Name: preparation of virus-enriched inoculum for oral infection of honey bees (apis mellifera)
Uploaded: 2020-08-26T15:00:00
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जूलिया फाइन को प्रोटोकॉल निर्माण प्रक्रिया के दौरान उनके विचारों और चर्चा के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं, साथ ही साथ संपादन के दौरान उनकी सहायक टिप्पणियों के लिए डॉ कैसोंड्रा वर्नियर। इन सामग्रियों ने उन परियोजनाओं की दिशा में योगदान दिया जिन्हें अनुदान आईडी 549025 के तहत फाउंडेशन फॉर फूड एंड एग्रीकल्चर रिसर्च द्वारा भाग में समर्थित किया गया था।

1. बड़े पैमाने पर मधुमक्खी निष्कर्षण विकल्प 1: लार्वा आत्म हटाने
<ol><li>एक खाली, खींचे गए लैंगस्ट्रोथ फ्रेम पर एक शहद मधुमक्खी रानी पिंजरे और उसे अपनी कॉलोनी में वापस कर दें। रानी को 24 घंटे के लिए इस फ्रेम पर ?...

यहां हमने लार्वा संग्रह और वायरस प्रसार, निष्कर्षण और एकाग्रता, साथ ही पिंजरे-खिला प्रयोगों के रूप में वायरल उपचार सहित वायरस प्रवर्धन और इनोकुलम स्टॉक तैयारी प्रक्रिया के हर चरण का विवरण देने वाले तर...

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% bleach solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24:1 chloroform:isoamyl alcohol</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>C0549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cages for bioassay</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Dependent on experimental setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Combitips Advanced 0.1 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30089405</td>
			<td>Optional (if no injector appartus is available)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Containers for larval self-removal</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Should measure roughly 19&#34; x 9-1/8&#34; (Langstroth deep frame dimensions)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Blunt, soft forceps for larval separationl; blunt, hard forceps for pupal excision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fume hood</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Capable of maintaining 34 &#186;C and 50% relative humidity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>Any absorbent wipe will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium-sized weight boats</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Serve as inoculum trays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcon-100kDa with Biomax membrane</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>MPE100025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>P5119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene glycol 8000 (PEG)</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>1546605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated benchtop centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Capable of 15,000 x g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Capable of 21,000 x g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Repeater M4 Multipipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>4982000322</td>
			<td>Optional (if no injector appartus is available)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAse Away</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>7000TS1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAse-free water</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>W4502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TES</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>T1375</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of virus-enriched inoculum for oral infection of honey bees (apis mellifera)

हनी मधुमक्खियां दुनिया भर में महान पारिस्थितिक और कृषि महत्व के हैं, लेकिन विभिन्न प्रकार के दबावों के अधीन भी हैं जो वायरल रोगजनकों के संपर्क सहित मधुमक्खी के स्वास्थ्य को नकारात्मक रूप से प्रभावित करते हैं। इस तरह के वायरस विभिन्न प्रकार के विनाशकारी प्रभाव पैदा कर सकते हैं और अक्सर कई कारकों के कारण अध्ययन करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है जो पूर्ववर्ती पृष्ठभूमि संक्रमण से प्रयोगात्मक उपचार के प्रभावों को अलग करना मुश्किल बनाते हैं। यहां हम वायरल संक्रमण और प्रभावों का परीक्षण करने के लिए एक उच्च थ्रूपुट बायोएसे के साथ बड़ी मात्रा में वायरस कणों का बड़े पैमाने पर उत्पादन करने के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं। एक निरंतर, वायरस मुक्त शहद मधुमक्खी सेल लाइन की वर्तमान कमी से आवश्यक, वायरल कणों को शहद मधुमक्खी प्यूपा का उपयोग करके विवो में प्रवर्धित किया जाता है, जो न्यूनतम तनावपूर्ण पद्धति का उपयोग करके बड़ी मात्रा में छत्ते से निकाले जाते हैं। इन वायरस कणों का उपयोग तब इनोकुला व्यवहार्यता का परीक्षण करने के लिए शहद मधुमक्खी पिंजरे बायोएसेज़ में किया जा सकता है, साथ ही पोषण, कीटनाशकों और अन्य रोगजनकों के साथ बातचीत सहित विभिन्न अन्य वायरस संक्रमण गतिशीलता भी शामिल है। ऐसे कणों का उपयोग करने का एक प्रमुख लाभ यह है कि यह वर्तमान विकल्पों की तुलना में बाद के प्रयोगों में अज्ञात चर शुरू करने की संभावनाओं को बहुत कम कर देता है, जैसे कि संक्रमित मधुमक्खी हेमोलिम्फ या होमोजेनेट के माध्यम से संक्रमण, हालांकि मधुमक्खियों को सोर्स करते समय देखभाल अभी भी की जानी चाहिए, पृष्ठभूमि वायरस संदूषण को कम करने के लिए। पिंजरे परख एक कॉलोनी स्तर पर वायरस संक्रमण प्रभाव का परीक्षण करने वाले बड़े पैमाने पर, क्षेत्र-यथार्थवादी प्रयोगों के लिए एक विकल्प नहीं हैं, बल्कि इसके बजाय बेसलाइन वायरल प्रतिक्रियाओं को स्थापित करने के लिए एक विधि के रूप में कार्य करते हैं, जो अर्ध-शुद्ध वायरस कणों के संयोजन में, शहद मधुमक्खी-वायरस शारीरिक बातचीत के विभिन्न आयामों की जांच करने के लिए महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में काम कर सकते हैं।

