPEC culture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro evaluation of oncogenic transformation in human mammary epithelial cells

Tümörigenez, hücrelerin düşmanca koşullar altında büyüme, hayatta kalma ve yayılmaya izin veren yetenekler edindiği çok aşamalı bir süreçtir. Farklı testler belirlemek ve kanserli hücrelerin bu işaretleri ölçmek için aramak; ancak, genellikle hücresel dönüşümün tek bir yönü üzerinde odaklanmak ve, aslında, birden fazla test onların uygun karakterizasyonu için gereklidir. Bu çalışmanın amacı, araştırmacılara hücresel dönüşümü geniş bir perspektiften değerlendirmek için bir dizi araç sağlamak ve böylece sağlam sonuçlar elde etmeyi mümkün kılmaktır.
Sürekli proliferatif sinyal aktivasyonu tümöral dokuların en önemli özelliğidir ve zaman içinde elde edilen popülasyon sayısı nın hesaplanmasıyla in vitro koşullarda kolayca izlenebilir. Ayrıca, 3D kültürlerde hücrelerin büyüme çevreleyen hücreler ile etkileşimsağlar, in vivo oluşur ne benzer. Bu, hücresel agregasyonun değerlendirilmesini ve farklı hücresel belirteçlerin immünororesan etiketlemesi ile birlikte tümöral dönüşümün bir diğer ilgili özelliği hakkında bilgi edinmesini sağlar: uygun organizasyonun kaybı. Dönüştürülmüş hücrelerin bir diğer dikkat çekici özelliği diğer hücrelere bağlanmadan ve hücre dışı matris, hangi ankraj tsay ile değerlendirilebilir olmadan büyümek için kapasiteleridir.
Hücre büyüme hızını değerlendirmek, 3Boyutlu kültürlerde hücre soyundan belirteçlerin immünororesan etiketlemesini gerçekleştirmek ve yumuşak agarlarda ankrajdan bağımsız hücre büyümesini test etmek için ayrıntılı deneysel prosedürler sağlanmaktadır. Bu metodolojiler meme kanserinde alaka nedeniyle Meme Primer Epitel Hücreleri (BPEC) için optimize edilsin; ancak, bazı ayarlamalardan sonra diğer hücre türlerine yordamlar uygulanabilir.

BpECs üç genetik elementin tanıtımı ile hücresel dönüşüm deneysel bir model onkojenik dönüşümtemsilisonuçlar üretmek için seçildi 6,7 (Şekil 3). Dönüştürülmeyen BPEC'ler(N),İnce vemeslektaşları tarafından açıklandığı gibi hastalıksız meme dokusundan 6 ve burada belirtilen protokolü takip ederek kültürlü olarak elde edilmiştir. STASIS üstesinden...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells at JoVE.com

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells (Video) | JoVE

Bu protokol, insan meme hücrelerinin dönüşümünü değerlendirmek için deneysel in vitro araçlar sağlar. Hücre çoğalma hızının takibi, ankraj-bağımsız büyüme kapasitesi ve hücre soylarının 3Boyutlu kültürlerde bazal membran matrisi ile dağılımı nın detaylı adımları tanımlanmıştır.

İnsan Meme Epitel Hücrelerinde Onkojenik Dönüşümün İn Vitro Değerlendirilmesi

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification (Video) | JoVE

Lezyon Tanımlaması için Meme Bandı Bütün Dağılımları

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

CRISPR/Cas9 kullanarak Gene sitokin bağımlı hematopoetik hücreler Mutant Calreticulin Oncogenic etkinliğini araştırmak için düzenleme

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function (Video) | JoVE

Vitro tümör hücre Rechallenge içinde akıllı Chimeric antijen reseptör T hücre antitümör işlevi değerlendirilmesi için

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Time-Lapse 2D Imaging of Phagocytic Activity in M1 Macrophage-4T1 Mouse Mammary Carcinoma Cells in Co-cultures

Time-Lapse 2D Imaging of Phagocytic Activity in M1 Macrophage-4T1 Mouse Mammary Carcinoma Cells in Co-cultures (Video) | JoVE

Eş-Kültürlerde M1 Makrofaj-4T1 Fare Mammary Karsinom Hücrelerinde Fagositik Aktivitenin Zaman Atlamalı 2D Görüntülemesi

Tumor-associated macrophages (TAMs) have been identified as an important component for tumor growth, invasion, metastasis, and resistance to cancer ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad (Video) | JoVE

Interscapular Beyaz Yağ Ped içine Rat Mammary Epitel Hücre Nakli

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Evaluation of the In vivo Antitumor Activity of Polyanhydride IL-1&#945; Nanoparticles

Evaluation of the In vivo Antitumor Activity of Polyanhydride IL-1ÃŽÂ± Nanoparticles (Video) | JoVE

Polianhidrit IL-1α Nanopartiküllerinin In vivo Antitümör Aktivitesinin Değerlendirilmesi

Cytokine therapy is a promising immunotherapeutic strategy that can produce robust antitumor immune responses in cancer patients. The proinflammatory ...

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research (Video) | JoVE

Meme Kanseri Araştırmaları için Potansiyel Fonksiyonel In vitro Model Olarak Meme Epitel ve Endotel Hücre Sferoidleri

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...

Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures

Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures (Video) | JoVE

Üç Boyutlu Kültürlerde Fosfolipid Aracısı İndüklenmiş Transformasyon

Several models have been developed to study cancer, such as rodent models and established cell lines. Valuable insights into carcinogenesis have been ...

Reconstruct Human Retinoblastoma In Vitro

Reconstruct Human Retinoblastoma In Vitro (Video) | JoVE

İnsan Retinoblastomunu In Vitro Yeniden İnşa Etmek

Human RB is pediatric cancer, which is lethal if no treatment is administered. As RB originates from cone precursors, which is relatively rare in rodent ...