प्यूपल इंजेक्शन और वायरल निष्कर्षण के लिए प्रोटोकॉल (आंकड़े 1) का सफलतापूर्वक पालन करने से बड़ी मात्रा में वायरस कणों का उत्पादन करना चाहिए। हालांकि, कई समय बिंदुओं पर विभिन्न प्रकार की कालोनिय?...

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Preparation of Virus-Enriched Inoculum for Oral Infection of Honey Bees Apis mellifera

यहां हम दो प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं: सबसे पहले शहद मधुमक्खी गैर-लिफाफे वाले वायरस कणों की बड़ी मात्रा में प्रचार, निकालने, शुद्ध करने और मात्रा निर्धारित करने के लिए, जिसमें शहद मधुमक्खी प्यूपा को हटाने के लिए एक विधि शामिल है और दूसरा अत्यधिक दोहराने योग्य, उच्च थ्रूपुट पिंजरे बायोएसे का उपयोग करके वायरल संक्रमण के प्रभावों का परीक्षण करने के लिए।

हनी बीज़ के मौखिक संक्रमण के लिए वायरस-समृद्ध इनोकुलम की तैयारी (एपिस मेलिफेरा)

Honey bees are of great ecological and agricultural importance around the world but are also subject to a variety of pressures that negatively affect bee ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Virus-Enriched Inoculum for Oral Infection of Honey Bees (Apis mellifera)

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Baculovirus साथ Lepidopteran लार्वा के मौखिक संक्रमण के लिए प्रोटोकॉल

Baculoviruses are widely used both as protein expression vectors and as insect pest control agents. This video shows how lepidopteran larvae can be ...

Extraction of the EPP Component from the Surface EMG

EPP घटक के भूतल EMG से निकालना

A surface electromyogram (EMG), especially when recorded near the neuromuscular junction, is expected to contain the endplate potential (EPP) component ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

कैल्शियम इमेजिंग का प्रयोजन, सेल चोट माप, और adenoviral संक्रमण के लिए अग्नाशय कोष्ठकी कक्ष की तैयारी

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Africanized और यूरोपीय हनी मधुमक्खियों द्वारा बनाया गया Beebread में पोषक तत्वों की तुलना के लिए तरीके और Hemolymph प्रोटीन titers पर प्रभाव

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

अस्थि वातानुकूलित माध्यम: तैयारी और Bioassay

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Dissection and Observation of Honey Bee Dorsal Vessel for Studies of Cardiac Function

विच्छेदन और हनी बी पृष्ठीय पोत का अवलोकन हृदय समारोह के अध्ययन के लिए

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

निगरानी कॉलोनी-हनी मधुमक्खियों पर घातक कीटनाशक जोखिम के स्तर प्रभाव

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

ओरल बैक्टीरियल इंफेक्शन और छप्पर में Drosophila melanogaster

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

युक्त शहद मधुमक्खी क्वींस के लिए एग्रोकेमिकल जोखिम का आकलन

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

An Improved Chemotaxis Assay for the Rapid Identification of Rhizobacterial Chemoattractants in Root Exudates

रूट एक्सूडेट्स में Rhizobacterial Chemoattractants की तेजी से पहचान के लिए एक बेहतर Chemotaxis परख

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward ...